PLoS ONE: Klinische Bedeutung von miR-137 Expression in Patienten mit Magenkrebs nach radikaler Gastrectomy

Abstrakt

Die Dysregulation von miR-137 spielt eine wichtige Rolle in der Onkogenese und Progression von verschiedenen Arten von Krebs, aber ihre Rolle bei der Prognose von Patienten mit Magenkrebs bleibt unbekannt. Diese Studie wurde entworfen, um die Expression und prognostische Bedeutung von miR-137 in Patienten mit Magenkrebs nach radikaler Gastrektomie zu untersuchen. Quantitative Echtzeit-PCR (qRT-PCR) wurde durchgeführt, um die Expression von miR-137 in menschlichen Magenkrebszelllinien und Geweben bei Patienten mit einem Adenokarzinom des Magens zu bewerten. Die Ergebnisse wurden für die Assoziation mit klinischen Faktoren und das Gesamtüberleben unter Verwendung von Kaplan-Meier-Analyse bewertet. Die prognostische Werte von miR-137 Expression und klinischen Ergebnisse wurden durch Cox-Regressionsanalyse ausgewertet. Die Ergebnisse zeigten, dass die Expression von miR-137 in der menschlichen Magenkrebs verringert wurde Zelllinien und Geweben, und nach unten reguliert die Expression von miR-137 wurde mit der Tumorzelldifferenzierung verbunden sind, N-Stadium, und TNM-Stadium. Verminderte miR-137 Expression in Geweben Magenkrebs war positiv mit schlechten Überlebenszeit von Patienten mit Magenkrebs korreliert. Weitere multivariaten Cox-Regressionsanalyse vorgeschlagen, dass miR-137 Expression ein unabhängiger prognostischer Indikator für Magenkrebs mit Ausnahme der TNM-Stadium war. Die Anwendung der prognostische Wert von miR-137 Expression zu TNM-Stadium zeigte der Gruppe III eine bessere Risikoabschätzung für das Gesamtüberleben. Abschließend verstärkt die Ergebnisse die entscheidende Rolle für die herunterreguliert miR-137 Expression in Magenkrebs und schlug vor, dass miR-137 Expression ein prognostischer Indikator für diese Krankheit sein könnte. Darüber hinaus, müssen diese Patienten mit TNM-Stadium III Magenkrebs und niedrigen miR-137 Expression aggressivere postoperative Behandlung und näher Follow-up

Citation:. Gu Q, Zhang J, Hu H, Tan Ye Shi S, Nian Y (2015) Klinische Bedeutung von miR-137 Expression in Patienten mit Magenkrebs nach radikaler Gastrectomy. PLoS ONE 10 (11): e0142377. doi: 10.1371 /journal.pone.0142377

Editor: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, JAPAN

Empfangen: 14. August 2015; Akzeptiert: 21. Oktober 2015; Veröffentlicht: 6. November 2015

Copyright: © 2015 Gu et al. Dies ist ein offener Zugang Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons Attribution verteilt, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorgesehen sind der ursprüngliche Autor und Quelle genannt

Datenverfügbarkeit: Alle relevanten Daten innerhalb des Papiers sind

Finanzierung:.. die Autoren haben keine Unterstützung oder Finanzierung zu berichten

konkurrierende Interessen:. die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen

Einleitung

China ist eines der Länder mit der höchsten Inzidenz von Magenkrebs und macht mehr als 40% aller neuen Fälle weltweit [1,2]. Trotz aggressiver Therapie, neigt die Prognose von fortgeschrittenem Magenkrebs in China trostlos [3,4] zu sein. Derzeit Tumor-Knoten-Metastase (TNM) Staging-System der Union für Internationale Cancer Control /American Joint Committee on Cancer (UICC /AJCC) ist der wichtigste prognostische Faktor für Magenkrebs [5]. Da es jedoch Heterogenität auf molekularer Ebene von Magenkrebs ist, ist es nicht ausreichend, nur auf TNM-Stadium verlassen, um die Prognose von Magenkrebs, vorherzusagen, [6]. Daher ist die Identifizierung von molekularen Markern, die Aggressivität von Magenkrebs prädiktiven sind und die Prognose von Patienten als zusätzliche zu TNM-Stadium das Potential die Fähigkeit Patienten zu verbessern hat die Behandlung und klinisch relevante Erkenntnisse der Bedeutung in Krankheitsmanagement bieten könnte. Darüber hinaus haben die Patienten die Auswahl profitieren könnten größte von Präzisionsbehandlung gedacht als die beste Methode, um die Mortalitätsraten von Magenkrebs mit Ausnahme der Operation zu senken.

MicroRNAs (miRNAs) sind kleine endogene 19-25 Nukleotide nicht-kodierenden RNAs die Genexpression Post transkriptionell durch Basenpaarung mit der 3'-untranslatierten Region (3'-UTR) von Ziel Boten-RNAs (mRNAs) zu regulieren, dass in mRNA-Abbau oder Hemmung der Translation resultierenden [7]. In vielen menschlichen Krebsarten können miRNAs dienen als Onkogene bzw. Tumorsuppressorgene Übersetzung zu unterdrücken oder mRNA-Abbau in Abhängigkeit von der Art ihrer Ziele [8] zu induzieren. Zuvor zeigten Studien, dass die Expression von miR-137 herunterreguliert und als prognostischer Marker in verschiedenen Arten von Krebs betrachtet, einschließlich Lungenkrebs [9], Darmkrebs [10], Ovarialkarzinom [11], multiples Myelom [12] , gastrointestinalen Stromatumoren Tumor [13], Glioblastom [14], und Plattenepithelkarzinom des Kopfes und Halses [15]. Es wurde vor kurzem gezeigt, dass miR-137 Expression signifikant wurde in Magenkrebsgewebe verringert und die Unterdrückung wurde gleichzeitig mit der Schwere des pathologischen Veränderungen, bei Magenkrebs das Potential Tumorsuppressor Rolle von miR-137 vorgeschlagen [16]. eine umfassende Analyse der Expression von miR-137 hat sich jedoch in korrelierten auf die Prognose von Patienten mit Magenkrebs nicht durchgeführt worden und wartet auf weitere Aufklärung.

Das Prinzip Ziel dieser Forschung ist es, die Beziehung zwischen der Expression von miR zu bewerten -137 und Gesamtüberlebenszeit von Patienten mit Magenkrebs in einem Versuch, die prognostische Bedeutung von miR-137 Expression zu identifizieren. Die Ergebnisse dieser Studie zeigen, dass die Expression von miR-137 war Herunterregulation bei Magenkrebs Zellen und Geweben, und miR-137 Expression war ein unabhängiger prognostischer Indikator für Magenkrebs.

Materialien und Methoden

Aussage
Ethik

wurde vom Institutional Review Board des Zweiten Affiliated Hospital der Xi'an Jiaotong University und der Affiliated Hospital der Yan'an University (Provinz Shanxi, China) Diese Studie überprüft und genehmigt. Alle Studienteilnehmer oder ihre Erziehungsberechtigten, sofern schriftliche Zustimmung Einschreibung vor der Studie informiert.

Zellkultur

Immortalized normalen menschlichen Magen-epithelialen Zelllinie GES-1 und fünf menschlichen Linien Magenkrebszellen, einschließlich MKN-45, SGC7901, BGC-823, MGC-803 und AGS, wurden direkt aus Shanghai Cell Bank der chinesischen Akademie der Wissenschaften (Shanghai, China) erhalten. Alle diese Zellen wurden routinemßig gezüchtet und gehalten in RPMI-1640 (Gibco) Kulturmedium mit 10% fötalem Rinderserum (Invitrogen) bei 37 ° C in einem befeuchteten Inkubator mit Zellen einer Atmosphäre von 5% CO ₂

Klinische Proben

Frisches Gewebe Adenokarzinom des Magens und der angrenzenden normalen Geweben wurden von zwei unabhängigen Sätzen bestehend aus 154 Patienten mit einem Adenokarzinom des Magens gesammelt. Alle in dieser Studie teilnehmenden Patienten waren unterzog sich radikale Gastrektomie (R0-Resektion nach der UICC /AJCC und D2 Lymphadenektomie). Proben von Trainingssatz (n = 67) wurden zwischen Januar 2005 und Dezember 2009 von der zweiten Affiliated Hospital der Xi'an Jiaotong University (Provinz Shanxi, China) erhalten, und Proben von Validierungssatz (n = 87) wurden zwischen Januar 2008 erhalten und Dezember 2010 der Affiliated Hospital der Yan'an University (Provinz Shanxi, China). Die Proben wurden in flüssigem Stickstoff bis zur Verwendung eingefroren. Proben wurden unabhängig von zwei Pathologen überprüft, und die Phase des Magenkrebs wird entsprechend dem TNM-Stadium System der UICC /AJCC klassifiziert [5]. Patienten wurden ausgeschlossen, wenn sie vorher auf jede gezielte Therapie, Strahlentherapie, Chemotherapie ausgesetzt waren und /oder Interventionstherapie für Magenkrebs.

qRT-PCR

Total RNA miRNA enthält aus kultivierten extrahiert Zellen oder Gewebe unter Verwendung miRNeasy Mini Kit (Qiagen). cDNA wurde mit miScript Reverse Transkription-Kit (Qiagen) unter Befolgung der Anweisungen des Herstellers synthetisiert. Reverse Transkription wurde unter Verwendung von 50 ng Gesamt-RNA mit einem Primer spezifisch für miR-137, zusammen mit dem SYBR Green MikroRNA Reverse Transcription Kit durchgeführt. miRNAs wurden nach dem Protokoll des Herstellers unter Verwendung des SYBR Green miRNA qRT-PCR-Assay quantifiziert (Applied Biosystems). Die qRT-PCR-Reaktion wurde auf einem 7500 Fast-Echtzeitsystem (Applied Biosystems) durchgeführt. Alle quantitative RT-PCRs wurden in dreifacher Ausführung durchgeführt. Die Daten wurden unter Verwendung eines automatisierten Baseline analysiert. Der Schwellenzyklus (Ct) wurde als fraktionelle Zyklenzahl definiert, bei der die Fluoreszenz des gegebenen Schwellenwert überschritten hat. Die Daten aus der qRT-PCR erhalten wurden, wurden unter Verwendung des Verfahrens analysiert ΔΔCt (2 ^{ΔΔCt). Die PCR-Primer-Sets hier für miR 137 verwendet wurde, wie folgt aufgebaut: miR-137 Vorwärts-Primer: 5'-GCGCGC TTATTGCTTAAGAATAC-3 'und Reverse-Primer: 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3'. U6 wurde als interne Kontrolle verwendet und mit Vorwärtsprimer amplifiziert: 5'-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3 'und Reverse-Primer: 5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3'.}

Die statistische Analyse

Die statistische Analyse wurde unter Verwendung von GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA) und SPSS 19.0 (SPSS, Chicago, IL, USA) durchgeführt. Die Gesamtüberlebenszeit wurde als die Zeit zwischen dem ersten Tag der Diagnose und dem Tag, der durch Krebs verursachten Tod oder der letzten Nachuntersuchung definiert. Pearson χ ^{2 oder exakte Fisher-Test wurde verwendet, um die Beziehung zwischen miR-137 Expression und klinisch-pathologischen Faktoren zu analysieren. Kumulative Überlebensraten wurden von Kaplan-Meier-Methode berechnet, und die Unterschiede zwischen den Untergruppen wurden von der Log-Rank-Test untersucht. Zahlen gefährdet wurden für den Beginn jeder Zeitperiode berechnet. Der prognostische Wert von miR-137-Expression wurde durch univariate und multivariate Analyse bestimmt. Alle P-Werte waren zweiseitig, und P < 0,05 wurde als statistisch signifikant sein}

Ergebnisse

• PLoS ONE: Bedeutung von Serum Pepsinogene als Biomarker für Magenkrebs und atrophische Gastritis Screening: eine systematische Überprüfung und Meta-Analysis
• PLoS ONE: deregulierte Expression von SRC, LYN und CKB Kinasen durch DNA-Methylierungs und seine mögliche Rolle bei Magenkrebs Invasivität und Metastasierung