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PLoS ONE: Verminderte Galectin-9 und erhöhte Tim-3 Expression beziehen sich auf einer schlechten Prognose bei Magen Cancer

Abstrakt

Einführung

Galectin-9 (Gal-9) induziert Adhäsion und Aggregation bestimmter Zelltypen und hemmt die Metastasierung von Tumorzellen. T-Zell-Immunglobulin-Domäne und Mucin-3-enthaltendes Molekül 3 (TIM-3), spielt eine zentrale Rolle in der Immunregulation. Das Ziel dieser Studie ist es Gal-9 und TIM-3 Änderungen bei Magenkrebs und ihre prognostische Werte zu untersuchen.

Methoden

Gal-9 und Tim-3-Expression wurde ein Gewebe ausgewertet Microarray Immunhistochemie Methode in 305 Magenkrebs, von denen 84 angrenzenden normalen Proben gepaart hatten. Die Zelllinien SGC-7901, BGC-823, MGC-803, MKN45 und GES-1 wurden auch gefärbt. Korrelationen zwischen Expression von Gal-9 und Tim-3-Protein und Tumorparameter oder klinische Ergebnisse analysiert.

Ergebnisse |

Gal-9 und Tim-3 positiv gefärbt auf Tumorzellen in 86,2% (263/305) und 60,0% (183/305) der Patienten mit Magenkrebs, respectively. Gal-9-Expression war signifikant höher als bei Krebs als in normalen Schleimhaut ( P
< 0,001). Reduzierte Gal-9-Expression wurde mit Lymphe-vaskuläre Invasion assoziiert, Lymphknotenmetastasen, Fernmetastasen und schlechter TNM ( P
= 0,034, P
= 0,009, P
= 0,002 und P
= 0,043, respectively). Im Gegensatz dazu war Tim-3-Expression signifikant niedriger als bei Krebs als in der Kontroll Schleimhaut ( P
< 0,001). Patienten mit Lymph-Gefäßinvasion hatten höhere Expression von Tim-3 ( P
< 0,001). Darüber hinaus multivariate Analyse zeigt, dass sowohl eine hohe Gal-9-Expression und niedrige Tim-3-Expression signifikant mit langen Gesamtüberlebenszeit assoziiert waren ( P
= 0,002, P
= 0,010, respectively); die Kombination von Gal-9 und Tim-3-Expression war ein unabhängiger prognostischer Prädiktor für Patienten mit Magenkrebs (RR: 0,43; 95% CI: 0,20-0,93). H.pylori
Infektionsstatus wurde nicht mit Gal-9 zugeordnet ist, und Tim-3-Expression ( P
= 0,102, P
= 0,565).

Fazit

Die Ergebnisse legen nahe, dass die Expression von Gal-9 und Tim-3 in Tumorzellen kann ein Potential, unabhängiger prognostischer Faktor für Patienten mit Magenkrebs sein. Gal-9 und TIM-3 eine wichtige Rolle in der Magen-Krebsentstehung spielen

Citation:. Jiang J, Jin M-S, Kong F, Cao D, Ma H-X, Jia Z, et al. (2013) Verminderte Galectin-9 und erhöhte Tim-3 Expression zu einer schlechten Prognose bei Magenkrebs in Zusammenhang stehen. PLoS ONE 8 (12): e81799. doi: 10.1371 /journal.pone.0081799

Herausgeber: Pierre Busson, Institut für Krebsforschung Gustave Roussy, Frankreich

Empfangen: 6. Januar 2013; Akzeptiert: 26. Oktober 2013 beginnen; Veröffentlicht am: 10. Dezember 2013

Copyright: © 2013 Jiang et al. Dies ist eine Open-Access-Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorausgesetzt, der ursprüngliche Autor und Quelle genannt werden

Finanzierung:. Diese Studie wurde von National Natural Science Foundation of China (81072369 und 81273065) unterstützt. Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung oder Vorbereitung des Manuskripts zur Veröffentlichung

Konkurrierende Interessen:.. Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen

Einführung

Magenkrebs bleibt die vierte am häufigsten diagnostizierte Krebs und ist die zweithäufigste Ursache von Krebs in Verbindung stehende Todesfälle weltweit [1]. Galectine sind eine Gruppe von Proteinen, die β-Galactoside durch evolutionär konservierte Sequenzelemente der Kohlenhydrat-Erkennungsdomäne (CRD) [2] binden, [3]. Der Galectin-Familie trägt zur neoplastischen Transformation, Tumorzellüberlebens, Gewebeinvasion und Metastasierung einiger Krebsarten, einschließlich Magenkrebs [4]. Frühere Studien zeigten, dass die Expression von Galectin-3 signifikant höher in der Magenkarzinomen im Vergleich zu angrenzenden normalen Gewebe war. Galectin-3 und Galectin-4 kann nützliche Tumormarker für Magenkarzinome sein in Bezug auf die Tumorprogression und Potentialität von Lymphknotenmetastasen vor allem in bestimmten histologischen Typen von Magenkrebs [5], [6]. Galectin-9 (Gal-9) ist ein neues Mitglied der Galectin-Proteinfamilie [7]. In den letzten Jahren hat eine wichtige Rolle für die Gal-9 in Gesundheit und Krankheit entstanden [8]. In der normalen Physiologie scheint Gal-9 eine zentrale Modulator der T-Zell-Immunität zu sein durch Apoptose in spezifischen T-Zell-Subpopulationen zu induzieren. Da diese T-Zellpopulationen mit Autoimmunität, entzündliche Erkrankung assoziiert sind, und Transplantatabstoßung, wurde postuliert, dass die Anwendung exogener Gal-9 pathogene T-Zell-Aktivität begrenzen kann [9], [10]. Zusätzlich wird Gal-9 im Zytoplasma lokalisiert und auf der Zelloberfläche von Zellen und scheint aus Tumorzellen freigesetzt werden [11]. In soliden Tumoren, schlug die verfügbaren Studien, dass Gal-9 ein Tumor-Suppressor-Funktion hat, mit einem Verlust von Gal-9 mit einer erhöhten Metastasierung und hohe Rezidiv eng verbunden ist [12], [13], [14], [15]. Kadowaki et al zeigte auch, dass Gal-9-Signalisierung das Überleben verlängern kann durch Makrophagen zu differenzieren sich in plasmazytoiden dendritische Zellen wie Makrophagen in einem Maus-Lungenkrebs-Modell [16] zu induzieren. Diese Daten präsentiert, dass Gal-9 kann ein möglicher prognostischer Faktor mit anti-metastatischen Potential sein. Die Expression von Gal-9 noch nicht in Magenkrebs untersucht worden.

T-Zell-Immunglobulin und Mucin-Domäne-3-enthaltendes Molekül 3 (Tim-3) ist ein T-Helfer-Typ 1 (Th1) -spezifische Zelloberflächenmolekül, das Th1-Antworten und die Induktion der peripheren Toleranz [17] zu regulieren scheint, [18]. Kürzlich wurde aberrant Tim-3-Expression in Melanomzellen berichtet, der geringen Haftfähigkeit von Tumorzellen beitragen und das Überleben des Tumors zu fördern [19]. Zhuang et al zeigte auch die wichtige Rolle von Tim-3-Expression in Tumorzellen als unabhängiger prognostischer Faktor für Patienten mit nicht-kleinzelligem Lungenkrebs [20]. Zhu C et al zeigten, dass Gal-9 der Tim-3-Ligand ist, und schlug vor, dass die Tim-3-Gal-9-Weg wirksame Beendigung der Effektor-Th1-Zellen [21], um sicherzustellen, haben sich weiterentwickelt werden. Um zu untersuchen, wurde die Beziehung zwischen Tim-3-Gal-9-Weg und den Fortschritt von Magenkrebs, der Gal-9 und Tim-3-Protein-Expression in 305 Patienten mit Magenkrebs untersucht, von denen 84 Fälle angrenzenden normalen Gewebeproben gepaart hatten. Verbände der Proteinexpression mit Patienten der klinischen Merkmale und die Prognose wurden auch in dieser Studie untersucht.

Methoden

Studienkollektive

Vor dreihundert und fünf Patienten darunter 231 Männer und 74 Frauen mit Magenkrebs, die eine Operation zwischen August 2000 und Dezember 2010 im ersten Krankenhaus der Universität Jilin unterzogen wurden in die Studie eingeschlossen. Die Patienten erhielten keine Behandlung vor der Operation. Die Diagnose von Magenkrebs wurde auf der Basis von morphologischer und immunhistochemischer Befund von zwei unabhängigen Pathologen (MSJ und YPW) ausgewertet hergestellt. Magenkrebs wurden durch chirurgische Exzision entfernt; angrenzenden normalen Magenepithelzellen Proben wurden auch von 84 Patienten zum Vergleich gesammelt. Patientenalter liegt zwischen 32 und 87 Jahren, mit einem mittleren Alter von 64 Jahren. Eine schriftliche Einverständniserklärung wurde von allen Patienten erhalten, und das Studienprotokoll wurde von der Ethikkommission des ersten Krankenhaus der Universität Jilin genehmigt.

Zellkultur

menschlichen Magenkrebszelllinien SGC-7901 , BGC823, MGC803, MKN45 wurden von Abteilung für Magen-und kolorektalen Chirurgie, erste Krankenhaus der Universität Jilin erworben. Die immortalisierten humanen Magenschleimhaut Zelllinie GES-1 durch das Cancer Hospital der Peking-Universität zur Verfügung gestellt. Zellen wurden in RPMI-1640-Medium mit 10% hitzeinaktiviertem fötalem Rinderserum (FBS) enthält, und 100 ng /ml jeweils Penicillin und Streptomycin in einem Inkubator (50 ml /l CO2) bei 37 ° C. Medium auf den Zellen wurde alle 2-3 Tage gewechselt. Die Zellen in der logarithmischen Wachstumsphase wurden für weitere Experimente gesammelt.

Immunhistochemie

Kurz gesagt, die Abschnitte (4 &mgr; m in der Breite) aus dem Gewebe microarry (TMA) Blöcke wurden entparaffiniert und dehydriert, hitze- induzierte Epitopdemaskierung wurde durch Eintauchen Objektträger in 10 mmol Citratpuffer (pH 6,0) und Auskochen des Puffers für 10 mi in einem Druckkocher durchgeführt. Nach dem Blockieren mit 3% H 2 O 2 wurden alle Abschnitte über Nacht bei 4 ° C mit Anti-Human-Galectin-9 polyklonalen Antikörper (1:250 verdünnt, ab69630, Abcam, UK) und Anti-Human-Tim-3 inkubiert polyklonalem Antikörper (8 &mgr; g /ml, AF2365, R & D Systems, Minneapolis, USA), 3,3-Diaminobenzidin (DAB) wurde als Chromogen verwendet, und die Schnitte wurden mit Hämatoxylin gegengefärbt. Für negative Kontrollen wurden Tumor Dias mit den IgG-Isotypen von Kaninchen (normales Kaninchen-IgG, sc-2027, Santacruz, USA) behandelt und Ziege (normale Ziegen-IgG, sc-2342, Santacruz, USA) auf den Ersatz des primären Antikörpers, die alle negativ Kontrollen zeigten vernachlässigbare Hintergrundfärbung. Zelllinien (SGC-7901, BGC-823, MGC-803, MKN45 und GES-1) wurden routinemäßig wurden Magenkrebszellpellets in Paraffin eingebettet und als Gewebe Folien verarbeitet. Magenkrebs-Zelllinien wurden mit dem gleichen Verfahren gefärbt.

Die gefärbten Folien von zwei unabhängigen Pathologen (MSJ und YPW) ausgewertet wurden, die zu klinischen Daten und die Ergebnisse wurden geblendet, die weithin akzeptierte semi-quantitative Analyse (HSCORE -System) wurde verwendet, Färbeintensität und Prozentsätze der Zellen mit einer bestimmten Größe der Intensität gefärbt zu beurteilen. Die HSCORE wurde mit der folgenden Gleichung berechnet: HSCORE = ΣPi (i) (i = 0,1,2,3, Pi = 0~100%). i bedeutet die Intensität der Färbung, dh keine Färbung = 0, schwache Färbung = 1, mäßige Anfärbung = 2 und starke Färbung = 3. Pi von 0 bis 100 ist daher die HSCORE reicht von 0 variierende Prozentsätze von gefärbten Zellen mit Intensitäten darstellt, 300, HSCORE > 0 wird als positive Färbung und HSCORE = 0 wird als komplette negative Färbung betrachtet. Die diskrepanten Ergebnisse der Färbung Intensität von zwei Pathologen aufgelöst wurden durch die Fälle zusammen zu überprüfen und auf die Noten stimmen, und die unstimmigen Ergebnissen der Prozentsatz der gefärbten Zellen durch die Berechnung der Mittel der Punkte gelöst wurden.

Western Blotting

Um die Genauigkeit der semi-Quantifizierung von Immun-Histologie bestätigen, die Western-Blot wurden in Magenkrebs-Zelllinien verwaltet. Die Zellen wurden mit kaltem Lysepuffer lysiert und bei 12000 g für 10 Minuten zentrifugiert, Puffer Beladung mit Zelllysaten wurden gemischt und bei 95 ° C für 5 Minuten gekocht. 10 &mgr; g Gesamtprotein wurde in 10% diskontinuierlichen SDS-Polyacrylamidgel für die Elektrophorese geladen und dann auf Polyvinylidenfluorid-Membranen übertragen. Membranen wurden in 5% Rinderserumalbumin und inkubiert mit primären Antikörpern (anti Gal-9 und anti Tim-3) über Nacht bei 4 ° C in Tris-gepufferter Salzlösung mit 0,1% Tween 20 blockiert. Nach dem Waschen wurden die Membranen in Meerrettich-Peroxidase-konjugierten Antikörpern für 1 Stunde bei Raumtemperatur inkubiert. Membranen wurden dann inkubiert, und Western-Blot-Bilder wurden aufgenommen und analysiert. β-Actin wurde als interne Kontrolle und alle densitometrischen Werte wurden normalisiert gegen die relative β-Actin-Wert verwendet.

Bestimmung von H.pylor
i Infektion

Unter 305 Magenkrebs Fällen wurden Blutproben von 104 Patienten für die Untersuchung von H.pylor
i-Infektion vor der Operation gesammelt. 4 ml nüchterne Blutproben wurden 30 Minuten bei Raumtemperatur stehen gelassen und dann zentrifugiert. Das Serum wurde bei -80 ° C gezogen und gespeichert. Serum-Immunglobulin (Ig) G-Antikörper zu H.pylori und Videos erkannt wurden H.pylor
i-IgG Enzyme Linked Immuno Assay (ELISA) Kit (Biohit, Helsink, Finnland). Die Antikörper-Titer wurden durch die optische Dichte (OD) -Werte definiert gemäß dem Protokoll des Herstellers und Titern höher als der abgeschnittene Wert von 30EIU als positiv angesehen wurden für H.pylori
Infektion. Die Kit-Qualitätskontrollproben zeigten Variationskoeffizienten von 4,5% für H
. pylori
Infektion Prüfung.

Statistik Analyse

Die HSCORE von Gal- 9 und Tim-3-Expression als Median (Interquartil) dargestellt. Die Wilcoxon-Paare Vorzeichen-Rang-Test und Mann-Whitney-U-Test oder Kruskal-Wallis-H-Test verwendet wurden, als gepaarte Gruppen und zwei unabhängige Gruppen zu vergleichen sind. Die Kaplan-Meier-Methode wurde verwendet, um die Gesamtüberlebensrate zu schätzen, und das Überleben Unterschiede wurden mit dem Log-Rank-Test analysiert. Die Cox-Proportional-Hazards-Modell wurde verwendet, um die relativen Risiken (RRs) und entsprechende 95% Konfidenzintervall (95% CIs) nach der Einstellung nach Alter (Skala variabel), Geschlecht (Nenngröße), Lymphe-Gefäßinvasion (Nenngröße) zu berechnen und TNM-Staging (Skala Variable). Alle statistischen Tests wurden zweiseitig und P
-Werten von weniger als 0,05 wurden als statistisch signifikant zu sein. Alle Analysen wurden mit Hilfe der SPSS-Software-Paket 18.0 (SPSS Inc. USA) durchgeführt.

Ergebnisse |

Expression von Gal-9 und Tim-3 bei Magenkrebs und Magenkrebs-Zelllinien

Immunhistochemische Analyse zeigte, daß Gal-9 und Tim-3 auf Tumorzellen in 86,2% positiv gefärbt (263/305), 60,0% (183/305) der Patienten mit Magenkrebs, respectively. Die meisten der Krebszellen in Magenkrebsgewebe zeigte starke zytoplasmatische Gal-9-Immunfärbung, aber eine kleine Anzahl von Magenkrebszellen zeigten negativen Immunfärbung für Gal-9 (Fig. 1A, 1B, 1C). Magentumorzellen zeigten eine deutliche und zytoplasmatische Positivität für Tim-3-Immunfärbung (Abbildung. 1D, 1E, 1F, 1G).

Unter 84 gepaarte Stichproben, Gal-9 positive Färbung wurde in 68/84 gefunden ( 81,0%) Magenkrebs und in basalen Zellen von 51/84 (60,7%) normale Schleimhaut, bzw. ( P
= 0,004). Im Gegensatz dazu wurde Tim-3 positive Färbung 55/84 (65,5%) bei Magenkrebs und 72/84 (82,7%) in normalen Schleimhaut, bzw. ( P
= 0,002) gefunden. Darüber hinaus Zelllinien SGC-7901, BGC-823and MGC-803 und GES-1 zeigte schwache zytoplasmatische Gal-9 Immunfärbung (Abbildung. 1 H), aber MKN45 zeigte negativen Immunfärbung für Gal-9 (Abb. 1I). Vier Magenkrebszelllinien zeigten auch starke und zytoplasmatische Positivität für Tim-3-Färbung (Abb. 1J). Allerdings GES-1-Zellen zeigten eine negative Färbung für Tim-3 (Figure.1K).

Der Nachweis von Gal-9 und Tim-3-Aktivierung wurde aus den gleichen Zellen durch Western Blot validiert, die in gezeigt wird, Abbildung 2.

Gal-9-Expression in Krebs Läsionen war signifikant höher als die in normalen Schleimhaut (Median HSCORE: 140 vs 20; P
< 0,001 3A.). Tim-3 HSCORE in Krebs-Läsionen signifikant niedriger war als in normalen Schleimhaut (Median HSCORE: 40 vs 170; P
< 0,001 3B.)

Gal-9 und Tim-. 3 Expressionsniveaus und H.pylor
i Infektion

von 104 Patienten Magenkrebs getestet für H.pylor
i-Antikörper, die gesamte positive Rate von H. pylor
i Infektion war 65,4%. Im Zeitalter Subgruppenanalyse der H.pylor
i-Infektionsrate war höher in der 45-65 Jahre Gruppe, im Vergleich zu den jünger als 45 Jahre alt Gruppen oder älter als 65 Jahre alt Gruppen. Die Ergebnisse zeigten keinen Zusammenhang zwischen H.pylor
i-Infektion und dem Gal-9 und Tim-3-Expression ( P
= 0,102, P
= 0,565). (3C, 3D).

Die Korrelation von Gal-9 und Tim-3-Expression mit klinisch-pathologische Parameter

Wie in Tabelle 1 gezeigt, HSCORE von Tim-3 war signifikant höher als bei männlichen Patienten als weibliche Patienten ( P
= 0,010). Tim-3-Expressionsniveaus waren positiv mit dem Alter ( P
= 0,004) korreliert jedoch Gal-9-Expressionsniveaus wurden negativ korreliert mit dem Alter ( P
= 0,049). Es wurden signifikante Unterschiede in Gal-9 und Tim-3-Expressionsniveaus zwischen Untergruppen von venösen Infiltration bei Patienten mit venöser Infiltration, der Median HSCORE von Gal-9 war signifikant geringer ( P
= 0,034) und Tim- 3 war signifikant höher ( P
< 0,001). Nach den TNM Stadien, höhere HSCORE bei Patienten der Stufe beobachtet wurde, vergleiche ich Tumoren zu anderen Stufen ( P
= 0,043). Die deutlich höhere HSCORE von Gal-9 wurde bei Patienten ohne Lymphknotenmetastasen ( P
= 0,009) und bei Patienten ohne Fernmetastasen ( P
= 0,022) gefunden. Wir analysierten auch die Gal-9 und Tim-3-Expression nach Tumordifferenzierung (hoch, mittel und niedrig) und die Tiefe der Invasion (T1-T4), wurden keine signifikanten Unterschiede gefunden. Die klinischen Merkmale der Patienten sind in Tabelle 1 im Detail zusammengefasst.

High Gal-9-Expression und negativen Tim-3-Expression signifikant mit langen Überlebenszeit assoziiert

Follow-up-Informationen zur Verfügung für Alle 305 Patienten, Perioden von 3 bis 135 Monate (Median 40 Monate) abdeckt. Kein Patient starb an postoperativen Komplikationen innerhalb von 30 Tagen nach Beginn der Studienzeit und 120 (39,3%) der Patienten während des Follow-up starben. Kaplan-Meier-Überlebenskurven wurden aufgetragen nach dem HSCORE (Negative, HSCORE≤100, HSCORE≤200 und HSCORE > 200). Die Gesamtüberlebensrate war signifikant höher in Gal-9 HSCORE > 200 Gruppe als andere Gruppen (Log-Rank-Test, P
= 0,011). Als Überlebenskurven von negativen Gruppe, HSCORE≤100 Gruppe und HSCORE≤200 Gruppe ähnlich waren, kombiniert man sie zur weiteren Analyse und Kaplan-Meier-Überlebenskurve wurden in Figure.4A ( P
= 0,002) gezeigt. Patienten mit Tim-3-negativen Tumoren hatte längeres Gesamtüberleben. Die gleichen Ergebnisse wurden erzielt, wenn alle positiven Ausdruck Patienten kombiniert wurden (Figure.4B, Log-Rank-Test, P
= 0,01). Kaplan-Meier-Überlebenskurven wurden auch nach dem Gal-9 aufgetragen und Tim-3 Co-Expression, die Gesamtüberlebensrate von Patienten, die Gal-9 HSCORE waren > 200 und Tim-3 negativ signifikant höher war, und Patienten, die Gal -9 HSCORE≤200 und Tim-3 positiv war signifikant niedriger (Figure.4C, Log-Rank-Test, P
< 0,001).

Die Kombination von Gal-9 und Tim-3 Expression war unabhängiger prognostischer Marker

Tabelle 2 zeigte die multivariate von Faktoren analysiert, um die Prognose der Patienten bezogen. Die univariate Analyse zeigte, dass die folgenden Faktoren wesentlich zur postoperativen Überleben verbunden waren: TNM-Stadium, venöse Infiltration und Kombination von Gal-9 und Tim-3-Expression ( P
< 0,001, P
= 0,001, P
< 0,001 beziehungsweise). Nach angepasst nach Alter und Geschlecht zeigten multivariate Regressionsanalyse, dass Gal-9 und Tim-3 Co-Expression und TNM-Stadium waren unabhängige prognostische Faktoren, aber Lymph-vaskuläre Invasion war nicht ein unabhängiger prognostischer Faktor.

Diskussion

in dieser Studie höhere Ausdrücke von Gal-9 wurden bei Patienten ohne Lymph- Gefäßinvasion, Lymphknotenmetastasen und Fernmetastasen gefunden. Darüber hinaus höhere Ausdrücke von Gal-9 ist eng mit besseren Überleben assoziiert. Diese Ergebnisse stehen im Einklang mit einem früheren Bericht in Brustkrebs, Leberzellkarzinom, Zervixkarzinom und malignes Melanom [12], [13], [14], [15], [22]. Gal-9-Expression in Magenkrebs Läsionen war signifikant höher als die in gepaarte angrenzenden normalen Magen Epithelgewebe Dieses Ergebnis führte uns zu der Hypothese, daß Gal-9 zeigen Antitumoraktivität in Tumor-tragenden Geweben durch incresed Aggregation von Tumorzellen [23] . Jedoch ist dieser Befund unterscheidet sich von der Liang Beobachtungen. Sie fanden, daß Gal-9-Expression in Krebsgeweben von 38 invasiven zervikalen Plattenepithelkarzinom (SCC) der Patienten war signifikant geringer als die in normaler zervikaler Plattenepithel von 23 gesunden Kontrollen. Aber Gal-9 Ausdrücke in gut differenzierten SCC waren signifikant höher im Vergleich zu denen in hohem Grade Plattenepithelkarzinom intrapiehelial Läsionen [14]. Leider hat sie die Gal-9-Expression in Krebsgeweben gepaart angrenzenden normalen Gewebe nicht vergleichen. Die Diskrepanz aus verschiedenen Studien sein kann aufgrund der individuellen Variation des Immunstatus, verursacht von Entzündungen und Gewebespezifität von Gal-9-Expression. Darüber hinaus sind verschiedene Krankheiten empfindlich gegen apoptotische Eliminierung durch rekombinante Gal-9. In Übereinstimmung mit dieser Beobachtung, was darauf hindeutet, dass gal-9 kann ein attraktiver Kandidat für die Behandlung von Krebs. Die Behandlung mit rekombinanten Gal-9 kann die Metastasierung von Krebs [16] zu verhindern, [24], [25].

Tim-3 ist das Oberflächenmolekül, das Th1-Zellen von Th2-Zellen in beiden Mäusen spezifisch erkennen und Menschen [26]. Es wurde auch auf zytotoxische CD8 + T-Zellen gefunden wurde, Th17, Treg, Monozyten, dendritischen Zellen, Mastzellen, natürliche Killerzellen (NK-Zellen), Melanom, SCC und Lungenkrebszellen [19], [20], [27], [ ,,,0],28], [29], [30]. Hier zum ersten Mal, haben wir gezeigt, Tim-3-Expression in Magenkrebszellen und Zelllinien. Darüber hinaus fanden wir eine signifikante Korrelation zwischen Tim-3-Expression in Krebszellen und die klinisch-pathologischen Parameter der Lymphe-Gefäßinvasion. Darüber hinaus fanden wir, dass die Überlebensrate von Patienten mit positiven Tim-3-Expression Tumoren als diejenigen mit negativen Tim-3-Expression signifikant niedriger war. Die eindimensionale und mehrdimensionale Analysen zeigten auch, dass Tim-3-Überexpression in Tumor mit einer schlechten Prognose von Magenkrebs assoziiert Zellen.

Tim-3 ist ein leistungsfähiges immunoinhibitorische Molekül in Immuntoleranz beteiligt sind, und Autoimmunreaktionen. Die Mechanismen für die Regulierung Tim-3-Expression in Tumorzellen sind noch nicht vollständig verstanden. Wiener et al berichtet, dass TGF-β1 Tim-3-Expression erhöht ist, die in lokale Immunsuppression führten [19]. Inzwischen wurden hohe Tumor TGF-β1-Spiegel signifikant mit einer verminderten Überleben der Patienten mit Magenkrebs in Verbindung gebracht. Frühere Studien haben Tim-3 als negativer Regulator der T-Helfer 1 identifiziert -cell Reaktionen [26]. Vor kurzem jedoch neue Forschungen zeigen, dass Tim-3 auch eine pro-inflammatorische Reaktion fördern kann, was darauf hinweist, dass Tim-3 eine doppelte Rolle bei der Immunität hat [31], [32]. Somit können die Expressionsniveaus von Tim-3 in Krebszellen assoziiert mit Cytokin während des Prozesses der Karzinogenese Magen erzeugen. Darüber hinaus haben die jüngsten Studien festgestellt, dass Tim-3-Überexpression mit kürzeren Gesamtüberlebenszeit von epithelialen Tumoren, einschließlich Lungenkrebs und Gebärmutterhalskrebs [20], assoziiert war [30], sind unsere Ergebnisse im Einklang mit diesen Berichten. Noch wichtiger ist als Cao et al all dieser Erkenntnisse bestätigt, dass die Expression von Tim-3 in Hela-Zellen, die Migration signifikant gehemmt sowohl Regulierung nach unten und die Invasion von HeLa-Zellen [30]. Diese Ergebnisse legen nahe, dass Tim-3 nicht nur Antitumor-Immunität unterdrücken, sondern auch direkt Krebs Fortschritt fördern.

Identifizierung von Gal-9 als Ligand für Tim-3 wurde nun fest etabliert die Tim-3-Gal -9-Weg als wichtiger Regulator von Th1 Immunität, die bei der Apoptose von Th1-Zellen führt [21], [33]. In dieser Studie haben wir festgestellt, dass sowohl höhere Gal-9-Expression und negativen Tim-3-Expression signifikant mit einer besseren Gesamtüberlebenszeit assoziiert waren ( P
= 0,002, P
= 0,010, respectively); die Kombination von Gal-9 und Tim-3-Expression war unabhängiger prognostischer Marker bei Magenkrebs. Diese Ergebnisse zeigen, dass die Tim-3-Gal-9-Weg eine wichtige Rolle bei Magen-Krebsentstehung spielen.

Darüber hinaus H.pylori
ein Karzinogen der Gruppe 1 der Weltgesundheitsorganisation basiert (WHO) und der Internationalen Agentur für Krebsforschung (IARC) [34]. Es wurde allgemein akzeptiert, dass Magenkrebs ist ein mehrstufiges Verfahren eine Reihe von Ereignissen, wie beispielsweise atrophische Gastritis, intestinale Metaplasie, Dysplasie und Karzinom beteiligt sind. Frühere Berichte haben darauf hingewiesen, dass die Tim-3-Gal-9-Interaktion eine bemerkenswerte Wirkung auf entzündliche [26] haben kann, [35], [36], [37]. Wir untersuchten auch, ob H.pylori
Infektion Expression von Gal-9 und Tim-3 bewirken kann. Doch in der aktuellen Studie, Gal-9 und Tim-3-Expressionsniveaus waren statistisch nicht unterschiedlich zwischen den H.pylori
(+) Gruppe und der H.pylori
(-) Gruppe bei Magenkrebs ( P
= 0,101, P
= 0,565). Weitere Untersuchungen mit additionalsamples nötig sind, um die Rollen von Gal-9 und Tim-3 in H.pylori
-Infektion zu etablieren.

Abschließend diese Studie hat die Expression von Gal-9 gezeigt, und Tim-3 bei Magenkrebs. Wichtig ist, zeigten die multivariaten Analysen die bedeutende Rolle von Gal-9 und Tim-3 als unabhängiger prognostischer Faktor für Patienten mit Magenkrebs. Somit kann der Status von Gal-9 und Tim-3 konnte bei der klinischen Untersuchung bestimmt und kann die Behandlung Wert in der Zukunft [38] haben, [39].

Acknowledgments

Die Autoren würden wie Dr. Jennifer S. Davis, Herr Chang-Song-Guo und Frau Ying Lied für ihre technische Unterstützung danken.

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