Abstrakt
Hintergrund
Der epidermale Wachstumsfaktor-Rezeptor (EGFR) -Gen spielt eine wichtige Rolle bei der Tumor Überleben, Invasion, Angiogenese und Metastasierung. Jüngste Studien haben gezeigt, dass Magenkrebs (GC) mit Polymorphismen des EGFR-Gens und Umwelteinflüssen verbunden war, wie Lifestyle-Faktoren. In dieser Studie wurden sieben bekannte SNPs in EGFR Exons wurden in einem Hochrisiko-chinesischen Bevölkerung in der Provinz Jiangsu sucht zu testen, ob genetische Varianten von EGFR Exons und Lifestyle mit einem erhöhten Risiko von GC verbunden sind.
Ein Krankenhaus-Fall-Kontroll-Studie wurde in der Provinz Jiangsu durchgeführt. Die Ergebnisse zeigten, dass das Rauchen, Trinken und Vorliebe für salzige Lebensmittel signifikant mit dem Risiko von GC verbunden waren. Die Unterschiede des Lebensstils zwischen Männern und Frauen könnten als bei Frauen diejenigen, bei Männern als Grund der höheren Inzidenzraten sein. Sieben Exon SNPs wurden rs2227983, rs2072454, rs17337023, rs1050171, rs1140475, rs2293347 und rs28384375 genotypisiert. Es wurde festgestellt, dass die Variante rs2072454 T-Allel und TT-Genotyp signifikant mit einem erhöhten Risiko von GC verbunden waren. Interessanterweise schlug unser Ergebnis der ACAGCA Haplotyp könnte mit verringerten Risiko für GC in Verbindung gebracht werden. Es wurde jedoch kein signifikanter Zusammenhang zwischen den anderen sechs SNPs und das Risiko von GC sowohl in der Gesamtbevölkerung und die Altersanpassung Bevölkerung auch mit geschlechtsspezifische Unterschiede untersucht.
Rauchen, Trinken und Vorliebe für salzige Lebensmittel waren signifikant mit dem Risiko von GC in der Provinz Jiangsu mit geschlechtsspezifischen Unterschieden in Verbindung gebracht. Obwohl nur ein SNP (rs2072454) signifikant mit einem erhöhten Risiko von GC verbunden war, kombiniert, um die sechs EGFR Exon SNPs können zusammen zur Vorhersage des Risikos von GC nützlich sein
Citation. Zhang J, Zhan Z, Wu J , Zhang C, Yang Y, Tong S, et al. (2013) Vereinigung unter Polymorphismen in EGFR-Gen Exons, Lifestyle und Risiko von Magenkrebs mit Geschlechtsspezifische Unterschiede in der chinesischen Han-Themen. PLoS ONE 8 (3): e59254. doi: 10.1371 /journal.pone.0059254
Editor: Eithne Costello, The Liverpool Cancer Research UK Centre, Vereinigtes Königreich
Empfangen: 19. September 2012; Akzeptiert: 13. Februar 2013 beginnen; Veröffentlicht: 29. März 2013
Copyright: © 2013 Zhang et al. Dies ist eine Open-Access-Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorausgesetzt, der ursprüngliche Autor und Quelle genannt werden
Finanzierung:. Diese Studie wurde von Priority Academic Program Development von Jiangsu Hochschulen (PAPD), Jiangsu Natural Science Foundation (BK2008461), National Natural Science Foundation of China (30973715 und 81001502), Forschungsfonds für das Doktoratsstudium der Hochschulbildung von China (20103237110011) unterstützt Junge Lehrer in Nanjing Universität für Traditionelle chinesische Medizin. Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung oder Vorbereitung des Manuskripts zur Veröffentlichung
Konkurrierende Interessen:.. Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen
Einführung
Obwohl sowohl die Inzidenz und Mortalität von Magenkrebs (GC) in den letzten Jahren zurückgegangen sind, GC die vierthäufigste Krebserkrankung in der Welt im Jahr 2008 mit etwa 989.600 neue Fälle war. Männer im Allgemeinen entwickeln GC doppelt so häufig wie Frauen und etwa 72% der neuen Fälle treten in Entwicklungsländern. Im Allgemeinen sind die höchsten Inzidenzraten in Asien, insbesondere in den ostasiatischen Ländern wie Korea, Japan und China [1].
Tatsächlich fast 40% aller GC Fälle treten in China, und es gibt eine bemerkenswerte geographische Variation in GC Raten in ganz China [2]. inoperablem Krankheit und ein medianes Überleben von sechs bis neun Monaten mehr als zwei Drittel der mit GC in China haben diagnostizierten Patienten. Darüber hinaus bei Patienten mit resektablen Tumoren, sind die lokalen und entfernten Rezidivraten hoch, und die 5-Jahres-Überlebensrate beträgt weniger als 30% [3]. Sun et al. Es ist heute allgemein anerkannt, dass die Pathogenese der GC eine multifaktorielle Interaktion zwischen Umwelt-Trigger und genetische Anfälligkeit beinhaltet. Epidemiologische Studien haben Alter, Geschlecht Unterschiede identifiziert und eine Reihe von Umweltfaktoren, die zur Entwicklung von GC, darunter eine salzige Ernährung, Rauchen, Alkoholkonsum und Helicobacter pylori Der epidermale Wachstumsfaktor-Rezeptor (EGFR) -Gen wird in dem kurzen Arm des menschlichen Chromosoms 7 und erzeugt ein Glykoprotein mit einem Molekulargewicht von 170 kDa liegt, der für seinen Liganden, einschließlich epidermalen Wachstumsfaktor (EGF) und der transformierende Wachstumsfaktor alpha (TGF-α) eine hohe Affinität aufweist. EGFR beteiligt sich an mehreren wesentlichen tumorigenen Mechanismen, wie Tumor Überleben, Invasion, Angiogenese und Metastasierung. EGFR-Expression wurde in zahlreichen humanen Tumoren beobachtet worden, und mehrere Studien gezeigt, dass die Überexpression von EGFR korreliert mit einer schlechten Prognose [11]. In GC korreliert EGFR-Überexpression mit fortgeschrittenem Tumorstadium und einem schlechten klinischen Ergebnis [12]. Allerdings bleiben die Rollen, die EGFR-Überexpression und genetische Veränderungen im Magen-Karzinogenese spielen unklar. Zudem ist nur ein paar Einzel-Nukleotid-Polymorphismen (SNPs) gefunden wurden, mit GC Entwicklung und der Ergebnisse [11], [13] zu verknüpfen. In dieser Studie die Hypothese aufgestellt, dass die Umweltbelastungen und geschlechtsspezifische Unterschiede wirken als Effektmodifikatoren auf dem Hintergrund der genetischen Variation in EGFR Exons, die EGFR-Funktion beeinflussen kann, wodurch GC Anfälligkeit zu gestalten. Um diese Hypothese zu testen, wurde eine Krankenhaus-Studie wurde in dem 387 GC Fälle und 392 Krebs-freie Kontrollen in einer Hochrisiko-chinesischen Bevölkerung durchgeführt wurden sieben bekannte SNPs in EGFR Exons Genotypisierung, nämlich rs2227983 A > G, rs2072454 C > T, rs17337023 A > T, rs1050171 G > A, rs1140475 C > T, rs2293347 G > A, und rs28384375 T >. C Materialien und Methoden Rekrutierung von Fällen und die Kontrolle Teilnehmer Zunächst 401GC Fälle und 420 Kontrollen wurden identifiziert; 3 Fälle von Krebs Mangel an Fragebögen sowie 11 anderen Tumoren als Adenokarzinom wurden ausgeschlossen; 18 Kontrollen wurden durch maßlose Serum krebsbedingte Biomarker ausgeschlossen und 10 Kontrollen wurden je nach geographischer Abweichung ausgeschlossen. Insgesamt eine Gesamtbevölkerung mit 387 Fällen und 392 Kontrollen für die aktuelle Studie auf der Grundlage der zukünftigen Leistung zur Verfügung standen analysiert, ist es schade, dass die Kontrollen etwa 10 Jahre jünger waren als Fälle, also eine Altersanpassung Bevölkerung mit 294 Fällen und 294 Kontrollen wurde von der gesamten Bevölkerung für die Zusammenstellung von Alter-Matching extrahiert. Alle Probanden waren genetisch nicht verwandten ethnischen Han-Chinesen. Die Patienten mit primären GC wurden von der Abteilung für Chirurgische Gastroenterologie in der Jiangsu Provence Krankenhaus für Traditionelle Chinesische Medizin (TCM), die zwischen Januar 2008 und Juli 2010 rekrutiert in Nanjing City, Provinz Jiangsu. Die Krebs-frei gesunden Kontrollen wurden nacheinander von Jiangsu Krankenhaus von TCM rekrutiert, und sie waren Krankenhausbesucher für einen jährlichen Check-up im gleichen Zeitraum. Um in die Studie aufgenommen werden, die Patienten (a) Männchen oder Weibchen über 20 Jahre alt, aber unter 80 Jahre alt, (b) sein musste von Han-Chinesen ethnische Zugehörigkeit (selbst berichteten), (c) kamen aus drei Regionen Jiangsu Provinz und hatte ein Anwohner für mindestens 5 Jahre zu sein, (d) musste neu zu haben histologisch diagnostizierten primären GC, (e) hatten bereits zuvor bösartigen Tumoren in anderen Organen zu fehlen, und (f) nicht Anti-Tumor-Therapie hatte vor der Einstellung einschließlich Chemotherapie und Strahlentherapie. Geschulten Interviewern verwendet, um eine vorgeprüfte Fragebogen epidemiologische Daten von den Teilnehmern zu sammeln, nämlich demografische Faktoren wie Alter und Geschlecht sowie bekannte Risikofaktoren für GC (wie Rauchen, Alkoholkonsum, und eine Familiengeschichte des Verdauungstraktes Krebs) . Personen, die über ein Jahr lang einmal oder mehrmals am Tag geraucht wurden als Raucher definiert, und diejenigen, die für mehr als 6 Monaten drei oder mehr alkoholische Getränke pro Woche verbraucht wurden als chronische Trinker [14], [15] zu sein. Einverständniserklärungen Nach der Unterzeichnung, jeder Gegenstand gespendet 3-5 ml peripherem Blut für die genomische DNA-Extraktion verwendet werden. Das Forschungsprotokoll vom Institutional Review Board von Jiangsu Provence Krankenhaus von TCM genehmigt wurde. Eine kommerzielle Blut-DNA-Extraktions-Kits (AxyPrep-96-Kit, Axygen, CA, USA) wurde verwendet, um genomische DNA aus den Blutproben zu extrahieren. Die gereinigten DNAs wurden bei -20 ° C gelagert, bis sie für die Genotyp-Tests verwendet wurden. Die Qualität der DNA durch Agarose-Gelelektrophorese beurteilt wurde. Polymerase-Kettenreaktion-Ligatur Nachweisreaktion (PCR-LDR) Methoden für die Genotypisierung verwendet wurden [16]. Die Primer wurden von Shanghai Sangon Biological Engineering Technology and Services (No.698, Xiangmin Rd, Songjiang District, Shanghai, China) synthetisiert. Jeder Satz von Ligase-Nachweisreaktion Sonden umfasst eine gemeinsame Sonde und zwei Diskriminierungssonden für die zwei Arten (Tabelle S1). Die Ziel-DNA-Sequenzen wurden unter Verwendung einer Multiplex-PCR-Verfahren amplifiziert. PCRs für jeden Probanden wurden in einem Endvolumen von 20 ul, enthaltend 1 × PCR-Puffer, 3,0 mmol /l MgCl 2, 2,0 mmol /l Desoxynukleotidtriphosphate, 1 &mgr; l Primer, 0,2 &mgr; l QIAGEN HotStarTaq Polymerase (QIAGEN, China durchgeführt ), 4 &mgr; l von 1 × Q-Lösung und 10-20 ng genomische DNA. Wärmezyklus wurde bei 95 ° C für 15 min für fünf SNPs (rs2227983, rs17337023, rs1140475, rs2293347 und rs2072454) im Gene Amp PCR System 9600 (PerkinElmer), mit einer anfänglichen Denaturierung durchgeführt, gefolgt von 35 Zyklen Denaturierung bei 94 ° C für 30 s, Annealing bei 59 ° C für 1 min und Verlängerung bei 72 ° C für 1 min, gefolgt von einer abschließenden Extension bei 72 ° C für 7 min. Das Protokoll für rs28384375 Amplifikation bestand aus einer anfänglichen Denaturierung für 15 min bei 95 ° C, gefolgt von 35 Zyklen Denaturierung bei 94 ° C für 30 s, Annealing bei 56 ° C für 1 min und Verlängerung bei 72 ° C für 1 min für 7 min bei 72 ° C gefolgt von einer abschließenden Erweiterung folgt. Das Protokoll für rs1050171 bestand aus einer anfänglichen Denaturierung für 15 min bei 95 ° C, 30 s bei 94 ° C von 35 Zyklen von Denaturierung, Annealing bei 53 ° C für 1 min und Verlängerung bei 72 ° C für 1 min, bei 72 ° C durch eine abschließende Extension für 7 min gefolgt. für jedes Subjekt Die Ligationsreaktion wurde in einem Endvolumen von 10 ul, enthaltend 1 × NEB Taq DNA-Ligase-Puffer, 12,5 pmol jedes Sondenmischung durchgeführt 0,05 &mgr; l Taq DNA-Ligase [NEB Biotechnology (Beijing)] und 1 ul multi-PCR-Produkt. Die Sondensequenzen sind in Tabelle S2 gezeigt. Insgesamt 35 Zyklen aus 95 ° C für 2 min, 94 ° C für 30 s und 60 ° C für 2 min durchgeführt. Die fluoreszierenden Produkte der Ligase Nachweisreaktionen wurden von einem ABI-Sequenzer 377 (Abbildung S1) unterschieden. Um die Genauigkeit der PCR-Genotypisierung LDR Verfahren, direkte DNA-Sequenzierung zufällig ausgewählter PCR-Produkte bestätigt wurde durchgeführt. Der Anteil der Sequenzierungsproben betrug etwa 5%. Die PCR-LDR Genotypisierung Ergebnisse zeigten eine vollständige Übereinstimmung mit den direkten DNA-Sequenzierung Ergebnisse. Alle statistischen Analysen unter Verwendung von SPSS-Software Version 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL durchgeführt wurden, USA). Um die beobachteten Genotyp Frequenzen in der Kontrollgruppe mit den erwarteten Frequenzen, die Hardy-Weinberg-Gleichgewicht (HWE) vergleichen wurde von einer Güte-of-fit getestet χ 2-Test. Fälle und Kontrollen wurden im Hinblick auf die demographischen Merkmale, Lifestyle-Faktoren und die Allelfrequenzen jedes SNP mit der χ 2 im Vergleich Ergebnisse | Merkmale der Studienteilnehmer Die Eigenschaften dieser Studie Themen waren konsistent mit zuvor [17] beschrieben, [18]. In diesem Papier wird die Gesamtbevölkerung mit 387 Fällen und 392 Kontrollen und einer altersAnpassung Bevölkerung mit 294 Fällen und 294 Kontrollen wurden in den aktuellen Analysen einbezogen. Geschlecht, Alter und geografische Region Verteilung der Studienteilnehmer in Tabelle 1 Um die Unterschiede in der GC Inzidenz zwischen Männern und Frauen, die Verteilungen von ausgewählten Lifestyle-Variablen untersuchen wurden mit geschlechtsspezifischen Unterschiede analysiert. Die Ergebnisse zeigten, dass sechs Lifestyle-Faktoren waren signifikant korreliert mit dem Risiko von GC (dh regelmäßig Mahlzeiten, Vorliebe für salzige, Essen Zeit, Rauchen, Trinken Status und beim Frühstück nehmen), und ihre Auswirkungen könnten nach Geschlecht geändert werden und Alter. Vier Faktoren des Lebensstils, das heißt, Vorliebe für salzige Nahrung, Zeit Essen, Rauchen Status und trinken Status, waren signifikant unterschiedlich zwischen Männern und Frauen ( P Genotyping Verteilung und Risiko von GC In der vorliegenden Studie wurde nur das T-Allel des Missense-Locus rs28384375 nachgewiesen. In Bezug auf die verbleibenden sechs SNPs wurden die beobachteten Genotyphäufigkeiten in den Kontrollen in HWE. Da keine statistische Signifikanz verloren war, wurden nur die angepassten statistischen Ergebnisse in den Tabellen dargestellt. In der Gesamtbevölkerung, die Assoziation zwischen der Verteilung von EGFR-Gen-Allele, Genotypen und das Risiko von GC wurde in Tabelle 5 nur einen geringen Unterschied beobachtet wurde im Hinblick auf die Allel-Verteilung von rs2072454 ( χ 2 gezeigt In die Altersanpassung Bevölkerung wurde die Assoziation zwischen der Verteilung von EGFR-Gen-Allele, Haplotypen und das Risiko von GC wurde in Tabelle 6. Ein signifikanter Unterschied in Bezug auf die Allel-Verteilung ( χ beobachtet gezeigt 2 Um auszuschließen, Umwelteinflüsse, untersuchten wir den Zusammenhang zwischen den möglichen drei GC-bezogene SNPs und das Risiko von GC in der Altersanpassung Bevölkerung tragen Gesundheit Lebensstil (Tabelle 7). Ein deutlicher Unterschied in Bezug auf die Genotyp Verteilung von rs2072454 ( χ 2 Exons kodieren, nicht nur die Aminosäuresequenz des Proteins, sondern auch Sequenzen enthalten, die Translation oder mRNA-Abbau beeinflussen [19]. Die Loci wurden vereinigt und zu Haplotyp Folgerung Analyse unterworfen, um das PHASE 2.0-Programm. Es gab vier möglichen Haplotypen in der Gesamtbevölkerung und drei möglichen Haplotypen in der Alters-matching Population mit einer Frequenz von > 4% (Tabelle 8, Tabelle 9). Im Vergleich zum GTTGCG Haplotyp-Analysen logistischer Regression ergab, dass die ACAGCG Haplotyp assoziiert war ein deutlich geringeres Risiko von GC (OR = 0,67, 95% CI = 0,49-0,92, P Diskussion Obwohl eine große Anzahl von neuen GC Fälle wurden auf der ganzen Welt in den jüngsten Jahrzehnten gesehen, die genauen Mechanismen zugrunde liegenden Magen-Karzinogenese noch nicht vollständig verstanden. Ähnlich wie bei der bisherigen Forschung [20], [21], zeigte unser Ergebnis, dass die Männer in der Regel GC doppelt so häufig wie Frauen in China entwickelt haben. Es wurde von Michael et al vorgeschlagen. Resent Untersuchungen vorgeschlagen, dass eine hohe Zufuhr von Salz (Natrium) könnte das Risiko von GC zu erhöhen [21], [ ,,,0],24] - [26]. Es wurde auch von unserer Beobachtung belegt, dass die GC-Patienten in der Provinz Jiangsu waren Vorliebe für salzige Lebensmittel, wie gesalzenes Fleisch, eingelegtem Gemüse und eingelegtem Gemüse-Saft, der von N-Nitrosoverbindungen kontaminiert sein könnten. Allerdings waren die N-Nitrosoverbindungen der am häufigsten auf das erhöhte Risiko von oberen gastrointestinalen Krebserkrankungen im Zusammenhang vorgeschlagen [27]. Trinken und Rauchen, noch zwei dominierenden Risikofaktoren für die GC in der Welt [28], wurden ebenfalls in dieser Studie untersucht. Wir fanden einen signifikanten Zusammenhang zwischen Trinken und GC Risiko in der Provinz Jiangsu. Es gab Hinweise durch eine Laborstudie, dass Rauchen durch eine Erhöhung der XO-Aktivität, die die Apoptose in der Ratte Magenschleimhaut erhöhen könnte [29] und Alkohol könnte auch Einfluss auf die Säuresekretion, die Magenentleerung ausübt und bestimmte Säure-Erkrankungen, wie beispielsweise Gastritis mit einer Schädigung der Magenschleimhaut begleitet, und die folgende Entzündungsreaktion wird wiederum fördern Magenzellproliferation und -differenzierung [30]. Bei dem Verfahren können die N-Nitrosoverbindungen und Mykotoxine aus einigen salzigen Speisen induzieren Gen-Mutationen [31], [32], so Vorliebe für salzige Nahrung kann das ursprüngliche Risiko von GC sein. Und wies Anzeichen einer Vereinigung mit Wegen in Entwicklungsprozessen beteiligt [33]. Schlüsselmoleküle dieser Wege sind die Rezeptor-Tyrosinkinasen, die aberrant aktiviert werden gefunden wurden oder in einer Vielzahl von Tumoren überexprimiert und daher vielversprechende Ziele für therapeutische Intervention dar [13]. EGFR war eine der Schlüsselmoleküle und viele Beweislinien legen nahe, dass sehr invasiv GC mit dem abweichende Aktivierung oder Überaktivierung des EGFR aufgrund Genamplifikation oder strukturelle Veränderungen [13] verbunden ist. In jüngster Zeit wurde eine Fall-Kontroll-Studie von 61 Fällen und 20 Kontrollen in der Provinz Henan, befindet sich in der Mitte China, zeigten, dass der EGFR rs28384375 C /T Polymorphismus das Auftreten und die Entwicklung von GC fördern kann [34]. Darüber hinaus befindet sich ein weiterer Fall-Kontroll-Studie von 138 Fällen und 170 Kontrollen in der Provinz Jiangxi, in Süd-Ost-China, ergab, dass der EGFR rs763317 G /A-Polymorphismus mit einem erhöhten Risiko von GC assoziieren kann [35]. EGFR ist Kinase ein Wachstumsfaktor-Rezeptor-Tyrosin und gehört zur Rezeptor-Tyrosinkinase-Superfamilie, deren Mitglieder durch eine extrazelluläre Domäne gekennzeichnet sind (wobei die Ligandenbindung Liganden stattfindet), nur eine kurze lipophile Transmembrandomäne und eine intrazelluläre Domäne, die die Tyrosinkinase birgt Aktivität [36]. EGFR können durch Bindung Liganden, wie EGF und TGF-α aktiviert werden, und es spielt eine entscheidende Rolle in der Entwicklung, Proliferation und Differenzierung. Die Aktivierung von EGFR kann zur Transformation von zellulären Phänotypen beitragen und Tumorzellen mit erheblichen Wachstum und Überleben Vorteile [37] bereitzustellen. Viele menschliche Tumoren zeigen EGFR-Überexpression, die mit einem fortgeschrittenen Tumorstadium oder einem schlechten klinischen Ergebnis, wie nicht-kleinzelligem Lungenkarzinom [38], Darmkrebs [39], Brustkrebs [40], Kopf- und Halskrebs korreliert ist [ ,,,0],41], Blasenkrebs [42], und GC [43]. Es gibt derzeit ein zunehmendes Interesse an SNP Mutationen in EGFR, da sie die Wirksamkeit der EGFR-Tyrosinkinase-Inhibitor (TKI) Behandlung in verschiedenen beeinträchtigen könnten Krebserkrankungen [44], Darmkrebs [39], nicht-kleinzelligem Lungenkarzinom [45], GC [46] - [49]. Es ist bekannt, dass nicht nur die Exons für die Aminosäuresequenz des Proteins kodieren, sondern auch Sequenzen enthalten, die Translation oder mRNA-Abbau beeinflussen [19]. So konnte die Expression EGFR-Gen SNPs EGFR Exon beeinflussen und /oder Proteinaktivität und dadurch die Affinität von EGFR verändern nicht nur für seinen Liganden, sondern auch für die Antikrebsmittel, die dieses Protein zielen. Tatsächlich Puyo et al. in der vorliegenden Studie wurden die sechs Exons SNPs in EGFR wurden leicht mit dem Risiko von GC verbunden sind sowohl in der Gesamtbevölkerung und die Altersanpassung Bevölkerung auch mit dem Geschlecht Unterschiede. Es wurde festgestellt, dass die SNP rs2072454 signifikant mit dem Risiko von GC verbunden war. Insbesondere wurden die Variante rs2072454 T-Allel und TT-Genotyp mit einem erhöhten Risiko von GC verbunden. Doch die rs2227983, rs17337023, rs1050171 und rs1140475 SNPs nicht mit GC Risiko beziehen. Im Hinblick auf die Missense-Locus rs28384375, nur das T-Allel wurde in den Fällen und Kontrollen festgestellt. Viele Berichte vorgeschlagen, daß mehrere EGFR SNPs, einschließlich rs2227983 (auch als Arg521Lys oder R497K bezeichnet) [39], [52], [53], rs1050171 (auch als Q787Q bezeichnet) [54], [55] und rs2293347 (C2982T) [ ,,,0],56], eher das biologische Verhalten von Tumoren (wie zum Beispiel Tumorwachstum, Invasion, Metastasierung, und das Fortschreiten) zu beeinflussen, als die Anfälligkeit für die Entwicklung von Krebs zu definieren. Da EGFR kann ein Schlüsselmediator der Angiogenese regulieren seine Zielgene, wie beispielsweise VEGF, die direkt Tumor biologische Verhalten beeinflussen können. Diese Ergebnisse würden auch erklären, warum EGFR SNPs als Schlüsselfaktoren für eine Antwort auf EGFR-TKI-basierte Chemotherapie dienen kann [11]. Daher können diese Gen-Mutationen verleihen, die Komplexität und Peinlichkeit für die GC-Behandlung und das Überleben [57]. Wenn Puyo et al Mehrere Einschränkungen in der vorliegenden Studie angesprochen werden müssen: 1.) Seine Stichprobengröße möglicherweise nicht groß genug gewesen SNPs mit niedriger Frequenz Variante, wie rs28384375 zu erfassen; 2) die Polymorphismen, die in dieser Studie untersucht wurden, wurden auf der Grundlage ihrer Wirkung auf EGFR-Funktion ausgewählt und nicht einen umfassenden Überblick über die genetische Variabilität in EGFR Exons geben; 3) detaillierte Informationen über die GC Fälle wurde nicht erhoben, darunter das Überleben des Patienten, ob die Tumoren der Darm oder diffuse Art waren, ob es Metastasen, und dem, was die Wirkung der medikamentösen Therapie war. Im Ergebnis der vorliegende Studie schlug vor, dass die Unterschiede in der Lebensweise zwischen Männern und Frauen als Grund der höheren Inzidenzraten bei Männern als bei Frauen sein könnten. Obwohl nur ein SNP (rs2072454) signifikant mit einem erhöhten Risiko von GC verbunden war, kombiniert, um die anderen sechs EGFR Exon Analyse können SNPs zusammen nützlich sein, um das Risiko von GC vorherzusagen. Weitere Studien sind gerechtfertigt, diese Erkenntnisse zu etablieren und die zugrunde liegenden Mechanismen zu adressieren. Acknowledgments Wir erkennen Meister Jingye Wang und Haixia Xu für die Unterstützung bei der DNA-Isolierung.
[4], um die Auswirkungen der GC auf der chinesischen Bevölkerung durch epidemiologische Analyse der Sterblichkeit Verteilung 1990-1992 beurteilt, die Ergebnisse zeigten, dass GC die führende Ursache der durch Krebs verursachten Todesfälle in China war .
Infektion beitragen kann [5] - [8] . Andere Studien haben Wirtsfaktoren und genetische Veränderungen identifiziert, die auch eine wichtige Rolle bei der Entwicklung und Progression von GC durch Gen-Umwelt-Interaktionen [9], [10] spielen.
Isolierung genomischer DNA aus peripheren Blutzellen
Genotyping
Statistische Analysen
-test. Für jeden Polymorphismus, Odds Ratios (OR) und 95% Konfidenzintervall (CI) wurden aus dem bedingten logistischen Regressionsmodellen berechnet, um die Hauptwirkung eines jeden Polymorphismus mit GC zu schätzen, während für die kontinuierliche Alter, Geschlecht und Lifestyle-Faktoren anzupassen. Die logistische Regression analysiert die wesentlichen Allel verwendet, als Referenz verwendet wurden angepasst OPs zu schätzen, 95% CIs und P
Werte. Allerdings fanden wir, dass das Geschlecht und das Alter Variable nicht zu der Annahme, der Verhältnismäßigkeit entsprach. So wurden Geschlecht Schichtung und altersAnpassung verwendet OPs und 95% CIs zu messen. Für Lifestyle-Variablen, die bedeutende Beziehungen mit GC in Analysen zeigten, kontrolliert nur Faktoren passend, wir beurteilen weiter ihre Unabhängigkeit in Analysen für zusätzliche potenzielle Störfaktoren angepasst (dh Rauchen, Trinken, salzig, Essen Zeit und essen Frühstück) in der Altersanpassung Bevölkerung. Und PHASE-Software-Paket Version 2.0 wurde verwendet Haplotypenfrequenz Genotypen basierend auf den beobachteten EGFR zu schließen. Alle P
Werte waren zweiseitig und ein P
Wert. ≪ 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen
gezeigt werden
< 0,05) (Tabelle 2). Es wurde festgestellt, dass die Prozentsätze der Männer ungesunde Ernährungsgewohnheiten, wie Vorliebe für salzige Lebensmittel, kurze Essen Zeit, Rauchen und Trinken, waren signifikant höher als die der Frauen ( P
< 0,05) trägt, , die als Grund für die höhere Inzidenz bei Männern als bei Frauen sein könnten. In der Gesamtbevölkerung regelmäßig Einnahme von Mahlzeiten und das Frühstück isst verringert das Risiko von weiblichen GC, beim Trinken das Risiko der männlichen GC (Tabelle 3) erhöhen könnte. Darüber hinaus erhöhten sich sowohl Vorliebe für salzige Lebensmittel und Rauchen das Risiko von männlichen und weiblichen GC ( P
< 0,05). Ähnliche Ergebnisse wurden auch nach Altersanpassung gefunden, die regelmäßige Einnahme von Mahlzeiten, das Risiko von GC und Vorliebe für salzige Lebensmittel verringert und Rauchen erhöht das Risiko von männlichen und weiblichen GC ( P
< 0,05, Tabelle 4). Allerdings gab es zwei Ausnahmen, dass das Risiko der männlichen GC erhöht das Trinken ( P
< 0,05), aber nicht weiblich GC ( P
> 0,05) vielleicht aufgrund der begrenzten weiblich Bevölkerung, während täglich Frühstück essen, das Risiko der weiblichen GC ( P
< 0,05) verringert, aber nicht männlich GC ( P
> 0,05). (Tabelle 4)
= 3,844, P =
0,050) und logistische Regressionsanalysen zeigten, dass die Variante dieses Allels mit GC Risiko verbunden sein können (bereinigt OR = 1,23, 95% CI = 1,00-1,50). Es wurden jedoch keine signifikanten Unterschiede zwischen den Fällen und Kontrollen in Bezug auf die Allelverteilung mit geschlechtsspezifischen Unterschiede beobachtet. Der rs2293347 Polymorphismus wurde mit männlichen GC Fälle verbunden, da 73,0% der GC Fälle ein G-Allel durch verglichen mit 29,5% der Gesundheitskontrollen (adjustierte OR = 6.45, 95% CI = 4,89-8,51, P
< 0,001 ), jedoch wurden keine Genotypen signifikant mit dem Risiko von GC verbunden. Im Gegensatz weiblichen Bevölkerung der GA-Genotyp das Risiko von weiblichen GC wegen 34,5% der GC Fällen abnehmen könnte GA Genotyp verglichen mit 38,9% der Gesundheitskontrolle, aber keine signifikanten Unterschiede zwischen der Verteilung von Allel und Genotypfrequenzen ( Trage P
> 0,05). Darüber hinaus wurden keine signifikanten Unterschiede bei den anderen vier SNPs untersucht ( P
> 0,05)., Dh rs2227983, rs17337023, rs1050171 und rs1140475 zwischen Fällen und Kontrollen auch mit geschlechtsspezifischen Unterschieden
= 4,795, P =
0,029) und Genotyp-Verteilung ( χ 2
= 6,668, P =
0,036) von rs2072454, andere als die Ergebnisse in Tabelle 5. Darüber hinaus analysiert logistische Regression ergab, dass die Variante des rs2072454 T-Allels könnte das Risiko von GC erhöhen (adjustierte OR = 0,77, 95% CI = 0,61-0,97; P
< 0,05). Nach dem Genotyp Verteilung wurde ein signifikanter Unterschied auch in der männlichen Bevölkerung ( χ 2
= 7,914, P =
0,019) beobachtet eher als weibliche Bevölkerung ( χ 2
= 0,452, P =
0.798). Allerdings gab es keine signifikanten Unterschiede zwischen den Fällen und Kontrollen auch mit geschlechtsspezifische Unterschiede für die restlichen SNPs, nämlich rs2227983, rs17337023, rs1140475, rs1050171 und rs2293347 ( P
> 0,05).
= 6,036, P =
0.049) untersucht. Speziell Analysen logistischer Regression ergab, dass der TT-Genotyp signifikant das Risiko für GC in der Bevölkerung mit täglich Frühstück essen erhöht (adjustierte OR = 1,92, 95% CI = 1,07-3,44, P
< 0,05).
< 0,05 adjustiert für Alter, Gender und Lifestyle-Faktoren) in der Gesamtbevölkerung (Tabelle 8) statt der Altersanpassung Bevölkerung (OR = 0,83, 95% CI = 0,58-1,19, P
> 0,05 korrigiert für Alter, Geschlecht und Lebensstil Faktoren) (Tabelle 9). Die anderen Haplotypen mit einem deutlich verringerten Risiko für GC verbunden waren (adjustierte OR = 0,69, 95% CI = 0,52 bis 0,90 für die Gesamtbevölkerung, bereinigt OR = 0,74, 95% CI = 0,56-0,99 für die Altersanpassung Bevölkerung). Im Vergleich zum ACAGCG Haplotyp, verringern die ACAACG könnte das Risiko von GC (OR = 0,61, 95% CI = 0,40-0,94 korrigiert für Alter, Geschlecht und Lebensstil) in der Gesamtbevölkerung, aber die P
Wert hat erreichte keine statistische Signifikanz von Bonferroni-Korrektur (Tabelle 8).
, Dass ein großer Teil der globalen Veränderung der Inzidenz von Krebserkrankungen hat sich auf Umwelteinflüsse zurückzuführen, darunter auch Ernährungsgewohnheiten und ungesunde Lebensweise Faktoren [22]. In der vorliegenden Studie daher waren wir daran interessiert zu testen, ob einige ungesunde Lebensweise Faktoren das Risiko von GC mit geschlechtsspezifischen Unterschieden in China erhöhen könnte. Sechs Lifestyle-Faktoren, einschließlich regelmäßige Einnahme von Mahlzeiten, Vorliebe für salzige Nahrung, Zeit zu essen, Rauchen, Trinken Status und beim Frühstück wurden identifiziert das Risiko von GC mit geschlechtsspezifischen Unterschieden beeinflusst zu werden, die mit den früheren Studien in Ost-China einstimmte [20], [23], [24]. Insbesondere Vorliebe für salzige Nahrung, Trinken und Rauchen waren die stärksten und beständigsten Risikofaktoren für die GC.
Festgestellt, dass Mutationen in den Exons 18-21 von EGFR, die Aktivität von TKI verbessern, während die Deletion der Exons 2-7 mit Glioblastom oncogenesis verbunden ist [49]. Außerdem wurden zwei klinische Studien zeigten, dass SNPs in EGFR Exons 18, 19, 21 und 25, die klinische Wirksamkeit von Gefitinib beeinflussen und potentielle Biomarker für die Vorhersage des klinischen Ergebnisses mit fortgeschrittenem nicht-kleinzelligem Lungenkrebs von Gefitinib behandelten Patienten sein kann, (NSCLC) [50], [51].
. [49] analysiert den Zusammenhang zwischen spezifischen EGFR funktionellen Polymorphismen und Anti-Krebs-Medikament Aktivität in 60 menschlichen Linien durch das National Cancer Institute, die Frequenz der nicht-synonymen SNP rs28384375 (auch als Val592Ala bezeichnet) etablierte Zelltumor 0,5 war, während die heterozygot Frequenz des -216G > T SNP (auch als rs287129 bezeichnet) betrug 0,346. Die Zelllinien, die heterozygote und homozygote Variante für die -216 G waren > T SNP zeigten eine signifikant höhere Expression des EGFR-Gens als die homozygot Wildtyp-Linien. Darüber hinaus, im Vergleich zu Zelllinien ohne Variante Allel, die Zelllinien mit mindestens einer Variante T Allel an der -216 G > T SNP waren empfindlicher auf Erlotinib und weniger empfindlich für Geldanamycin, Topoisomerase I und II Inhibitoren, und Alkylierungsmittel. Interessanterweise zeigten unsere Ergebnisse, dass die GTTGCG Haplotyp häufiger bei GC Fälle als in Krebs-freie Kontrollen war, und dass die ACAGCG Haplotypen wurden im Zusammenhang mit einem deutlich verringerten Risiko von GC (adjustierte OR = 0,67, 95% CI = 0,49-0,92 für ACAGCG, bereinigt OR = 0,69, 95% CI = 0,52-0,90 für andere) in der Gesamtbevölkerung (Tabelle 8). Doch in der Altersanpassung Bevölkerung wurde kein signifikanter Zusammenhang zwischen ACAGCA Haplotyp und das Risiko von GC untersucht (bereinigt OR = 0,83, 95% CI = 0,58-1,19) (Tabelle 9). Somit sind die T-Allele von rs2072454 und rs17337023, insbesondere die ersteren, könnte mit dem Risiko von GC verbunden sein. Daher kombinierte Analyse der sechs SNPs, vor allem die T-Allele von rs2072454 und rs17337023 kann zur Vorhersage des Risikos von GC nützlich sein
Grundinformationen
Abbildung S1.
Die fluoreszierenden Produkte von LDR wurden von ABI Sequenzer 377 für die sieben SNPs in EGFR Exons unterschieden. Insgesamt wurden mehr als 90% der Produkte wurden von ABI Sequenzer 377.
doi erfolgreich unterschieden: 10.1371 /journal.pone.0059254.s001
(TIF)
Tabelle S1. Die PCR-Primersequenzen für die sieben Loci in dem EGFR-Gen
. Die Primer wurden durch Primer Premier 6-Software entwickelt und synthetisiert von Shanghai Sangon Biological Engineering Technology and Services
doi:. 10.1371 /journal.pone.0059254.s002
(DOC)
Tabelle S2.
Sondensequenzen der sieben SNPs in EGFR-Gen. Die Primer wurden von Shanghai Sangon Biological Engineering Technology and Services synthetisiert
doi:. 10.1371 /journal.pone.0059254.s003
(DOC)
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