PLOS ONE: Impacto de la NGP, TFF3 y TACC1 en el pronóstico de pacientes con Gástrico Primario Cancer

Extracto

Antecedentes

MNP, TFF3 y TACC1 son marcadores moleculares que desempeñan papeles importantes en la celda diferenciación. En este documento, hemos investigado su impacto pronóstico en pacientes con cáncer primario gástrico (CG) y se determinó si podrían ser utilizados como marcadores de los carcinomas gástricos más agresivas detectando el grado de expresión en muestras de carcinoma gástrico humano.

Metodología /principales conclusiones

muestras de tejido tumoral de 142 pacientes GC se recuperan de forma retrospectiva y el estudio inmunohistoquímico evaluados. Las correlaciones entre la NGP, TFF3 y TACC1 sobre-expresión y parámetros clincopathologic, y sus valores de pronóstico se investigaron con modelos χ ^{2, el método de Kaplan-Meier y Cox de supervivencia uni y multivariante. NPM, TFF3 y expresión TACC1 fue significativamente mayor en los pacientes con GC tipo histológico pobremente diferenciado que en pacientes con el tipo histológico bien diferenciado. NPM expresión fue significativamente mayor en los pacientes con metástasis hepática o la repetición de lo que en los pacientes sin metástasis. TFF3 expresión fue significativamente mayor en los pacientes con ganglios linfáticos positivos metástasis que en pacientes con metástasis en los ganglios linfáticos negativos. La edad, metástasis en los ganglios linfáticos, y TFF3 y TACC1 sobre-expresión se correlacionaron significativamente con baja supervivencia (P < 0,05, P < 0,05, P = 0,005 y P = 0,009, respectivamente). El análisis multivariado mostró que la metástasis de los ganglios linfáticos y TFF3 y TACC1 sobreexpresión fueron factores pronósticos independientes.}

Conclusiones

TFF3 y TACC1 sobre-expresión en las células epiteliales de tejidos GC resecado quirúrgicamente fue un predictor independiente supervivencia de corto en pacientes GC. El pronóstico era más pobre en pacientes con expresión positiva de ambos TFF3 y TACC1 que en pacientes con expresión positiva de TFF3 o TACC1 solo, o con la expresión negativa de TFF3 y TACC1

Visto:. Ding A, Zhao W, Shi X, Yao R, Zhou F, Yue L, et al. (2013) Impacto de la NGP, TFF3 y TACC1 en el pronóstico de pacientes con cáncer gástrico primario. PLoS ONE 8 (12): e82136. doi: 10.1371 /journal.pone.0082136

Editor: Yves St-Pierre, INRS, Canada |

Recibido: 16 Agosto, 2013; Aceptado: 21 Octubre 2013; Publicado: 16 de diciembre 2013

Derechos de Autor © 2013 Ding et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Financiación:. Este estudio con el apoyo de la Fundación de Ciencias Naturales de Shandong (2009HW024); Proyecto de Shandong Excelente Young Scientist Award Fund Research (2006BSB14114; BS2010YY013). Shandong abordar los problemas clave de la Ciencia y la Tecnología (2010GSF10245; Y2006C23). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia

Introducción

el cáncer gástrico (CG) es el 4 ^{º cáncer más común en todo el mundo (7,8% de todos los cánceres) y el 2 ª causa de muerte por cáncer (9,7% de todas las muertes por cáncer) líder a nivel mundial [1]. Aunque la resección quirúrgica es una opción viable para los pacientes con cáncer gástrico en etapa temprana, el control de la progresión GC sigue siendo difícil [2], [3]. La patogénesis de la GC se asocia a múltiples factores. Recientemente, se han identificado diversos factores biológicos implicados en la patogénesis de la GC, pero su relevancia clínica no se ha confirmado. Una mejor comprensión de las bases biológicas de GC sería de gran ayuda.}

nucleofosmina (NMP), también conocido como numatrin o NO38, es un miembro de la nucleoplasmina (MNP) de la familia. Se trata de una fosfoproteína nucleolar constantemente yendo y viniendo entre el nucleolo y citoplasma [4]. NPM ejerce muchas funciones, incluyendo la generación de los ribosomas, el mantenimiento de la integridad genómica, y el transporte de las proteínas en el núcleo [5]. Por lo tanto, la nucleofosmina /gen B23 (B23) parece estar implicado en el control del crecimiento celular, la diferenciación y la muerte celular programada [6], [7]. NMP se sobreexpresa o mutado en células de cáncer humano, y por lo tanto es un marcador pronóstico candidato en los cánceres de colon, de ovario y de próstata [8], [9]. Sin embargo, dado que la mayoría de estas conclusiones se basan predominantemente en pruebas indirectas con modelos in vitro, la contribución exacta de la NGP a la tumorigénesis está lejos de ser clara en gran parte debido a la falta de estudios clínicos apropiados.

factor trébol 3 (TFF3 ) es un miembro de la familia de genes TFF, que codifica una serie de pequeños polipéptidos de mucina asociada a [10]. TFF3 está presente principalmente en el tracto gastrointestinal y otros tejidos epiteliales, y se sabe que juega un papel importante en el mantenimiento de la integridad de la mucosa [11]. TFF3 se supone para mejorar la migración celular a través de la modulación de las funciones de E-cadherina complejos /catenina [12]. Recientemente, se ha informado de factorías francas que se sobreexpresa tanto a nivel de genes y proteínas en los tumores humanos, incluyendo los cánceres intestinales, páncreas y próstata

La transformación de ácidos en espiral -.
Bobina 1 (TACC1) fue originalmente identificado como la secuencia de codificación único encontrado consistentemente dentro del amplicón de cáncer de mama humano 8p11 [13]. Se expresa en altos niveles durante la embriogénesis y luego hacia abajo-regulada en tejidos diferenciados [13] - [15]. TACC1 está involucrado en varios tipos de cáncer como el de mama y de ovario y leucemia. En un estudio reciente [16], TACC1 se encontró que estaba regulada hacia arriba y actuar como un oncogén en cánceres de mama y de ovario. Sin embargo, un análisis reciente de serie de la expresión génica (SAGE) sugirió que TACC1 se había reducido regulado en los tumores de ovario y cáncer de ovario líneas celulares [17]. Por lo tanto, si las funciones TCAA1 como un oncogén [16] o un supresor de tumores [18] es altamente dependiente del tipo de cáncer [13].

En el presente estudio, se investigaron los niveles de expresión de la NGP, TFF3 y TACC1 en pacientes con cáncer gástrico, y también analizaron sus posibles correlaciones con las características clínicas y la supervivencia global (SG) de pacientes con cáncer gástrico.

Materiales y Métodos

pacientes y muestras clínicas

incluido en este estudio fueron 142 pacientes (93 varones y 49 mujeres) que recibieron la resección quirúrgica del GC primaria en el departamento de cirugía general en nuestro hospital entre julio de 2007 y septiembre de 2009. el protocolo de estudio fue aprobado por el Comité de Ética del hospital Afiliado de Qingdao Escuela universitaria de Medicina (Qingdao, china). Los pacientes habían firmado un consentimiento informado. La mediana de edad fue de 59 años (27 a 89 años). las muestras de tumor se fijaron en solución de formaldehído al 10% y embebidos en parafina. Ninguno de los pacientes había recibido quimioterapia o radioterapia antes de la cirugía. Los diagnósticos patológicos y las clasificaciones se hicieron de acuerdo con la Clasificación japonesa de carcinoma gástrico. Se recogieron de forma retrospectiva los datos demográficos y clínicos completos. "El cáncer temprano" se definió como la invasión del cáncer limitado a la submucosa, y "cáncer avanzado" se definió como la invasión del cáncer en la capa muscular propia o serosa. La fecha final del seguimiento fue de Julio de 2012, y el período de seguimiento medio de SG fue de 47 meses (rango 3-59 meses) con una tasa de supervivencia posquirúrgica de 3 años del 64,2%.

La inmunohistoquímica

bloques de matriz se cortaron en secciones de 4 micras, eliminó la parafina y se hidrataron en etanol clasificado. La recuperación del antígeno se llevó a cabo mediante la inmersión de los portaobjetos en tampón de citrato (pH 6,0) y el horno de microondas durante 10 min. Desparafinaron secciones de tejido y hidratados se trataron con 0,3% de peroxidasa de hidrógeno en metanol durante 15 min, se lavaron en PBS y se incubaron con los anticuerpos primarios contra NPM, TFF3 y TACC1 durante la noche a 4 ° C (Tabla 1). La tinción de anticuerpos se detectó con el complejo (PV9005, hipersensibilidad ratón, Beijing abeto Jinqiao, China) avidina-biotina-peroxidasa. Diaminobencidina se utiliza para visualizar la deposición de la peroxidasa en el sitio antigénico, y estas secciones se contratiñeron con hematoxilina.

La tinción inmunohistoquímica se evaluó semi-cuantitativamente midiendo tanto la intensidad de la tinción (0, 1, 2, o 3 ) y el grado de tinción (0, 0%; 1, 0 a 10%; 2, 10 a 50%; 3, 50 a 100%). Las calificaciones de la intensidad y la extensión de la tinción se multiplicaron para dar una puntuación ponderada para cada caso (máximo posible, 9). Para el análisis estadístico, las puntuaciones ponderadas se agruparon en dos categorías en las puntuaciones de 0 a 3 se consideran negativas, y 4 a 9 positivo.

Análisis estadístico

Todos los análisis estadísticos se realizaron con el paquete estadístico SAS versión 9.2. La prueba de X2 y prueba exacta de Fisher se usaron para examinar las correlaciones entre la expresión de los marcadores moleculares y diferentes parámetros clínico. El análisis univariante se realizó mediante el método de Kaplan-Meier, y la significación estadística entre las curvas de supervivencia se evaluó mediante la prueba de log-rank. OS se determinó a partir de la fecha de la cirugía para el momento de la muerte por cáncer. Para evaluar los valores independientes de diferentes variables sobre la supervivencia, el análisis multivariante se llevó a cabo en presencia de otras variables utilizando el modelo de riesgos proporcionales de Cox. Sólo las variables de valor significativo a partir del análisis univariante se introdujeron en el análisis de regresión de Cox. p < 0,05 se consideró estadísticamente significativa

Resultados

MNP, TFF3 y expresión TACC1 patrones en las células tumorales

La expresión de la NGP, TFF3 y TACC1 se midió por semi-cuantitativos. análisis IHC. NGP fue localizado en el nucleolo, núcleo y el citoplasma de las células epiteliales tumorales (positivo 47% frente a 53% negativo) (Figura. 1). TFF3 se expresó en el citoplasma de las células epiteliales del tumor (positivo 44% vs. 56%) negativo, y no se observó tinción en el núcleo (Figura. 1). TACC1 se expresó en el citoplasma de las células epiteliales tumorales (positivo 49% vs. 51% negativo) (Figura. 1), y no se observó tinción en el núcleo.

clinicopathological variables del paciente

la edad media de los pacientes en este estudio fue de 59 años (27 a 89 años). La supervivencia global mediana de seguimiento fue de 47 meses (rango 3-59 meses), y la tasa de supervivencia posquirúrgica de 3 años fue del 64,2%. El tamaño tumoral medio fue de 35 mm (rango 15-130 mm). Con respecto a la etapa del tumor, el 14% (20/142) de los pacientes se encontraban en el cáncer temprano y el 86% (122/142) estaban en el cáncer avanzado. se observó metástasis de los ganglios linfáticos en el 55% (78/142) de los pacientes. Las metástasis a distancia, incluyendo la metástasis hepática, la invasión y la metástasis peritoneal venosa, se produjo en 15 pacientes.

Las correlaciones entre los datos clínico-patológico y las expresiones de la NGP, TFF3 y TACC1

NGP, TFF3 y expresiones eran TACC1 significativamente mayor en los pacientes con mala GC tipo histológico diferenciadas que las de los pacientes con GC tipo histológico bien diferenciado (NPM, 0,88 frente a 0,12; TFF3, 0,90 frente a 0,10; TACC1, 0,90 frente a 0,10; P < 0,05). Sólo expresión NPM fue significativamente mayor en los pacientes con metástasis hepáticas (0,88 vs. 0,12; P < 0,05) o recurrencia (0,73 vs. 0,27; P < 0,05). TFF3 fue significativamente mayor en los pacientes con positivo metástasis en ganglios linfáticos de que en pacientes con metástasis en los ganglios linfáticos negativos (TFF3, 0,61 vs. 0,39; p < 0,05). expresión TACC1 correlacionó significativamente con invasión venosa (0,88 vs. 0,12; P < 0,05) y pacientes de sexo femenino (0,69 vs. 0,31; P < 0,05). Las variables clínicas e histopatológicas se muestran en la Tabla 2. Análisis FODA

univariante

Los análisis univariados mostraron que la edad, metástasis en los ganglios linfáticos, TFF3 sobre-expresión y TACC1 sobre-expresión se correlacionó significativamente con una supervivencia a corto tiempo (Tabla 3, Figura 2). Para el análisis estadístico, el denominado "grupo de alto riesgo" tenía una expresión alterada de 2 ó 3 proteínas. el "grupo de bajo riesgo" designado tenía una expresión alterada de 0 o 1 proteínas. El pronóstico era más pobre en pacientes con co-expresión positiva de la NPM /TFF3, TFF3 /TACC1, NPM /TACC1 y NPM /TFF3 /TACC1 que en pacientes con expresión positiva de la NGP, TFF3 o TACC1 solo, o con negativo co-expresión de estos marcadores (Tabla 3).

análisis multivariado

el análisis multivariante mostró que la metástasis de los ganglios linfáticos y la expresión de TFF3 y TACC1 en las células epiteliales tumorales fueron factores pronósticos independientes para la supervivencia global (Tabla 4 ), y que la razón de riesgo (HR) de la muerte relacionada con el tumor aumentó en 3.409 veces en el grupo FF3 (P < 0,001; IC del 95%: 2,387-8,143). El aumento de 3.311 veces en la HR de muerte relacionada con el tumor en el grupo de metástasis en ganglios linfáticos fue obviouslyly significativa (P < 0,001; IC 95% 2,148-8,651) (Tabla 4). El aumento de 2.278 veces en la HR de muerte relacionada con el tumor en el grupo TACC1 también era obviamente significativa (P < 0,001; IC 95% 1,803-5,959).

Discusión

De acuerdo con ello, el examen de la expresión de genes específicos en células de carcinoma gástrico podría ayudar a entender las características histopatológicas de GC.Consequently, es esencial para estudiar los diferentes marcadores moleculares para ser capaz de comprender el mecanismo de la tumorigénesis y metástasis. Por lo tanto, nos buscó para probar un panel de tres marcadores moleculares asociados con la tumorigénesis.

expresión nucleofosmina /B23 es una fosfoproteína nucleolar constantemente yendo y viniendo entre el nucleolo y citoplasma [4], y en los niveles de ARN y proteínas pueden contribuyen a la aparición de cáncer [19], [20], la NGP se sugirió anteriormente como un factor pronóstico de supervivencia de los pobres y se relaciona con la progresión tumoral y la resistencia [21], [22]. Sin embargo, los resultados obtenidos en el presente estudio difieren en varios aspectos importantes de estos estudios anteriores. Encontramos un peor resultado en pacientes con NGP sobre-expresión, pero no es un marcador pronóstico independiente, posiblemente debido a la variación biológica de la expresión de proteínas en diferentes zonas del tejido tumoral. En nuestro estudio, la NGP se observó un exceso de expresión en el 73% de los pacientes con recidiva, lo que indica que la NGP sobre-expresión se asoció significativamente con la recidiva. El estudio de Tsui et al [23] también mostró que el nivel /B23 alta NPM se correlacionó con la recurrencia de cáncer de vejiga. Además, es intrigante especular que NPM podría se correlacionó con la promoción de metástasis hepática de este cáncer. El resultado del presente estudio indica que la NGP sobre-expresión puede llegar a ser un predictor de mal pronóstico de GC, aunque el mecanismo subyacente exacto no está claro.

Los estudios anteriores [24], [25] demostraron que TFF3 fue frecuentemente sobreexpresado en cáncer de mama y otros tumores primarios. Nuestros resultados mostraron que el 44% de los carcinomas gástricos expresó TFF3, y lo más importante que TFF3 sobre-expresión en GC era un indicador de mal pronóstico independiente para el sistema operativo. El riesgo de muerte fue significativamente mayor en los pacientes con TFF3 sobre-expresión. Además, TFF3 sobre-expresión fue el segundo riesgo más alto junto a la metástasis en los ganglios linfáticos para la supervivencia postoperatoria. correlaciones significativas entre TFF3 sobre expresión y el mal pronóstico se ha informado anteriormente en colangiocarcinoma [26] y carcinoma endometrial endometrioide [27], que es consistente con nuestro resultado. Nuestros datos también sugieren que la sobre-expresión TFF3 se correlacionó con parámetros clínico más agresivos. Por ejemplo, TFF3 se detectó sobreexpresión en aproximadamente el 50% de los pacientes con ganglios linfáticos positivos metástasis vs.
Un tercio en los pacientes con metástasis en ganglios linfáticos negativo, lo que indica que TFF3 sobre-expresión juega un papel importante en metástasis de ganglios linfáticos en pacientes GC. Se necesitan más estudios sobre el mecanismo molecular para definir con mayor precisión el papel de la expresión del péptido trébol en la progresión tumoral y la metástasis.

Los estudios anteriores [28], [29] han sugerido el posible efecto de TACC1 sobre la proliferación celular y su carcinogenéticas propiedades. Sin embargo, a lo mejor de nuestro conocimiento, no existen otros estudios que informan la correlación entre TACC1 sobre-expresión y la importancia clínica en los pacientes con cáncer gástrico. Una de las conclusiones importantes de este estudio es el gran impacto relacionado con el género en TACC1 sobre-expresión, lo que muestra que el 69% de los pacientes femeninos GC mostró expresión TACC1 positivo. Además, el número de pacientes de sexo femenino con TACC1 sobre-expresión fue el doble que en los pacientes de sexo masculino con expresión TACC1 negativo. Sin embargo, TACC1 sobre-expresión no tuvo un impacto significativo sobre la supervivencia con respecto al género en comparación con el impacto significativo en la supervivencia de diferentes grupos de edad, lo que sugiere que puede haber otros mecanismos que afectan a la supervivencia de los pacientes de GC. El resultado de nuestro análisis multivariante mostró que la sobreexpresión TACC1 fue un factor pronóstico independiente de GC, que es coherente con la conclusión anterior sobre la importancia pronóstica de TACC1 observada en los tumores de ovario [30]. Además, nuestros datos proporcionan la evidencia de que TACC1 sobreexpresión se asocia con la invasión venosa, lo que implica su posible papel en la metástasis tumoral.

Aproximadamente la mitad de las muestras de cáncer se encontraron con la co-expresión de estos dos marcadores. El análisis univariante muestra que el grupo de alto riesgo se asoció significativamente con la supervivencia global del paciente más corto, y ese grupo de alto riesgo presenta un peor pronóstico que el grupo de bajo riesgo. Si la expresión combinada de la NGP, TFF3 y TACC1 aporta una ventaja de crecimiento del tumor debe ser determinada además por estudios in vitro y clínicos.

En conclusión, TFF3 y TACC1 sobre-expresión en el tumor de células epiteliales de gastic resecado quirúrgicamente adenocarcinoma podía predecir de forma independiente una supervivencia más corta. NGP sobre-expresión se correlaciona significativamente con las características de patología clínica de GC. Estas observaciones indican que la sobre expresión es crucial para la patogénesis y el desarrollo de GC. Se necesitan investigaciones adicionales para proporcionar una mejor base para el desarrollo de estrategias terapéuticas más eficaces para la GC y otros tumores malignos humanos.

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