El significado de la expresión NTR1 y su correlación con β-catenina y EGFR en el cáncer gástrico

El significado de la expresión NTR1 y su correlación con β-catenina y EGFR en el cáncer gástrico
Abstract
Antecedentes
Varios informes indican que el receptor de alta afinidad de NT (neurotensina), NTR1 (receptor de neurotensina 1), en numerosas funciones perjudiciales relacionados con la progresión neoplásica de varios tipos de cáncer. Recientemente, también se ha demostrado que el gen NTR1 es un objetivo de las vías oncogénicas Wnt /APC relacionados con la β-catenina /Tcf transcripcional complejo y NT puede estimular la proliferación del cáncer en un mecanismo de EGFR-dependiente. En este estudio, hemos explorado NTR1, β-catenina y la expresión de EGFR en cáncer gástrico. Se analizaron las posibles asociaciones de expresión NTR1 con factores clínico-patológicos, pronóstico, β-catenina y EGFR.
Métodos
NTR1, β-catenina y la expresión de EGFR en cáncer gástrico tejidos y los tejidos normales adyacentes de 210 casos fue detectado por inmunohistoquímica. . Se analizaron las posibles asociaciones de expresión NTR1 con clinicopathological datos, pronóstico, β-catenina y EGFR
Resultados
1. NTR1 expresión en los tejidos tumorales era significativamente más alta que en los tejidos normales adyacentes (P
< 0, 01). 2. Su expresión se correlacionó positivamente con el grado patológico, estadio T, la etapa N y el estadio TNM y no se correlacionó con el sexo, la edad, el tamaño del tumor y clasificación de Lauren. 3. Un co-expresión de NTR1 y β-catenina nuclear fue en 53 (25,2%) de los casos y la expresión NTR1 se correlacionó positivamente con la translocación nuclear de β-catenina. expresión NTR1 no se correlaciona con la expresión de EGFR, pero a un valor crítico (P
= 0,05). 4. Por log-rank test, más alta expresión de NTR1, alto grado patológico, la difusión Clase de Lauren y el estadio TNM avanzada mostraron un peor pronóstico (P Hotel < 0, 05). La edad, el sexo, el tamaño del tumor, β-catenina y EGFR tenían ninguna importancia pronóstica. El análisis multivariante de Cox mostró que la expresión NTR1 y el estadio clínico TNM (P Hotel < 0, 05). eran los factores pronósticos independientes para pacientes con GC
Conclusión fotos: por inmunohistoquímica, se encontró que una alta expresión de NTR1 en muestras de GC, que mostraban un mal pronóstico, además, la expresión NTR1 estaba relacionada con la invasión y migración de GC. Estos resultados proporcionan información nueva e importante en la progresión de la GC. Este estudio indicó que NTR1 puede desempeñar un papel importante en la progresión tumoral de GC y tienen su potencial para ser un biomarcador predictivo o una diana molecular terapéutico en GC. La interacción entre NTR1 y β-catenina puede participar en el desarrollo de GC. Sin embargo, la relación entre NTR1 y EGFR necesita de mayor investigación.
Palabras clave
El cáncer gástrico, NTR1 β-catenina, EGFR, patología clínica, pronóstico Antecedentes
El cáncer gástrico es una causa frecuente de muerte relacionada con el cáncer en el mundo [1]. En China, el cáncer gástrico ocupa el tercer cáncer más común [2]. Aunque el establecimiento de la detección, el diagnóstico precoz y la operación curativa ha aumentado significativamente supervivencia, recurrencia y metástasis sigue siendo un gran desafío para los pacientes con cáncer gástrico. el desarrollo del cáncer gástrico se asocia a menudo con un número de anormalidades moleculares, incluyendo la inactivación de diversos genes supresores de tumores y /o la activación de diversos oncogenes [3, 4], pero el mecanismo del desarrollo, invasión y metástasis del cáncer gástrico no es todavía claro. Las investigaciones sobre las alteraciones moleculares en el cáncer gástrico pueden proporcionar nuevos conocimientos sobre los mecanismos responsables de la carcinogénesis estómago y conducir al desarrollo de biomarcadores para la detección precoz del cáncer gástrico y la predicción de su pronóstico.
Neurotensina (NT) y sus afines (receptor de neurotensina 1, NTR1) son complejos neuropéptido receptores de frecuencia desregulados durante el proceso neoplásico. NT es un péptido de 13-amino-ácido reconocida previamente para su distribución a lo largo del tracto gastrointestinal [5]. Los efectos de la NT están mediados por la unión a tres receptores de neurotensina NTR-1, -2, y -3. El NTR1 y NTR2 son receptores acoplados a proteínas G, mientras que el NTR3 pertenece a la superfamilia de receptores sortilin. Las funciones periféricas de NT están mediados principalmente a través de su interacción con NTR1, un receptor de alta afinidad acoplado a una proteína Gq /G11 [6]. Varios informes implican NTR1 en numerosas funciones perjudiciales vinculados a la progresión neoplásica de varios tipos de cáncer, incluyendo pancreático, de próstata, de colon, de pulmón y cánceres de cabeza y cuello [7, 8]. In vivo e in vitro de los efectos NT son abolidos por el antagonista específico de NTR1, SR48692, lo que implica que NTR1 es un importante mediador de estas acciones transformadoras [9].
Activación NTR1 conduce a la proliferación celular, la supervivencia, la movilidad y capacidad de invasión en tipos de células de cáncer específicos a través de la transducción de señales a través de PKC, la quinasa extracelular regulada por señal 1 y 2, RhoGTPases, NF-kB, o focal de activación quinasa de adhesión [10-12]. Algunos estudios sugieren que NT puede estimular la proliferación de muchos cáncer en un mecanismo de EGFR-dependiente, incluyendo tumor neuroendocrino intestino anterior, próstata, colon y no pequeñas de cáncer de pulmón de células [13]. Recientemente, se ha demostrado que el gen NTR1 es un objetivo de las vías oncogénicas Wnt /APC relacionados con la β-catenina /Tcf transcripcional complejo, se sabe que activa los genes implicados en la proliferación celular y la transformación [14]. La expresión de
NTR1 y su relación con EGFR y β-catenina en el cáncer gástrico no se han reportado. En este estudio, hemos explorado NTR1, β-catenina y la expresión de EGFR en cáncer gástrico. Se analizaron las posibles asociaciones de expresión NTR1 con factores clínico-patológicos, pronóstico, β-catenina y EGFR.
Métodos Los pacientes

Un total de 210 pacientes con diagnóstico histológico de adenocarcinoma gástrico que invade la capa submucosa o más profundo se incluyeron retrospectivamente en este estudio. Todos los pacientes recibieron la gastrectomía curativa con disección de los ganglios linfáticos en nuestro departamento de Wuxi Hospital Afiliado Popular de la Universidad de Medicina de Nanjing (Wuxi, China) entre enero de 2011 y diciembre de 2011. No hay pacientes fueron sometidos a quimioterapia o radioterapia antes de la cirugía. Una muestra no cancerosa distante emparejado (5 cm de distancia de la lesión) también se obtuvo de cada paciente y se utiliza como control. Las características clínico-patológicas de los pacientes incluidos la edad, el sexo, el tamaño del tumor, el grado patológico, la clasificación de Lauren, el estadio TNM y el estado de los ganglios linfáticos metástasis.
La edad media de los pacientes fue de 64 años, que van desde 34 a 90 años. Había 160 hombres y 50 mujeres (3,2: 1). De acuerdo con la diferenciación del tumor, hubo 93 (44,3%) tumores bien diferenciados y moderada y 117 (55,7%) tumores pobres y no diferenciadas. De acuerdo con el estadio TNM, 51 (24,3%) pacientes estaban en la etapa T1-2 mientras que la izquierda 159 (75,7%) pacientes estaban en fase T3-4. 157 (74,8%) pacientes fueron positivos y 53 (25,2%) fueron negativos para metástasis en los ganglios linfáticos. Hubo 63 (30,0%) en estadio I-II y 147 (70,0%) pacientes en estadio III-IV. El seguimiento de la información, incluyendo los resultados de los pacientes y el intervalo de tiempo entre la fecha de la resección quirúrgica y la fecha de la muerte relacionada con el cáncer, se recogió. Esos casos perdidos durante el seguimiento y murieron por causas distintas al cáncer gástrico fueron considerados como datos censurados para el análisis de supervivencia. El estudio fue aprobado por los comités de ética locales. Las muestras se obtuvieron con consentimiento informado, de conformidad con las normas éticas de la Declaración de Helsinki de 1975, revisada en 2000.
inmunohistoquímica
rebanadas de parafina fueron tratados de acuerdo con el kit de inmunohistoquímica ha ocurrido, y los resultados se analizaron mediante un doble método ciego. Dos patólogos evaluaron las puntuaciones de forma independiente. PBS, en lugar del anticuerpo primario, se utilizó como control negativo. Para NTR1 (anticuerpo policlonal, Abcam, utilizando una concentración de /ml 5 g) de la tinción, el grado de expresión se clasificó como negativo (tinción positiva de < 10% de las células tumorales), (tinción positiva positiva de ≥10% y < 50% de las células tumorales), o fuertemente positiva (tinción positiva que implica ≥50% de las células tumorales) [15]
Según Aust et al.. [16], una evaluación semi-cuantitativa de la β-catenina (. Anticuerpo monoclonal, MAB-259, Fuzhou Maixin Biotech Co., Ltd, Pre-diluido) translocación nuclear se llevó a cabo mediante la estimación del porcentaje de núcleos positivos como sigue: 0; 1: 0 a 5%; 2: 5 a 25%; 3: hasta el 25%, y un valor de corte de > 5% de núcleos positivos β-catenina (puntuación de 2 o más) fue considerado significativo para la transposición nuclear de la proteína EGFR
(anticuerpo monoclonal, RMA-0554. , Fuzhou Maixin Biotech. Co., Ltd, la reactividad-Pre diluida) se puntuó como 0 si no hubo reactividad membranosa dentro del tumor, o como 1+, 2+, 3+ o dependiendo de la intensidad por encima del nivel de fondo [17 ]. La puntuación de 1+ a 3+ se definió como positiva y la puntuación de 0 se define como negativo [18]. El análisis estadístico

Todos los datos fueron analizados con el programa SPSS 18.0. x 2 pruebas (o la prueba exacta de Fisher) se utilizaron para las muestras clasificadas como porcentajes; Se utilizó el análisis de Spearman para determinar la correlación entre dos variables. Tanto el método de Kaplan-Meier y log-rank test se utilizaron para el análisis de variantes individuales, y un modelo de Cox se utilizó para analizar las relaciones entre las tasas de supervivencia y de múltiples variables. P Hotel < 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.
Resultados
expresión NTR1 en los tejidos tumorales fue significativamente mayor que en los tejidos normales adyacentes y se correlacionó positivamente con el grado patológico, estadio T, la etapa N y el estadio TNM
De acuerdo con los criterios establecido para la inmunotinción, el 71,0% (149/210) de los tumores fueron positivos para la tinción NTR1. Sólo 28 (13,3%) casos fueron positivos en la mucosa gástrica normal adyacente. A modo de la 2-test x, expresión NTR1 de tejidos tumorales fue significativamente mayor (P
< 0,01) (Fig. 1). Higo. 1 Expresión de NTR1 en tejidos de cáncer gástrico (200 ×). expresión NTR1 fuertemente positiva en (a) y de tipo difuso intestinal- (b) de los tejidos de cáncer gástrico; NTR1 expresión negativa en la mucosa gástrica (c)
normal adyacente A modo de análisis de Spearman, la expresión NTR1 se correlacionó positivamente con el grado patológico (Fig. 2), el estadio T, N y estadio TNM y no estaba correlacionado con el sexo, la edad, el tamaño del tumor y clasificación de Lauren (Tabla 1). Higo. 2 Expresión de NTR1 de tipo intestinal de los tejidos de cáncer gástrico (200 ×). Expresión positiva en NTR1 bien diferenciado de tipo intestinal de los tejidos de cáncer gástrico (a); expresión fuertemente positiva NTR1 en mal diferenciado de tipo intestinal de los tejidos de cáncer gástrico (b)
Tabla 1 Características clínico y la expresión de NTR1 en 210 pacientes con cáncer gástrico
artículo
NTR1 intensidad Expresión

p-valor
*
negativo positivo

fuertemente positiva
Edad
0,302 Hotel < 60
15
27
23
≥60
46
53
46 Sexo seguro
0.315
Hombre
44
61
55
Mujer
17 página 19 página 14
El tamaño del tumor (cm)
0,291 Hotel < 5
34
21
31
≥5
27
59
38 del tour Patológica
0,027
Bueno y moderada
34
34
25
pobre e indiferenciada
27
46
44
clasificación de Lauren
0.125
intestinal
32
39
27
Difusión
18
20
24
Mixta página 11
21
18
estadio T
0,001
T1-2
26 página 14 página 11
T3-4
35
66
58
estadio N
0.000
positiva
33
66
58
negativo
28 página 14
11
estadio TNM
0,011
I- II
28
18
17
III-IV
33
62
52
* análisis de Spearman
expresión NTR1 se correlacionó positivamente con β-catenina translocación nuclear y no se correlaciona con la expresión de EGFR
Utilizando el análisis de inmunohistoquímica, se observó una co-expresión de NTS1 y β-catenina nuclear en el 25,2% (53 ) de los casos y la expresión NTR1 se correlacionó positivamente con la β-catenina translocación nuclear (P Hotel < 0,05) (Fig. 3, 4 y 5) y no se correlacionó con la expresión de EGFR (Fig. 6), sin embargo, a un valor crítico (P
= 0,05) (Tabla 2). Higo. expresión 3 β-catenina en el cáncer gástrico y la mucosa gástrica normal adyacente (200 ×). expresión ß-catenina nuclear en el cáncer gástrico (a) y tinción de membrana ß-catenina nomal en la mucosa gástrica normal adyacente (b)
Fig. 4 Expresión de NTR1 y β-catenina en el tipo intestinal de los tejidos de cáncer gástrico (200 ×). Tinción HE imagen (a), la tinción IHC de NTR1 (b) y la expresión de ß-catenina nuclear (c) en la misma región de los mismos casos de tipo intestinal. × 200
Fig. 5 Expresión de NTR1 y β-catenina en difusa de tipo de tejidos de cáncer gástrico (200 ×). IHC tinción de NTR1 y β-catenina en el mismo caso de los casos de tipo difuso. × 200
Fig. expresión 6 EGFR en el cáncer gástrico y la mucosa gástrica normal adyacente. la expresión de EGFR positivo (puntuación de 3+) en el cáncer gástrico (a) y la expresión de EGFR negativo en la mucosa gástrica normal adyacente (b)
Tabla 2 Correlación entre NTR1 y expresión translocación y EGFR nuclear β-catenina en el cáncer gástrico
Tema
intensidad Expresión NTR1
p-valor
*
negativo positivo

fuertemente positiva

expresión de ß-catenina nuclear
0,034
negativo
42
60
36
positiva página 19
20
33
EGFR expresión
0.050
negativa (puntuación 0)
29
24
21
positivo (puntuación 1-3 +): perfil 32
56
48
* análisis de Spearman
de la expresión de NTR1, alto grado patológico, estadio TNM de clasificación y difusión de Lauren mostró un peor pronóstico y una expresión de alto NTR1 y el estadio clínico TNM fueron los factores pronósticos independientes para pacientes con GC
se realizó un análisis de supervivencia NTR1 en 210 casos de cáncer gástrico con los datos de seguimiento. Las tasas de supervivencia a 1 año y 3 años de 210 casos fueron 78,9% y 68,0%. Los pacientes con mayor expresión NTR1 mostraron un pronóstico más desfavorable que los que no tienen expresión (P Hotel < 0, 01) (Fig. 7). Mediante la prueba de log-rank, más alta expresión de NTR1 (P = 0,000
), mayor grado patológico (p = 0,014
), la difusión de Lauren clasificación (P = 0,004
), estadio avanzado T (P
= 0,026), el estadio TNM (P = 0,000
), y el estadio N (P = 0,000
) mostraron un peor pronóstico, y la edad, el sexo y el tamaño del tumor no tenía ninguna importancia pronóstica. El análisis multivariante de Cox mostró que los siguientes factores fueron los factores pronósticos independientes para pacientes con GC: NTR1 expresión y el estadio clínico TNM (P Hotel < 0, 05) (Tabla 3). Higo. 7 curvas de supervivencia global de los pacientes con cáncer gástrico de acuerdo con los resultados de inmunotinción de NTR1. De la expresión de NTR1 (P = 0,000
) mostró un peor pronóstico sobre Table 3 del factor múltiple de Cox modelo de regresión de forma variable del cáncer gástrico
artículo
B
SE

Wald
df
Sig.a
Exp (B) guía empresas IC del 95,0% para Exp (B)

Baja
superior
NTR1 Expressin Intensidad
0,444 0,186

5.686
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