Differential vaikutukset mahansisäisillä happoa ja kapsaisiini mahalaukun tyhjenemistä ja afferent syötetään rotan selkäydin ja brainstem

Differential vaikutukset mahansisäisillä happoa ja kapsaisiini mahalaukun tyhjenemistä ja afferent syötetään rotan selkäydin ja aivorungon
tiivistelmä
tausta
Suolahappo (HCl) on mahdollinen uhka eheys mahalaukun limakalvon ja tiedetään osaltaan ylävatsakipu. Olemme aiemmin havainneet, että mahalaukun limakalvon haaste ylimäärällä HCl-kaasua signaloidaan rotan aivorunko, mutta ei selkäytimen, kuten visualisoitiin ilmentyminen c-fos messenger ribonukleiinihappo (mRNA), sijaismarkkerina neuronaalisen heräte. Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia mahalaukun limakalvon altistuminen kapsaisiini, nautintoaine nosiseptiivisiin afferentteihin joka ei vahingoita mahalaukun limakalvon, viestitetään sekä aivorungon ja selkäytimen ja onko erot tuovissa signalointi mahalaukun HCl ja kapsaisiinin liittyvät erilaiset vaikutukset mahalaukun tyhjenemistä.
tulokset
Rotat käsiteltiin mahansisäisesti vehikkeliä, HCl: llä tai kapsaisiini, aktivointi neuronien aivorungon ja selkäytimen visualisoitiin in situ -hybridisaatiolla autoradiografialla c-fos mRNA: n, ja mahalaukun tyhjenemistä päätellä säilyttämistä of mahalaukunsisäisesti nestettä. Suhteessa ajoneuvoon, HCl (0,5 M) ja kapsaisiinia (3,2 mM) kasvoi c-fos transkriptio tumassa tractus solitarii tekijöillä 7,0 ja 2,1, vastaavasti. Kapsaisiini myös aiheutti 5,2-kertainen nousu c-fos mRNA-ekspressio lamina I pyrstöevän rintakehä selkäytimen, vaikka määrä c-fos mRNA-positiivisia soluja tässä lamina oli hyvin pieni. Näin ollen keskimäärin vain 0,13 ja 0,68 c-fos mRNA-positiivisia soluja laskettiin 0,01 mm osissa yksipuolisen kerroksen I seuraava mahalaukun sisäinen vehikkelin ja kapsaisiini, vastaavasti. Sen sijaan, mahan HCl: ei onnistunut indusoimaan c-fos mRNA selkäytimessä. Mittaus mahalaukun nesteen kertymisestä paljasti, että HCl tukahdutettu mahalaukun tyhjenemistä, kun kapsaisiini ei.
Päätelmä
Tämän tutkimuksen tulokset osoittavat, että mahalaukun limakalvon altistuminen HCl ja kapsaisiini on differentiaalisesti lähetetään aivorungon ja selkäytimen. Koska vain HCI: a lohkot mahalaukun tyhjenemistä, on arveltu, että kaksi ärsykkeiden transduktoitiin eri afferenttien reittejä. Olemme päätellä, että HCl yksinomaan signaloidaan mahalaukun vagaaliset afferentit taas kapsaisiinia käsitellään sekä maha- vagaaliset ja suoliston selkärangan afferentit.
Tausta
Mahahappo liittyvät sairaudet ovat yleisin limakalvon häiriöt ruoansulatuskanavan yläosassa. On myös näyttöä siitä, että suolahappoa (HCl) osallistuu kivun ruokatorveen ja mahahaavan sekä ei-sydänperäinen rintakipu ja toiminnallinen dyspepsia [1-3]. Mahalaukun kemiallista kipuärsytystä herättämän altistuminen rotan mahan ylimäärä HCI välittävät vagaalisia afferenttien neuronien, koska visceromotor kivun vaste intragastrinen (IG) annon HCl poistetaan kahdenvälisin vagotomy, kun taas visceromotor vastaus pullistuma pysyy muuttumattomana [4] . Tämä havainto on johdonmukainen havainto, että IG anto HCl signaloidaan tumaan tractus solitarii (NTS) rotan aivorunko, Keski päättyminen alueella vagaalisten afferenttien, visualisoituina ilmaus messenger ribonukleiinihappo (mRNA) välittömästi varhaisen geeni c-fos, kun taas mitään induktio c-fos mRNA nähdään selkäytimessä [5, 6]. Samoin mahalaukun haaste ammoniumhydroksidilla indusoi c-fos mRNA ja proteiini vain aivorungon, mutta ei selkäydin, rotan [7]. Vaikka sekä HCl ja ammoniumhydroksidia vahingoittaa mahalaukun limakalvon pitoisuuksilla, jotka aiheuttavat lähes maksimaalinen käännös c-fos -geenin NTS [7], kapsaisiini on kemikaali, joka innostaa maha afferent neuronien [8-10] aiheuttamatta vahinkoa rotan vatsa [11]. Tämä johtuu siitä, kapsaisiini stimuloi afferent neuronien avaintamalla ohimenevä reseptorin potentiaalia ionikanavia of vanilloidi tyypin 1 (TRPV1), joka on ilmaistu sekä vagaaliset ja selkärangan afferent neuronien hermoissa rotan vatsan ja suoliston [12-16].
Yleisenä tavoitteena tämän valmistelevan tutkimuksen tarkoituksena oli testata, mahalaukun limakalvon haaste kapsaisiini ja ylimääräinen HCI differentiaalidekoodataan lähetetään rotan aivorungon ja selkäytimen ja onko ero käsittely kahden ärsykkeiden tapahtuu tasolla ruoansulatuskanavan yläosassa. Kahdet kokeet tehtiin näiden kysymysten. Ensimmäisessä tutkimuksessa, IG antaa kapsaisiini ja HCl verrattiin niiden vaikutuksia ilmentymisen c-fos mRNA NTS ja pyrstö rintakehän selkäydin, joka vastaanottaa tihein afferent panosta rotan mahassa [17, 18]. Se oli erityisesti tutkinut, antaminen IG HCl ja kapsaisiini on selvä vaikutus neuronien tiettyjä laminae ja ytimet selkäytimessä. Pitoisuudet HCl: lla (0,5 M) ja kapsaisiinia (0,64 ja 3,2 M) testattiin näissä kokeissa valittiin aikaisempien kokeiden. Altistuminen rotan mahalaukun limakalvon HCl (0,5 M) aiheuttaa erottuva mutta submaksimaalisella induktio c-fos mRNA aivorungon [5], kun taas antaminen IG 0,64 mM kapsaisiini on maksimaalisesti tehokas lisäämään mahalaukun limakalvon verenvirtausta tuntohermosolun -riippuvaisella tavalla [19].
Koska todettiin, että afferent signalointi HCl ja kapsaisiini on NTS ja selkäydin on erilainen, tavoitteena toisessa tutkimuksessa oli tutkia, HCl ja kapsaisiini vaikutus mahan ja tyhjenemistä erotusdiagnoosissa tavalla. Se oli perusteltu, että suuruus c-fos vasteen NTS ja selkäytimen riippuu sekä pitoisuudesta kemikaalien ja keston niiden läsnäolo vatsassa. Aikaisemmin on havaittu, että antaminen IG HCl-ylimäärä estää mahalaukun tyhjenemistä ja muuttaa mahan paine [5, 20]. Havainnot Tämän tutkimuksen paljastaa, että toisin kuin ylimääräinen HCI, kapsaisiini ei estänyt mahalaukun tyhjenemistä. Oletetaan siis, että mahalaukun HCl haaste on yksinomaan signaloidaan aivorungon kautta vagaalisten afferenttien, koska se pysyy mahassa pitkäksi aikaa, kun taas sekä maha- kiertäjähermo- ja pohjukaissuolen selkärangan afferentit vastata antaminen IG kapsaisiini, The tyhjentämisen joka pohjukaissuoleen ei ole hidastuu.
tulokset
vaikutukset HCI: ää ja kapsaisiini aiheuttaa c-fos mRNA: n NTS ja selkäytimessä (tutkimus 1) B Kuten on kuvattu aikaisemmin [5, 21], IG anto 0,5 M HCI aiheuttanut monia neuronien NTS ilmaista c-fos mRNA verrattuna antaminen IG fysiologista suolaliuosta. Määrä c-fos mRNA-positiivisia soluja kappaleessa nähdä sen jälkeen, kun antaminen IG HCl oli 7,0 kertaa suurempi kuin sen jälkeen, kun antaminen IG fysiologista suolaliuosta (kuvio 1). Määrä c-fos mRNA-positiivisia neuroneja per NTS osassa laskettiin sen jälkeen, kun antaminen IG ajoneuvon taipumus olla suurempi kuin annon jälkeen fysiologista suolaliuosta, vaikka tämä vaikutus oli tilastollisesti merkitsevä (kuvio 1). Ajoneuvon suhteen, kapsaisiini (0,64 ja 3,2 mM) tehostettu määrä c-fos mRNA-positiivisia neuroneja per NTS osassa, tämä vaikutus riippuen lääkkeen pitoisuus. Kuten voidaan nähdä kuviossa 1, vain pitoisuus 3,2 mM kapsaisiinin pystyi lisäämään merkittävästi induktio c-fos mRNA kertoimella 2,1. Jakelu c-fos mRNA-positiivisia soluja NTS jälkeen IG altistumisen HCl: lla (0,5 M) ja kapsaisiinia (3,2 mM) oli epätasaista, eniten aktivoitujen solujen esiintyvien ventromediaalisessa osa NTS [22]. Kuvio 1 lukumäärä c-fos mRNA-positiivisia soluja per jakso (0,01 mm) yksipuolinen NTS määrittää 45 min kuluttua antaminen IG NaCl (0,15 M), HCI (0,5 M), ajoneuvo (Veh) ja kapsaisiinia (Cap, 0,64 ja 3,2 mM). Keinot + SEM, n kuten. * P < 0,05 vs. Veh, ** P < 0,01 vs. NaCl.
Suostumuksella aiempia havaintoja [5], IG altistuminen 0,5 M HCI ole todettu mitään ilmentymistä c-fos mRNA selkäpuoli puoliskolla caudal rintakehä selkäytimessä. Näin ollen, kokonaismäärä c-fos mRNA-positiivisia soluja per selkäytimessä jakso lasketaan, kun IG altistuksen fysiologinen suolaliuos oli 1,30 ± 0,29 (n = 4), ja sen jälkeen IG altistumisen HCl: 1,33 ± 0,18 (n = 4). Tämä puute vaikutuksesta HCl nähtiin myös, kun jakelu c-fos mRNA-positiivisia soluja LI, LII, LIU, LIV, LV, AX ja IMLN jälkeen IG annon HCl verrattiin jälkeen IG annon fysiologista suolaliuosta ( kuvio 2A). IG antaminen kapsaisiinia (3,2 mmol) myöskään ole merkittävästi lisätä ilmentymistä c-fos mRNA selkäytimessä, koska kokonaismäärä c-fos mRNA-positiivisia soluja per jakso laskettiin jälkeen IG altistumisen ajoneuvo oli 2,19 ± 0,32 (n = 6), ja sen jälkeen IG altistumisen kapsaisiini oli 1,94 ± 0,23 (n = 7). Analyysi jakelun c-fos mRNA-positiivisia soluja LI, LII, LIII, LIV, LV, AX ja IMLN paljasti kuitenkin, että kapsaisiini aiheutti merkittävän 5,2-kertainen c-fos mRNA: n ekspression LI, joka meni rinnalla merkittävä lasku muodostumiseen c-fos mRNA LIII ja LIV (kuvio 2B). On huomattava, että taso c-fos transkription oli erittäin alhainen, sillä on tyypillisesti vähemmän kuin 0,7 c-fos mRNA-positiivisia soluja per levy laskettiin 0,01 mm: n osat yksipuolisen selkäytimessä (kuvio 2). Tästä syystä kokeet, joissa HCl: n ja kapsaisiinin tiukasti rinnakkain niiden kanssa, joissa vastaavat ohjaus /vehikkeliliuosta (kuvio 2). Kuvio 2 lukumäärä c-fos mRNA-positiivisia soluja per jakso (0,01 mm) eri laminae ja alueiden yksipuolinen selkä puolet caudal rintakehä selkäydin määritettiin 45 min kuluttua antaminen IG (A) NaCl (0,15 M), HCI (0,5 M), (B) ajoneuvo (Veh) ja kapsaisiinia (Cap, 3,2 mmol). Käyrät osoittavat laskee kerroksissa I-V (LI-LV), alue X (AX) ja intermediolateral nucleus (IMLN). Keinot + SEM, n kuten. * P < 0,05, ** P < 0,01 vs. Veh.
Vaikutukset HCl ja kapsaisiinia mahan paineita ja mahanesteen toipuminen (tutkimus 2)
perustason IGP mitattiin ennen antamisen mitä tahansa välinettä oli välillä 400 ja 500 Pa [20]. IG injektio 2 ml nestettä bolus kasvoi IGP tasolle, jonka suuruus oli riippumaton siitä, onko ruiskutetaan neste oli suolaliuosta, HCI (0,35 M), ajoneuvo tai kapsaisiinia (3,2 mmol) määritettynä 2-3 min injektion (kuvio 3A ). Sitä vastoin, kun myöhemmistä lasku IGP riippui luonteesta annetaan välineellä. Injektion jälkeen suolaliuosta tai ajoneuvon, IGP väheni huomattavasti nopeammin kuin injektion jälkeen HCl tai kapsaisiinin, vastaavasti (kuvio 3B). Niinpä HCl-ja kapsaisiini-alttiina mahoja IGP ei merkittävästi kuulu aikana 30 minuutin tarkkailujakson aikana injektion, kun taas NaCl- ja ajoneuvojen altistuneet mahat IGP merkittävästi vähentynyt tasolle noin 65% IGP mitattuna 2-3 min injektion (kuvio 3B). Toinen vaikutus HCl oli parantaa maha- nesteretention päätellä 100% elpyminen ruiskutetaan nesteen mahasta 30 min injektion jälkeen (kuvio 3C). Sitä vastoin 30 minuutin kuluttua annon jälkeen suolaliuosta, ajoneuvon tai kapsaisiini vain 30-60% injektoidusta nesteen tilavuus takaisin (kuvio 3C). Kuvio 3 Vaikutukset mahansisäisillä injektion NaCl (0,15 M), HCI (0,35 M), ajoneuvo (Veh) ja kapsaisiinia (Cap, 3,2 mm) (A) alustava nousu mahansisäisillä paine (IGP), (B) myöhempi aika aikana IGP ja (C) nesteen talteenotto mahasta. NaCl, HCl, Veh ja Cap injektoitiin kuin 2 ml boluksena. Arvot esitetään A-kuvassa ovat IGP saavutti 2-3 min injektion jälkeen. IGP mitatut arvot jaksojen aikana 9-10 min ja 29-30 min injektion (paneeli B) ilmaistaan ​​prosentteina alkuperäisestä IGP nousua kirjattiin 2-3 min injektion jälkeen ja mahan tilavuus elpyminen (paneeli C ) mitattiin 30 minuutin kuluttua bolus-injektion ilmaistaan ​​prosenttiosuutena injektiotilavuus (2 ml). Keinot + SEM, n = 6-13. ** P < 0,01 vs. IGP mitattu 2-3 min injektion jälkeen; ++ P < 0,01 vs. NaCl.
Keskustelu
tulokset nykyisen tutkimuksen osoittavat, että antaminen IG HCl ja kapsaisiini rotille tuottaa ero panoksia NTS ja rintakehän selkäydin, johon liittyy ero vaikutuksia mahalaukun tyhjenemistä. Kuten aiemmin on kuvattu [5, 7], mahalaukun signalointi aivorungon ja selkäytimen tehtiin näkyväksi ilmentymistä geenin, c-fos mRNA-tasolla, menetelmä, joka on perustettu vakiomenetelmänä funktionaalisten neuroanatomian rajaamiseksi ärsyke -evoked aktivointi neuronien [23, 24]. Transkriptio c-fos-geenin alkaa muutaman minuutin kuluttua hermosolujen virityksen [23, 24] ja NTS näyttää olevan maksimaalinen 45 min kuluttua mahalaukun HCl haaste [5]. Vaikka altistuminen HCl (,35-,7 ​​M) indusoi mahalaukun limakalvon vauriota pitoisuutena liittyvän tavalla, on olemassa näyttöä siitä, että afferent signalointi mahalaukun HCl haaste ei liity suoraan muodostumiseen limakalvon vaurioita, koska ilmaus c- fos-geenin NTS voidaan stimuloida IG pitoisuuksia HCl: a, jotka aiheuttavat vain vähän, jos lainkaan, epiteelivaurio [5, 7]. Se on siis oletettu [5, 7], että massiivinen kasvu H + ionigradientin poikki mahalaukun limakalvon este on sinänsä riittävä ajamaan H + ioneja lamina propria jossa he voivat kiihottaa vagaalisia tuojahermosolut kuituja joko suoraan [25, 26] tai epäsuorasti neuroaktiivisiksi tekijöitä vapautuu kudoksessa.
topografinen jakelu c-fos mRNA-positiivisten solujen NTS oli epätasainen mutta samanlaisia ​​jälkeen IG annon HCl ja kapsaisiini. Kuten aiemmin on esitetty immunohistokemiallisesti [22], eniten HCl-aktivoitua neuronien nähtiin ventromediaalisessa osa NTS. Sen lisäksi vagaalisia mahalaukun input [27], tämä alue NTS vastaanottaa myös tulon selkärangan kerroksen I neuronien kautta spinosolitary suolikanavan [28-30]. Suhteellinen osuus kiertäjähermo- ja selkärangan panokset tämä osa NTS seuraava kemiallinen stimulaatio vatsan on vielä määrittämättä.
Esillä oleva tutkimus vahvistaa, että ylimääräinen mahalaukun HCl ei indusoi c-fos mRNA ja c-Fos-proteiinin takasarveen takaosan rintakehän selkäydin [5, 7], joka vastaanottaa tihein tulon afferent neuronien hermoissa rotan vatsa [17, 18]. Samanlaisia ​​havaintoja on tehty seuraava altistuminen rotan mahalaukun limakalvon ammoniumhydroksidi [7]. Näin ollen vaikutti siltä, ​​mahalaukun haasteeseen haitallisten kemikaalien ilmaistaan ​​vagaalisia afferentit vain, otaksumasta joka hylkäsi nykyinen havainto, että tuovia syöttämästä kapsaisiinin altistuvat mahan lähetetään sekä selkäytimen ja aivorungon. Tämä tulos on sopusoinnussa ilmaus TRPV1, kapsaisiinia reseptori, sekä vagaalinen ja selkärangan afferent neuronien hermoissa rotan ruoansulatuskanavassa [12-16]. Retrograde jäljittäminen on osoittanut, että 80 ja 71%: n nodose ja takajuuren hermosolu neuronien toimittaa rotan mahan vastaavasti ilmaista TRPV1 [16]. Kun suoraan soveltaa somata, kapsaisiini virittää 90% takajuuren hermosolu neuronien ja 59% nodose hermosolu neuronien ulkonevat rotan mahan [31]. Vaikka TRPV1 on helppo havaita, että nodoosigangliot taso TRPV1 ilmentymisen useimmissa vagaalisia tuojahermosolut kuitujen vatsa on alle immunohistokemiallisella Erotuskynnys [12]. Tässä tapauksessa voisi selittää, miksi antaminen IG kapsaisiinin indusoi verrattain vähän ilmentymistä c-fos mRNA NTS. Emme usko, että pieni vaikutus kapsaisiinin johtuu epätyydyttävästä annostelun koska se on aikaisemmin todettu, että antaminen IG 0,64 mM kapsaisiini on maksimaalisesti tehokas lisäämään mahalaukun limakalvon verenvirtausta tuntohermosolun riippuvaisella tavalla [19].
Kuten HCl, kapsaisiini annosteltiin rotan mahaan ei merkittävästi parantaa yleistä ilmaisua c-fos mRNA selkäpuoli puoliskolla posterior rintakehän selkäydin. Kuitenkin alueellinen analyysi paljasti, että kapsaisiini aiheutti neuronien pinnallinen lamina I selkä torvi ilmaista c-fos mRNA, vaikutus, joka ei nähty seuraavia antaminen IG HCl. Tämä havainto saatu kapsaisiini on yhdenmukainen projektio sisäelinten afferenttien neuronien lamina I ja pinnallinen osa lamina II sekä lamina V ja alue X rotan ja kissa selkäytimen [17, 32]. Tuloksemme osoittavat, että antaminen kapsaisiinia osaksi mahan onteloon aktivoi aistihermoilla jotka työntyvät ensisijaisesti lamina I selkäytimen. Tämän löytää se voidaan sulkea pois, että c-fos ilme on riittämätön menetelmä, jolla kuvataan kemoreseptoreja signalointia mahan onteloon selkäytimeen ja että epäonnistuminen mahalaukun HCl haaste indusoi c-fos mRNA selkäytimessä edustaa väärän negatiivisen tuloksen. Vaikka hermo-anturit, jolloin ylimäärä HCI: a havaitaan mahalaukun onteloon ei tunneta, on mahdollista, että sekä TRPV1 ja happo-tunnistava ionikanavien (ASIC), kuten ASIC3 osallistuvat [33]. Koska sekä TRPV1 ja ASIC3 ilmaistaan ​​enemmistöllä takajuuren hermosolu neuronien toimittaa rotan mahan [16], on epätodennäköistä, että IG HCl ei indusoi c-fos mRNA selkäytimessä koska vastaavat afferentit eivät vastaa sopivaa happoa antureita.
verrattuna neuronien lukumäärä ilmentävät c-fos mRNA: n NTS määrä c-fos mRNA-positiivisia neuroneja 0,01 mm osissa selkäytimen oli hyvin pieni. Tämä johtuu todennäköisesti siitä, että afferent panosta rotan mahalaukusta selkäydin on vähäinen suhteessa selkärangan panos somaattisten kudosten ja että neurofysiologisesti ominaista selkäytimen afferentit tuskin innervate limakalvon ruoansulatuskanavan [34, 35]. Alhainen c-fos transkriptio in lamellit on selkäytimessä tehty pakolliseksi ajaa kokeista, joissa HCl ja kapsaisiini tiukasti samanaikaisesti ne, joihin liittyy vastaavien ohjaus /vehikkeliliuokseen. Oletamme, että ilmeisesti eri jakelu c-fos mRNA-positiivisten solujen selkäytimessä kontrollirottien, kuten on esitetty kaksi paneelit kuvassa 2, paitsi heijastaa välinen kokeilu vaihtelu mutta myös erilainen luonne valvonnan /ajoneuvo ratkaisu: kun auto HCl- oli fysiologinen suolaliuos, ajoneuvo, kapsaisiini oli suolaliuosta, joka sisältää etanolia ja Tween 80.
vaikutus IG kapsaisiinin lisäämään c-fos mRNA induktio lamina I selkäytimen liittyi merkittävä lasku c-fos mRNA: n ekspression lamellien III ja IV. Meillä ei ole mitään suoraviivaista selitystä tälle havainnolle. Koska lamellit III ja IV ei näytä saada suoraa palautetta sisälmysten [17, 32], oletamme, että vähennys c-fos mRNA muodostuminen näissä lamellien on epäsuora vaikutus kapsaisiini. Ymmärrettävästi, sisäelinten afferent sisääntuloon lamina I neuronien aktivoi estävä polkuja, jotka painavat excitability lamina III ja IV neuronien.
Tuovissa signalointi mahalaukun limakalvon altistumisen kapsaisiini ja ylimäärä HCl määräytyy paitsi pitoisuuden haitallisten kemiallisten mutta myös kestoa sen läsnäolo mahalaukun onteloon. Aiemmin on havaittu, että suhteessa suolaliuos, IG anto HCUla anestesioiduille rotille pidentää nesteen kertyminen vatsaan ja viiveet mukauttaminen IGP [7, 20]. HCl aiheuttama maha- nesteen kertymistä tuloksia esto mahalaukun tyhjenemistä ja parannettu mahanesteessä bikarbonaatin ja liman eritystä [20, 36], mutta analyysi mahan sisällön oli kuulu tämän tutkimuksen. HCl: n aikaansaaman inhibition mahalaukun tyhjenemistä välittävät hermo refleksit, että aloitetaan sekä mahan ja pohjukaissuolen [20, 37-40]. HCl-pitoisuus testattiin gastropyloric moottorin vaikutuksia nukutetuilla rotilla oli alennettu 0,35 M, koska anestesian heikentää mahalaukun limakalvon HCl ja IG HCl-pitoisuus (0,5 M) testattiin sen vaikutuksen keskeinen c-fos ilmentymisen indusoi laajan vahinko nukutetuilla rotilla mutta aiheuttaa pieniä mahalaukun vaurioita eläimen ollessa tajuissaan [5]. Koska kokeet paljastivat, mahalaukun altistuminen HCl ja kapsaisiini muutettu gastropyloric potevilla differentiaalisella tavalla. Vaikka mahalaukun tyhjenemistä esti HCl vaan jätti muuttumattomina kapsaisiini, mukauttaminen IGP estivät sekä HCl ja kapsaisiini. Vaikutus kapsaisiinin viivyttää IGP sopeutumiseen voi liittyä sen kyky aiheuttaa supistumista tai lieventämistä rotan mahalaukun lihaksisto, tyypin vasteen riippuen annoksesta kapsaisiinin ja mahalaukun alueella ja lihasten kerros tutkitaan [19, 41-43 ].
Mitä tulee erilainen vaikutus IG HCl ja kapsaisiini selkäydinkanavan c-fos ilmentymisen se oli erityisen tärkeää huomata, että toisin kuin HCI, kapsaisiini ei parantaa mahanesteen hyödyntämistä, mikä tarkoittaa, että mahalaukun tyhjenemistä tapahtunut moitteettomia ja IG annetaan kapsaisiini oli nopeasti kulkeutuu ohutsuolen yläosassa. Sen vuoksi voidaan väittää, että kapsaisiinin herätti c-fos vasteen NTS, joka oli pienempi kuin HCl, ja selkäydin johtuvat kapsaisiinin herätti heräte sekä mahan ja suoliston afferentit, kun taas kiihottavaa vaikutusta HCl on rajoittunut lähinnä mahalaukun afferentit. Epäonnistuminen mahalaukun HCl haaste indusoi c-fos ilmentymisen selkäytimessä ei voida selittää raportoitu kyky vagaalisia afferenttien aktivoida laskeva reittejä ja siten estävät afferent panos selkäydin [44, 45], koska kahden- krooninen vagotomy epäonnistuu paljastaa mahdollinen kasvu selkärangan c-fos mRNA induktio johtuu mahalaukun HCl haaste [5]. On muitakin tapoja selittää ero kyky IG HCl ja kapsaisiini aiheuttaa c-fos mRNA NTS ja selkäytimen, mutta analyysi näiden tekijöiden oli kuulu tämän tutkimuksen. Esimerkiksi on olemassa todisteita siitä, että kapsaisiini on pieni imeytyy mahalaukun seinämän [19], mikä myös selittää, miksi IG antaa kapsaisiini on verrattain heikko stimuloivan mahalaukun vagaalisia afferentit ulkonevat NTS, kun taas Kapsaisiini kuljetetaan ylemmässä ohutsuolessa voi enemmän helposti ja stimuloida selkärangan tuojahermosolut terminaalit suolen lamina propria.
ansiosta eksploratiivisen luonteesta, nykyinen tutkimus on rajansa. Siten ero vaikutus IG annettiin kapsaisiinin ja HCl päälle vagaalinen ja selkärangan afferent polkuja riippuu todennäköisesti paitsi mahalaukun tyhjenemistä ja absorptiokinetiikka HCl ja kapsaisiini, mutta myös siitä, missä määrin limakalvon vauriota ja suuruus limakalvon verta virtaus. Vaikka eheys mahalaukun limakalvon häiritsee vain HCI: ää [5, 7, 46], mutta ei kapsaisiini [11], mahalaukun limakalvon verenkierto on koholla sekä kapsaisiinia [19] ja backdiffusing HCl: [46].
Päätelmät
Mahalaukun haaste HCUIä ja kapsaisiini on differentiaalisesti signaloidaan NTS ja selkäytimen, mikä osoittaa, että molemmat ärsykkeet käsittelee erilaisia ​​nociceptive afferent reittejä. Koska HCl estää mahalaukun tyhjenemistä, kun taas kapsaisiini ei ole, päätellään, että HCl-herätti afferenttien tulo NTS välitetään vagaalisia afferentit vatsassa, kun aktivointi NTS ja selkärangan lamina I neuronien kapsaisiinia välittyy sekä vagaalisia afferentit mahassa ja selkäytimen afferentit ylemmässä ohutsuolessa. Edelleen kokeiluja, jotta voitaisiin selvittää, miten nämä havainnot liittyvät mahalaukun kemiallista kipuärsytystä. Suostumuksella meidän C-fos data, nosiseptioon aikaansaama ylimääräinen mahalaukun HCl välittyy vagaaliset afferent neuronien [4], ja se odottaa tutkittava joka tuovissa väyliä rele nosiseptioon herättämistä mahalaukun kapsaisiini. Mechanonociception herättämän turvotus ja vatsan saadaan aikaan selkäytimen afferentit [4], vaikka ilmentyminen c-fos nähdään sekä selkäytimessä ja, laajemmin, aivorungon [47]. Tool Menetelmät
Eläimet
hyväksyi tutkimuksen eettisen komitean liittovaltion opetus-, tiede- ja kulttuuriministeri Itävallan tasavallan ja johdetaan direktiivin mukaisesti Euroopan yhteisöjen neuvoston 24. marraskuuta 1986 (86/609 /ETY) . Kokeet suunniteltiin siten, että käytettyjen eläinten määrä ja kärsimystä minimoitu. Nainen samanikäisiin Sprague-Dawley-rottia (Abteilung für Labortierkunde und -genetik, Medical University of Vienna, Himberg, Itävalta), jotka painoivat 180-220 g. Ne sijoitettiin neljän ryhmissä muovisissa läpinäkyvä häkeissä standardiolosuhteissa; valot olivat peräisin 06:00 asti 18:00.
Kokeelliset protokollat ​​
Kaikki kokeet tehtiin valoisan vaiheen aikana 8:00-00:00. Kaksikymmentä tuntia ennen aloittaa kokeiden rotat ilman ruokaa, jotta vatsa oli tyhjä mennessä kokeiden, kun vesi oli saatavilla ad libitum koko tämän valmisteluvaihe. Lisäksi rotat pantiin kahden ryhmissä lattialla verkkoon estämiseksi coprophagy. Kahdessa tutkimuksessa, joissa erilaisia ​​kokeellisia protokollia tehtiin.
Tutkimus 1 suoritettiin ei-nukutettu eläimiä. Fysiologinen suolaliuos (0,15 M NaCl), HCI: a (0,5 M), kapsaisiini (0,64 ja 3,2 mM) tai sen vehikkeliä annettiin IG tilavuudessa 10 ml /kg kautta pehmeän imeväisruokinnasta putki (ulkohalkaisija 2,2 mm, Portex, Hythe , UK). 45 minuutin kuluttua rotat tapettiin injektoimalla vatsaonteloon yliannostuksen pentobarbitaali (200 mg /kg; Intervet, Wien, Itävalta) ja niiden aivorungon ja selkäytimen poistettiin nopeasti. Kapsaisiini (Sigma, Wien, Itävalta) liuotettiin väliaineessa, joka sisälsi 10% Tween 80, 10% etanolia ja 80% fysiologista suolaliuosta, jolloin saatiin kantaliuokset 2 ja 10 mg /ml (6,4 ja 32 mM) kapsaisiini. Nämä kantaliuoksia laimennettiin sitten fysiologisella suolaliuoksella, jolloin saatiin testiliuokset 0,64 ja 3,2 mM kapsaisiini, vastaavasti. Ajoneuvon kapsaisiini sisälsi 1% Tween 80, 1% etanolia ja 98% fysiologista suolaliuosta.
Tutkimus 2 suoritettiin eläimillä, jotka nukutettiin fenobarbitaali (230 mg /kg vatsakalvonsisäisesti; Sigma) ja sijoitettiin termostoituun taulukon säilyttää peräsuolen lämpötila 37 Celsius-astetta [20]. Rotat sitten varustettu henkitorvikanyyli helpottamiseksi spontaanin hengityksen. Kanyyli vasemmassa kaulalaskimoon käytettiin jatkuvana infuusiona fysiologista suolaliuosta (1,5 ml /h), jotta vältetään kuivuminen. Jälkeen keskiviivan laparotomy IG katetri (ulkohalkaisija: 2,2 mm) lisättiin vatsassa kautta ruokatorven ja mahalaukun huuhdellaan [20]. Sen kärki on sijoitettu corpus alueella, katetri käytettiin tallentamaan mahansisäisillä paine (IGP) kautta paineanturi sekä nesteen tunkeutumaan ja valua mahasta [20]. Tätä menetelmää IGP mittaus on kuvattu ja validoitu aiemmassa tutkimuksessa [20]. Tasapainotusvaiheen jälkeen 30 minuutin aikana, 2 ml nestettä bolus hitaasti injektoitiin vatsaan ajan 5 s ja jäljellä mahassa ajaksi 30 minuuttia, minkä jälkeen mahan valutettiin pois ja paino talteen nesteen määritetty . Talteenotto nesteen mahasta (epäsuora mitta mahalaukun tyhjenemistä) ilmaistiin prosentteina painosta nesteen annetaan vatsaan [20]. Kukin rotta saatettiin 4 injektiota /talteenotto tutkimuksissa välein 15 min, jonka aikana mahalaukun jäi tyhjäksi. Ensinnäkin Kahden alustavan kokeet suolaliuoksella tehtiin seuraa joko testi tutkimus suolaliuoksella ja testi tutkimus HCUIä (0,35 M) tai testin tutkimuksessa ajoneuvon ja testi tutkimuksessa kapsaisiinia (3,2 mM). IGP oli keskimäärin ajanjaksoina 2-3 min, 9-10 min ja 29-30 min injektion jälkeen. Koska aiemmin kuvatulla [20] huippu nousu IGP injektion jälkeen vaihteli eroavaisuuksien vuoksi injektionopeutta, IGP keskimäärin aikana 2-3 min injektion otettiin 100% ja IGP tallentuneet myöhemmän havainnon kaudet ilmaistaan ​​prosenttiosuutena tuon viitearvon.
In situ -hybridisaatio autoradiografia
aivorungon ja selkäytimen poistettiin nopeasti ja jäädytettiin jauhettu kuivajäässä. Koronan kohdat (0,01 mm) leikattiin sarjoittain alkaen aivokudos on rostrocaudal laajentaminen area postremassa ja pyrstö rintakehän selkäydin kanssa kryostaatti [5, 6, 22]. Joka kuudes kohta käsiteltiin in situ hybridisaatiota oligodeoksiribonukleotidi koettimen leimatun 3'-pää [ 35S] deoksiadenosiini 5 '(α-tio) trifosfaatin kuten aiemmin on kuvattu [6]. Leikkeet kastettiin Ilford K5 valokuvaus emulsio ja sen jälkeen 18-25 päivää altistuksen on suljettu kotelo 4 astetta, Autoradiogrammien kehitettiin ja kohdat vastavärjättiin hematoksyliinillä ja päällystettiin [6]. Spesifisyyden menettelyn todistaa puuttuessa hybridisaatio signaalin, kun ohjaus hybridisoitiin seoksella leimatun koettimen kanssa 100-kertainen ylimäärä leimaamatonta (kylmää) koetin.
Autoradiogrammien tutkittiin koodatussa tavalla valomikroskoopilla (Axiophot, Zeiss, Oberkochen, Saksa) kytkettynä tietokoneistetun kuva-analyysi-järjestelmän (Imaging, St. Catharines, Ontario, Canada). Solut pidetään c-fos mRNA-positiivisia, kun niiden viljaa tiheys oli vähintään 10 kertaa suurempi kuin tausta [6]. Parantaakseen luotettavuutta määrällisten tulosten, 5 aivorungon osissa ja 7-10 selkäydin kohdat kustakin eläimestä arvioitiin. Nämä kohdat on valittu siten, että ne olivat 0,05 mm: n päässä toisistaan, jotta vältettäisiin se, että samat solut laskettiin kahdesti. C-fos mRNA-positiivisia soluja per jakso laskettiin yksipuolisesti NTS tasolla area postremassa ja selkäpuoli puolet selkäydin caudal rintakehä tasolla (T8-T12). Nämä rakenteet tunnistettiin mukaan Molander ja Grant [48] ja Paxinos ja Watson [49]. Selkäpuoli puoliskolla selkäytimen, jakelu c-fos mRNA-positiivisia soluja lamellien IV (LI-LV), alue X (AX) ympäri Keski kanavan ja intermediolateral nucleus (IMLN) arvioitiin mukaan rotta

• Ruuansulatuskanavan tukikudosten kasvain mahassa matkimalla maksakasvain: tapausselostus
• Uutta tekniikkaa sapen rekonstruktio käyttämällä eristettyä mahalaukun putki vascularized pedicle: elävä eläin kokeellinen tutkimus ja ensimmäinen kliininen tapaus