Korjauksilla E-kadheriinin ja β-kateniinin mahalaukun cancer

korjauksilla E-kadheriinin ja β-kateniinin mahasyövän
tiivistelmä
tausta
E-kadheriinin-kateniinin kompleksi on keskeinen rooli epiteelin solu- soluadheesiota ja ylläpidossa kudosrakenne. Häiriön ilmaisemisessa tai tehtävä tämä kompleksi johtaa menetykseen välistä adheesiota, mahdollisesti seurauksena solujen transformaatio ja syövän etenemiseen. Tool Menetelmät
Tutkimme korjauksilla E-kadheriinin ja β-kateniinin joukko 50 ensisijaisen mahalaukun kasvaimet käyttämällä heterotsygotian menetys (LOH) analyysi, geenimutaatio seulonta, havaitseminen poikkeavien selostukset ja immunohistokemia (IHC).
tulokset
korkea taajuus (75%) LOH havaittiin 16q22.1 sisältävä E -cadherin lokukseen. Kolme tapausta (6%), osoitti identtistä missense-mutaatio, A592T. Tämä mutaatio ei todennäköisesti edistää voimakkaasti karsinogeneesi mahalaukun syövän, koska pieni (1,6%) tämän mutaation löydettiin myös 187 terveillä henkilöillä. Olemme myös havainneet alhaisen taajuuden (0,36%, 0%) tämän mutaation 280 rintasyövistä ja 444 muut tuumorit, mukaan lukien paksusuolen ja peräsuolen, keuhkon, kohdun limakalvon, munasarjojen, kives, munuainen, kilpirauhasen karsinoomat ja sarkoomat, vastaavasti. Olemme myös analysoineet poikkeava E-kadheriinin mRNA mahalaukun kasvaimet ja havaittiin, että 7 kasvaimia (18%) oli poikkeava mRNA: iden lisäksi normaali mRNA. Nämä poikkeava mRNA: t voivat aiheuttaa epänormaaleja E-kadheriinin molekyylejä, mikä johtaa heikko solu-solu-adheesion ja invasiivisen käyttäytymisen karsinoomasoluja. Alennettu ilmentyminen E-kadheriinin ja β-kateniinin tunnistettiin taajuudella 42% ja 28%, vastaavasti. Erityisesti, 11 kasvaimet (22%) oli positiivisia sytoplasmista värjäytymistä β-kateniinin IHC. Yhdistyksen välillä todettiin alennettu ilmentyminen E-kadheriinin ja β-kateniinin. Lisäksi yhdistys havaittiin alentamisella ilmentyminen E-kadheriinin ja hajanainen histotype.
Päätelmä
Tuloksemme tukevat oletusta, että korjauksilla E-kadheriinin ja β-kateniinin osansa aloittamisen ja etenemisessä mahasyövän .
Taustaa
E-kadheriinin (120 kDa; kromosomissa 16q) on klassinen kadheriinin ja muodostaa avaimen toiminnallinen komponentti pysyvyyttä liittymien välillä epiteelisolujen [1]. Se on sitoutunut sarjan kautta pohjavillan proteiinien catenins (α, β ja γ) ja aktiinitukirankaan [1]. Tämä kytkös transmembraanireseptoria kadheriineja ja aktiinisäikeiden solun tukirangan on välttämätöntä muodostaa vahva solu- soluadheesiota. Ehjä E-kadheriinin - kateniinin monimutkainen tarvitaan normaaleista välistä adheesiota. Tämän valossa, useat ryhmät ovat esittäneet, että karsinoomat, E-kadheriinin toimii invaasio vaimennin molekyyli siten, että sen menetys sallii tai edistää invaasio viereisiin normaaleihin kudoksiin. Immunohistokemialliset tutkimukset ihmisen syövissä, kuten mahasyövän, ovat usein osoittaneet, että osa invasiivisia karsinoomia ja karsinoomia in situ
osoittavat poikkeava taso E-kadheriinin ja /tai kateniinin ilmentymistä verrattuna niiden liittyvän normaalia kudosta [2-4] . Yleisesti E-kadheriinin ja kateniinin värjäytyminen on vahva hyvin erilaistunut syöpiä, jotka säilyttävät solujen tarttuvuuden ja ovat vähemmän invasiivisia, mutta pienenee huonosti eriytetty kasvaimia, jotka ovat menettäneet solu- soluadheesiota ja vahvaa invasiivisen käyttäytymisen [2, 3].
E-kadheriinin on mukana kosketukseen solujen kasvun esto indusoimalla solukierron pysähtymisen [5]. Se on kyky inhiboida soluproliferaatiota säätely p27 osallistuu solusyklin säätelyssä [5], vaikka mekanismi, jonka E-kadheriinin säätelee p27 on vielä epäselvä. Siksi E-kadheriinin, kuvataan yleensä hyökkäys vaimennin [6], voi toimia keskeisenä kasvun /proliferaation vaimennin.
Tärkeänä tehtävänä β-kateniinin solusignalointia, on selvitetty [7]. Koska mitoottisen signaalin solun ulkopuolella, β-kateniinin on erottautuvat kompleksin adenomatoottisen polypoosin coli (APC) -geenin tuote, seriiinitreoniinin glykogeenin syntetaasin kinaasin (GSK-3β) ja sovitin proteiinin ak- siini (tai homologi conductin), joka mahdollistaa fosforylaatio ja hajoaminen vapaa β-kateniinin jota ubikitiinistä proteasomin järjestelmä [8]. Kun mitoosi viestejä lähettävät Wnt reitin, jonka yhdistys on Wg /Wnt perhe erittyvien glykoproteiinien ja niiden membraanireseptoriin frizzled, se johtaa aktivoitumiseen epäsiisti (DSH) proteiini, joka on palkattu solukalvon. Aktivoitu DSH downregulates proteiinin monimutkainen, niin että se ei enää voi fosforyloida β-kateniinin, joka sitten ei hajoa. Vapautuminen β-kateniinin päässä fosforylaatiota ja hajoaminen monimutkaisia ​​edistää β-kateniinin stabilointi ja signalointi. Tämä johtaa kasvuun vapaan cystolic β-kateniinin, joka siirtyy tumaan ja sitoutuu suoraan transkriptiofaktoreiden Lef ja Tcf, mikä johtaa geeniekspression aktivaation. Siksi β-kateniinin suorittaa erillisiä toimintoja E-kadheriinin välittämiä solun-soluadheesiota ja Wnt signalointi [8].
Menettäminen E-kadheriinin lokus pitkän varren kromosomin 16 (16q22) esiintyy mahalaukun (24 %), hepatosellulaarista (50%), lobulaarinen rintojen (50-100%) ja ruokatorven (66%) karsinoomien [4, 9-12]. On ollut useita raportteja E-kadheriinin geenimutaatioita ihmisen syövissä [13]. Heikosti erilaistunut kasvaimet, kuten lobulaarinen rintasyövän ja diffuusi-tyyppinen mahasyöpä, E-kadheriinin mutaatioiden tärkeä rooli kasvainten kehittymiseen [14, 15]. Useissa tutkimuksissa on raportoitu ituradan mutaatioita E-kadheriinin geenin perheet perinnöllinen diffuusi tyyppinen mahasyöpä [16, 17]. Vain pieni osa mahasyöpä voidaan selittää E-kadheriinin mutaatioita. Usein somaattisia mutaatioita β-kateniinin geeni on löydetty pienissä peräsuolen adenoomien ja suoliston tyyppi mahasyövän [18, 19]. Suurin osa mutaatioista mukana menetys seriinien tai treoniinien päässä GSK-3β fosforylaation alue. Geneettisten muutosten β-kateniinin poistamalla solu-solu-tarttuvuus on havaittu kaksi mahasyövän solulinjoissa, HSC39 ja 40A; molemmat ovat peräisin samasta sinettisormuksella karsinooma mahan ja näyttää hajanainen kasvumalli [20, 21]. Tämä mutaatio johtaa typistetyn β-kateniinin, josta puuttuu alue vuorovaikutukseen β-kateniinin. Transfektio näistä solulinjoista villityypin β-kateniinin palauttaa solun tarttuvuus [21].
Täällä suoritimme E-kadheriinin ja beeta-kateniinin geenimutaatio ja ilmentymisanalyysit sarjassa 50 ensisijaisen mahalaukun kasvaimet, jotta voidaan ymmärtää parempi osallistuminen muutokset E-kadheriinin ja β-kateniinin että karsinogeneesi mahasyövän.
Materiaalit ja menetelmät
näytteet
Mukana tutkimuksessa olivat 50 kasvaimia ja vastaavassa normaalissa näytteitä, joista kaksi kasvaimia (17 ja 23) olivat samasta perheestä, loput satunnaista (taulukko 1). Nämä tapaukset diagnosoitiin Department of Pathology, University Hospital Islannin. Tissue saatiin tuoreeltaan päivänä leikkauksen tai parafinoidut materiaalia. Tiedot kasvain vaiheessa histotype ja arvosana hankittiin myös samasta osasto. DNA PCR eristettiin proteinaasi K hoitoon [22]. RNA RT-PCR uutettiin käyttäen Tri-reagenssia (Molecular Research Center, INC. USA). Sillä A592T-mutaatio, me seulotaan 187 normaali yksilöitä, 280 rinta- ja 444 muiden syöpäpotilaiden paksusuolen ja peräsuolen, keuhko-, kohdun limakalvon, munasarjojen, kives, munuainen, kilpirauhasen karsinoomat ja sarkoomat. Kaikki yksittäiset tunnisteet poistettiin kontrollinäytteistä ennen analyysiä, ja tutkijat saivat sokaisi tunnistamiseen näytteistä, joita ei enää voida jäljittää tietyille henkilöille. Suostumus otaksuttiin potilaalle näytteitä. Tapauksissa 294 ja 728 kanssa A592T-mutaatio, analysoimme sukutauluineen ja totesi, että ei ollut muita syöpätapausta sukupuussa case 294, mutta on olemassa muita 5 syöpätapausta sukupuussa case 728, mukaan lukien 2 eturauhasen syöpiä, 1 iho syöpä, 1 keuhkosyöpä ja 1 syöpä epäselvä origin.Table 1 Yhteenveto korjauksilla E-kadheriinin ja β-kateniinin sarjassa 50 mahalaukun kasvaimet.
Tumour

Stage

Type

Grade

LOH

E-cad geenimutaatioita
Poikkeava mRNA
E-cad
β-kissa
Näytteet



at 16q22.1
ja polymorfismit
E-cad
IHC
IHC

1
T3N3
JM
+
IVS1+6T→C
-
+/-
++/-∇
3
T3N1
squ
G1
+
IVS4+10C→G
ND
-
+/-
17
T3N1
diff
ND
GTG (Val) → GTC (Val) at cd832
ND -
-
23
täyty
+
GCC (Ala) → ACC (Thr ) at cd592 *
ND
+++ /-
+++ /-
43
T3N2
JM
+
- -
-
+++ /-
50
T3N1
JM
-
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
165
T3N1
int
G3
ND
-
-
+++/-
+++/-∇
174
T3N2
int
G3
-
-
ND
+++/-
++/-
193
T3N2
int
G3
+
-
ND
-/+++
-/++
200
T3N1
int
G2
-
IVS4+10C→G
-
++/-
+++/-
231
T3N0
mi
G3
+
-
-
++/-
++/-∇
283
T3N0
int
G3
ND
-
ND
++/-
++/-
287
T3N1
int
G2
+
-
-
-/+
++/-
294
T3N1M1
mi
G4
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) at cd592♦
-
++/-
++/-∇
304
T3N3
int
G2
-
-
-
-/+++
+/-
308
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
++/-
314
T3N1
diff
-
CAC (His) → CAT (His) at cd632 -
+++ /-
++ /- ∇
GGC (Gly) → GGT (Gly) at cd865
360
T2N1
int
G3
+
IVS4 + 10C → G
+ ♣
++ /-
+/-
369
met
+
-
+♣
+++/-
++/-
433
T3N1
mi
G3
-
IVS4+10C→G
-
-/++
-/+
435
T2N0
int
G3
+
-
-
-/+++
-/++
443
T2N0
int
G4
-
-
-
+++/-
+++/-
451
T4N0
int
G2
ND
-
ND
+++/-
++/-
474
T3N1
int
G3
ND
-
ND
-
+/-
493
T3N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+/-
503
T3N1
int
G3
ND
-
-
-
+++/-
556
T3N2
int
G2
-
IVS1+6T→C
ND
++/-
+/-
5'UTR--71C → G
568
T3N2
mi
G3
+
-
+♣
++/-
++/-
612
T3N0
int
G2
ND
IVS4+10C→G
-
+++/-
+/-
AAC (Asn) → AAT (Asn) at cd751
636
T3N1
JM
+
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-∇
650
T2N0M1
int
G2
+
-
ND
-/+
++/-
675
T2N0
mi
G3
+
IVS4+10C→G
-
+/-
++/-∇
676
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-∇
680
T3N1
mi
G3
+
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
AAC (Asn) → AAT (Asn) at cd751
694
T3N1
int
G1
+
-
-
+++/-
+++/-
717
T3N1
int
G3
+
-
+♣
-/+++
+++/-
726
T2N1
int
G2
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
728
T3N0
int
G2
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) at cd592♦
-
-/+++
++/-
729
T3N1
int
G1
-
IVS1+6T→C
-
-/+++
+++/-
732
T2N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+++/-
735
T4N3
diff
ND
AAC (Asn) → AAT (Asn) at cd751 -
+++ /-
+++ /- ∇
738
T3N2
JM
+ -
- -
-∇
750
täyty
ND
AAC (Asn) → AAT (Asn) at cd751
+♣
++/-
+++/-
755
T2N1
int
G2
ND
-
+♥
+++/-
++/-
808
T3N0
int
G1
+
ACG(Thr)→ACA(Thr) at cd251
+♠
+++/-
++/-
811
T2N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-/+
832
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-∇
855
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-
875
T3N2
int
G2
-
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-
904
T2N0
int
G3
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
Useful
30
3
7
21
14
Yhteensä
40
50
38
50
50
%
75
6
18
42
28
T, kasvain (koko ja invasiivisuus); N, solmu (aste etäpesäke); M, etäpesäke; G1, hyvin eriytetty; G2, kohtuullisesti erilaistunut; G3, huonosti eriytetty; G4, ei eriytetty; JM, hajanainen (erottelutarkkuus = G4); mi, sekoitettu; int, suoli; met, etäpesäkekasvainten luultavasti mahan kasvain; squ, suomuinen epiteelin; Loh, Heterotsygotian menetys; E-cad, E-kadheriinin; β-kissa, β-kateniinin; IHC, immunohistokemia; cd, kodoni; UTR, transloimaton alue; +, Positiivinen LOH, poikkeava E-cad mRNA, E-cad ja β-kissa IHC -, negatiivinen LOH, E-kadheriinin geenimutaatio, poikkeava E-cad mRNA, E-cad ja β-kissa IHC; ND, ei määritetty eikä ole tehty; +/-, ++ /- Ja +++ /-, yli 50% soluista positiivisia; - /+, - /++ Ja - /+++, yli 50% soluista negatiivinen; *, Somaattinen mutaatio; ♦, ituradan mutaatio; ♣, lisätään intronia 7 välillä eksonien 7 ja 8, lopetuskodonin 374; ♥, poistaminen viimeisen 72 perustaa eksonin 7, eksonin 8 ja ensimmäinen 124 emäkset eksonin 9, lopetuskodoni 322; ♠, poistetaan eksonien 8 ja 9; poistaminen viimeisen 84 perustaa eksonin 8, lopetuskodoni 358; ∇, nämä näytteet osoittivat myös sytoplasmista värjäytymistä β-kateniinin IHC.
LOH määritys
mikrosatelliittimarkkerin käytetään LOH-analyysi kromosomin 16q olivat: D16S503, D16S496, D16S421, D16S545 ja D16S512 alueen 16q22.1 sisältävä E -cadherin locus (Genome Database). Polymeraasiketjureaktio (PCR) tuotteiden erotettiin akryy- sekvensointi geelillä ja siirrettiin positiivisesti varatulle nailonkalvolle, Hybond-N + (Amersham, Aylesbury, UK), ja paistetaan vähintään 2 tuntia 80 ° C: ssa. Ei-radioaktiivinen havaitsemiseksi käytetty menetelmä visualisoida PCR-tuotteet on kuvattu aiemmin [23]. Autoradiokuvat tarkastettiin visuaalisesti vähintään kaksi arvioijat, vertaamalla intensiteetti alleelien normaalista ja kasvaimen DNA. Puuttuminen tai merkittävä lasku yhden alleelin kasvaimessa verrattuna normaaliin Vertailunäytteen pidettiin Loh.
Mutaatio seulonta
Kaikki 16 eksonit E-kadheriinin geenin ja eksonin 3 β-kateniinin geeni seulottiin inaktivaatio mutaatioiden PCR-SSCP (yksijuosteisen konformaatiopolymorfismia) analyysi genomisen DNA malleja. Alukkeet E-kadheriinin ja β-kateniinin käytetty SSCP analyysissä oli kuvattu edellisessä artikkelissa [4] ja Park et al. [1999] vastaavasti ja tilata Pharmacia Biotech tai TAG Copenhagen A /S. Genomista DNA: ta käytettiin 30 ng per 25 ui reaktioseosta, joka sisälsi 5 pmol eteenpäin ja taaksepäin-alukkeita, 2,5 nmol kutakin dNTP: tä, 0,5 yksikköä Dynazyme-polymeraasia. Näytteet monistettiin 35 sykliä, joka koostuu 30: n denaturointi 94 ° C: ssa, 30 s, pariutuminen 55-70 ° C: ssa, ja lopuksi 60 s pidennys 72 ° C: ssa. Kuuma käynnistys käytettiin lisäämällä entsyymin ensimmäisen jakson noin 70 ° C, kun esi-inkubointi ajan ollessa 5 minuuttia 94 ° C: ssa. A4 xl: n näyte PCR-tuotteiden sekoitettiin 7 ui formamidia väriainetta (95% formamidia, 0,05% bromifenolisinistä ja 0,05% ksyleenisyanolia), denaturoitiin 94 ° C: ssa 10 minuutin ajan ja snapcooled jäällä. Alikvootit 2 pl analysoitiin samanaikaisesti kahdella denaturoimatonta polyakryyliamidigeeleillä (5% akryyliamidia 2% silloittaminen), joko sisälsi 5% glyserolia tai puuttuvat glyseroli. Elektroforeesi suoritettiin 1 x TBE: tä pystysuuntaisen geelejä 6w: ssa yön yli tai 6 h huoneen lämpötilassa. PCR-tuotteet visualisoitiin kuin mikrosatelliittimarkkerin. Näytteitä, joissa epänormaali liikkuvuuden vyöhykkeitä monistettiin uudelleen 35 sykliä edellä kuvatulla tavalla. 5 ul: n erä PCR-tuotteita inkuboitiin sitten 10 U exonulease I ja 2 U katkaravun alkalisella fosfataasilla poistaa liiallisen alukkeita ja dNTP: itä (US70995, Amersham). Sekvenssit molemmat juosteet määritettiin Thermo Sequenase-DNA-polymeraasia (Thermo Sequenase Radioaktiivisuusmerkittyä Terminator Cycle Sequencing Kit, Amersham) käyttäen kaksi alkuperäistä PCR-alukkeita. Suoritimme A592T-mutaation analyysi näistä syövistä, paitsi syöpä epäselvä alkuperää, perheen tapausta 728 käytetään suoralla sekvensoinnilla.
Poikkeava mRNA seulonta
1-5 ug kokonais-RNA käänteisesti cDNA: ksi käyttäen ensimmäisen juosteen cDNA-synteesi (Amersham Pharmacia Biotech). Kaikki näytteet tutkittiin E-kadheriinin cDNA deleetioita ja insertioita. E-kadheriinin cDNA monistettiin käyttämällä alukeparia EX7-rEx10 /2 ja EX9 /2a-rEx11 alueelle eksonien 7-10 koodaavat kalsiumia sitovat kohdat [24]. PCR-tuotteet visualisoitiin agaroosigeelielektroforeesilla. Epänormaali fragmentit leikattiin irti ja sekvensoitiin käyttämällä forward- ja reverse-alukkeita määrittää rajat poistumat ja istutukset. Täällä, käytimme BigDye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit (Perkin-Elmer, Foster City, CA) ja automaattisekvensoijaa ABI PRISM ™ 3100 (Perkin-Elmer) sekvensointia
immunohistokemiallinen värjäys
immunohistokemiaallisesti E-kadheriinin ja β kateniinin suoritettiin 5 um: n osia parafinoidut kasvainkudoksen lohkojen monoklonaalisilla vasta-aineilla E-kadheriinin 5H9 ja Goat Anti-kateniini Beta (Research Diagnostic, Inc. NJ, USA), vastaavasti, käyttämällä antigeeni haku kuvanneet Hazelbag et ai. [1995]. Kasvaimet luokitellaan värjäytymisen intensiteetti negatiivisena (-), heikosti positiivinen (+), kohtalaisen positiivinen (++) ja vahvasti positiivinen (+++).
Tilastollinen analyysi
Χ 2 testiä tai Fisherin tarkkaa testiä käytettiin välisen suhteen arvioimiseksi edellä mainituilla muuttujilla.
tulokset
taajuus LOH on 16q22.1 alueella oli 75% (taulukko 1).
Kolme kasvaimia (6%) oli sama missensemutaatio A592T eksonin 12, joista 2 tapausta oli ituradan mutaatio, ja yhdessä tapauksessa oli somaattisen mutaation. Tietoa havaittu polymorfismien sisällytettiin taulukossa 1. Kolme 187 (1,6%) normaalien yksilöiden ja 1 280 (0,36%) rintojen kasvaimia osoitti tämän ituradan mutaatio. Mutaatio ei löytynyt 444 muissa kasvaimissa (taulukko 2) .table 2 taajuus A592T missensemutaatio mahasyövän, muut syövän ja normaali yksilöt
muuttujat
A592T /yhteensä
%
Mahasyöpää
3/50
6
Rintasyöpä
1/280
0,36
Muut syövän *
0/444
0
Normaali väestöstä
3/187
1,6
* lukien paksusuolen ja peräsuolen, keuhko-, kohdun limakalvon, munasarjojen, kives, munuainen, kilpirauhasen karsinoomat ja sarkoomat.
Lisäksi 3 280 rintasyövistä osoitti toisen missensemutaatio GCC (Ala) → TCC (Ser) on sama kodonissa 592, joista 2 tapausta olivat ituradan mutaation; kolmas oli epäselvä, koska normaali kudos ei ollut saatavilla. Histologinen tyyppi 4 rinnan kasvaimia oli ductal.
Perheessä case 728, huomasimme, että potilaalle ihosyövän ja yksi potilaista, joilla on eturauhasen syöpä oli sama ituradan mutaation tapauksessa 728. Kiinnostavaa kyllä, ei mutaatioita havaittiin kasvaimen näytteitä näissä kahdessa tapauksessa. Luultavasti, mutatoitu alleelit menetettiin aikana kasvainten kehittymiseen. Puhkeamista iät tapauksia, joissa ituradan mutaatioita sukupuu, oli 78 vuotta tapauksen 728, 73 vuotta ihosyöpä ja 76 vuotta eturauhassyövän.
Emme havainneet mutaation SSCP ja DNA-sekvensoinnilla eksonissa 3 β-kateniinin geenin 50 mahalaukun kasvaimet.
Seitsemän mahalaukun kasvaimet osoittivat poikkeava selostukset E-kadheriinin. Kasvaimet 360, 369, 568, 717 ja 750 näytetään insertoimalla intronia 7 välillä eksonien 7 ja 8. Kasvaimen 755 osoitti poistetaan viimeisen 72 perustaa eksonin 7, eksonin 8 ja ensimmäinen 124 emäkset eksonin 9. Kasvaimen 808 näytetään kaksi poikkeavaa mRNA: t, joista yksi oli deleetio eksonien 8 ja 9, ja yksi tapaus, jossa poistetaan viimeisen 84 emästä eksonin 8 (taulukko 1).
Lopuksi suoritettiin immunohistokemiallinen värjäys ja E-kadheriinin ja β-kateniinin. Alueellinen vaihtelu värjäytyminen havaittiin poikki kasvaimia. Scorings +/-, ++ /- ja +++ /- katso yli 50% soluista positiivisia, ja scorings - /+, - /++ ja - /+++ osoittaa yli 50% soluista negatiivinen. Negatiivinen (-) tai vähentää (- /+, - /++, - /+++ ja +/-) ilmentyminen E-kadheriinin ja β-kateniinin havaittiin 21/50 (42%) ja 14/50 ( 28%) tapauksista, vastaavasti. Lisäksi, että β-kateniinin IHC, 11 kasvaimia suotuisasti sytoplasmista värjäytymistä (taulukko 1). Merkittävä assosioitunut negatiivinen tai pienentää ilmentymisen E-kadheriinin ja β-kateniinin (p = 0,048, Χ 2 -testi). Lisäksi löysimme yhdistyksen alentamisella ilmentyminen E-kadheriinin ja hajanainen histotype (p = 0,04, Fisherin tarkka testi).
Keskustelu
tiheä LOH at 16q22.1 alue viittaa vahvasti siihen, että on olemassa yksi tai useampi tuumorisuppressorigeeneille tällä alueella, jonka menetys voi laukaista syövän synnyn mahasyövän. E-kadheriinin-geeni on kartoitettu kromosomiin 16q22.1 [26]. Alennettu ilmentyminen ja geenimutaatioita E-kadheriinin useita erilaisia ​​syöpiä, kuten maha- ja lobulaarinen rintasyöpä on todettu, mikä osoittaa, että E-kadheriinin geeni on tuumorisuppressorigeeni [2-4], [13-17, 27] . Tässä tutkimuksessa 3 tapauksessa (6%), osoitti identtistä missensemutaatio A592T. Kalsiuminsitomiskykymittauksesta motiivien sijaitsee solunulkoisten 1-5 pidetään keskeinen tekijä toiminnan E-kadheriinin, koska synteettinen molekyyli, jossa on yksi aminohapon substituutio kalsiumia sitova motiivi ei osoittanut tarttuvuutta [28] . Myös ihmisen solulinjassa MKN45 mahalaukun syövän, josta puuttui tiukka solu-solu-adheesion, joka on 4-amino-happo poistetaan havaittiin välisellä rajalla eksonien 6 ja 7, jota pidettiin muuttaa konformaatiota ympäröivästä avaimen kalsiumia sitova motiiveja ja poistaa liiman ominaisuus E-kadheriinimolekyylien [29]. Yhden aminohapon korvaaminen esillä olevassa tutkimuksessa sijaitsee viidennen solunulkoisen domeenin E-kadheriinin, jossa kalsiumia sitova motiivi voi olla olemassa. On mahdollista, siksi, että mutaatiot kolmessa tapauksessa myös tuhosi funktio E-kadheriinin. Mielenkiintoista, kolme tapausta osoitti myös LOH at 16q22.1 sisältävä E-kadheriinin lokuksen. Niin se voidaan katsoa, ​​että kaksi geneettisiä tapahtumia tuloksena inaktivaation geenin tapahtui kahden alleelin E-kadheriinin geenin, vastaavasti. Edellä esitetty osoitti, että E-kadheriinin geeni on kasvain-vaimennin-geenin, koska se on sopusoinnussa klassisen kahden osuman teoriaa tuumorisuppressorigeeneille [30]. Aiemmat tutkimukset lobulaarinen rintasyövän tukevat myös tämän lausunnon [4, 14]. Solulinjan MKN45 mainittu edellä (huonosti eriytetty adenokarsinooma), joilla on heikko solu-solu-adheesion, 12 bp: n lukukehyksessä poistetaan E-kadheriinin geenin ja menetys villityypin alleelin havaittiin [29]. Mutta tämä solulinja oli edelleen voimakasta ilmentymistä mRNA ja proteiineja, mikä viittaa siihen, että paitsi lyhentää ilmaisun lisäksi myös rakenteellisia poikkeavuuksia itse voi johtaa inaktivoituminen E-kadheriinin välittämiä solun adheesiosysteemi [29]. Näin ollen, yhden aminohapon substituutio havaittu tässä tutkimuksessa voi aiheuttaa rakenteellisia muutoksia E-kadheriinin ja johtaa rajoitetun solu-solu-adheesion, vaikka kaksi tapauksista (23 ja 294) osoitti riittävä proteiinin ilmentymisen.
Mielenkiintoista on, että sama sekvenssivariantti somaattisten ja ituradan mutaatio löydettiin samanaikaisesti eri mahalaukun potilailla. Case 23 somaattisista mutaatio oli puhkeamista ikä 56 vuotta, mutta tapaukset 294 ja 728, joissa ituradan mutaatio oli puhkeamista vuotiaita 71 ja 78 vuotta, vastaavasti. Yksi selitys tähän ilmiöön voisi olla, että menetys toisen alleelin E-kadheriinin tapauksessa 23 tapahtui hyvin varhaisessa vaiheessa, mikä triggerring karsinogeneesi suhteellisen varhain tapauksessa 23. Mutta on toinen mahdollisuus, että tämä mutaatio tapauksessa 23 ollut merkitystä vain etenemisessä kasvain, mutta ei aloittamisen, jossa muita geneettisiä tapahtumia voisi ehkä olla vastuussa aloittamisen mahasyövän. Mutta tapaukset 294 ja 728, joissa ituradan mutaatioita oli viivästyneen ikä. Tämä voi johtua siitä, että inaktivaatio toisen alleelin hyvin myöhään. Artikkeli kertoi, että pakollinen harjoittajat typistetyn mutaatioita E-kadheriinin geenin niiden 80 ja 90 pysyi ennallaan [31]. Siksi edelleen tunnistaminen geneettisen ja /tai ympäristön muokkaajia, jotka saattavat selittää muuttujan alkamisiällä tulisi suorittaa. Erityisesti, kotelo 294 oli kolme kasvaimia mahassa, joka on sopusoinnussa geneettisen kasvaimia yleensä on useita [30].
Taajuus (6%) mutaation A592T 50 mahalaukun kasvaimet on lähes neljä kertaa, että normaaliväestössä , mikä viittaa jälleen, että tämä mutaatio todellakin osaltaan tuumorigeneesiä alaryhmässä mahalaukun kasvaimet. Futhermore, 0,36% rintasyövistä, eikä muita kasvaimia, oli identtiset ituradan mutaatio, mikä osoittaa, että siellä voisi olla histologista ero tämän mutaation mahasyövän ja muita syöpää.
Vain kahdessa muussa näytteillä A592T-mutaation perheen tapauksessa 728. Erityisesti, tämä mutaatio havaittiin ainoastaan ​​vastaavassa normaalissa kudoksessa, mutta ei kasvainkudoksessa, mikä viittaa siihen, että mutatoitu alleelit menetettiin tuumorigeneesiä. Näistä voimme päätellä, että tämä mutaatio voi olla merkitystä, että tuumorigeneesiä eturauhassyövän ja ihosyöpä, mutta se voisi olla mahalaukun syövän erityinen.
Olemme päätellä, että A592T-mutaatio voi lisätä elinikäinen riski sairastua mahalaukun syöpään, mutta on selvästi sekvenssivariantti alhaisen penetraation. Meidän havainnot kahden eri sekvenssivariantit kodonissa 592 (A592T ja A592S), kuten ituradan ja somaattiset mutaatiot, viittaavat siihen, että tämä kodoni on hotspot mutaatioiden kasvaimen synnyssä.
Raja-arvot insertioita intronin 7 ja poisto eksonien 8 ja 9 ovat silmukointipaikoista mukaisesti "GU-AG" sääntö mRNA. Se voidaan arveltu, että nämä muutokset eivät syntyvät vaihtoehtoisen silmukoinnin, koska mitään todisteita vaihtoehtoisen silmukoinnin havaittiin sisällä hiiren E-kadheriinin geenin [32] ja ei poikkeavaa mRNA: ita havaittu noncancerous kudoksissa. Mutaatiot silmukointipaikoista pitäisi olla vastuussa korjauksilla E-kadheriinin mRNA: t, vaikka mitään mutaatioita löydettiin DNA-tasolla tässä tutkimuksessa, oletettavasti koska SSCP käyttää mutaation seulontaan on alhainen tehokkuus. Ylimääräinen 2 poistot osoitti keskeytyskohtia ei-silmukointipaikoista, joiden liittämiseen ei vastaa "GU-AG" sääntö, mahdollisesti osoittaa, että uudelleenjärjestely perimän tasolla voi aiheuttaa poikkeavaa mRNA: t. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet eksonin 8 tai 9 mahasyövän [24, 33]. Näitä poikkeamia voivat johtaa E-kadheriineja menettää kalsiuminsitomisominaisuudet motiivien puutteen vuoksi eksonien 8 ja 9, ja katkaistun molekyylit takia lukukehysmutaatioita aiheuttamat lisäykset ja poistot, lopulta helpottaa sironta masoluja.
Vähentynyt ilmentyminen E- kadheriinin ja β-kateniinin on havaittu joidenkin syöpien, kuten mahasyövän [8]. Heterogeenisissä tai epävakaa ilmaisua sekä E-kadheriinin ja β-kateniinin poikki kasvaimia todettiin. On osoitettu, että 40% adenokarsinoomien E-kadheriinin tasot on esitetty niiden suonensisäisen kasvaimen komponenttien verrattuna niiden ekstravaskulaaritilan [34]. Yksi selitys voi olla, että sisäänkäynnin kohdunkaulan osaksi suonensisäisestä liittyy säätelyyn ylöspäin E-kadheriinin ilmentymisen, ja että myöhemmät poistu osaksi ekstravaskulaarisiin kudoksiin liittyy downregulation [35]. Koska E-kadheriinin ja β-kateniinin ovat kriittisiä komponentteja muodostamiseksi solu-solu-adheesion monimutkainen, menetys voivat johtaa häiriöitä toiminnan monimutkainen, mikä voi aiheuttaa heikkoa solu-solu-adheesion ja antaa invasiivisia ominaisuuksia kasvaimen . Lisäksi vähensi solu-soluadheesion liittyy kontakti-inhibition menetys proliferaation, jolloin paeta kasvusta ohjaussignaalia lopuksi liipaisu karsinogeneesi ihmisen syövän [8]. Tässä tutkimuksessa välisen assosiaation epänormaali ilmentyminen E-kadheriinin ja β-kateniinin havaittiin, mikä viittaa siihen, että menetys E-kadheriinin sitoutuminen voi aiheuttaa uudelleenjako β-kateniinin solukalvon sytoplasmaan. Lisääntynyt vapaa β-kateniinin sytoplasmaan voi siirtyvät tumaan ja johtaa geeniekspression aktivaation. Tätä tukevat havainnot, että kaksi tapausta (676 ja 738) osoittivat negatiivista värjäytymistä sisäpinnalla kalvo ja positiivista värjäytymistä sytoplasmassa, samanaikaisesti. Mutta muut 9 kasvaimia (taulukko 1) osoittavat kohtalaista tai voimakasta värjäytymistä kalvoon myös näytteillä positiivista värjäytymistä sytoplasmassa, mikä viittaa siihen, että normaali hajoaminen vapaan β-kateniinin solulimassa estyy. Lisäksi löysimme yhdistyksen välillä epänormaali ilmentyminen E-kadheriinin ja hajanainen histotype, mikä osoittaa, että korjauksilla E-kadheriinin voi olla rooli huonosti eriytetty mahalaukun kasvaimet. Mielenkiintoista, poikkeava ilmentyminen E-kadheriinin ja /tai catenins on osoitettu olevan riippumaton prognostinen markkeri lyhyen selviytymisen mahasyöpäpotilaista [8]. Erityisen kiinnostava on havainto, että E-kadheriinin on itsenäinen ennustaja okkultismin imusolmuke ja mikrometastaasin solmuissa luokiteltu No rutiinien histopatologisten menetelmillä [8].
Johtopäätökset
Tuloksemme että korjauksilla E-kadheriinin ja β-kateniinin osansa aloittamisen ja etenemisessä mahasyövän. Molempien geenien ilmentymistä vähennetään mahasyövän, mutta mekanismi downregulation ei ole selvä. Loh, mutaatiot ja muutokset Silmukointi voisi selittää osan downregulation E-kadheriinin mahasyövän.
Julistukset
Kiitokset
Tätä työtä tukivat Islannin Research Council, University of Iceland Science Fund ja Islannin Cancer Society.
Kilpailevat edut
yhtään julistettu

• A case-control tutkimus vaikutuksesta apolipoproteiini E genotyypit mahalaukun syövän riskiä ja etenemisen
• Tukivektorikone malli diagnosointiin imusolmuke etäpesäke mahasyövän kanssa multidetector tietokonetomografia: alustava tutkimus