Stomach Health > Vatsa terveys >  > Stomach Knowledges > tutkimukset

Differential geeniekspressiota hiiren mahan silmänpohjan puuttuu interstitiaalinen solujen Cajal

Differential geeniekspressiota hiiren mahan silmänpohjan puuttuu interstitiaalinen solujen Cajal
tiivistelmä
tausta
Lihaksen kerrokset hiiren mahan silmänpohjan ole interstitiaalinen solujen Cajal tasolla on myenteeri- plexus ja vain niillä lihakseen interstitiaalinen soluja ja tämä kudos ei synny sähköinen hidas aaltoja. Puuttuminen lihakseen interstitiaalinen solujen W /W
V
mutantteja tarjoaa ainutlaatuisen mahdollisuuden tutkia muutoksia molekyylitasolla, jotka liittyvät menetys näiden interkalatoivia solujen.
Menetelmä
geeni mentymisprofiili mahalaukun silmänpohjan villityyppisen ja W /W
V
hiiriä testattiin hiiren mikrosiruanalyysillä näyttämällä yhteensä 8734 elementtejä. Tiedustella geenien microarray-analyysi varmistettiin semikvantitatiivinen käänteistranskriptio-polymeraasiketjureaktiolla.
Tulokset
Kaksikymmentäyksi geenit ilmentyvät differentiaalisesti villityypin ja W /W
V
hiirillä. Yksitoista selostukset oli 2,0-2,5 kertaa suurempi mRNA ilmaisun W /W
V
mahan silmänpohjan verrattuna villityypin kudoksiin. Kymmenen selostukset oli 2,1-3,9 kertaa pienempi ilmentyminen W /W
V
mutantteja verrattuna villityypin eläimiin. Mikään näistä geeneistä on koskaan ollut mukana missään suolen motiliteetin toiminto.
Johtopäätökset
Nämä tiedot on todistettava, että useat tärkeät geenit ovat muuttuneet huomattavasti hiiren silmänpohjan W /W
V
mutantteja, joista puuttuu lihakseen interstitiaalinen solujen Cajal ja ovat vähentäneet enteerisesti moottorin neurotransmissiota.
Tausta
Interstitial solujen Cajal (ICC) ovat ruoansulatuskanavan (GI) sydämentahdistimen soluja ja välittäjien enteerisen moottori neurotransmissiota ruuansulatuskanavassa [1, 2 ]. ICC ilmaista KIT Twitter /c-kit
ja riippuvat signaloinnin kautta geenituote proteiini, KIT, tyrosiinikinaasireseptorin joka on välttämätöntä kehittämiseen ja ylläpitoon ICC fenotyypin [3]. Mutaatiot valkoisen tiputtelua
lokuksen (eli W /W
V
) tulos alentuneeseen KIT ilme. Nämä mutanttieläimissä kehittyä muutaman ICC tasolla on myenteeri- plexus (IC-MY) ohutsuolessa ja alennetun ICC numeroiden liittyy menetykseen hitaan aallon toimintaa. Lihakseen ICC (IC-IM) sijaitsee vatsassa, alempi ruokatorven ja mahaportin sulkijalihakset puuttuvat W /W
V
mutanttieläimissä [4]. Vähentynyt määrä ICC on myös raportoitu useissa GI motiliteettihäiriöitä, kuten krooninen suoliston pseudo-tukos [5, 6], infantiili hypertrofinen mahanportin ahtauma [7-9], hirschsprungin tauti [10-12], hitaasti läpikulun ummetusta ja tietyt gastroparesis [13, 14].
yhdistyksen välillä motiliteettihäiriöissä ja menetys tiettyjen populaatioiden ICC viittaa siihen, että täydellisempi ymmärtäminen molekyyli- ja solubiologian ICC verkostoja ruoansulatuskanavassa voi auttaa ymmärtämään etiologiassa joidenkin GI moottorin sairauksista. Tavoitteena tässä tutkimuksessa oli kuvata geneettisiä sekvenssejä, jotka ilmaistaan ​​ICC mahalaukun jotka voivat koodata merkittäviä toiminnallisia elementtejä GI tahdistimen /moottori neurotransmissiota järjestelmässä. Me nähden oletusta, että tällaiset geenit saattavat näyttää ero ilmentymistä ohutsuolessa villityypin hiirien ja W /W
V
hiirillä [15, 16]. Olemme aiemmin tunnistettu viisitoista tunnettuja ja uusia geenejä, jotka ilmentyvät differentiaalisesti ohutsuolessa villityypin ja W /W
V
hiirillä, jotka kehittävät muutaman IC-MY käyttäen differentiaalista geenien ilmentymistä menetelmällä [17, 18].
esillä olevassa tutkimuksessa olemme arveltu, että voi myös olla ero geenien ilmentymistä mahan silmänpohjan W /W
V
hiiriä, jossa IC-IM menetetään. Meidän geeni microarray-analyysi tunnisti menestyksellisesti 21 geenejä, jotka ilmentyvät differentiaalisesti silmänpohjan W /W
V
hiirillä. Ero ilmentymistä näiden hiirten vahvistettiin semikvantitatiivisella käänteistranskriptio-polymeraasiketjureaktio (RT-PCR).
Menetelmät
Eläimet ja Kudosten valmistelu
käyttö ja hoito Koe-eläinten hyväksyttiin Guideline säätelevät eläinkoe ​​komitea yliopiston Yamanashin School of Medicine ja yliopiston Nevada School of Medicine. Kuusi aikuinen mies WBB6F1 - + /+ hiirillä (villityypin) ja iän täsmäsi kuusi aikuisen WBB6F1-W /W
V
hiiriä, jotka painavat 20-30 g, hankittiin Japan SLC Inc. (Shizuoka , Japani). Ne nukutettiin eetterillä tai hiilidioksidin käytön ja tapettiin taittamalla niskasta. Geenien analyysien mahat poistettiin eläin- ja limakalvon kanssa liitteenä submukoosassa nopeasti teräviä leikeltiin tunica musculariksesta
. Kudokset jälkeen jäädytettiin nestetypessä (-196 ° C). Kudokset säilytettiin -80 ° C: ssa, kunnes eristäminen RNA: ta esimuotoillut [18].
RNA valmistelu ja Microarray Data Analysis
Geeniterapiassa mikrosiruanalyysi, poly (A) + RNA eristettiin kustakin kudoksesta näytteestä TRIZOL ( Life Technologies, Inc., Gaithersburg, MD, USA) ja Poly (A) + eristys Kit Total RNA (ISOGEN, Nippon Gene, Tokio, Japani). 18 Ennen mikrosiruanalyysi, ero geeniekspressiota KIT
välissä mahalaukun fundic kudoksissa villityypin hiirien ja niille W /W
V
mutanttihiirien varmistettiin semikvantitatiivinen RT-PCR (katso kohta semi-kvantitatiivinen RT-PCR
) (Fig. 1A). Mikrosiruja hybridisoitiin ja skannataan, ja kuva-analyysi suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [19, 20]. Lyhyesti, muutokset geenien ilmentyminen arvioitiin käänteisen transkription poly (A) + RNA: iden läsnä ollessa, Cy3 tai Cy5 fluorokromit seuraa hybridisaatio hiiren GEM 1 microarray pelimerkkejä (Incyte Genomics, Inc., Porter Drive Palo Alto, CA, YHDYSVALLAT). Päteväksi määrityksen, kokeet suoritettiin kahtena kappaleena. 8734 cDNA käytimme edustavat 7854 ainutlaatuinen geenejä /UniGene klusterit: 3205, on merkitty ja 4649 ovat annotoimaton sekvenssit. Me annetaan raja-arvon, käyttämällä varianssi analyysi, jotta microarray dia. Geenit, joiden Cy3- ja Cy5-signaali intensiteetit olivat pienemmät kuin raja-arvot jätettiin pois lisätutkimuksia. Balanced ero ilmentyminen määritettiin ohjaus villityypin hiirillä versus W /W
V
mutanttihiirien. Arvot, jotka olivat < -2.0 Tai > 2,0 kummassakin kahdessa riippumattomassa kokeessa pidettiin merkittävinä, ja keskiarvot suhteellisen fluoresenssin suhde kunkin geenin laskettiin. Kuva 1 A. ilmentäminen KIT
geenin avulla semikvantitatiivinen RT-PCR, mahalaukun fundic kudoksissa villityypin ja W /W
V
mutanttihiirien pidettiin paasto
olosuhteissa. GAPDH
tasot mitattiin kontrollina. B. Edustavia kuva DNA-siru hybridisaatio. Muutokset geenien ilmentyminen, jotka edustivat suhdetta fluoresenssin voimakkuus mitataan Cy3 ja Cy5 fluorokromeista. Expression profiilit arvioitiin käänteisen transkription poly (A) + RNA: t mahalaukun fundic lihaksia villityypin ja W /W
V
hiirissä läsnä ollessa Cy3 tai Cy5 fluoresoivia väriaineita seuraa hybridisaatio hiiren GEM 1 mikrosiruja. Kuva näkyy tuotti päällekkäin Cy5-fluoresenssi-kuvasta (pseudo-värinen vihreä, joka edustaa ilmentymistason RNA tunica musculariksesta
W /W
V
silmänpohjan) ja Cy3-fluoresenssi-kuvasta (pseudo punaisia, joka edustaa RNA-ilmentymisen villityypin kudokset). Arrays vastavärjättiin DAPI (sininen). C. vahvistaminen luotettavuuden microarray tietojen semikvantitatiivisella RT-PCR: llä. Edustavia esimerkkejä RT-PCR-analyysi, in fundic kudoksissa kuudesta villityypin ja kuusi W /W
V
mutanttihiirissä ylläpidetään nälkään olosuhteissa. Ilmentymisen CPO
geenin väheni huomattavasti silmänpohjan W /W
V
hiirillä verrattuna iän suhteen sovitetun villityypin hiirissä, kun taas MCM7
geenin osoitti kasvua ilmaisun W /W
V
hiirillä. D. suhteellinen ilmentymistaso CPO
(CPO
/GAPDH
) ja MCM7
(MCM7
/GAPDH
) sisään fundic kudoksissa kuudelta villityypin ja kuusi W /W
V
mutanttihiirien. Tulokset edustavat keskiarvoa (± SD) kuuden eri RT-PCR-kokeita käyttäen kuutta villityypin tai W
/W
V
silmänpohjan RNA malleja.
Puolikvantitatiivinen RT-PCR-
tasot mRNA ilmaus, joka pieneni tai lisääntyi > 2.0-kertainen tai suurempi, vahvistettiin semikvantitatiivinen RT-PCR silmänpohjan 6 kunkin villityypin hiirissä ja W /W
V
hiirillä. RT-PCR suoritettiin, kuten aikaisemmin on kuvattu [18]. Lyhyesti, 2 ug eriä kokonais-RNA: iden käsiteltiin DNaasi I (Roche Diagnostics, Basel, Sveitsi) hiiristä fundic kudoksia käytettiin syntetisoimaan yhden juosteen cDNA. Näitä cDNA: ita käytettiin templaatteina PCR: lämpösyklilaitteessa (PerkinElmer, Shelton, CT, USA), käyttämällä alukkeita, jotka on lueteltu taulukossa 1 tai KIT
(5'-ATG ACG TCA TGA AGA CTT GCT-3 'ja 5' -CTA CCC TGG AAT AGG ATG CA-3 '), ja GAPDH
spesifistä aluketta sarjaa (5'-GACAACAGCCTCAAGATCATCA-3' ja 5'-GGTCCACCACTGACACTGTG-3 '). Expression of GAPDH
toimi sisäisenä kontrollina. Alukkeet olivat peräisin eri eksonien saman geenin, kun vastaava hiiren genominen sekvenssi oli tuolloin saatavilla. PCR-reaktiot optimoitu jaksojen määrä varmistaa tuotteen voimakkuus sisällä lineaarinen vaiheessa amplification.Table 1 Primer sarjaa käytetään semikvantitatiivisella RT-PCR.
Gene Name
hakunumero
Forward Primer

Reverse Primer
EST
AA185701
CGA AAG CCT TGA GGT TGA AG
TAG GAA AAC AGG CGT CAC TG
EST
AA166336
GAA GAA AAG GCT GCA GAT CG
CAA GAG GCA AAG AGC AAT CC
EST
AA021806
CAC GAA TTG CAG GAC TAC CT
ACC TGC ACT GTA GGC TGA GT
MCM7
Q61881
GCC CAC TGG ATT GTG AAG Ladbrokes.comissa AGG AGA CTG GTC CAC ACC AC
P160 ROCK2

U58513
AAG AAC CTG TCA AGC GTG GT
TCC AGG GTC ATC TGG AGT TC
EST
W18585
AGA CTT GGT GGC AGA GGA GA
GCA GCT CAT GAC AGA ACA CC
EST
AA403748
CCT AAA GCA ACC CAA CCT GA
TAG CCT TAT GGG ACC TGG TG
BST1 /PP3
Q64277
GAT TTC TTG AGC TGG TGT CG
AAA ACC CTC TCG TGG GAT AG
EST
AA024250
CAG ATA GAG CAA GGG ATG GA
CTG AGC CCA AAC CAG TAG AA
RBP2

Q08652
GAC GAA GGA CCA AAA TGG AA
CGG TGA AAT CCA GGT CGT AG
EST
W46016
AGC AAC AAC AGC TGG ACT TC
ACC TTC TGT TTG GTG CTG AG
BP1 /6C3
S30398
TAT CGG CCT CAT CTA ACC AG
ATC TTC AAG CAG CAC CTG AC
EST
AI552444
CAT GCG ATA CTG GAA CAT GA
TGA CTC CAA ATA GCC CTC AG
EST
AA108876
TGG AGC AAG AGA GGA AAG TG
CTA GAC CTG AGC TTG CCT TG
EST
AA049294
ACG TGG AGA AAG TTC TCG TG
GCA ATA GTG TCA CCG AAT CC
EST
AA254777
GCC CTG GAG TTG AGA CTG TA
TGA CAA GCT GCA CAG TAA CC
RHAMM
AF031932 GCA GAA GGA GGA GCA GAG TG
GCA GTG ACG TCC CTC AGA CT
EST
AA002293
AAG TCT TTG TGT GGG CTG AG
AGG AAG CTT CGT CTC TCC Ladbrokes.comissa EST
AI595081
CAC CAG GAT GTC TGC CTA CT
CCG AGA TCA TGT TCT TCA CC
CPO
D16333
GAA GAC CAA GAT GGA GCT GA
CAG AAA GAT TCC CAT GAA CG
EST
AA000304
TTC ATC TGC TGC TCC TTC TC
TTA TAG ACC TTC CCG CAC AG
tulokset
Microarray Analysis ja Semi -quantitative RT-PCR
tunnistamiseksi geenejä, jotka voidaan valikoivasti liittyy IC-IM, vertasimme geeniekspressiomalleja mahalaukun fundic kudoksissa, jotka ovat peräisin villityypin ja W /W
V
hiirillä käyttämällä geeni microarray menetelmän [19, 20]. Hiiren silmänpohjan ilman epiteelikudoksista peräisin villityypin ja W /W
V
hiiriä pidettiin paasto
olosuhteita käytettiin tuottamaan poly (A) + mRNA: n mikrosiruanalyysi hiirellä GEM 1 microarray . Tämän kokeen tulokset, korostetaan geenejä, jotka toistettavasti pieneni tai lisääntyi > 2,0-kertainen tai suurempi, on esitetty taulukossa 2 ja kuviossa. 1B. Useat tunnetut ja uudet geenit ilmentyvät differentiaalisesti silmänpohjan W /W
V
hiiriä (> 2,0 tasapainotettu differentiaalikaavojen). Vahvista ero ekspressioprofiileja, me tutki vielä ekspressiotasot hiiren fundic mRNA peräisin luonnosta tyyppejä ja W /W
V
hiiriä pidettiin paasto
olosuhteissa malleina käyttäen semikvantitatiivinen RT-PCR-analyysi (edustaja tietoja kuviossa. 1C, 1D. Kaikki alukesarjat käytetään vahvistusta oli lueteltu taulukossa 1). Expression kymmenen geenien väheni huomattavasti mahan silmänpohjan W /W
V
hiirillä verrattuna iän Hyväksytty villityypin hiirillä. Toinen yksitoista geenit osoitti kasvua ilmaisun paastonneet W /W
V
mice.Table 2 analyysi geenien ilmentymisen silmänpohjan villityypin ja W /W
V
hiiriä
Gene Name
W /W
V Twitter /villityypin suhde (a)
Accession No.
Subsellulaariset sijainti (b)
Cytoband (c)
EST
2,5
AA185701
EST
2,5
AA166336
EST
2.4
AA021806
MCM7
: DNA Replication Licensing Factor
2,4
Q61881
nucleus
7q21.3-q22.1
P160 ROCK2
: Rho-Associated Protein Kinase
2.3
U58513
tukirankansa
2p24
EST
2.3
W18585
EST
2.3
AA403748
BST1 /PP3
: ADP-ribosyl syklaasiin 2 esiasteet
2,0
Q64277
kalvo
4p15
EST
2,0
AA024250
RBP2
: retinolia sitova proteiini 2, solu
2,0
Q08652
solulimassa
3q23
EST
2,0
W46016
BP1 /6C3
: glutamyyli Aminopeptitase
- 2.1
S30398
kalvo
16
EST
-2,2
AI552444
EST
-2,3
AA108876
EST
-2,4
AA049294
EST
-2,4
AA254777
RHAMM
: Hyaluronaani välittämä Liikkuvuus Receptor
-2,5
AF031932
kalvo
5q33.2-qter
EST
-2,5
AA002293
EST
-3,4
AI595081
CPO
: Coproporphyrinogen Oksidaasipositiivinen
-3,6
D16333
mitokondrioita
3q12
EST
-3,9
AA000304
(a) Balanced differentiaalikaavojen valvontaa villityypin hiiriin vs W /W
V
mutanttihiirien. Arvot, jotka pienenivät tai kasvoi > 2-kertainen tai suurempi sekä kahdessa riippumattomassa kokeessa pidettiin merkittävinä, ja keskiarvot laskettiin. Kaikki tulokset vahvistettiin semi-kvantitatiivinen RT-PCR: llä käyttäen fundic kudoksia kuudesta villityypin ja kuusi W /W
V
mutanttihiirien. (B) Subsellulaariset sijainti määräytyy lähdeohjelma http: //lähde. Stanford. Edu. (C) Ihmisen kromosomaalinen sijainti geenin.
Keskustelu
vertailu eri tavalla ekspressoituneiden geenien silmänpohjan W /W
V
hiiriin käyttäen DNA-siru-analyysi osoitti, että ekspressio yksitoista geenit selostukset olivat merkittävästi säädellään ylöspäin W /W
V
hiiriä, kun taas kymmenen geenit transkriptit dramaattisesti tukahdutettiin näillä eläimillä. Olemme vahvistivat nämä tulokset semi-kvantitatiivinen RT-PCR kudosten kuudesta kunkin villityypin ja W /W
V
hiirillä. Saadut tiedot näistä kokeista viittaavat siihen, että geenien ilmentymistä varta säännelty W /W
V
hiirillä.
Yksitoista geenit, jotka olivat säädellään ylöspäin mahalaukun silmänpohjan W /W
V
hiiret tunnistettiin MCM7
, P160 ROCK2
, BST1 /PP3
, RBP2
, ja toinen seitsemän annotoimaton selostukset. MCM7 on nisäkkään homologi hiivan tumaproteiini MCM2 /CDC47, jonka uskotaan olevan tärkeä rooli kahdessa ratkaisevaa vaihetta solusyklin, nimittäin DNA-replikaation alkua ja solunjakautumisen [21, 22]. P160 ROCK2, joka on isotsyymi ROCK1 on tavoite pieni GTPaasi Rho [23]. ROCK2 on seriini /treoniini-kinaasi, joka säätelee sytokineesi, sileän lihaksen supistuminen, muodostumista aktiinin rasitukseen liittyviä säikeitä ja paikallisia tarttumista, ja aktivointi FOS seerumin vaste-elementin [24]. Ylös-sääntely P160 ROCK2 voi olla korvaava vaikutus menetyksestä ICC-riippuvainen mekanismeja mahalaukun silmänpohjan. BST1 /PP3, eli luuydinperuskudos- solun pinta-antigeeni, on vaihtelevasti glykosyloitu glukosylfosfatidyl-inositoli (GPI) linkatun molekyyli, joka ilmentyy selektiivisesti varhaisen B- ja T-sukuperää solujen ja diskreetti alapopulaatio reticular solut perifeerisen imukudoselimissä. Se ilmentyy myös harjareunusten suolen epiteelisolujen luminaalipinnalla munuaisten kerätä tubulukset ja kypsiä ydinsoluissa [25]. Tämä proteiini on tarkoitus kuulua ADP-ribosyyli cyclase perheen [26]. Cellular RBP2 on runsas 134-tähteen proteiinin läsnä ohutsuolen epiteelin [27]. On ajateltu osallistumaan sisäänoton ja /tai solunsisäistä metaboliaa A-vitamiinin ja kuuluvat proteiinin perheen, joka sisältää maksan rasvahappoja sitova proteiini. A-vitamiini on rasvaliukoinen vitamiini välttämätöntä kasvun, lisääntymisen, erilaistumisen epiteelikudosten, ja visio. Nisäkkäät ovat riippuvaisia ​​imeytymistä suolistosta tämän vitamiinin niiden säilymistä. RBP2, joka rajoittuu pääasiassa ohutsuolen suoliston, todennäköisesti tärkeä rooli imeytymistä suolistosta ja /tai aineenvaihduntaan vitamiinin [27].
Myös vahvisti säätely alaspäin kymmenen geenien W /W
V
hiiret: BP1 /6C3
, RHAMM
, CPO
, ja toinen seitsemän annotoimaton EST. Hiiren β-lymfosyyttien erilaistuminen antigeeni, BP1 /6C3 karakterisoitiin glutamyyli aminopeptidaasi, joka on raportoitu toimivat solun erilaistumisen merkkiaine lymphomyelocytic suvusta, ja voivat olla mukana solujen aktivaation, signaalitransduktion, ja solu-matriisi adheesio. Se ilmaistaan ​​myös hiussuonten endoteelisolut, istukka, ja epiteelisolujen suolistossa ja proksimaalinen munuaistiehyiden [28]. RHAMM
koodaa hyaluronaania reseptoriproteiinin [29]. Kun hyaluronaani sitoutuu RHAMM, fosforylaatiota useiden proteiinien, mukaan lukien fokaalisen adheesion kinaasi pp125-FAK tapahtuu [30]. Tämä on välttämätön askel purkamista paikallisissa kontakteissa ja myöhemmät liikkuvuutta. CPO on kuudes entsyymiä hemin biosynteesitien. Tämä liukoinen proteiini on lokalisoitu intermembrane tilaan mitokondrioiden ja katalysoi kaksi propionaatti asemissa kaksi ja neljä coproporphyrinogen III kaksi vinyyli- ryhmää protoporfirinogeenioksadaasi IX [31]. Kerrottiin, että coproporphyria (CPO puutos) potilaista havaittiin ummetus ja epänormaalia koliikki, jotka ovat tärkeimmät oireet tämä tauti [32]. Merkitty korkeus coproporphyria ulosteissa eriytetty kunnon Ruotsin tyyppiä, jossa ulosteesta porfyriinit ovat yleensä normaalit ja variegate porfyria, jossa sekä koproporfyriini ja protoporfirinogeenioksadaasi jakeet lisääntyneet ulosteesta [33].
Vuonna 21 geenit tunnistettu, määritimme solunosasijaintia ja ihmisen kromosomi kartoitus 7 tunnettuja geenejä käyttäen sOURCE ohjelma http: //lähde. Stanford. edu (taulukko 2). Nämä geenit osoittivat erilaisia ​​solusijaintipaikan lukien 3 kalvo, 2 sytoplasminen, 1 mitokondrioiden ja 1 tumaproteiinien. Lisäanalyysit näiden geenien voisi auttaa meitä valaista paitsi heidän suhteensa KIT, tyrosiinikinaasireseptorin, mutta myös molekyylitason näkökohtia GI tahdistimen järjestelmän.
Olemme aiemmin tunnistettu viisitoista geenejä, jotka ilmentyvät differentiaalisesti ohutsuolessa villityypin ja W /W
V
hiiriä, jotka kehittävät harvat IC-MY käyttäen ero geenien ilmentyminen menetelmällä [17, 18]. ™ @ Mitään näistä 15 geenien havaittiin luettelosta 21 geenien jotka ilmentyvät differentiaalisesti mahalaukun silmänpohjan villityypin ja W /W
V
hiirillä, jotka kehittävät muutaman IC-IM käyttäen cDNA microarray. Kuten olemme vahvistaneet ero geenin ilmentymistä KIT
välillä ohutsuoleen /mahalaukun fundic kudoksissa villityypin ja niille W /W
V
mutanttihiirien semi-kvantitatiivinen RT-PCR, meidän kokeellinen järjestelmä voisi havaita geneettinen poikkeavuus W /W
V
hiirillä. Siksi meidän tulokset voivat heijastaa eroa matkapuhelinverkon kokonaisuuden kahdentyyppisiä lisähintaa, IC-MY ja IC-IM, tai erotuksen solukoostumuksesta välillä ohutsuolessa ja silmänpohjan. Toimittamaan ratkaisevia todisteita, jotka tukevat näitä spekulaatioita, mentymisprofiili käyttämällä puhdistettua mRNA eristetyt yksittäiset interstitiaalinen solut voivat olla erittäin hyödyllisiä seuraavassa tutkimuksessa.
Tällä hetkellä emme tiedä, ovatko nämä geenit ovat tärkeitä toiminta mahalaukun sydämentahdistin /neurotransmission laitetta tai olivat alaspäin tai ylöspäin säädelty seurauksena menetys ICC. Nämä tiedot kuitenkin antamaan selkeitä systeeminen geneettisiä todisteita siitä, että useita tärkeitä proteiineja, joilla rooleja solusyklin, sytokineesin ja muodostuminen solun tukirangan, solujen aineenvaihduntaan happi aineenvaihduntaa, soluadheesiota, ja kehitystä ja erilaistumista suoliston soluja muuttuneet huomattavasti mahan silmänpohjan W /W
V
hiirillä. Sukupolven siirtogeenisiä eläimiä, jotka osoittavat kudosspesifisten yliekspressio kandidaattigeenien, samoin kuin geenin tyrmäyseläinten voivat olla hyödyllisiä selvittämiseksi rooli kunkin geenin ruoansulatuskanavan motiliteettia.
Löytö koko ihmisen ja hiiren geenien kautta Genome Project on tarkoitus mullistaa biologisten lääke kuten molekyyli- diagnoosi erilaisten sairauksien ja kehittää uusia hoitoon. Tiedot yhdistettynä suurikapasiteettisten teknologian kuten DNA-siru ja SNP kirjoittamalla analyysi nopeuttaa löytö geenien alttiita tai aiheuttaa erilaisia ​​sairauksia ja edistää seulontaan uusia lääkkeitä, jotka kohdistuvat näihin tauti-geenin tuotteita. Tässä mielessä vaivaa molekyylitason profiloinnin hanke, jossa yritämme löytää geneettinen poikkeavuus eläintauti malleja, kuten W /W
V
hiiret tuottavat hyvin vaihteleva resursseja edelleen selvittämiseen motiliteettihäiriöissä . Koska alennettu määrä ICC on myös raportoitu useissa GI motiliteettihäiriöitä, kuten krooninen suoliston pseudo-tukos [5, 6], hitaasti läpikulun ummetusta ja tietynlaista gastroparesis [13, 14], nämä geeni tiedot pitäisi tukea kehitystä uusien molekyyli- kohdistettujen hoitojen näiden häiriöiden, ja se voi myös tunnistaa diagnostisia molekyylimarkkereita näiden häiriöiden.
Johtopäätös
Olemme tunnistaneet kaksikymmentäyksi geenejä, jotka koodaavat funktionaalisia proteiineja, jotka ovat merkittävästi ylös- tai alaspäin säännellään tunica muscularis
mahalaukun silmänpohjan W /W
V
hiirillä. Ottaen huomioon, että mikään näistä geeneistä on liitetty miltään osin GI liikkuvuutta, suosittelemme, että monet tuntemattomat geenit voivat olla mukana solumuutoksia, jotka johtavat motiliteettihäiriöissä liittyy menetys ICC. Gene microarray-analyysi on tehokas menetelmä seulomiseksi muutoksia, jotka tapahtuvat ilmentymiskuviot geenien vastauksena spontaani tai geneettisiä mutaatioita, jotka johtavat menetykseen tietyn solutyypin. Tätä menetelmää voi sallia tunnustamista malleja geenien ilmentymisen, jotka ovat yhteisiä useita motiliteettihäiriöissä jossa ICC menetetään, mikä tarjoaa uusia oivalluksia molekyylitason mekanismeja vastuussa selektiivisen menetyksen ICC populaatioiden.
Huomautuksia
Yataro Daigo, Ichiro Takayama vaikuttanut yhtä tähän työhön.
lyhenteet
BP1 /6C3:
glutamyyli aminopeptidaasi
BST1 /PP3:
luuydinperuskudos- antigeeni 1 (alias ADP-ribosylcyclase 2 esiaste)
CPO:
coproporphyrinogen oksidaasi
DMP:
syvä lihaksikas plexus
EST:
ilmenevän geenin osiksi
FISH:
fluoresenssi in situ
-hybridisaatio

GI:
ruoansulatuskanavan
ICC:
interstitiaalinen solujen Cajal
IC- DMP:
ICC tasolla syvän lihasten plexus
IC-IM:
lihakseen ICC
IC-MY :
ICC tasolla on myenteeri- plexus
MCM7:
minikro- huolto 7
MY:
myenteeri- plexus
P160 ROCK2:
P160 Rho-liittyvä, kiertynyt muodostavan käämin proteiinikinaasi 2
RBP2:
retinolia sitova proteiini 2, solu
RHAMM:
hyaluronaani välittämä motiliteettia reseptorin
RT-PCR:
käänteistranskriptio-polymeraasiketjureaktio reaktio
SNP:
yhden emäksen monimuotoisuus
julistukset
Kiitokset
tukemana 08457165 (MF) saapuneen Japanin valtiovarainministeriön Koulutus, tiede, urheilu ja kulttuuri, JAPAN ja DK 57236 (SW) ja PO1 DK41315 (SW ja KS) National Institutes of Health, USA.
Kirjoittajien alkuperäinen toimitti asiakirjat kuville
Alta linkit kirjoittajien alkuperäiset toimitti asiakirjat kuville. 12876_2002_51_MOESM1_ESM.ppt Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 1 Kilpailevat edut
yhtään ilmoitettu.

Other Languages