Stomach Health > Estomac Santé >  > Gastric Cancer > Cancer de l'estomac

PLOS ONE: Augmentation microARN-630 expression dans le cancer gastrique est associé à l'ensemble pauvre Survival

Résumé

Les microARN sont non codantes ARN qui régulent plusieurs processus cellulaires au cours de la progression du cancer. Parmi les divers microARN, miR-630 a récemment été identifié pour être impliqué dans de nombreux processus critiques dans les tumeurs malignes humaines. Nous avons cherché à enquêter sur l'importance et la valeur pronostique de miR-630 dans le cancer gastrique humain. Le cancer gastrique et des échantillons normaux adjacents de 236 patients de qui n'a pas reçu une chimiothérapie néoadjuvante ont été recueillies. L'expression de miR-630 a été étudiée par une analyse quantitative PCR en temps réel et son association avec la survie globale des patients a été analysée par une analyse statistique. niveau d'expression miR-630 a été significativement plus élevée dans le cancer gastrique par rapport à des échantillons normaux adjacents. Il est également prouvé que l'expression de miR-630 devait être associé à l'invasion gastrique du cancer, métastase ganglionnaire, métastases à distance et le stade TNM. En outre, l'analyse de survie a prouvé que l'expression élevée miR-630 a été associé à la survie globale des patients pauvres. analyse de survie multivariée a également prouvé que miR-630 était un marqueur pronostique indépendant après ajusté pour les facteurs pronostiques connus. La présente étude a démontré la surexpression de miR-630 et son association avec la progression tumorale dans le cancer gastrique humain. Il a également fourni la première preuve que l'expression de miR-630 était un facteur pronostique indépendant pour les patients atteints de cancer gastrique, ce qui pourrait être un biomarqueur utile potentiel de cancer gastrique

Citation:. Chu D, Zhao Z, Li Y, Li J., Zheng J, Wang W, et al. (2014) Augmentation Expression microARN-630 dans le cancer gastrique est associé à une mauvaise survie globale. PLoS ONE 9 (3): e90526. doi: 10.1371 /journal.pone.0090526

Editeur: Alfons Navarro, Université de Barcelone, Espagne

Reçu le 14 Septembre 2013; Accepté 3 Février 2014; Publié: 12 Mars, 2014

Droit d'auteur: © 2014 Chu et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités

Financement:. Ce travail a été soutenue par des subventions de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (n ° 81201927, 81272204 et 31270812) et la Chine science Foundation postdoctorale (n ° 2012M521862). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

le cancer gastrique est l'une des maladies malignes les plus courantes dans le monde [1]. Le pronostic du cancer gastrique est pauvre et les patients sont généralement diagnostiqué à un stade assez avancé dans la plupart des pays [2], [3]. Ainsi, le taux global de survie à cinq ans est d'environ 40%, et celui des patients atteints de métastases à distance est inférieure à 5% [4] - [8]. Environ 700.000 patients atteints de cancer gastrique meurent chaque année, ce qui en fait la deuxième cause la plus fréquente de décès liés au cancer dans le monde entier. Les données ont montré que le taux brut de mortalité du cancer gastrique était de 25,2 pour 100 000 (32,8 pour 100 000 chez les hommes et de 17,0 pour 100 000 chez les femmes) [1]. Mais il existe une variation géographique remarquable de l'incidence du cancer gastrique pour les pays de l'Est tels que la Chine et le Japon ont les plus forts taux de cancer de l'estomac que les pays occidentaux [9], [10]. En Chine, le cancer gastrique est le deuxième cancer le plus fréquemment diagnostiqué et la troisième principale cause de décès par cancer, avec environ 464 439 nouveaux cas et 352 315 décès par cancer en 2008. Le taux global estimé ajusté selon l'âge incidence en 2008 était de 29,9 pour 100 000 personnes en Chine [9]. Ainsi, le cancer gastrique reste un problème important dans le monde en dépit d'une diminution de l'incidence non seulement dans les pays occidentaux, mais aussi la Chine.

Les microARN (miARN) sont une classe de très conservées, de petites molécules d'ARN non codantes simple brin, qui sont connu en tant que régulateurs endogènes de l'expression génique post-transcriptionnelle régulation de l'expression par le biais de la répression traductionnelle et de l'ARN messager clivage [11]. Ils peuvent inhiber l'expression génique au niveau post-transcriptionnel par liaison à la région non traduite en 3 'des ARNm cibles peuvent entraîner une dégradation de l'ARNm ou de l'inhibition de la traduction, en fonction du degré d'appariement de bases complémentaires [12], [13]. Il est largement admis que les miARN jouent un rôle essentiel dans différents processus biologiques, y compris le développement, la prolifération cellulaire, la différenciation, l'apoptose et le métabolisme [14]. L'expérience accumulée suggère également que les miARN participent à l'angiogenèse tumorale, l'invasion et les métastases d'une tumeur maligne humaine [15]. expression de miRNA Aberrant a été associée à l'oncogenèse, et certains miARN agir comme suppresseurs de tumeurs, tandis que d'autres oncogènes, en fonction de leurs objectifs, ce qui peut donner un aperçu sur le diagnostic et le pronostic des tumeurs malignes humaines [16]. Récemment, des preuves ont montré que l'expression de miARN est dérégulée dans divers types de tumeurs malignes humaines telles que le cancer gastrique, le cancer du sein, le cancer colorectal, le cancer de la prostate, le cancer du poumon, le cancer du pancréas et la leucémie lymphocytaire chronique [17] - [19]. Dans le cancer gastrique humain, plusieurs miARN avec expression aberrante ont été identifiés, par exemple, miR-21, miR-22, miR-23, miR-127, miR-148, miR-202 et miR-433, qui a joué oncogénique ou suppressive rôle [20] - [25]. Ces résultats indiquent que les miARN peuvent jouer des rôles divers et cruciaux dans les tumeurs malignes humaines, y compris le cancer gastrique. Cependant, le profil d'expression des miARN est très tissu et le type spécifique de cancer et miRNA spécifique, démontrant ainsi l'importance fonctionnelle et clinique d'un miRNA spécifique peut fournir des indications cliniquement pertinentes en fonction des miARN et la gestion du cancer efficace [12], [15]. À notre connaissance, jusqu'à maintenant, la signification clinique et pronostique de l'expression de miR-630 dans le cancer gastrique n'a pas encore été signalé.

Dans la présente étude, nous avons étudié le niveau de miR-630 expression dans gastrique clinique spécimens et les tissus normaux adjacents, ainsi que l'analyse de son association avec la survie globale des patients.

Matériel et méthodes

patients et Specimens

la présente étude a été approuvée par le Comité d'éthique de la quatrième université médicale militaire. Tous les membres concernés ont donné leur consentement écrit éclairé. échantillons cliniques frais gastriques de cancer et les tissus normaux adjacents ont été recueillies à partir de 236 patients ayant subi une chirurgie entre Janvier 2007 et Décembre 2008 à l'hôpital Xijing de maladies digestives, quatrième université médicale militaire. Aucun de ces patients avaient reçu une chimiothérapie avant la chirurgie. En outre, des échantillons de tissus normaux ont été prélevés sur 18 patients ayant subi une chirurgie pour des raisons autres que la malignité comme échantillons témoins normaux. Le histomorphologie de tous les échantillons de tissus ont été confirmés par le Département de pathologie, quatrième université médicale militaire. Les spécimens ont été immédiatement mis en liquide N 2 après résection chirurgicale pendant 10 minutes, puis dans un -70 ° C ultra-congélateur pour l'isolement de l'ARNm. information clinique des patients, tels que l'âge, le sexe, le statut de différenciation et le stade TNM, a été recueilli et stocké dans une base de données. Suivi complet a été mis à la disposition d'au moins 5 ans. La survie globale est définie comme étant le temps écoulé depuis la chirurgie à la mort des patients atteints d'un cancer gastrique. Les données de suivi de tous les participants a été mis à jour tous les trois mois par visite de téléphone et questionnaire lettres. Décès de participants a été constatée par rapport à la famille et vérifié par l'examen des dossiers publics.

quantitative en temps réel
PCR

ARN total a été purifié à partir de la totalité du cancer gastrique 236 et correspondant à des échantillons normaux adjacents par le fabricant en utilisant le réactif Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Seuls les échantillons d'ARN total avec la DO A260 /ratio proche de la valeur de A280 de 2,0, ce qui indique que l'ARN est pur, ont été analysés par la suite. Le contrôle interne ADNc spécifique miR-630 et RNU44 ont été synthétisés à partir de l'ARN total en utilisant des amorces spécifiques du gène selon le protocole des essais TaqMan microARN (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Les produits de transcription inverse ont ensuite été amplifiés et détectés par PCR en temps réel en utilisant Taqman microARN Assay (Applied Biosystems) spécifique pour hsa-miR-630. Chaque échantillon a été examiné en triple exemplaire et les données brutes ont été présentés comme la quantification relative d'expression miR-630 évaluée par la méthode, normalisée par rapport à RNU44 seuil comparative de cycle (CT). normalisé miR-630 expression moyenne ± écart-type (SD) a été calculée à partir de l'analyse triplicate. PCR en temps réel a été réalisée en utilisant un système ABI 7500 (Applied Biosystems) et comparatif 2 -ΔΔCt analyse a été réalisée en utilisant SDS 2.2.2 logiciel (Applied Biosystems).

Analyse statistique

les associations entre les caractéristiques d'expression et clinico miR-630 ont été analysés par Mann-Whitney de test et test de Kruskal-Wallis, le cas échéant. Les courbes de survie ont été estimées en utilisant la méthode de Kaplan-Meier et les différences dans les distributions de survie ont été évalués par le test du log-rank. risques proportionnels de Cox modélisation des facteurs potentiellement liés à la survie a été réalisée afin d'identifier les facteurs qui pourraient avoir une influence significative sur la survie et de l'âge, le sexe et le statut de différenciation. Différences avec P
valeur de 0,05 ou moins ont été considérées comme statistiquement significatives.

Résultats

miR-630 Expression Détecté dans le cancer gastrique

le test de PCR en temps réel, 236 cas de cancer de l'estomac, correspondant à des échantillons normaux adjacents et 18 cas de spécimens témoins normaux ont été étudiés. l'expression relative de miR-630 normalisé à RNU44 dans le cancer gastrique a été jugée 8,51 ± 1,63 (moyenne ± écart-type), tandis qu'en correspondance adjacente à la normale était de 3,25 ± 0,63. Les résultats statistiques ont montré que l'expression de miR-630 dans le cancer gastrique était significativement plus élevé que dans des échantillons témoins normaux adjacents et ( P
< 0,05). Ces résultats indiquent que miR-630 pourrait jouer un rôle oncogène dans le cancer gastrique. Pour faciliter une analyse plus approfondie sur l'association entre miR-630 expression et les caractéristiques cliniques, nous avons défini manuellement le cancer gastrique avec miR-630 expression inférieure à 3,88 (moyenne + expression SD de miR-630 dans des échantillons adjacents) aussi bas miR-630 groupe d'expression tout en spécimens avec l'expression de miR-630 non inférieure à 3,88 ont été définis comme haut groupe d'expression miR-630. Ainsi, parmi 236 cas de cancer de l'estomac, 98 cas ont été assignés à faible groupe d'expression alors que 138 cas ont été affectés au groupe d'expression élevé.

Relation de miR-630 à Caractéristiques clinicopathologiques de cancer gastrique

comme notre enquête a montré que l'expression de miR-630 a été augmenté dans le cancer gastrique, ce qui indique que miR-630 pourrait agir comme un rôle oncogène dans le cancer gastrique. Nous avons également étudié l'association d'expression miR-630 avec des caractéristiques clinico des patients à explorer son rôle potentiel dans la progression du cancer gastrique. les résultats de l'analyse statistique, ont montré dans le tableau 1, a prouvé que l'augmentation de miR-630 expression était associée à une invasion de cancer gastrique avancé depuis haute miR-630 expression était plus souvent à détecter dans tumeurs T3 et T4 ( P
= 0,007 ). En ce qui concerne les métastases de la tumeur a été considérée, élevée miR-630 expression était liée à des ganglions lymphatiques positifs et métastases à distance pour une grande miR-630 expression était plus souvent à détecter dans les tumeurs avec des ganglions lymphatiques positifs ( P
< 0,001) ou métastases à distance ( P
= 0,002). En outre, lorsque nous avons mesuré les caractéristiques cliniques des patients par le système de classification TNM, nous avons constaté que l'expression de miR-630 était significativement associée à stade TNM du cancer gastrique parce élevée miR-630 expression était plus susceptible d'être détectée dans les tumeurs de stade TNM avancé ( P
< 0,001). Ces résultats suggèrent que miR-630 pourrait jouer un rôle oncogène dans la progression du cancer gastrique. Cependant, la ration positive de miR-630 n'a pas été trouvé d'être associé à le sexe de patients ( P
= 0,788), l'âge ( P
= 0,471), le statut de différenciation ( P
= 0,890), site de la tumeur ( P
= 0,835) ou le classement lauren ( P
= 0,160).

La relation de miR-630 à l'ensemble la survie des patients »avec le cancer gastrique

Pendant toute la période de suivi, 130 des 236 patients (55,1%) atteints de cancer gastrique était mort et le temps de survie globale médiane de tous les patients recrutés était de 48 mois. L'analyse de Kaplan-Meier a été utilisée pour examiner la valeur pronostique de l'expression de miR-630 à la survie globale des patients atteints de cancer gastrique. Résultats ont montré que les patients atteints de cancer gastrique de haute miR-630 expression ont tendance à avoir la survie globale pire (log rank test: P
< 0,001, Figure 1). La durée médiane de survie des patients avec une faible expression de miR-630 ne peut pas être estimée parce que plus de 50% des patients ont survécu pendant la période de suivi. Alors que la durée médiane de survie post-opératoire des patients avec une forte expression de miR-630 était de 34 mois (IC à 95%: 28,2 à 39,8). Lorsque non ajusté hazard ratio (HR) a été examiné avec un faible miR-630 expression comme référence (1,00), les patients atteints de cancer gastrique de haute miR-630 expression avait un 2,28 fois plus de risque de décès (95% CI: 1,57 à 3,32; P
< 0,001). En ce qui concerne les caractéristiques clinico ont été considérés, métastase ganglionnaire (log rank test: P
= 0,002), métastases à distance (log rank test: P
< 0,001) et le stade TNM (log test de rang: P
< 0,001) ont également été prouvé d'être associés à la survie globale puisque les patients atteints de cancer gastrique de métastase ganglionnaire, métastases à distance ou de grade avancé ont tendance à avoir la survie globale pire et le risque plus élevé de décès. Cependant, le sexe (log rank test: P
= 0,168), l'âge (log rank test: P
= 0,572) état de différenciation (log rank test: P
= 0,156), site de la tumeur (log rank test: P
= 0,632) ou classification lauren (log rank test: P
= 0,573) n'a pas de valeur pronostique sur la survie globale des patients atteints de cancer gastrique .

comme miR-630 expression a été prouvé d'être associé à la survie globale des patients en analyse de survie univariée, nous avons étudié plus avant si miR-630 pourrait servir comme marqueur pronostique indépendant pour les patients atteints de cancer gastrique. Parce que les métastases des ganglions lymphatiques et de l'information de métastases à distance a été inclus dans les données de stade TNM, nous avons effectué Cox modèle des risques proportionnels, qui est ajusté selon le sexe, l'âge et le stade TNM. Les résultats ont montré que le HR ajusté de haute groupe d'expression miR-630 était 3,51 (IC à 95%: 1,83 à 6,72; P
< 0,001). Ces résultats ont prouvé que miR-630 était un facteur pronostique indépendant de la survie globale chez les patients atteints de cancer gastrique. Ainsi, l'augmentation de miR-630 expression pourrait être un indicateur de la survie globale pauvres sans considération d'âge, de sexe ou de stade TNM (tableau 2).

Discussion

Selon des études récentes, plus de 1.900 miARN humains ont été identifiés, qui sont estimés à réglementer plus de 60% des gènes chez les mammifères [26]. En raison de leur grande importance dans la régulation de l'expression des gènes, il a été largement admis que les miARN sont impliqués dans de multiples fonctions cellulaires, y compris la prolifération, l'apoptose et la différenciation, donc, ont été mis en œuvre dans les processus physiologiques et pathologiques variés allant du développement au cancer [27 ] - [29]. enquête interrogés précédents profils d'expression des miARN dans I non-petit cancer du poumon de stade pour identifier les motifs qui pourraient prédire la récidive après résection chirurgicale a révélé que mir-630 était l'un des plus couramment miRNA parmi les 1000 classificateurs identifiés [30]. Une autre étude sur la non-small cell lung a constaté que miR-630 peut réguler la mort des cellules cancéreuses induite par le cisplatine, ce qui indique miR-630 est un modulateur potentiel de la réponse du cisplatine dans le cancer non à petites cellules du poumon [31]. MiR-630 a également été trouvé pour être régulée à la hausse dans la tête et le cou carcinome épidermoïde après le traitement par le cisplatine et peut moduler l'expression de la protéine de ATG5, ATG6 /BECN1, ATG10, ATG12, ATG16L1 et UVRAG [32], [33]. Une étude récente a montré que la régulation positive de miR-630 dans des cellules cancéreuses pancréatiques peut induire une apoptose par ciblage de l'IGF-1R [34]. Etant donné que les miARN individuels dans différents types de cancer peuvent avoir un grand nombre de gènes cibles différentes, par conséquent, ont des fonctions différentes dans diverses tumeurs malignes. Ainsi, la découverte fonctionnelle des miARN individuels peut permettre un aperçu plus profond dans la régulation de l'expression génique et la complexité de la progression du cancer.

Dans la présente étude, nous avons étudié l'expression de miR-630 ARNm par dosage PCR en temps réel dans 236 les cas de cancer de l'estomac de patients qui avaient pas reçu de chimiothérapie néoadjuvante. calcul de l'expression relative Basé, nous avons analysé l'association de miR-630 avec des caractéristiques clinico ainsi que le pronostic des patients. Les résultats ont montré que l'expression de miR-630 a été augmenté dans le cancer gastrique par rapport à celle dans les tissus adjacents et de contrôle normales pour une forte expression de miR-630 est plus susceptible d'être détecté dans des échantillons de cancer de l'estomac, qui indiquent la participation éventuelle sur la cancérogenèse. Il est également constaté que l'expression de miR-630 a été étroitement liée à l'invasion gastrique du cancer, métastase ganglionnaire, métastases à distance et le stade TNM pour la haute expression de miR-630 était plus souvent à détecter dans les tumeurs avec envahissement profond, métastases ganglionnaires, distant métastases ou stade TNM avancé, suggérant la participation éventuelle de miR-630 sur l'invasion de cancer de l'estomac et les métastases. Avec les éléments de preuve ci-dessus, il a donc été proposé que miR-630 peut jouer un rôle important dans la carcinogenèse du cancer de l'estomac et de la progression.

Comme miR-630 expression a été trouvé à être associée à l'invasion de cancer de l'estomac et des métastases, compte tenu de la invasion du cancer aux tissus voisins et des métastases aux tissus distales sont des facteurs essentiels affectant le pronostic des patients, miR-630 pourrait être un marqueur pronostique potentiel pour les patients atteints de cancer gastrique. Afin d'étudier le rôle pronostique de miR-630 sur le cancer de l'estomac, nous avons effectué une analyse de Kaplan-Meier de la survie globale. Les résultats ont montré que les patients atteints de cancer gastrique de haute miR-630 expression ont tendance à avoir la survie globale pire par rapport aux patients ayant une tumeur de faible miR-630 expression, ce qui suggère que l'expression de miR-630 était un marqueur pronostique pour les patients atteints de cancer gastrique. Pour mieux évaluer la valeur pronostique de miR-630 dans le cancer gastrique, nous avons effectué Cox modèle des risques proportionnels qui a été ajusté pour le sexe, l'âge et le stade TNM des patients. Les résultats ont montré que l'expression accrue miR-630 était un marqueur de survie globale pauvres indépendamment des facteurs ajustés, donc, miR-630 pourrait être utilisé pour déterminer le pronostic des patients avec en considérant le stade TNM. Ces résultats indiquent que miR-630 pourrait constituer un marqueur additif pronostique moléculaire pour le stade TNM pour les patients atteints de cancer gastrique, l'identification des personnes à risque élevé qui sont plus susceptibles d'avoir une rechute de la tumeur dans la pratique clinique, ainsi, de bons candidats pour recevoir un traitement plus agressif. Ces résultats sont en accord avec les enquêtes ont porté sur cancer non à petites cellules du poumon, ce qui indique la consistance de miR-630 fonction dans ces types de tumeur. Ainsi, le lien positif entre miR-630 surexpression et de mauvais pronostic peut non seulement être utilisé pour identifier les patients atteints de cancer gastrique avec un risque plus élevé de rechute précoce des tumeurs, mais aussi pour fournir des indices précieux pour comprendre le mécanisme possible de l'invasion de cancer de l'estomac et des métastases.

en conclusion, nous avons démontré que l'expression de miR-630 a été augmenté dans le cancer gastrique et associée à la progression de la tumeur. La présente étude a également démontré pour la première fois que l'expression de miR-630 est un facteur pronostique indépendant des patients atteints d'un cancer gastrique. Par conséquent, il est possible que miR-630 peut jouer un rôle important dans la propagation et la métastase du cancer gastrique. Il est également possible que miR-630 sert de marqueur pronostique dans la pratique clinique et même l'inhibition de miR-630 en utilisant des inhibiteurs spécifiques peuvent devenir une nouvelle méthode thérapeutique pour le traitement du cancer gastrique.

Other Languages