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PLOS ONE: exosomal miARN du péritoine Lavage Fluid comme potentiels Prognostic Biomarqueurs de péritonéale Métastase dans gastrique Cancer

Résumé

métastase péritonéale est le type le plus fréquent de récidive chez les patients atteints de cancer gastrique (GC) et est associée à mauvais pronostic. Péritonéale cytologie de lavage, utilisé pour évaluer le risque de métastases péritonéales, a une faible sensibilité. Ici, nous avons évalué le potentiel de diagnostic des profils miRNA exosomales dans le liquide péritonéal pour la prédiction de la diffusion péritonéale en GC. L'ARN total a été extrait à partir des exosomes isolés à partir de six ascite gastriques malignes (MA) des échantillons, 24 de fluide de lavage peritoneal (FLP) des échantillons et des surnageants de culture (CM) de deux lignées cellulaires de cancer gastrique humain qui diffèrent par leur potentiel de métastase peritoneale. L'expression de miARN exosomales a été évaluée avec des microréseaux Agilent miRNA humaine et la réaction en chaîne par polymérase inverse quantitative (qRT-PCR). L'analyse des microréseaux a indiqué une faible variabilité du nombre et intensité du signal des miARN détectés parmi les échantillons. Dans les six fluides MA, miR-21 a montré l'intensité du signal le plus élevé. Nous avons identifié cinq miARN (miR-1225-5p, miR-320c, miR-1202, miR-1207-5p et miR-4270) avec une expression élevée dans les échantillons MA, le FLP de séreuse-invasive GC, et le CM d'un ligne hautement métastatique des cellules de GC; ces espèces miRNA candidats semblent être liés à la diffusion péritonéale. L'expression différentielle de miR-21, miR-320c, et miR-1225-5p a été validé dans le PLF de séreuse-invasive et non invasive GC par qRT-PCR et miR-21 et miR-1225-5p ont été confirmés pour être associés avec envahissement séreuse dans GC. FLP peut être utilisé pour le profil de l'expression des miARN exosomales. Nos résultats suggèrent que miR-21 et miR-1225-5p peuvent servir de biomarqueurs de récidive péritonéale après résection curative GC, offrant ainsi une nouvelle approche pour le diagnostic précoce de la diffusion péritonéale du GC

Citation:. Tokuhisa M, Ichikawa Y, Kosaka N, Ochiya T, Yashiro M, Hirakawa K, et al. (2015) exosomal miARN du péritoine Lavage Fluid comme potentiels Prognostic Biomarqueurs de péritonéale Métastase dans le cancer gastrique. PLoS ONE 10 (7): e0130472. doi: 10.1371 /journal.pone.0130472

Editeur: S. Dadras Soheil, University of Connecticut Health Center, ETATS-UNIS

Reçu: 1 Février 2015; Accepté: 20 mai 2015; Publié le 24 Juillet, 2015

Droit d'auteur: © 2015 Tokuhisa et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités

Disponibilité des données: Toutes les données pertinentes sont dans le papier

financement:.. les auteurs ont pas de soutien ou de financement pour signaler

intérêts concurrents:. les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

introduction

les microARN (miARN) sont de petite taille (19-23 nucléotides) non codante ARNs qui fonctionnent comme des régulateurs post-transcriptionnelle de l'expression génique et jouent un rôle important dans le contrôle de nombreux processus biologiques, y compris la différenciation cellulaire, la prolifération, et apoptose [1]. MiRNAs se sont révélés avoir une activité oncogénique ou d'une tumeur de suppression, et déréglementé l'expression de nombreuses espèces miRNA a été détectée dans plusieurs cancers, ce qui suggère une application potentielle des miARN comme biomarqueurs de la progression du cancer et des métastases [2-5].

miRNAs sont enveloppés dans des microvésicules sécrétoires (par exemple exosomes, corps apoptotiques et microvésicules délestage), qui miARN de bouclier de la dégradation par la RNAse et servent de véhicules pour miRNA la sécrétion dans l'espace et les fluides corporels extracellulaires. Les exosomes sont de petites vésicules membranaires qui ont été impliqués dans les réponses immunitaires cellulaires; Toutefois, récemment, il est devenu évident que les exosomes contiennent des quantités importantes d'ARN et peuvent être impliqués dans les mécanismes de régulation immunitaire indépendante. Il a maintenant été établi que les exosomes peuvent effectuer le transfert intercellulaire de miARN, participant ainsi à des mécanismes de signalisation à base de miRNA [6]. Des niveaux plus élevés de exosomes contenant miARN ont également été détectés dans le plasma des patients atteints de cancer que dans celui des personnes en bonne santé [7], ce qui suggère que la base exosomes miRNA sécrétion est impliqué dans le développement du cancer. Analyse de l'expression de miARN aberrante dans le sérum, la salive, les selles et l'urine a été utilisée pour la détection précoce du lymphome à cellules B, et par voie orale, intestinale, et la vessie cancers [8-11].

Le cancer gastrique (GC) est la deuxième cause la plus fréquente de décès liés au cancer dans le monde [12]. Le péritoine est le site le plus fréquent de métastases et la réapparition du GC, et ascite maligne (MA), provoquée par la diffusion péritonéale des cellules cancéreuses, ont été associés à un mauvais pronostic. À l'heure actuelle, il n'y a pas des indicateurs fiables pour le développement de l'ascite péritonéale malignes chez les patients du GC. exosomes contenant miARN représentent un nouveau mécanisme de signalisation intercellulaire et peuvent donner un aperçu de l'environnement qui permet la diffusion du cancer dans le péritoine [13].

Dans cette étude, les exosomes ont été isolés à partir de MA et le liquide de lavage péritonéal peropératoire (FLP) des échantillons obtenus à partir de patients atteints de GC, et le milieu de culture (MC) de lignées de cellules peritoneales hautement invasives et miARN ont ensuite été extraits à partir de ces échantillons. La qualité des miARN exosomales extraites et la cohérence des modèles d'expression de miARN ont été vérifiées. les profils d'expression de miARN dans MA, FLP, et des échantillons ont été comparés CM et miARN candidats liés à la diffusion péritonéale de GC ont été identifiés.

Les Matériaux et méthodes Patients

Tous les patients ou leurs tuteurs ont donné leur consentement écrit éclairé. L'étude a été approuvée par le comité d'éthique de Yokohama Hospital City University (Approbation n ° A110127001).

MA et peropératoires échantillons PLF ont été recueillies auprès des patients du GC avec les caractéristiques clinico présentées dans le tableau 1. Tous les patients avaient déjà été diagnostiqué avec GC par l'analyse histopathologique des échantillons de biopsie prélevés sur les lésions primaires et six patients MA avaient reçu un diagnostic de la présence d'ascite par tomodensitométrie abdominale (TDM). Ascite ont également été analysées par la cytologie et tous ont été confirmés comme positifs pour la malignité par des pathologistes; les échantillons de MA restants ont été utilisés pour miRNA isolement. FLP a été peropératoire recueillies auprès de 24 patients atteints de GC (tableau 1). Après laparotomie, 100 ml d'une solution saline normale a été versé dans le sac de Douglas et de l'eau de lavage peritoneal a été collecté avant la résection chirurgicale de la tumeur. FLP a été analysé par cytologie et utilisé pour miRNA isolement. Parmi les 24 échantillons PLF, six ont été analysés en utilisant miRNA microarray et 18 ont été analysés par qPCR.

culture
Cell

La lignée cellulaire OCUM-2M a été créé à partir d'une tumeur primaire du carcinome gastrique squirrheux et la lignée cellulaire OCUM-2MD3 a été dérivée à partir de cellules OCUM-2M avec un fort potentiel de dissémination péritonéale chez la souris nude [14]. Les cellules ont été cultivées dans Eagle modifié du milieu de Dulbecco (DMEM, Life Technologies, Grand Island, NY) supplémenté avec 10% de sérum inactivé à la chaleur de fœtus bovin (FBS) et les antibiotiques, antimycosiques à 37 ° C dans un CO à 5% 2 incubateur. Pour obtenir des cellules CM, les cellules OCUM-2M et OCUM-2MD3 ont été lavées trois fois avec du DMEM sans sérum supplémenté avec un antibiotique antimycotique et incubées dans le même milieu pendant 48 h.

Isolement des exosomes

des échantillons pour l'isolement d'exosomes ont été préparées comme décrit précédemment [15]. Pour éliminer les grosses particules cellulaires et les débris cellulaires, MA, FLP et CM ont été centrifugés à 2000 × g
pendant 15 min à 4 ° C et filtré à travers un filtre de 0,22 um (Millipore, Billerica, MA). Le surnageant a été stocké à -80 ° C jusqu'au moment de l'extraction miRNA
.

Pour précipiter exosomes, des échantillons ont été centrifugés à 110.000 × g
pendant 70 minutes à 4 ° C. Le culot d'exosomes a été lavé avec 11 ml d'une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) et on centrifuge à nouveau comme décrit. Le culot a été utilisé pour l'extraction d'ARN.

Extraction de l'ARN total et l'analyse

ARN total a été extrait à partir des exosomes en utilisant un kit miRNeasy Mini (Qiagen, Hilden, Allemagne) selon les instructions du fabricant et a été puis stocké à -80 ° C jusqu'à ce que d'autres analyses nécessaires.

La qualité, la concentration et la taille de l'ARN exosomal total ont été évalués à l'aide d'un Agilent bioanalyseur 2100 (Agilent Technologies, Foster City, CA). Avant l'analyse, l'ARN total a été préparé à l'aide d'un kit Agilent RNA 6000 Pico (Agilent Technologies) selon le protocole du fabricant.

MiRNA microarray

MiRNAs extraites de six MA, six FLP, et deux échantillons ont été analysés en utilisant CM Agilent Human miRNA Microarrays (Agilent Technologies), qui contiennent 1,226 miARN humains et 146 miARN viraux humains. Pour la détection miARN, 100 ng d'ARN a été marqué et hybridé à l'aide du kit humain miRNA Microarray (Rel 16,0; Agilent Technologies) selon le protocole du fabricant (miRNA étiquetage complet et kit Hyb pour miRNA système microarray). signaux d'hybridation ont été détectés avec un G2505C micropuce à ADN Scanner (Agilent Technologies) et les images numérisées ont été analysées en utilisant le logiciel d'extraction d'entité Agilent (v. 10.7.3.1). L'analyse des données a été effectuée en utilisant un logiciel GeneSpring Agilent GX c. 11.0.2. (Log 2 transformation). transformation de base n'a pas été effectuée.

La qualité de l'extraction miRNA a été analysée en fonction de la variabilité du nombre d'espèces de miARN microréseaux détectée, l'intensité du signal, et la corrélation d'expression miRNA parmi les échantillons en fonction de la moyenne ± SD, coefficient de variation (CV) et coefficient de corrélation (CC).

Sélection de miARN spécifiques métastases péritonéales

Les profils d'expression des miARN exosomales ont été analysés pour sélectionner miARN qui sont spécifiques pour GC péritonéale diffusion en utilisant l'approche par étapes suivante. Étape 1: profils miRNA dans le CM des cellules péritonéales hautement métastatiques OCUM-2MD3 ont été comparées à celles des cellules non-métastatique OCUM-2M parentales et miARN exprimés de manière différentielle (moyenne-facteur de changement, > 2) ont été sélectionnés <. br>

Étape 2: six échantillons PLF ont été classés en deux groupes: T4 (n = 4) et T1-T3 (n = 2), selon le stade du cancer par la taille de la tumeur et l'extension (UICC-AJCC, 7 e édition). Étape T4 CG est caractérisée par la plus haute fréquence des métastases peritoneales par rapport aux autres étapes [16]. Les profils d'expression des miARN du groupe T4 ont été comparés à ceux du groupe T1-T3 et miARN exprimés de manière différentielle (moyenne-facteur de changement, > 2) ont été sélectionnés

Étape 3:. MiARN sélectionnés qui étaient communs à et les deux étapes qui ont été exprimés en MA ont ensuite été filtrés en fonction de l'intensité du signal. Ceux qui ont des valeurs d'intensité de plus de log 2 10 MA et FLP ont été choisis comme miARN candidats liés aux métastases péritonéales; miR-21 a montré la plus forte intensité de signal moyenne parmi les échantillons MA. L'expression différentielle des espèces miRNA sélectionné à l'étape 3 a été validée dans les 18 échantillons restants par qRT PLF-PCR.

Analyse quantitative des péritonéale miRNA expression spécifique de métastases par qRT-PCR

TaqMan microRNA essais (Life Technologies) ont été utilisés pour quantifier les niveaux d'expression relatifs de miR-21 (test ID. 000397), miR-320c (test ID. 241053_mat), miR-1225-5p (test ID. 002764), et miR-16 (test ID. 000391). La transcription inverse a été réalisée en utilisant le kit TaqMan miRNA RT (Life Technologies) dans les conditions suivantes: 30 min à 16 ° C, 30 min à 42 ° C, et 5 min à 85 ° C. La PCR a été réalisée dans des plaques à 96 puits en utilisant le système de PCR en temps réel 7500 (Life Technologies); toutes les réactions ont été réalisées en triple. Les niveaux de miARN cibles d'expression ont été normalisés par rapport à celui de miR-16, qui a été utilisé comme témoin exprimé de façon stable [17]. Lors de l'analyse de nos données de biopuces de exosomal miARN dans des échantillons d'ascite maligne, miR-16 présente le plus faible coefficient de variation (CV = 4%) parmi les normes internes de candidats, y compris miR-638 (CV = 8%), laissez-7a (CV = 8%), et 142-3p (CV = 23%).

L'analyse statistique

Les variables continues ont été comparées à l'aide de l'étudiant t
-test. Si nécessaire, le t
-test a été modifié pour comparer les variances inégales. La différence entre les variables catégorielles a été évaluée en utilisant le test exact de Fisher. Corrélation entre deux variables a été évaluée à l'aide de Pearson coefficient de corrélation. Les différences ont été considérées comme statistiquement significatives chez P < 0,05. Les analyses statistiques ont été effectuées à l'aide du logiciel SPSS 21.0 pour Windows (IBM, Armonk, NY).

Résultats

L'analyse quantitative de l'ARN extrait exosomal

L'ARN total a été extrait des exosomes isolés de MA, FLP peropératoire, et la cellule CM. La concentration médiane de l'ARN extrait exosomal était de 4,4 ng /ul (allant de 1,2 à 6,1 ng /ul) pour MA et 6,4 ng /ul (1,7 à 16,4 ng /ul) pour FLP. Électrophérogrammes a révélé une grande proportion de petites espèces d'ARN présentes dans les MC et les échantillons cliniques, alors que peu ou pas d'une contamination par l'ARN ribosomal 18S et 28S (pas de pics distincts à la masse moléculaire correspondant) a été observée (figure 1).

Performance de biopuces miARN

Pour tester l'expression de microarrays exosomal miRNA dans chaque groupe d'échantillons, nous avons examiné le nombre de miARN détectés, percentile de l'intensité du signal, le nombre de miARN couramment capturées, et la corrélation des expression miRNA entre les groupes. Le nombre d'espèces miRNA détectées dans chaque groupe par microarray est représenté sur la figure 2. Dans les six MA et six échantillons PLF, ceux-ci signifient chiffres étaient 490.1 (SD = 42,3; CV = 8,6%) et 367,5 (SD = 13,4; CV = 3,6%), respectivement. Dans chaque groupe, la variabilité du nombre de miARN détectés parmi les échantillons était faible

distribution d'intensité du signal pour chaque groupe est présenté sur la figure 3. ceci montre les signaux traités normalisée à la 25, 50, 75, et 90 e percentile dans chaque groupe. Dans le 50 e percentile, le journal 2 intensités de signal relatives pour MA (figures 3-1) et FLP (figures 3 et 2) échantillons et entre les trois groupes (MA, FLP et CM, figures 3 et 4) étaient de 5,53 ± 0,19 (CV = 3,49%), 6,14 ± 0,24 (CV = 3,87%), et 4,97 ± SD (CV = 5,24%), respectivement. La variabilité de l'intensité du signal entre les échantillons dans chaque groupe, ainsi que parmi les groupes était faible.

Le nombre de miARN communs parmi les échantillons dans les groupes MA, PLF, et CM étaient 327, 263 et 354 , respectivement, alors que cela était 194 pour les trois groupes (figure 4).

le tableau 2 montre la corrélation d'expression miRNA entre tous les deux échantillons. Les valeurs les plus élevées et le CC le plus faible étaient de 0,94 et 0,68, respectivement; CC moyenne de tous les échantillons était de 0,79 (CV = 8,86%). En MA, FLP, et les groupes CM, les valeurs moyennes de CC étaient de 0,85, 0,88 et 0,90, respectivement, et la variabilité des profils d'expression pour chaque groupe a été faible.

Sélection des miARN candidats liés à la dissémination péritonéale

à ce jour, aucune donnée n'a été disponible sur les profils d'expression des miARN exosomales associés à la diffusion péritonéale, en raison de l'indisponibilité des fluides ascitiques normaux permettant de comparer les profils d'expression MA. Nous avons choisi miARN liées à la diffusion péritonéale en utilisant une approche par étapes. Le nombre de miARN couramment capturées dans les six échantillons MA était 327. Dans les étapes 1 et 2, 140 et 118 miARN spécifiques métastases ont été sélectionnés dans les groupes CM et PLF, respectivement. De ces 327, 140 et 118 miARN, cinq miARN ont été choisis comme candidats liés à la dissémination péritonéale (figure 5). Deux d'entre eux (miR-1225-5p et miR-320c) et miR-21 avec l'intensité la plus élevée du signal parmi les miARN spécifiques MA ont été validées comme étant différentiellement exprimés dans 18 échantillons PLF, en utilisant qPCR (tableau 3).

validation du candidat miRNA expression par qPCR

Dix-huit échantillons ont été PLF divisés en deux groupes selon le stade métastatique, T4 (séreuse perforé, n = 9) et T1-T3 (séreuse ou moins, n = 9), et l'expression de miR-21, miR-320c, miR-1225-5p et a été analysé par qRT-PCR. La figure 5 montre que les niveaux de miR-21 et miR-1225-5p chez les patients du GC T4 stade ont été significativement augmenté par rapport à ceux des patients T1-T3 (miR-21, P = 0,027, et miR-1225-5p, P = 0,008; figure 5). La différence dans l'expression de miR-320c entre deux groupes de patients était non significative (P = 0,928, figure 6).

Ensuite, la corrélation entre les niveaux de miARN et les antécédents cliniques des patients du GC a été examiné (tableau 4). MiR-21 et miR-1225-5p expression était significativement plus élevée chez les patients atteints d'un cancer au stade T4 que chez les patients T1-T3-scène (p = 0,015). Aucune corrélation significative n'a été trouvée entre l'expression des miARN et d'autres paramètres cliniques.

Discussion

Dans cette étude, nous avons étudié, pour la première fois, le contenu miRNA des exosomes isolés de MA et de GC FLP les patients. Notre étude montre que les miARN exosomales peuvent être systématiquement extraites de MA et FLP et que les profils d'expression de miARN peuvent indiquer l'état du péritoine chez les patients du GC.

Le pronostic de GC avec envahissement séreuse reste médiocre, même après résection R0, parce du taux élevé de récidive, en particulier des métastases péritonéales (PM) [18]. PM en GC est le type le plus compliqué de récidive, car il est difficile de prévoir, ainsi que pour diagnostiquer. Bien que l'ascite est PM symptôme le plus fréquent, de nombreux patients du GC avec PM ne se développent pas ascite. Parmi les méthodes de diagnostic fondées sur l'imagerie à haute vitesse spirale CT est largement utilisé pour l'évaluation de la mise en scène préopératoire de GC et de post-suivi thérapeutique; cependant, dans le cas de PM sa précision diagnostique est insuffisante, surtout en raison de la faible sensibilité [19]. Utilisation de la TEP-TDM pour PM diagnostic GC est également controversée, comme il a été rapporté que le FDG-PET a une faible sensibilité pour la détection des particules dans GC [20]. FLP est devenu la prochaine cible pour le diagnostic et la prévision des PM dans GC. L'examen cytologique des peropératoire collectés PLF est utilisé pour la prédiction de la récidive péritonéale [21] et est utilisé pour la mise en scène GC au Japon [22]. Toutefois, certains chercheurs ont rapporté que PLF cytologique ne présente pas la sensibilité requise pour la prédiction et la détection de PM [21] et ont proposé l'utilisation de méthodes de diagnostic moléculaire, tels que la RT-PCR pour la détection de micro-métastases FLP. Dans une étude prospective multicentrique, expression de l'ARNm des gènes codant pour l'antigène carcinoembryonnaire (CEA) et la cytokératine 20 (CK-20), évaluée par RT-PCR, est avérée utile pour la prédiction de la survie globale et PM GC [23] . Toutefois, l'inconvénient des procédés de diagnostic basés sur l'ARNm est la haute biodégradabilité de l'ARNm au cours de procédures chirurgicales.

En revanche, les miARN enfermés dans des exosomes sont stables et peuvent circuler dans les fluides corporels tels que le sérum, le plasma , la salive, l'urine, le lait maternel, et les larmes, pendant de longues périodes de temps [24, 25]; exosomes ont également été isolés de MA dans le cancer de l'ovaire [26].

Au meilleur de notre connaissance, il n'y a pas eu de rapport sur exosomales miARN isolés du FLP des patients du GC. Levänen et al. recueillies exosomes de liquide de lavage broncho-alvéolaire et analysé exosomal miRNA expression pour détecter les espèces liées à l'allergie-miRNA [27]. Liu et al. ont rapporté que des exosomes isolés à partir de fluide de lavage cervico contenaient des niveaux élevés de miR-21, qui peuvent être utilisés comme marqueurs biologiques du cancer du col [28]. Ici, nous avons analysé les profils d'expression des miARN exosomales dans le FLP des patients du GC par la technologie des biopuces miARN afin d'identifier les candidats de diagnostic biomarqueurs miARN pour la prédiction des métastases dans GC
.

Dans notre enquête, le premier laïc défi dans l'isolement quantitatif de exosomal miRNA de FLP. Weber et al. évaluer l'expression de miARN dans 12 fluides corporels, et a rapporté que la concentration totale d'ARN dans le liquide péritonéal était de 775 ug /L [25], qui était inférieure à celle que nous avons obtenu de MA et FLP-4 400 et 6 400 ug /L, respectivement La raison de la différence peut être la méthode utilisée pour l'isolement de l'ARN total, car Weber et al. directement extrait l'ARN à partir du liquide péritonéal, alors que nous avons d'abord isolés exosomes et ensuite utilisé ces derniers pour l'extraction de l'ARN. Analyse de la qualité de l'ARN isolé à partir de FLP a démontré une abondance de petits (< 200 nt) espèces d'ARN dans CM et MA. Il n'y avait pas ribosomal 18S et 28S d'ARN pics distincts dans la préparation, ce qui indique l'absence de contamination par l'ARN intracellulaire.

Le second problème rencontré dans la présente étude a impliqué l'uniformité de la qualité de miARN exosomales isolé. Dans notre étude, nous avons observé une faible variabilité du nombre d'espèces miRNA détectées et miRNA intensité du signal, et une forte corrélation entre l'expression du miARN parmi les échantillons dans chaque groupe. Les nombres moyens de miARN détectables dans MA et FLP étaient 490 et 367, qui était en accord avec le nombre de miARN (397) précédemment détectée dans le liquide péritonéal [25].

FLP et des échantillons MA ont montré une faible variabilité dans intensité du signal (CV = 3,87% pour le 50 e percentile). En outre, les modèles d'expression de miARN étaient fortement corrélées entre les échantillons dans chaque groupe (CC > 0,850), ainsi qu'entre les groupes (0,8 > CC > 0,7). Ces résultats indiquent que PLF pourrait être une source de bonnes miARN de qualité, qui montrent des profils d'expression cohérents dans le dosage des microréseaux à haut rendement.

Les profils d'expression de miARN ont été analysés pour sélectionner miARN spécifiques pour métastases péritonéales. MiR-21 a montré une expression plus élevée chez les patients atteints d'un carcinome T4 stade que dans ceux du groupe T1-T3. Fabbri et coll. a rapporté que miR-21 et miR-29a en exosomes cancer libéré affecté la croissance tumorale et transmet par liaison à et activation des TLR dans les cellules immunitaires avoisinantes et induire une réponse inflammatoire prometastatic [29]; cette prise en charge la notion selon laquelle les exosomes dérivées de tumeurs contribuent au microenvironnement prémétastatique [30, 31]. Cela peut indiquer que T4 exosomes de carcinome dérivé créent la niche prémétastatique dans le péritoine, qui soutient alors l'invasion péritonéale après résection curative du GC.

En utilisant une approche par étapes, nous avons sélectionné cinq miARN exosomales (miR-320c , miR-1202, miR-1225-5p, miR-1207-5p et miR-7270) et validé l'expression de miR-320 et miR1225-5p dans le PLF de 18 patients CG par qRT-PCR. Mir-1225-5p a montré une expression plus élevée dans T4 que dans T1-T3 patients CG stade, ce qui confirme les résultats obtenus par microarray, alors qu'il n'y avait aucune différence dans miR-320 niveaux entre les groupes de patients. Mir-1225 cibles du gène de la maladie polykystique des reins, PKD1
, qui est fréquemment muté dans la maladie polykystique des reins autosomique dominante; Ainsi, miR1225 peut affecter la progression de cette maladie [31]. Cependant, la relation entre miR-1225 et le cancer reste incertain. MiR-21 et miR-1225-5p peuvent préparer une niche prémétastatique dans le péritoine pour la diffusion et le règlement des cellules cancéreuses de métastases et peut donc indiquer la prédisposition à la récidive péritonéale après curative GC résection.

FLP fournit des informations sur l'état du péritoine, tels que des changements dans la population de cellules immunitaires et de la sécrétion de facteurs de croissance et des cytokines [32, 33]. Cytologiques et moléculaires des tests de diagnostic sont basées sur la détection de cellules cancéreuses, tandis que le profilage de miARN dans FLP peut être utilisée pour la prédiction d'un phénotype prémétastatique peritoneale en GC, assurant des mesures préventives et curatives plus efficaces.

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