Longue non codante profil d'expression de l'ARN dans le cancer gastrique humain et sa longue non codante profil d'expression de l'ARN significances

clinique dans le cancer gastrique humain et ses significations cliniques
Résumé de l'arrière-plan
ARNs non codants longues (lncRNAs) sont prévalente transcrit dans le génome encore leur rôle potentiel dans les cancers humains ne sont pas bien comprises. Le but de la présente étude était de déterminer le profil d'expression de lncRNA dans le cancer gastrique et sa valeur clinique potentielle.
Méthodes
Le profil global d'expression lncRNA dans le cancer gastrique a été mesurée par lncRNA microarray. Les niveaux de deux lncRNAs représentatifs, H19 et uc001lsz, ont été confirmés par temps réel la réaction en chaîne de la transcriptase inverse-polymérase. La relation entre leurs niveaux et les facteurs clinicopathologiques des patients atteints de cancer de l'estomac a été explorée. Un récepteur fonctionnant (ROC) courbe caractéristique a été construit pour différencier le cancer gastrique de maladies gastriques bénignes
. Résultats de Total de 135 lncRNAs, qui différentielle des niveaux d'expression entre les tissus tumoraux et non tumoraux étaient plus de deux fois, ont été trouvés ( GEO n ° GSE47850). Le plus lncRNAs réglementés vers le bas dans les tissus de cancer gastrique ont été FER1L4, uc001lsz, BG491697, AF131784, uc009ycs, BG981369, AF147447, HMlincRNA1600 et AK054588; tandis que les plus régulés à la hausse étaient H19, HMlincRNA717, BM709340, BQ213083, AK054978 et DB077273. H19 a été trouvé fortement exprimé dans l'estomac et des cellules du cancer du foie lignes, tandis que faiblement exprimé dans le cancer du poumon et des lignées cellulaires du cancer de la prostate. Uc001lsz était faiblement exprimé dans l'estomac, du poumon et de cellules de cancer du foie lignes, tandis que fortement exprimé dans le cancer de la prostate. Les conclusions des zones sous les courbes ROC étaient jusqu'à 0,613, 0,751 et 0,761 pour H19, uc001lsz, et la combinaison, respectivement.
Le profil d'expression lncRNA dans le cancer gastrique suggère le rôle potentiel des lncRNAs dans la survenue du cancer gastrique et développement. La surexpression de H19 dans le cancer gastrique suggère que H19 peut être participé à un cancer gastrique. L'expression réduite de uc001lsz dans les lignes et les tissus cellulaires de cancer gastrique, ses associations avec le stade TNM, et sa dysrégulation dans le cancer précoce et les lésions précancéreuses suggèrent que uc001lsz peut être un marqueur potentiel pour le diagnostic du cancer gastrique précoce.
Mots-clés
le cancer gastrique longue non codante profil ARN expression H19 uc001lsz Contexte
les composants bien étudiés dans le génome humain sont ceux des gènes codant pour des protéines. Cependant, les exons codants de ces gènes représentent seulement 1,5% du génome [1]. Au cours des dernières années, il est devenu de plus en plus évident que la partie non-codant pour une protéine du génome est d'une importance cruciale pour le fonctionnement apparition de la maladie [2]. Les ARN non codants (ARNnc) qualifient de trois types, de longues ncRNAs, de taille moyenne et de courte ncRNAs ncRNAs [1]. Bien que la plupart des études sur ncRNAs se concentrent sur courte ncRNAs, tels que les microARN (miARN), longs ARN non codants (lncRNAs) gagnent rapidement en évidence récemment.
LncRNAs sont supérieurs à 200 nucléotides de longueur [3]. Ils ont récemment émergé comme des acteurs majeurs régissant les processus biologiques fondamentaux. l'expression aberrante de lncRNAs a été associée à des cancers [3]. Par exemple, Différentiel code d'affichage 3 (DD3 PCA3), un lncRNA spécifique de la prostate, semble être un marqueur pour le diagnostic précoce du cancer de la prostate [4]. Plus important encore, DD3 PCA3 peut être détecté dans l'urine de patients atteints de cancer de la prostate [5]. Bien que Métastases pulmonaires associées adénocarcinomes transcription 1 (MALAT-1) est d'abord trouvé anormal exprimé dans métastasé cancers du poumon non à petites cellules [6], il est régulée à la hausse dans un hépatocarcinome, cancer du sein, le cancer du pancréas, le cancer colorectal et le cancer de la prostate [7]. MALAT-1 est non seulement un marqueur de diagnostic potentiel, mais aussi un marqueur pronostique potentiel [8]. HOX ARN transcrit antisens (Hotair) est associée à un cancer du sein et le cancer colorectal [9, 10]. H19, un autre lncRNA célèbre, est souvent impliqué dans les tumeurs pédiatriques et adultes [11].
Le cancer gastrique est toujours l'une des causes les plus fréquentes de mortalité dans le monde [12]. Cependant, les stratégies traditionnelles basées sur la chirurgie radicale pour le traitement du cancer gastrique ne sont pas encore satisfaisants. Par conséquent, révéler des mécanismes d'apparition et le développement du cancer gastrique est d'attirer une attention accrue dans la recherche sur le cancer.
Depuis le profil global d'expression lncRNA dans le cancer gastrique est pas entièrement découvert, dans la présente étude, nous avons exploré le profil d'expression lncRNA dans cancer de l'estomac. Ensuite, la relation entre la lncRNAs-exprimée de manière aberrante et les facteurs clinico des patients atteints d'un cancer gastrique a été étudiée. Nos données fournit des candidats biomarqueurs de diagnostic de cancer de l'estomac.
Méthodes
Patients et échantillons
Le tissus patients atteints de cancer gastrique, y compris des tissus de cancer gastrique, lésion précancéreuse et des tissus non tumoraux adjacents correspondants ont été immédiatement conservés dans l'ARN (fixateur Bioteke, Beijing, Chine) après le retrait du corps et stockées à -80 ° C jusqu'à utilisation. Des échantillons de tissus ont été obtenus à partir de prélèvements ou de biopsie de Février 2011 à Juin 2012 à trois centres de cancérologie, Hôpital de Yinzhou populaire, Ningbo hôpital numéro 1 et l'hôpital affilié de l'École de médecine, Université de Chine Ningbo. Le consentement éclairé a été prise de tous les sujets. La recherche Comité d'éthique humaine de l'Université de Ningbo a approuvé tous les aspects de cette étude. Les tumeurs ont été organisées en fonction de la tumeur-node-métastases (TNM) du système de mise en scène de l'International Cancer Union Against (5 e éd). Le grade histologique a été évaluée suivant le National Comprehensive Cancer Network (NCCN) la pratique de lignes directrices cliniques de l'oncologie (V.1.2011). Les tissus non tumoraux étaient de 5 cm du bord de la tumeur et il n'y avait pas de cellules tumorales évidentes, évaluée par un pathologiste. Il n'y avait pas la radiothérapie, la chimiothérapie, thérapie ciblée ou des cellules dendritiques /tueur induite par les cytokines (DC /CIK) thérapie préalable à l'examen d'endoscopie digestive haute ou opération ARN total de de. ARN préparation total a été isolé en utilisant le réactif Trizol ( Invitrogen, Karlsruhe, Allemagne) suivant les instructions du fabricant [13].
lncRNA analyse des microréseaux
Trois apparié échantillons de biopsie ont été obtenus à partir de patients (55 ans et de sexe masculin, 76 ans et de sexe masculin, et 88 y et femelle) avec mal ou mal-et-modérément différencié cancer gastrique. microarray lncRNA humaine a été fabriqué dans le système NimbleGen Hybridation (Arraystar, Rockville, MD). Plus de 23 000 lncRNAs ont été recueillies à partir des sources de données faisant autorité, y compris National Center for Biotechnology Information (NCBI) de RefSeq, Université de Californie, Santa Cruz (UCSC), lncRNAs de littératures et Régions Ultra Conserves (UCR) [14]. Les données ont été extraites et normalisées en utilisant le logiciel v2.5 NimbleScan (Roche NimbleGen, Madison, WI). Une analyse plus poussée des données a été réalisée en utilisant le logiciel Agilent GeneSpring GX 11.5 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA). lignée humaine de cellules épithéliales gastriques (les GES-1) de culture cellulaire
, des lignées cellulaires de cancer gastrique (AGS, MGC-803 et CGS-7901), la ligne de foie normal de la cellule (HL-7702), les lignées cellulaires de carcinome du foie (HepG2 et SMMC-7721), foetal lignée cellulaire de fibroblastes de poumon (HELF), la lignée cellulaire de carcinome du poumon (A549), la lignée cellulaire épithéliale de la prostate des lignées de cellules de carcinome de la prostate (RWPE-1), et (du-145 et PC-3) ont été obtenus à partir de l'Institut de Shanghai de biochimie et de biologie cellulaire, Académie chinoise des sciences (Shanghai, Chine). Les cellules ont été cultivées dans des flacons de culture à 37 ° C dans une atmosphère humidifiée de 5% de CO 2 [15].
Détection qRT-PCR de l'H19 et uc001lsz
temps réel réaction en chaîne inverse quantitative de transcription-polymerase (qRT-PCR) est l'étalon-or pour la vérification des données. Pour vérifier les résultats de lncRNA microréseau d'ADNc a été générée à l'aide du système (Promega, Madison, WI) GoScript transcription inverse (RT). Quantitative réaction en chaîne par polymérase (qPCR) a été obtenue en utilisant le GoTaq qPCR Master Mix (Promega, Madison, WI) sur un Mx3005P en temps réel du système de PCR (Stratagene, La Jolla, CA). Les séquences des amorces de PCR pour H19, uc001lsz et β-actine étaient les suivantes: 5'-ACCAGCCACCACATCATC-3 '(sens) et 5'-TCAGAAACAAAGAGACAGAAGG-3' (anti-sens) pour H19; GACGGCACCTACTACACCTT 5'-3 '(sens) et 5'-GCTGACCACCTTGTTGTTGAA-3' (anti-sens) pour uc001lsz; AAGCCACCCCACTTCTCTCTAA 5'-3 '(sens) et 5'-AATGCTATCACCTCCCCTGTGT-3' (antisens) pour la β-actine. Les données ont été analysées par le ôc
t méthode [16, 17]. Clonage Tous les résultats sont exprimés en tant que moyen ± écart-type de trois expériences indépendantes. Et le séquençage des produits qRT-PCR
Les produits qRT-PCR de lncRNA ont été purifiés en utilisant d'abord un kit de purification de produit UNIQ-10 PCR puis clonées dans le vecteur pUCm-T (Sangon Biotech, Shanghai, Chine) suivant les instructions du fabricant. Ensuite, le séquençage de l'ADN a été réalisé par Sangon Biotech Co., Ltd. analyse sérologique de marqueur tumoral sérique
antigène carcinoembryonnaire (CEA) et d'hydrate de carbone antigène 19-9 (CA 19-9) ont été mesurées en utilisant une machine Elecsys 2010 (Roche Diagnostics, Bâle, Suisse). Les valeurs limites ont été de 5 ng /ml et 35 U /ml pour le CEA et CA19-9, respectivement.
Analyse statistique
Toutes les données statistiques ont été analysées par le programme statistique pour les sciences sociales (SPSS) Logiciel 18.0 (SPSS, Chicago , IL) et GraphPad Prism 6.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA). analyse Une façon de test de variance, deux-tailed t de Student
-test et le test rang-somme ont été utilisées le cas échéant. Une courbe caractéristique de fonctionnement du récepteur (ROC) a été créé pour évaluer la valeur diagnostique. P
< Résultats de 0,05 a été considérée comme statistiquement significative.
profils d'expression lncRNA dans les tissus de cancer gastrique par rapport à des tissus non tumoraux adjacents
Les profils d'expression lncRNA entre les tissus de cancer gastrique et les tissus non tumoraux adjacents se sont révélés être significativement différents (Figure 1). Total de 135 lncRNAs, dont l'expression était le changement de plus du double, ont été trouvés (numéros d'accès GEO est 47850; http:.... //Www NCBI nlm nih gov /geo /query /acc. cgi? acc = GSE47850). Parmi eux, 71 et 64 ont été de haut en bas exprimé dans les tissus tumoraux, respectivement. Les lncRNAs les plus bas réglementés dans les tissus de cancer gastrique ont été FER1L4, uc001lsz, BG491697, AF131784, uc009ycs, BG981369, AF147447, HMlincRNA1600 et AK054588. Les lncRNAs les plus régulés à la hausse dans les tissus de cancer gastrique ont été H19, HMlincRNA717, AI769947, BQ213083, AK054978 et DB077273 (tableau 1). Figure 1 Les modifications de profils d'expression lncRNA entre les tissus de carcinome gastrique et les tissus non tumoraux. Le résultat de clustering hiérarchique montre l'expression de lncRNA distinguer le profilage parmi les échantillons. "Red" indique l'expression relative élevée; et "bleu" indique une faible expression relative.
tableau 1 plus que quadruplé lncRNAs différentiellement exprimés dans les tissus de cancer gastrique comparant avec les tissus non tumoraux appariés
Nom

Chromosome
règlement
Pliez le changement
Sourcea
P value

H19
11
up
8.91
lncRNAdb
0.020
HMlincRNA717
18
up
5.96
lincRNA
0.013
AI769947
7
up
5.51
lincRNA
0.026
BQ213083
2
up
5.45
lincRNA
0.040
AK054978
X
up
4.59
lincRNA
0.006
DB077273
2
up
4.11
lincRNA
0.008
FER1L4
20
down
9.17
refNR
0.047
uc0 01lsz
11
down
8.36
UCSC_knowngene
0.020
BG491697
20
down
6.50
lincRNA
0.035
AF131784
18
down
6.25
mRNA
0.019
uc009ycs
11
down
5.82
UCSC_knowngene
0.009
BG981369
1
down
5.20
lincRNA
0.048
AF147447
16
down
4.76
mRNA
0.038
HMlincRNA1600
X
down
4.12
lincRNA
0.013
AK054588
1
down
4.04
lincRNA
0.045
alncRNAdb: http:.. //lncrnadb com /Default aspx; lincRNA: http:.. //génome UCSC edu /cgi-bin /hgGateway; .. Refnr: http: //génome UCSC edu /cgi-bin /hgTables; .... Http: //www NCBI NLM nih gov /RefSeq /; .. UCSC_knowngene: http: //génome UCSC edu /cgi-bin /hgTables; ARNm: http:... Expression de //génome UCSC edu /cgi-bin /à hgTables de H19 a été régulée à la hausse dans les tissus de carcinome gastrique
Depuis H19 a été trouvé le plus régulé à la hausse lncRNA dans les tissus du cancer de l'estomac, jusqu'au changement 8,91 fois la détection des puces à ADN (tableau 1), de valider ce résultat, nous avons détecté le niveau d'expression de H19 dans les deux types de tissus cancéreux, les tissus de biopsie et chirurgicaux, par qRT-PCR. Tout d'abord, nous avons exploré le niveau de H19 d'expression dans 15 paires de carcinome 'tissus de biopsies gastriques. Nous avons constaté que son niveau dans les tissus cancéreux était significativement plus élevé que dans les tissus non tumoraux (figure 2A). Ensuite, nous avons détecté le niveau de H19 dans un grand nombre de spécimens chirurgicaux. Comme on le voit sur la figure 2B, il a été régulée à la hausse dans 74,0% (57/77) des tissus de cancer gastrique (P = 0,029)
. Par séquençage du produit de PCR qRT, nous avons trouvé que la séquence H19 (figure 2C) était conforme à celui de la base de données (http:... //Www. Ncbi NLM NIH gov /gène /283.120). Figure 2 H19 a été régulée à la hausse dans les tissus de cancer gastrique, des lignées cellulaires de cancer gastrique et d'autres lignées de cellules de cancer commun. En temps réel qRT-PCR a été utilisée pour déterminer le niveau d'expression de H19. Le ôc de la valeur de t a été déterminé en soustrayant la C
t valeur de β-actine de la cible lncRNA C valeur
t. Diminuer la valeur ôc
t indique une expression plus élevée. Niveau de H19 dans les tissus de biopsie du cancer gastrique (n = 15
, P = 0,014
; A) et les tissus de cancer gastrique (n = 77
, P = 0,029
; B). Résultat de séquençage du produit qRT-PCR de l'H19 (C). Le niveau de H19 dans les lignées gastriques de cellules cancéreuses (AGS, MGC-803 et SGC-7901) et des lignées cellulaires de cancer du foie (SMMC-7721 et HepG2) est supérieur à celui dans la lignée cellulaire de l'épithélium gastrique humaine GES-1 et le foie humain normal des cellules ligne HL-7702, respectivement; cependant, son niveau dans une cellule de cancer du poumon A549 ligne et des lignées cellulaires du cancer de la prostate (DU-145 et PC-3) était inférieur à celui dans la lignée cellulaire de fibroblaste de poumon fœtal humain des cellules HELF et la lignée cellulaire de l'épithélium de la prostate humaine RWPE-1 (D). Tous les résultats ont été exprimés en moyennes ± SD de trois expériences indépendantes. #P
≪ Expression de 0,001. de H19 dans le cancer commun des lignées cellulaires
Pour obtenir plus d'informations sur l'expression de H19 dans les cancers, nous avons étudié son niveau dans certaines lignées de cellules cancéreuses communes. Comme on le voit sur la figure 2D, la comparaison avec la ligne normale de la cellule respective, H19 a été trouvé fortement exprimé dans les lignées de cancer de l'estomac cellulaires (AGS, MGC-803 et SGC-7901) et des lignées cellulaires de carcinome hépatocellulaire (SMMC-7721 et HepG2), tandis que faiblement exprimé dans la ligne de poumon de cellules cancéreuses (A549) et des lignées de cellules de cancer de la prostate (du-145 et PC-3) de. expression de uc001lsz a été régulée à la baisse dans les tissus de carcinome gastrique
uc001lsz est un nouveau-trouvé lncRNA, qui est transcrit à partir du brin direct sur le chromosome 11p15.5. A partir des résultats de puces à ADN (tableau 1), nous pouvons voir que uc001lsz était la deuxième lncRNA plus régulé à la baisse dans les tissus du cancer gastrique. Une autre raison qui nous a encouragés à uc001lsz en outre l'étude était qu'il est associé à
trans MUC2, qui est sécrété et forme une barrière muqueuse insoluble dans la lumière intestinale. Afin de valider l'expression de uc001lsz dans le cancer gastrique, nous avons élargi le nombre d'échantillons. Les données indiquent qu'il était significativement régulée à la baisse dans 84,4% (65/77) des tissus gastriques de cancer (Figure 3A, P
< 0,001). En séquençant le produit qRT-PCR, nous avons constaté que la séquence de uc001lsz (figure 3B) était conforme à celle de la base de données (http:. //Génome UCSC edu /cgi-bin /hgTables.). La figure 3 Uc001lsz a été régulée à la baisse dans les tissus du cancer de l'estomac, des lignées cellulaires de cancer de l'estomac et d'autres lignées cellulaires de cancer commun. En temps réel qRT-PCR a été utilisée pour déterminer le niveau d'expression de uc001lsz. Trois expériences indépendantes ont été réalisées. Niveau de uc001lsz dans les tissus du cancer gastrique était significativement plus faible que dans les tissus non tumoraux correspondants (n = 77
, P
< 0,001; A). Résultat de séquençage du produit qRT-PCR uc001lsz (B). Le niveau de uc001lsz dans les lignes gastriques de cellules cancéreuses (AGS, MGC-803 et SGC-7901), des lignées cellulaires de cancer du foie (SMMC-7721 et HepG2) et le cancer du poumon lignée cellulaire A549 était inférieur à celui de lignée humaine de cellules épithéliales gastriques Ges- 1, lignée humaine de cellules normales du foie HL-7702 et la lignée cellulaire de fibroblastes de poumon fœtal humain OLAIRE, respectivement; cependant, son niveau dans les lignées cellulaires du cancer de la prostate (DU-145 et PC-3) était supérieur à celui dans la lignée cellulaire epitheliale prostatique humaine RWPE-1 (C) Expression de uc001lsz dans des lignées cellulaires de cancer commun.

Pour obtenir les informations d'expression à propos de uc001lsz dans les cancers communs, nous avons détecté son niveau dans plusieurs lignées de cellules cancéreuses commun. Nous avons constaté que la comparaison avec la lignée cellulaire normale respective, uc001lsz a été faiblement exprimé dans le cancer gastrique (AGS, MGC-803 et SGC-7901), le cancer du poumon (A549) et le cancer du foie (SMMC-7721 et HepG2) lignées cellulaires, tandis que seulement très exprimé dans le cancer de la prostate (du-145 et PC-3) des lignées cellulaires (figure 3C).
valeurs diagnostiques potentielles de H19 et uc001lsz
Nous avons ensuite procédé à une analyse afin de déterminer si H19 ou l'expression uc001lsz a été associée à l'clinicopathologique caractéristiques du cancer gastrique. Comme on le voit dans le tableau 2, le niveau de uc001lsz était associée à des étapes TNM (P = 0,032
). Les taux de détection des positifs et H19 sont uc001lsz 74,0% et 84,4%, respectivement. Les deux d'entre eux sont plus élevés que ceux de l'estomac CEA commune de biomarqueur du cancer (64,0%) et CA19-9 (53,3%) (tableau 2). Les aires sous courbes ROC étaient jusqu'à 0,613, 0,751 et 0,761 pour H19, uc001lsz, et la combinaison, respectivement (figure 4). L'utilisation combinatoire de H19 et uc001lsz légèrement augmenté le value.Table diagnostic 2 La relation entre les niveaux d'expression uc001lsz H19 et (Δ C t) dans les tissus cancéreux présentant des facteurs clinicopathologiques des patients atteints de cancer de l'estomac a
Caractéristiques
Non. des patients (%)
H19
uc001lsz
moyenne ±
P valeur
moyenne ± SD

valeur P
âge (y)
≥ 60
59 (76,6)
8,74 ± 4,67
0,588
18,85 ± 4,94
0,240
< Homme de 60
18 (23,4)
8.08 ± 3.99
17,28 ± 4,85
Sexe
57 (74,0)
8,66 ± 4,81
0,823
18.19 ± 5.01
0,355
Femme
20 (26,0)
8,40 ± 3,44
19,37 ± 4,58
Diamètre (cm) b
≥ 5
39 (52,0)
7,98 ± 4,44
0,282
18,49 ± 5,03
0,682
< 5
36 (48,0)
9.10 ± 4.53 ± 5.11
18.01
CEAB
Positive
48 (64,0)
8,45 ± 4,21
0,882
18.28 ± 4,54
0,593
négatif 27 (36,0)
8.61 ± 5.01
18,92 ± 5,71
CA19-9b
positive
40 (53,3)
8,68 ± 3.87
0,720
18,65 ± 4,64
0,792
négatif 35 (46,7)
8,31 ± 5,14
18.35 ± 5.37
Differentiationc
Eh bien
3 (4.9)
8,28 ± 1,92
0,635
15,34 ± 5,40
0,371
Modéré
33 (54,1)
9,05 ± 4,40
19,37 ± 4,85
Pauvre
25 (41,0)
7,84 ± 5,47
19,54 ± 4,91
lymphatique metastasisc
N0
20 (32,8)
8.95 ± 3.17
0,926
18.55 ± 6.01
0,472
N1 & N2 & 41 (67,2)
9,07 ± 5,25
19,53 ± 4,39
metastasisc distal de N3 M0

58 (95,1)
8,87 ± 4,70
0,258
19.13 ± 5.02
0,617
M1
3 (4.9)
12.00 ± 1.30
20,62 ± 3,74
Invasionc
Tis & T1-T3
20 (32,8)
10.04 ± 3.86
0,237
17,73 ± 4,72
0,105
41 (67,2)
8,53 ± 4,95
T4 19,93 ± 4,95
TNM stagec
0 & I & II
24 (39,3)
9,40 ± 3,86
0,620
17,81 ± 5,52
0,032
III & IV
37 (60,7)
8,79 échantillons ± 5.14
20,49 ± 3,98
tTous sont constitués de 16 échantillons de biopsie endoscopiques et 61 échantillons de chirurgie de patients atteints de cancer de l'estomac.
BNOT détecté pour 2 patients qui étaient effectué un examen endoscopique.
Conly comprend 61 patients de chirurgie.
Figure 4 La courbe ROC.
Expression de uc001lsz était aberrante dans le cancer précoce et de lésions précancéreuses
Enfin, pour observer les valeurs de diagnostic précoce possibles de lncRNA, nous avons mesuré le niveau de uc001lsz dans le cancer précoce et de lésions précancéreuses. Nous avons constaté que le niveau inférieur a été remarquable ces lésions par rapport à celles de (figure 5A) des tissus non tumoraux adjacents correspondants. Le niveau de uc001lsz dans les tissus normaux était significativement plus élevée que dans les lésions pré-cancéreuses et des tissus cancéreux précoce. En outre, son niveau dans les lésions précancéreuses brillait plus élevé que dans les tissus cancéreux précoces (figure 5B). Figure 5 Expression de uc001lsz dans le cancer précoce et de lésions précancéreuses. Le niveau de uc001lsz au début de tissu de changement pathologique est plus faible que dans les tissus normaux appariés (n = 14
, P = 0,0016
; A). Le niveau de uc001lsz dans le tissu normal est significativement plus élevée que dans les lésions précancéreuses et des cancers précoces (B). #P
≪ 0,001; * P
< Rapport de 0,05.
Des études ont montré que ~ 18% de la protéine gènes qui produisent lncRNAs sont associés au cancer de codage, alors que seulement 9% de toutes les protéines humaines gènes codant sont associés avec le cancer [18]. La relation entre lncRNAs et les tumeurs est actuellement devenu l'un des axes d'études sur le cancer.
Il est plus évident que lncRNAs sont rapport aux tumeurs du système digestif [19]. Trois lncRNAs, H19, Hotair et lncRNA fortement surexprimés dans le cancer du foie (HULC), ont été trouvés surexpression dans des carcinomes hépatocellulaires humains (HCC) [20-22]. En outre, l'expression HULC ne se limite pas à la HCC, mais est également exprimé dans les carcinomes colorectaux qui métastasent dans le foie [23].
Etude de sujet lncRNAs liés à l'estomac sont limitées. Sun et al., A trouvé que le niveau de cancer gastrique associé à la transcription 1 (GACAT1), ou AC096655.1-002 expression, était significativement corrélée avec métastase ganglionnaire, métastases à distance, les stades TNM, et la différenciation [17]. Mei et al.
A rapporté que ubiquitine modificateur (SUMO) 1 pseudogène 3, SUMO1P3, pourrait être un biomarqueur potentiel dans le diagnostic du cancer gastrique [16]. Niinuma et al., A trouvé que la surexpression de Hotair était nettement associée à un risque élevé de tumeurs stromales gastro-intestinales [24]. ARN, 7SK petite nucléaire (RN7SK) peut indirectement réguler la tumorigenèse gastrique via le facteur-b positif allongement de la transcription (p-TEFb) [25]. H19 peut jouer un rôle important dans le cancer gastrique par la perte de l'empreinte et d'autres mécanismes [26, 27]. Récent, Cao et al
. méthodes bioinformatiques utilisés pour cribler des profils d'expression lncRNA associés au cancer gastrique [28]. Tout d'abord, deux tableaux d'exons humains publiquement disponibles pour le cancer gastrique et des données pour le tissu normal correspondant ont été téléchargés à partir du GEO. Ensuite, les sondes des matrices d'exons humains ont été ré-annotés. Enfin, les sondes pour cartographier de manière unique lncRNAs au niveau du gène ont été retenus. Total de 88 lncRNAs qui ont été exprimés de manière différentielle dans le cancer gastrique ont été identifiés [28].
Ici, les approches pour le dépistage des lncRNAs associés au cancer gastrique étaient différentes de celles utilisées par Cao et al
. [28]. Pour identifier les lncRNAs remarquablement bas réglementés ou régulés à la hausse dans le cancer gastrique, nous avons d'abord recueilli le cancer gastrique et des échantillons de tissus non tumoraux adjacents de haut examen d'endoscopie gastro-intestinale. A partir des profils d'expression lncRNA obtenus à partir lncRNA analyse de puces à ADN (figure 1), nous avons constaté que parmi les différences significatives lncRNAs exprimées (tableau 1), seule H19 a été trouvée dans d'autres cancers [11, 20, 26, 27]. Par conséquent, il est essentiel de clarifier davantage les signatures cliniques de lncRNAs dans le diagnostic et le traitement du cancer gastrique.
Les études de plus en plus de fonctionnellement caractérisé lncRNAs révèle que ces transcriptions sont importants dans différents processus physiologiques, y compris la différenciation des cellules souches embryonnaires [29], la différenciation des lymphocytes T [30], la différenciation des kératinocytes [31], en particulier, l'expression altérée de lncRNAs pourrait entraîner un cancer [32].
dans la présente étude, nous nous sommes concentrés sur deux lncRNAs, H19 et uc001lsz . Le niveau d'expression de H19 dans les tissus du cancer de l'estomac a été jugée manifestement plus élevé que dans les tissus non tumoraux (figure 2A et B). Avec l'augmentation de l'expression de H19 dans des lignées cellulaires de cancer gastrique (Figure 2D), nous suggérons que H19 peut jouer un rôle important dans la pathogenèse du cancer gastrique. Intéressant, H19 expression n'a pas augmenté dans tous les types de tumeurs. Comme le montre la figure 2D, l'expression H19 est diminuée dans l'hépatocarcinome et de la prostate. Ces résultats attestent également que H19 agit non seulement comme un oncogène, mais aussi comme un suppresseur de tumeur [20, 27, 33]. Matouk et al
. a constaté que le bas-cognement du H19 ARN a entraîné une atténuation presque complète de p57 Kip2 induction en réponse au stress hypoxique [20]. Ils ont en outre constaté que H19 a été associée à l'angiopoïétine (ANG) et le facteur de croissance fibroblastique 18 (FGF-18), dont les fonctions sont impliqués dans la croissance tumorale et la prolifération [20]. Pour comprendre le mécanisme moléculaire par lequel H19 augmente la croissance des cellules cancéreuses de l'estomac, Yang et al.
examiner si H19 affecte la fonction du suppresseur de tumeur p53 [27]. Ils ont constaté que H19 a été associée à p53, et que cette association conduit à une inactivation partielle p53 [27].
Contrairement à H19, uc001lsz niveau d'expression dans les tissus du cancer de l'estomac a été jugée nettement plus faible (figure 3A). Comme le montre la figure 3C, l'expression de uc001lsz dans des lignées cellulaires de cancer gastrique (AGS et MGC-803) est inférieure à celle des cellules épithéliales gastriques (GES-1), mais il n'y avait pas de différence significative entre la CGT-7901 et GES-1 . Peut-être la faible grade de malignité du SGC-7901 conduit à ce résultat. Plus important encore, une plus grande association entre l'expression uc001lsz et le stade TNM a été trouvé (tableau 2). Ces résultats ont confirmé uc001lsz comme un acteur important dans l'inhibition du développement du cancer gastrique. Comme nous l'avons connu, de nombreux lncRNAs sont transcrits à proximité ou au sein codant pour une protéine loci, qui a renforcé l'hypothèse selon laquelle lncRNAs peut avoir cis
-acting effets au sein de ces loci. Mais uc001lsz peut avoir trans
-acting effet dans ses loci codant pour des protéines adjacentes. MUC2
, un membre de la famille des protéines de mucine de gènes, est situé à côté UC001LSZ
. La MUC2 est sécrété sur les surfaces des muqueuses où il est sécrété par les cellules caliciformes dans l'épithélium dans la lumière de l'estomac [34]. Comme l'a signalé, MUC2 était une expression élevée dans le cancer gastrique [35]. Bien que uc001lsz semble jouer comme gène suppresseur de tumeur dans le cancer gastrique et de nombreux autres types de tumeurs, il peut jouer le rôle différent dans le cancer de la prostate où uc001lsz a été fortement exprimée (figure 3C).
Biomarqueurs tumoraux moléculaires sont des outils de diagnostic et de pronostic vital. Nos données montrent que l'expression de uc001lsz est aberrante dans le cancer gastrique précoce et des lésions précancéreuses gastriques (figure 5A). Et les changements extraordinaires apparaissent peut-être dans les lésions précancéreuses (figure 5B). Cette enquête indique que uc001lsz peut être un biomarqueur candidat du cancer gastrique.
Conclusions
En résumé, nous décrivons un profil d'expression de lncRNA qui associée au cancer gastrique. La surexpression de H19 dans les lignes et les tissus cellulaires de cancer gastrique suggère que H19 peut être pris part à un cancer gastrique. L'expression réduite de uc001lsz dans les lignes et les tissus cellulaires de cancer gastrique, ses associations avec le stade TNM, et sa dysrégulation dans le cancer précoce et les lésions précancéreuses suggèrent que uc001lsz peut avoir un rôle important dans la survenue du cancer gastrique et être un biomarqueur potentiel pour le diagnostic de début cancer gastrique
abréviations
ANG:.
Angiopoietin
CA19-9:
Glucides antigène 19-9

CEA: antigène carcino
Ct:
cycle de seuil
DC /CIK:
dendritique cellule /tueur induite par la cytokine
FGF-18:
croissance des fibroblastes facteur 18
GACAT1: cancer gastrique
-Associated transcription 1
H19:
Le partenaire réciproquement imprimé de Igf2
HCC:
carcinomes hépatocellulaires

Hotair:
HOX ARN transcrit antisens
HOX:
Homeobox
HULC:
hautement régulés à la hausse dans le cancer du foie
IGF2:
facteur de croissance analogue à l'insuline 2
IGF2-AS:
IGF -IR et de l'IGF-IIR antisens
IGF-IR:
type de facteur de croissance analogue à l'insuline I récepteur de
IGF-IIR:
Insulin-like type de facteur de croissance du récepteur II
lncRNA:
long ARN non codant
MALAT-1: <

• Détection des sentinelles et non-sentinelles micrométastases des ganglions lymphatiques par tronçonnage série complète et analyse immunohistochimique pour le cancer gastrique
• la liaison EBNA1 et la régulation épigénétique des gènes suppresseurs de tumeurs gastrokine dans des cellules de carcinome gastrique