Effet de la stimulation electroacupuncture à Zusanli acupoint (ST36) sur la motilité gastrique: possible par la PKC et MAPK de transduction du signal

Effet de la stimulation electroacupuncture à Zusanli acupoint (ST36) sur la motilité gastrique: possible par la PKC et MAPK de transduction du signal
Résumé de l'arrière-plan
Electroacupuncture (EA) stimulation a été démontré qu'ils ont un grand potentiel thérapeutique pour le traitement gastro-intestinal troubles de la motricité. Toutefois, aucune preuve n'a clarifié les mécanismes qui contribuent aux effets de la stimulation EA à l'acupoint Zusanli (ST.36). Cette étude a été conçue pour étudier l'effet régulateur de EA stimulation au ST.36 sur la motilité gastrique et d'explorer les mécanismes possibles
Méthodes
Trente rats Sprague-Dawley ont été divisés au hasard en trois groupes:. L'ST.36 groupe, le groupe non-acupoint, et le groupe de contrôle. EA stimulation a été fixé à 2 Hz, mode continu, et 1 V pendant 30 min. La fréquence et la crête moyenne amplitude de la motilité gastrique ont été mesurés par electrogastrography. La protéine kinase C (PKC) et la protéine kinase activée par un mitogene (MAPK), les voies de signalisation ont été évaluées en utilisant des réactions en chaîne par polymérase en temps réel. Caldesmon (CaD) et d'expression calponin (CaP) de protéines dans l'antre gastrique ont été détectés sur des transferts de Western. Un système de traitement vidéo par ordinateur a été utilisé pour évaluer les changements morphologiques dans les cellules musculaires lisses (CML) de l'antre gastrique.: Résultats
EA stimulation à ST.36 ont eu un double effet sur la fréquence et l'amplitude de pointe moyenne. De plus, EA stimulation à ST.36 réglementé l'expression de certains gènes dans les voies de signalisation MAPK et de la PKC, et il réglemente l'expression de la CaD et les protéines CaP. sérum EA induite SMC contractilité. Promotion de la motilité gastrique peut corréler avec la régulation des MAPK6 (ERK3), MAPK13 et prostaglandine synthase 2 (PTGS2) de l'expression des gènes et la régulation négative du collagène de type I, alpha 1 (COL1A1) gène et CaD et CaP expression de la protéine. L'inhibition de la motilité gastrique peut en corrélation avec la régulation du type de récepteur de l'interleukine-1 2 (IL1R2) et métalloprotéinase-9 (MMP9) gènes de la matrice, et la régulation de la CAO et CaP expression de la protéine
. Conclusions
EA stimulation à ST.36 régulée motilité gastrique, et les effets ont été à la fois la promotion et l'inhibition chez les rats. Les mécanismes possibles peuvent en corrélation avec les voies de signalisation MAPK et PKC.
Mots-clés
Electroacupuncture Zusanli gastrique motilité PKC MAPK Contexte
motilité gastrique est l'une des fonctions physiologiques les plus critiques de l'intestin humain. Sans motilité coordonnée, la digestion et l'absorption des nutriments alimentaires ne peuvent pas avoir lieu. La régulation de la motilité gastro-intestinale est complexe et implique la contraction des cellules musculaires lisses (CML). La contraction des CML est principalement régulée par des changements transitoires dans le Ca intracellulaire 2 + concentration [1]. Il existe deux voies majeures impliquées dans ce mécanisme, à savoir, la voie de la kinase RhoA-Rho et de la voie de la protéine kinase C (PKC) [2]. Calponin (CaP), une vitro
substrat bien établi dans des protéines de signalisation par PKC [3], interagit directement avec PKC [4]. Caldesmone (CAD) est une protéine de liaison à l'actine et la myosine qui existe sous deux isoformes, qui sont générés par épissage alternatif [5]. Il existe des preuves d'accumulation pour une voie secondaire dans la régulation de la contraction des muscles lisses qui est PKC dépendante, et cette voie peut être médiée par CaP et activation CaD [6-9]. voies activée par mitogene de la protéine kinase (MAPK) de signalisation ont également été impliqués dans la contraction SMC [10]. Il existe trois grands groupes de MAPK réglementés distinctement qui conduisent à l'expression du gène modifié. Les signaux extracellulaires liés kinases 1 et 2 (ERK1 /2), la kinase c-Jun terminal (JNK) et la MAPK p38 sont connues pour jouer un rôle important dans la réponse de signalisation intracellulaire à des stimuli extracellulaires [11]. En outre, CaP peut faciliter la signalisation ERK-dépendante, jouant ainsi un rôle important dans la régulation de la contraction SMC [12].
Acupuncture, qui a été utilisé depuis des milliers d'années en Chine, de plus en plus utilisé dans le monde entier pour la gestion des différentes maladies [13]. On croit que la stimulation d'un acupoint peut affecter directement les organes compétents et obtenir l'effet de la thérapie de l'acupuncture. EA est une procédure mixte qui stimule une acupoint avec une stimulation électrique au lieu d'avec les manipulations manuelles des aiguilles. De nombreuses études ont évalué les effets et les mécanismes d'EA sur la motilité gastrique [14-20]. Sur la base des éléments de preuve de ces études, EA stimulation a été démontré qu'ils ont un grand potentiel thérapeutique pour le traitement des troubles de la motilité gastro-intestinale. Le Zusanli (ST.36) est l'un des points d'acupuncture les plus couramment utilisés pour les maladies gastro-intestinales. Selon la théorie de la médecine traditionnelle chinoise (MTC), il existe une relation entre ST.36 et la fonction du tractus gastro-intestinal. À ce jour, cependant, aucune preuve n'a clarifié les mécanismes exacts qui contribuent aux effets de EA stimulation.
Par conséquent, en examinant les changements morphologiques et l'activité myoélectrique, la présente étude visait à évaluer l'effet régulateur de EA stimulation au ST.36 acupoint sur la motilité gastrique chez le rat et d'explorer les mécanismes possibles.
Méthodes
Animaux et réactifs
Trente adultes mâles Sprague-Dawley (SD) rats pesant 180-220 g ont été maintenus sur un 12 h éclairage cycle d'obscurité à 25 ± 2 ° C et 60% d'humidité avec un accès libre à la nourriture et de l'eau. rats SD ont été achetés à partir du Centre Expérimental des animaux de la quatrième université médicale militaire. Toutes les expériences animales ont été réalisées conformément aux directives institutionnelles de la quatrième université médicale militaire pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire. Approbation du protocole d'étude a été obtenue auprès du Comité d'éthique de la recherche animale, quatrième université médicale militaire, la Chine. Les animaux ont été répartis au hasard en trois groupes:. Le groupe ST.36, le groupe non-acupoint, et le groupe de contrôle collagénase II, inhibiteur de la trypsine, le dithiothréitol sucre d'alcool, l'albumine de sérum bovin, sans calcium de tampon phosphate salin (PBS ), le glutaraldéhyde, et bleu trypan ont été achetés chez Kit Sigma Chemical Co. L'extraction d'ARN total, SuperScript III transcriptase inverse, et SuperArray PCR master Mix ont été achetés chez Invitrogen Co. Anti-chèvre, anti-souris et anti-lapin anticorps étaient acheté de Shanghai Kangcheng Bio-Engineering Co.
EA procédure de stimulation The ST.36 a été situé à environ 5 mm latéral au péroné des membres postérieurs, alors que le non-acupoint était situé sur le pied arrière à côté de la ST.36 ouvert 5 mm [21]. Les aiguilles ont été insérées 5 mm de profondeur dans la couche musculaire de l'acupoint sélectionné et ont été stimulées par EA à 2 Hz et 2 V en utilisant un stimulateur électrique (G6805-2A; Shanghai Huayi Medical Instrument Factory, Shanghai, Chine). Chaque stimulation a duré 20 minutes en mode continu, et de la stimulation a été effectuée une fois /jour pendant 5 jours. Les rats du groupe témoin ont été soumis à une immobilisation seule sans stimulation pendant 30 minutes à la même heure chaque jour.
Electrogastrography de Electrogastrography a été appliquée en utilisant la Multichannel Physiologic Acquisition du signal et système de traitement (mode RM-6280) après la dernière la stimulation sur le cinquième jour. Après un 12 h rapide (avec un accès libre à l'eau) et 6 h sans boire, les rats ont été anesthésiés par voie intrapéritonéale (i.p.) avec 10% d'uréthane à une dose de 1 g /kg corps puis immobilisés. La première électrode est fixée à la queue, et des électrodes guidées ont été implantées sur la surface séreuse de l'estomac, 0,3 - 0,5 cm au-dessus du pylore. Les électrodes ont été recouvertes de 37 ° C une solution saline normale gaze, relié avec du fil. Les paramètres expérimentaux utilisés étaient les suivants:. Fréquence de 400 Hz, filtre 10 Hz, la vitesse de balayage 2 s /division, la sensibilité de 25 mV, le temps courant continu constant, et l'oscilloscope temps d'enregistrement 1 h [18]
chaîne par polymérase en temps réel réaction (PCR)
Après la dernière stimulation avec EA, les rats ont été sacrifiés. Pour le groupe témoin et le groupe non-acupoint, un rat a été choisi au hasard, respectivement. Pour le groupe EA, nous avons d'abord divisé en EA promouvoir le groupe et le groupe EA inhibant selon les résultats de l'electrogastrography. Et puis, là-bas rats ont été choisis au hasard parmi les deux groupes. tissus gastriques (de antre du pylore 0,8 à 1 cm) ont été coupés en morceaux qui étaient d'environ 0,3 cm x 0,5 cm en taille et immédiatement placés dans -70 ° C l'azote liquide. Des échantillons d'ARN totaux ont été extraits en utilisant TRIZOL de différents groupes selon les instructions du fabricant. la qualité de l'ARN a été évaluée par spectrophotométrie, sur la base du rapport A260 /A280. Des échantillons d'ARN ont été vérifiés pour l'intégrité de l'ARN 18S et 28S par électrophorèse sur gel. L'ARN total (1,5 ug) a été utilisé pour générer de l'ADNc du premier brin SuperScript III avec la transcriptase inverse (1 pi) à partir de l'ARN isolé. Les réactions de PCR en temps réel ont été préparés à l'aide d'un SuperArray PCR Master Mix (Cat. No. PA-112) contenant les gènes de la voie de signalisation MAPK et de la PKC. L'ADNc dilué (102 ul de) a été ajouté à chaque trou correspondant à la puce par PCR. Ensuite, les puces de PCR ont été placées dans l'instrument PCR en temps réel pour la réaction PCR. Les conditions de cyclage sont les suivantes: 95 ° C pendant 10 min, 60 ° C pendant 15 secondes, et 60 ° C pendant 1 min (40 cycles). Les différences dans l'expression des gènes, exprimés sous forme de facteurs de variation, ont été calculées en utilisant la 2 -ΔΔCt méthode.
Western blots de CaD et CaP
Les niveaux de Cad et de protéine CaP ont été détectées par Western blot. Après traitement avec de l'EA, les rats ont été sacrifiés. Les rats ont ensuite été fixées, suivie par une incision de la peau abdominale et du péritoine. Les viscères ont été exposés et le tiers central du corps de l'estomac a été découpé en petits morceaux qui ont été d'environ 0,3 cm x 0,5 cm. Les morceaux ont été immédiatement stockés à -70 ° C dans de l'azote liquide. En bref, des extraits cellulaires (30 ug) à partir de la partie supérieure du tiers du milieu du corps de l'estomac ont été séparés par électrophorèse sur dodécylsulfate de sodium sur gel polyacrylamide (SDS-PAGE) puis transférés sur des membranes de nitrocellulose. Les filtres ont été bloqués avec une solution saline tamponnée au Tris (TBS) /5% de lait, suivie d'une incubation avec des anticorps polyclonaux contre CaD (1: 3000 dilution), CaP (1: 3000 dilution), et β-actine (1: 10000). Une fois que les membranes ont été lavées, elles ont été mises en incubation avec des anticorps conjugués à la peroxydase secondaire dilué 1: 5000 dans du TBS avec 0,01% de Tween 20. Le système de détection d'anticorps a été utilisé, et les membranes ont été exposées à un film à rayons X selon les instructions du fabricant.
préparation du sérum
Le sérum a été préparé comme décrit précédemment avec des modifications [22]. Après la dernière stimulation avec EA, tous les rats ont été sacrifiés. Ensuite, 6 ml de sang ont été prélevés dans l'artère carotide de chaque rat. Le sang a été maintenue encore pendant 1 heure, puis centrifugé à 3000 rpm pendant 15 min. Effets du sérum a été recueilli, filtré pour éliminer les bactéries, et 1,5 ml a été emballé dans un tube EP, qui a été stocké à -70 ° C dans de l'azote liquide. De sérum EA sur SMC contractilité
Cinq rats SD normales étaient ip anesthésié avec 10% d'uréthane à une dose de 1 g /kg de poids corporel. Après avoir été anesthésié, la peau abdominale et du péritoine ont été incisés, et les viscères ont été exposés. a été coupé sur l'ensemble de l'estomac et les tissus de l'antre gastrique ont été isolés et immédiatement placé dans l'oxygène saturé PBS avec de la pénicilline (100 U /ml) et de la streptomycine (100 ug /ml) à 4 ° C. Après avoir été rincés, les tissus ont été transférés à HEPES d'oxygène saturé, la propagation et fixés sur une plaque de gel de silice avec une aiguille fine. La couche muqueuse a été soigneusement coupée, l'exposition de la muqueuse circulaire, qui est clipsé dans les 9 - 10 bandes de muscle (1 mm x 4 mm), placés dans une solution de Tyrode, et maintenue à 4 ° C dans le réfrigérateur pendant environ 15 min. Les bandes de muscle ont été digérées dans 1% de collagénase de type II, un inhibiteur de trypsine à 0,05%, 0,05% de sucre en alcool dithiothréitol et 0,2% de sérum albumine bovine enzyme dans un bain-marie pendant 25 min à 36 ° C. Après digestion, le mélange a été rincé avec de l'HEPES sans enzyme, incubée pendant 30 minutes et filtré avec un tamis 200 de l'écran pour recueillir les CML gastriques individuelles libres. La viabilité cellulaire a été mesurée avec le test au bleu Trypan. Les cellules vivantes sont plus de 95% à une densité de 10 6 cellules /ml.
Les COGES isolés ont été répartis au hasard dans le groupe normal de sérum, un groupe de sérum ST.36, et le groupe de sérum non-acupoint. Les suspensions CML (50 ul) à une densité de 1,0 x 10 6 cellules /ml ont été placées dans des plaques à 96 puits. Chaque échantillon de sérum a été inactivée après 30 minutes dans un bain-marie à 56 ° C, puis dilué à 1: 2 avec de l'HEPES. Le sérum (50 ul) à partir de différents groupes a été ajouté à CML, mélangé avec une pipette pendant 30 s, et fixé avec 30 ul de 2,5% de glutaraldéhyde. longueur des cellules a été évaluée avec un système de traitement vidéo informatisée (DP2-BSW), qui a été utilisé pour calculer le pourcentage de retrait. Le pourcentage de rétrécissement cellulaire = (longueur de la cellule avant le traitement - la longueur des cellules après le traitement). /Longueur de la cellule avant le traitement × 100% Analyse statistique Le plus
Les données ont été exprimées en moyenne ± E.T. analyse unidirectionnelle de la variance suivie par le test de comparaisons multiples de Bonferroni a été appliquée avec le logiciel SPSS 10.0. Les valeurs de ACt obtenues à partir de la PCR en temps réel, qui ont servi à calculer les différences de changement de pli (exprimé ici comme pour cent de contrôle), ont également été utilisés pour l'analyse statistique. A p
-value < 0,05 ou un facteur de variation > Effets de résultats de 2 a été définie comme statistiquement significative pour toutes les analyses. De EA sur la motilité gastrique
EA au ST.36 produit des changements importants dans la valeur absolue de l'amplitude maximale moyenne et la fréquence par rapport au témoin ou les groupes non-acupoint (P
< 0,01). En revanche, EA à la non-acupoint n'a pas induit d'importants changements dans la motilité gastrique par rapport au groupe de contrôle (fichier additionnel 1: Figure S1). Deux types de modèles de moteur gastriques ont été observés pour le groupe ST.36 dans les 10 rats testés selon le pic moyenne: rats avec pic moyen positif ont été jugés à la promotion de modèle, tandis que les rats avec un pic moyen négatif ont été jugés à la promotion de modèle. Les résultats ont montré 5 (50,0%) des rats ont montré la ST.36 promotion motif et 5 (50,0%) des rats ont montré l'inhibition ST.36 motif. Chez le rat, avec le motif de ST.36 promouvoir, les valeurs moyennes d'amplitude et de fréquence de pics étaient 47,13 ± 0,44 et 0,19 ± 0,06, respectivement. Chez les rats avec le motif ST.36 inhibant, les pics d'amplitude et de fréquence des valeurs moyennes étaient -43,41 ± 0,62 et 0,17 ± 0,03, respectivement. (Fichier supplémentaire 2: Tableau S1)
Effets de EA sur la PKC et de signalisation MAPK
EA au ST.36 considérablement réglementé l'expression de certains gènes dans la PKC et de signalisation MAPK. Le tableau 1 présente les résultats de l'analyse de puces à ADN du groupe favorisant ST.36 (par rapport au groupe témoin). L'expression de plusieurs gènes a été augmenté après stimulation EA, y compris ERK3, MAPK13, IL1R1, PRKCA et PTGS2. D'autres gènes ont montré une diminution d'expression après EA stimulation, y compris IL1R2. Le tableau 2 énumère les résultats de l'analyse de puces à ADN du groupe inhibant ST.36 (par rapport au groupe témoin). L'expression du gène de IL1R2 et MMP9 ont diminué après EA stimulation.Table variation de 1 Gene comparant EA promotion groupe avec le groupe de contrôle de signal de voie
Gene
Sites
EA /contrôle (changement Fold)
EA /commande (Fold haut ou bas-régulation)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
2.39
2.39
MAPK
MAPK13
D10
2.86
2.86
PKC
IL1R1
F08
2.18
2.18
PKC
PRKCA
G01
2.40
2.40
PKC
PTGS2
G02
2.72
2.72
PKC
IL1R2
F09
0.26
-3.85
Pliez changement (2-ΔΔCt) est l'expression du gène normalisé (2-ACt) dans l'échantillon d'essai divisé par l'expression du gène normalisé (2-ACt) dans l'échantillon de contrôle. Pliez-régulation représente les résultats de changement de pli d'une manière biologiquement significative. Pliez-le changement des valeurs supérieures à un indiquent un ou en positif la régulation, et le pli-régulation est égale à la fois le changement. Changement Pliez les valeurs inférieures à un indiquent un négatif ou la régulation, et le pli-régulation est l'inverse négatif du facteur de variation.
Tableau 2 Gene changement comparant groupe inhibitrice EA avec le groupe de contrôle de la voie de signal
Gene
Sites
EA /contrôle (Pliez changement)
EA /contrôle (Pliez le haut ou down-regulation)

PKC
IL1R2
F09
0.24
-4.26
PKC
MMP9
F11
0.21
-4.68
Pliez changement (2-ΔΔCt) est l'expression du gène normalisé (2-ACt) dans l'échantillon d'essai divisé par l'expression du gène normalisé (2-ACt) dans l'échantillon de contrôle. Pliez-régulation représente les résultats de changement de pli dans un biologiquement manière significative. Pliez-le changement des valeurs supérieures à un indiquent un en positif ou la régulation, et le pli-régulation est égal au facteur de variation. Pliez-le changement des valeurs inférieures à un indiquent un négatif ou la régulation, et le pli -Règlement est l'inverse négatif du facteur de variation.
le tableau 3 présente les résultats de l'analyse des microréseaux du groupe ST.36 promotion (par rapport au groupe non-acupoint). l'expression du gène COL1A1 a été augmenté après EA stimulation. l'expression des gènes IL1R2 et SERPINE1 ont diminué après EA stimulation. le tableau 4 énumère les résultats de l'analyse des microréseaux du groupe ST.36 inhibition (par rapport au groupe non-acupoint). la plupart des gènes ont montré une diminution expression après EA stimulation, y compris le ERK3, JNK3, p38bMAPK, MAPK13, p38MAPK, ERK1, FGF2, IL1R1, IL1R2, MYC, PRKCA, et les gènes PTGS2. L'expression du gène COL1A1 a augmenté après EA stimulation.Table 3 Gene changement comparant groupe promoteur EA avec la voie de signal de non-acupoint groupe
Gene
Sites
EA /non-acupoint (changement Fold)
EA /non-acupoint (Pliez le haut ou down-regulation)

PKC
COL1A1
F05
3.60
3.60
PKC
IL1R2
F09
0.39
-2.54
PKC
SERPINE1
G04
0.48
-2.07
Pliez changement (2-ΔΔCt) est l'expression du gène normalisé (2-ACt) dans l'échantillon d'essai divisé par l'expression du gène normalisé (2-ACt) dans l'échantillon de contrôle. Pliez-régulation représente les résultats de changement de pli dans un biologiquement manière significative. Pliez-le changement des valeurs supérieures à un indiquent un en positif ou la régulation, et le pli-régulation est égal au facteur de variation. Pliez-le changement des valeurs inférieures à un indiquent un négatif ou la régulation, et le pli -Règlement est l'inverse négatif du facteur de variation.
Tableau 4 Gene changement comparant groupe inhibitrice EA avec signal de voie de non-acupoint groupe
Gene
Sites de

EA /non-acupoint (Pliez changement)
EA /non-acupoint (Pliez le haut ou vers le bas-règlement)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
0,18
-5,67
MAPK
MAPK10 (JNK3)
D07
0,42
-2.40
MAPK
MAPK11 (p38bMAPK)
D08
0,39
-2.58
MAPK
MAPK13
D10
0,28
-3.58
MAPK
MAPK3 (ERK1)
G11
0,26
-3,83
MAPK
MAPK14 (p38MAPK)
D11
0.47
-2.13
PKC
FGF2
F07
0.37
-2.67
PKC
IL1R1
F08
0.30
-3.31
PKC
IL1R2
F09
0.36
-2.81
PKC
MMP9
F11
0.22
-4.48
PKC
MYC
F12
0.39
-2.59
PKC
PRKCA
G01
0.23
-4.27
PKC
PTGS2
G02
0.19
-5.36
PKC
COL1A1
F05
4.81
4.81
Pliez changement (2-ΔΔCt) est l'expression du gène normalisé (2-ACt) dans l'échantillon d'essai divisé par l'expression du gène normalisé (2-ACt) dans l'échantillon de contrôle. Pliez-régulation représente les résultats de changement de pli dans un biologiquement manière significative. Pliez-le changement des valeurs supérieures à un indiquent un en positif ou la régulation, et le pli-régulation est égal au facteur de variation. Pliez-le changement des valeurs inférieures à un indiquent un négatif ou la régulation, et le pli -Règlement est l'inverse négative du facteur de variation
. Effets de EA sur CaD et CaP expression de la protéine
Stimulation avec EA augmenté de manière significative CaD et CaP expression de la protéine dans le groupe inhibiteur de ST.36 par rapport à la non-acupoint groupe, alors que la stimulation avec EA diminué de manière significative CaD et CaP expression de la protéine dans ST.36 promotion groupe par rapport au groupe non-acupoint (Figure 1A, B, C, D). Figure 1 Effets de stimulation sur EA Caldesmon (CaD) et calponine (CaP) les niveaux de protéines. A. Expression de Caldesmon niveaux de protéines par Western blot. les niveaux de protéine B. densitométrique analyse Caldesmon normalisées par β-actine; C. Expression de calponin niveaux de protéines par Western blot; D densitométrique analyse calponine Les niveaux de protéines normalisées par β-actine. CaD: Caldesmon; CaP: calponin; 1: groupe non-acupoint; 2-4: groupe inhibiteur EA; 5-7: EA promotion groupe. * P < 0,05 COMPARD au groupe non-acupoint
Effets de sérum EA sur SMC contractilité
Comme indiqué dans le fichier supplémentaire 3:. Figure S2 et le fichier complémentaire 4: Tableau S2, la morphologie des cellules a été observée au microscope optique après traitement avec différents les types de sérum. Il n'y avait pas de différences dans la longueur de la cellule, avant l'addition de sérum (p > 0,05). sérum ST.36 augmenté SMC contractilité (60,22 ± 3,84 um) par rapport au sérum de contrôle (96,02 ± 6,24 um) ou le sérum non-acupoint (97,33 ± 6,97 um). Le pourcentage de contraction est de 41% après stimulation avec du sérum ST.36, alors que les pourcentages de contraction ont été de 7% et 10%, soit après stimulation par le sérum non point d'acupuncture ou de sérum témoin, respectivement Discussion La présente étude a
démontré
. que EA stimulation à ST.36 a eu un effet régulateur sur la motilité gastrique chez les rats qui étaient soit stimulatrice ou inhibitrice. L'effet stimulant de l'évaluation environnementale peut agir à travers les voies de signalisation MAPK et PKC.
Les effets de EA sur la motilité gastrique ont été largement étudiés chez les animaux et les humains en raison de la disponibilité des electrogastrography. Il est bien connu que l'activité myoélectrique de l'estomac se compose d'ondes lentes et des pointes. Spikes sont directement associés à l'apparition de contractions. ondes lentes n'évoquent la contractilité gastro-intestinal, mais ils déterminent la fréquence maximale des contractions gastriques.
Le acupoint le plus souvent utilisé dans le traitement des troubles gastro-intestinaux est l'ST.36. Il est communément admis que l'acupuncture peut exercer la promotion et les effets sur la motilité gastro-intestinale selon la acupoint stimulée inhibant. Chez l'homme, il a été démontré que EA stimulation à ST.36 avait un double effet sur le péristaltisme de l'estomac qui sont soit facilitante ou inhibiteur [15, 23]. Bien que les patients souffrant de maladies gastro-intestinales ont bénéficié de l'application de l'acupuncture au ST.36, mais les mécanismes moléculaires exacts ne sont pas encore clair. Chez les chiens, EA à ST.36 augmenté la régularité des ondes lentes gastriques [24, 25]. Chez les rats conscients, EA stimulation à ST.36 induit des effets doubles, qui étaient soit facilitatrice ou inhibitrice, sur la motilité gastrique [26, 27]. Une étude plus approfondie a révélé que l'effet stimulateur est médié par des voies cholinergiques, tandis que l'effet inhibiteur est indépendant de la voie sympathique [28]. La théorie générale de la médecine d'acupuncture repose sur le concept du Yin et du Yang, et l'acupuncture est censé modifier le déséquilibre entre le Yin et le Yang. Les effets de l'acupuncture sur l'équilibre Yin et Yang peuvent être médiés par l'interaction entre la neurotransmission de GABA et glutamate dans le tronc cérébral.
Dans le présent document, EA stimulation à ST.36 a été efficace dans la régulation de la motilité gastrique, comme l'a démontré par l'augmentation significative du pic d'amplitude et de fréquence. En outre, l'absence d'une telle réponse quand la même stimulation a été réalisée à la non-point d'acupuncture est une indication de la spécificité de cet effet. Selon l'amplitude de crête et la fréquence, le groupe ST.36 a été divisée en favorisant et inhibitrices modèles, puisque EA a montré un double effet. Pour explorer davantage les mécanismes par lesquels EA réglemente la motilité gastrique, nous avons isolé les CML de l'estomac et observé l'effet du sérum ST.36 sur SMC contractilité en utilisant des méthodes d'essais pharmacologiques sérologiques. Les résultats ont montré que le sérum a augmenté significativement ST.36 contractilité SMC; . Alors que les effets produits par le sérum normal ou non-acupoint étaient pas évidentes
enquêtes récentes ont suggéré que les effets de la stimulation EA sont médiés par le système opioïde [29] ou par son effet stimulant sur l'activité vagale [30]; Cependant, les mécanismes précis par lesquels EA affecte la motilité gastrique ne sont pas pleinement compris. Des résultats antérieurs ont également indiqué que les niveaux de PKC ont été augmentés après stimulation par EA [31]. Par conséquent, nous avons sélectionné les voies PKC et MAPK comme cibles pour la médiation des effets stimulateurs de l'EA sur la mobilité gastrique. De plus, CaP et CaD peuvent jouer un rôle dans la régulation de la motilité gastro-intestinale lors de l'adaptation physiologique et pathologique. Up-régulation de CaP et d'expression de CaD inhibé la motilité gastro-intestinale, et la régulation de CaP et d'expression de CaD promu motilité gastro-intestinale [32, 33]. ERK1 /2, un membre de la famille des MAPK a été montré pour jouer un rôle important dans la régulation de la contraction des muscles lisses [34]. Selon nos résultats de puces à ADN, la promotion de la motilité gastrique peut corréler avec la régulation des MAPK6 (ERK3), MAPK13, et l'expression du gène PTGS2, et la régulation de l'expression génique COL1A1. L'inhibition de la motilité gastrique peut en corrélation avec la régulation de IL1R2 et l'expression du gène MMP9. Western blots ont montré une régulation de CaD et CaP expression de la protéine inhibée motilité gastrique, tandis que la régulation des CaD et CaP expression de la protéine promu la motilité gastrique. Ces résultats démontrent que CaD et CaP peuvent jouer un rôle dans la régulation de la motilité gastro-intestinale lors de l'adaptation physiologique et pathologique.
Il y avait quelques limitations dans la présente étude qui devraient être mentionnés. Premièrement, nous n'avons pas enquêté si les inhibiteurs de la PKC et MAPK pourraient affecter ou bloquer l'effet réglementaire de EA stimulation à ST.36 sur la mobilité gastrique. D'autres études seront nécessaires pour étudier les influences des inhibiteurs de la PKC et de MAPK. Deuxièmement, les enquêtes futures seront axées sur la compréhension pleinement les rôles de chaque changement dans l'expression des gènes sur la régulation de la mobilité gastrique.
Conclusions
En résumé, nos résultats démontrent que EA stimulation à ST.36 régulée motilité gastrique. EA stimulation à ST.36 exercée double effet sur la motilité gastrique qui étaient soit stimulatrice ou inhibitrice. En outre, la régulation de la motilité gastrique peut corréler avec les voies de signalisation MAPK et PKC.
Qi Yang Notes, Yan-Dong Xie a contribué également à ce travail.
Déclarations
Remerciements
Cette étude a été soutenue par des subventions de la national science Foundation naturelles de la Chine (n ° 30801487)
matériel supplémentaire électronique
12906_2013_1722_MOESM1_ESM.doc fichiers supplémentaires 1:. Figure S1: Effets de l'EA stimulation sur la motilité gastrique. motilité gastrique a été mesurée par electrogastrography. A. Contrôle, B. ST.36, C. Non-acupoint. Stimulation avec EA à ST.36 a augmenté l'amplitude maximale moyenne et la fréquence. ondes gastriques ont montré deux changements dans le groupe ST.36 par rapport au groupe témoin ou non-acupoint. Les valeurs sont exprimées comme la moyenne ± E.T. (N = 10
). * P
< 0,05, ** p
< 0,01 vs
. groupe de contrôle. #p
< 0,05, ## p
< 0,01 vs.
groupe non-acupoint. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM2_ESM.doc fichiers supplémentaires 2: Tableau S1: Effets de EA sur l'activité myoélectrique gastrique. Le groupe ST.36 a été divisée en EA promotion et EA inhibant les groupes selon les ondes gastriques. Les valeurs sont exprimées en moyenne ± S.D (n = 5
). (DOC 26 Ko) 12906_2013_1722_MOESM3_ESM.doc fichier supplémentaire 3: Figure S2: Effets de l'EA stimulation sur la contractilité gastrique SMC. La morphologie cellulaire a été observée à l'aide d'un microscope optique (× 200 grossissement). La longueur de la cellule, et le pourcentage de contraction est mesurée à l'aide d'un ordinateur l'image Système d'analyse. O. CML; A. CML + sérum de contrôle; sérum B. CML + ST.36; C. CML + de sérum non-acupoint. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM4_ESM.doc fichier complémentaire 4: Tableau S2: Effets du sérum sur SMC contractilité. Comme évalué par le système de traitement vidéo informatisée, le sérum Zusanli a abouti à la contractilité significative de CML. Les résultats sont exprimés par la moyenne ± S.D (n = 10
). * P
< 0,05 ** p
< 0,01 vs.
groupe de sérum de contrôle. #p
< 0,05, ## p
< 0,01 vs.
non-acupoint sérum. (DOC 28 Ko) Auteurs de fichiers originaux soumis pour les images
Voici les liens vers les auteurs originaux soumis les fichiers pour les images. 12906_2013_1722_MOESM5_ESM.tiff Auteurs fichier d'origine pour la figure 1 Intérêts concurrents
Les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts.
Auteurs contributions
QY a réalisé les études de génétique moléculaire, ont participé à l'alignement de séquences et a rédigé le manuscrit. YDX, MXZ, BH a réalisé les immunoessais. CZ HYLi, RZ a participé à l'alignement des séquences. MQ, YXH participé à la conception de l'étude et a effectué l'analyse statistique. JJW conçu de l'étude, et a participé à sa conception et la coordination et a contribué à la rédaction du manuscrit. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

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