phénotypes moléculaires immunohistochimique de cancer gastrique basé sur SOX2 et CDX2 prédire les résultats du patient

phénotypes moléculaires immunohistochimique de cancer gastrique basé sur SOX2 et CDX2 prédire les résultats des patients
Résumé de l'arrière-plan
cancer gastrique reste un grave problème de santé dans le monde entier. Les patients bénéficieraient grandement de la découverte de nouveaux biomarqueurs qui prédisent les résultats avec plus de précision et de permettre un meilleur traitement et les décisions de suivi. Ici, nous avons utilisé, une étude observationnelle rétrospective pour évaluer l'expression et la valeur pronostique de facteurs de transcription SOX2 et CDX2 dans le cancer gastrique.
Méthodes
SOX2, CDX2, MUC5AC et d'expression MUC2 ont été évalués dans 201 tumeurs gastriques par immunohistochimie . SOX2 et d'expression de CDX2 ont été croisées avec des données clinicopathologiques et de suivi afin de déterminer leur impact sur le comportement de la tumeur et les résultats. En outre, les locus SOX2 de la copie numéro état a été évalué par FISH (N = 21) et Copy Number Variation Assay (N = 62) de SOX2 de de. Les résultats ont été exprimés dans 52% des tumeurs gastriques et était significativement associé avec le sexe masculin, le stade T et N scène. En outre, l'expression de SOX2 prédit une moins bonne survie des patients, et la combinaison avec CDX2 défini deux phénotypes moléculaires, SOX2 + CDX2 - contre SOX2 -CDX2 +, qui prédisent le pire et le meilleur long le résultat du patient à long terme. Ces profils combinés avec des paramètres clinicopathologiques stratifier le pronostic des patients atteints de tumeurs intestinales et en expansion et dans ceux sans signes d'invasion veineuse. Enfin, SOX2
nombre de copies de locus gains ont été trouvés dans 93% des échantillons ayant atteint le seuil d'amplification de 14% et de manière significative l'association avec l'expression de la protéine. Conclusions de
Nous avons montré, pour la première fois, que SOX2 combinés avec le profil d'expression de CDX2 dans le cancer gastrique séparer les patients en différents groupes pronostiques, complétant les informations clinicopathologique. Nous démontrons en outre un mécanisme moléculaire pour l'expression de SOX2 dans un sous-ensemble des cas de cancer de l'estomac.
Mots-clés
SOX2 CDX2 cancer gastrique Pronostic de survie Contexte
Le cancer gastrique est l'un des cancers les plus fréquemment diagnostiqués et maintenant la troisième cause principale des décès liés au cancer dans le monde [1]. classification Laurén divise le cancer gastrique en deux principaux types histologiques: intestinal et diffus [2]. Ils présentent des caractéristiques morphologiques, cliniques et épidémiologiques distinctes et on pense qu'ils se développent à partir de l'activation des mécanismes moléculaires indépendants. Les données épidémiologiques montrent que, dans la plupart des cas, le cancer gastrique ne se pose pas de novo
de l'épithélium gastrique normale, mais résulte d'un processus en plusieurs étapes, par des altérations génétiques et épigénétiques successifs dans plusieurs gènes. Contrairement au type diffus, pour laquelle les lésions prédisposant ne sont pas bien établies, la succession d'événements conduisant à un cancer gastrique de type intestinal est bien décrite. Selon la cascade de la Correa, elle se développe de manière progressive, généralement initiée par un processus inflammatoire déclenchée par Helicobacter pylori
, qui peut évoluer vers multifocales gastrite atrophique, métaplasie intestinale (GI), la dysplasie et finalement adénocarcinome [3].
Même si il y a eu une baisse constante de l'incidence du cancer de l'estomac à l'échelle mondiale, l'expansion et le vieillissement de la population mondiale prévoit une augmentation du nombre de cas et, malgré les derniers développements dans le diagnostic et le traitement, le pronostic des gastriques patients atteints de cancer reste pauvre. Cela se traduit par un taux de survie à 5 ans de pas plus de 25% en Europe [4]. La plupart des patients atteints de cancer gastrique ont avancé de la maladie au moment du diagnostic pour qui la seule option de traitement repose sur l'ablation chirurgicale complète de la tumeur, avec une vaste dissection des ganglions lymphatiques qui peut être complétée par l'administration de néoadjuvante ou chimiothérapie adjuvante [5]. Le plus important facteur pronostique de survie influençant ainsi que le choix de traitement est le stade TNM. Cependant, une couche supplémentaire de complexité provient de l'observation que les patients avec la même mise en scène montrent souvent une évolution clinique différente, mettant en évidence l'hétérogénéité du cancer gastrique [6]. Ceci suggère que les propriétés biologiques intrinsèques uniques de ces tumeurs peuvent avoir un impact significatif de leur potentiel agressif. Par conséquent, il y a encore un besoin urgent de découvrir des biomarqueurs pronostiques supplémentaires pour prédire les résultats avec plus de précision et, par conséquent, pour aider à prendre des décisions de traitement mieux informées par rapport à la thérapie. Comme les tumeurs qui sont plus différenciés généralement se comporter d'une façon moins agressive, nous avons interrogé la pertinence des deux marqueurs de différenciation, SOX2 et CDX2, pour le comportement biologique des cancers gastriques. Ces marqueurs sont exprimés de manière différentielle le long de la chaîne d'événements qui mènent au cancer gastrique et sont étroitement associés à l'estomac et la différenciation intestinale, respectivement [7].
CDX2 est un facteur homeobox transcription spécifique intestin dont la fonction assure le développement et l'entretien des la différenciation intestinale de l'intestin et des sites ectopiques, qui a été bien établie dans des modèles animaux [8, 9]. Il est largement connu que CDX2 est exprimée en métaplasie intestinale humaine de l'estomac et de l'œsophage [10]. Il a été montré pour être également exprimé dans la dysplasie renforçant ainsi son rôle en tant que biomarqueur de la progression dans les stades prénéoplasiques de la cancérogenèse gastrique [11].
SOX2 est un membre de la SOX (SRY liées HMG Box) famille de facteurs de transcription , codée par un gène exon unique fortement conservé. SOX2 joue divers rôles au cours du développement et de la différenciation cellulaire, la première orchestrer embryogenèse chez les mammifères [12] et contribuant ensuite à la morphogenèse normal et l'homéostasie des épithéliums de l'intestin antérieur dérivé de l'oesophage, des poumons et de la trachée [13]. À l'âge adulte, SOX2 est exprimée dans une variété de tissus, à savoir dans l'épithélium malpighien qui tapissent l'œsophage et l'épithélium glandulaire de l'estomac. Il a été montré, chez la souris, cette expression Sox2 contribue à toutes les lignées de cellules qui se trouvent normalement dans l'estomac, ce qui suggère un rôle important pour la différenciation gastrique [14]. En outre, une expression anormale de SOX2 a été observée dans les tumeurs du cerveau, du sein, du poumon et de l'oesophage [15-17]. Cependant, dans le contexte du cancer gastrique, son rôle reste énigmatique et doit être clarifiée [18-20]. En outre, son interaction avec CDX2 reste inexplorée.
Notre objectif était d'analyser la pertinence clinique de SOX2 et CDX2 expression dans la biologie du cancer gastrique. Les résultats obtenus montrent que leur expression dans les tumeurs primaires a une valeur pronostique pertinente pour les patients atteints de cancer gastrique.
Tissus humains de méthodes et des échantillons d'ADN
Deux cent un cas de formaline fixe paraffine (FFPE ) des échantillons provenant de patients atteints d'un adénocarcinome gastrique subissant une chirurgie au Centro Hospitalar S. João, Porto, Portugal entre 1988 et 2010 ont été étudiés. Les cas choisis sont ceux avec le matériel disponible en paraffine, clinicopathologique et les données de suivi obtenu à partir de la pathologie et de services de chirurgie de Centro Hospitalar S. João. De ceux-ci, soixante-sept échantillons ont été fournis sous forme d'un microréseau tissulaire (TMA), avec 2 noyaux réplicats de chaque échantillon, à partir de la tumeur et des tissus Biobanque du même département de pathologie. L'ADN génomique de la tumeur (ADNg) a été obtenu à partir de 62 cas inclus dans la TMA. ADNg a également été extrait à partir d'échantillons FFPE de deux muqueuses gastriques normales en utilisant le kit de purification d'ADN génomique (Citomed, Lisbonne, Portugal), et utilisés comme témoins. Tous les échantillons de la Biobanque ont été obtenus avec le consentement éclairé des patients. L'utilisation d'échantillons rétroactifs à partir de laquelle le consentement éclairé ne peut être obtenue est autorisée pour les études de recherche par la loi portugaise. Cette étude a été approuvée par le comité d'éthique du Centro Hospitalar S. João.
Immunohistochimie
sections de tissu FFPE avec 4 um à partir de spécimens chirurgicaux et TMA ont été soumis à l'immunohistochimie pour SOX2, CDX2, MUC5AC et MUC2, suivant des méthodologies standard. Brièvement, après déparaffinage et réhydratation, la récupération de l'antigène a été effectuée dans un IHC-Tek Epitope Steamer Set (IHC mondiale, Woodstock, MD, USA), pendant 40 minutes avec 10 mM de tampon citrate, pH 6,0 (CDX2) ou 10 mM, pH 8,0 EDTA (SOX2). Désialylation a été réalisée pour la détection MUC2, avec 0,1 U /ml de neuraminidase à partir du type Clostridium perfringes VI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) en tampon acétate de sodium pH 5,5 pendant 2 heures à 37 ° C. La peroxydase endogène a été bloquée avec 3% de peroxyde d'hydrogène dans du methanol pendant 10 minutes. L'incubation avec des anticorps primaires pour CDX2 (1:50 dilution, CDX2-88 clone, BIOGENEX, San Ramon, Californie, USA), MUC5AC (dilution 1:10, CLH2 clone) et MUC2 (1:10 dilution, PMH1 clone) a été réalisée nuit, à 4 ° C. Les sections ont ensuite été incubées avec un lapin anticorps secondaire anti-souris marqué à la biotine, suivie par le /système de détection de avidine biotine-peroxydase (kit Vectastain ABC, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Pour SOX2 coloration, l'incubation avec l'anticorps primaire (dilution 1:50, SP76 clone, Cell Marque, barbillons, CA, USA) a été effectuée pendant 1 h à température ambiante et la détection a été effectuée à l'aide du Dako REAL ™ Envision ™ Système de détection de peroxydase /DAB + (Dako, Glostrup, Danemark) selon les instructions du fabricant. La détection de l'expression a été réalisée avec 3,3'-diaminobenzidine (DAB) (Sigma, St. Louis, MO, USA) des coupes de tissus ont été colorées avec de l'hématoxyline de Gill (Leica Microsystems, Amersham, Bucks, Royaume-Uni), déshydraté, clarifié et monté. une muqueuse gastrique normale a été utilisé comme témoin positif pour l'expression et SOX2 MUC5AC et la muqueuse colique normale a été utilisé comme témoin positif pour l'expression et CDX2 MUC2. Les cas ont été considérés comme positifs lorsque plus de 5% des cellules ont été colorées avec chaque anticorps avec le consensus des trois observateurs (VC; LD et RA).
Fluorescence In Situ de Hybridation (FISH)
FISH a été utilisé pour évaluer l'état d'amplification de SOX2 dans 21 échantillons, en utilisant un essai de 2 couleurs comme décrit par Bass et al
[17]. Une sonde recouvrant le locus 3q26.33 (BAC clone CTD-2348H10) a été utilisé pour déterminer SOX2
nombre de copies et a été comparée à une hybridation de la sonde de référence à 3p22.3-3p22.2 (BAC clone RP11-286G5), acheté de Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). La sonde cible a été marquée avec la digoxigénine (DIG-11-UTP, Roche, Mannheim, Allemagne) et détecté avec un anticorps anti-digoxigénine-fluorescéine (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Allemagne) et la sonde de référence a été marqué à la biotine (BioPrime® système de marquage d'ADN, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) et détecté avec un CY anticorps 3-avidine (Jackson Immunoresearch Lab, West Grove, États-Unis). de quatre um diapositives de chaque échantillon d'adénocarcinome gastrique ont été déparaffinées, réhydratés et placés dans une solution de pré-chauffé de NaSCN 1 M à 80 ° C pendant 10 min. Les échantillons ont été digérés avec 6mg /ml de pepsine (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) dans HCl 0,02N, pH 2 pendant 30 minutes à 37 ° C. mélange de la sonde dans 50% de formamide dans 2 x SSC a été codenatured avec de l'ADN nucléaire à 94 ° C pendant 3min. L'hybridation a été réalisée pendant 30h à 37 ° C. Nuclei ont été contre avec une solution de montage DAPI-Vectashield (Vector, Burlingame, États-Unis). Pour chaque cas, un minimum de 67 cellules ont été analysées au microscope à fluorescence (Zeiss Axio Z1) et des images ont été acquises avec un grossissement x 1000, en utilisant une came MRm Zeiss Axio et la Axiovision Rel. le logiciel 4.8. Le rapport entre le nombre de SOX2, et les signaux de la sonde de référence est calculé pour chaque cellule individuelle et la moyenne des rapports a été déterminé pour chaque cas. L'amplification génique a été considéré comme à chaque fois que la moyenne était de ≥2.
Copy Number Variation (CNV) Assays
Le test CNV a été réalisée en utilisant un spécifique TaqMan® Copy Number Assay (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) après la les instructions du fabricant. En bref, PCR multiplex pour SOX2
(cible) et Rnase P
(contrôle endogène) ont été réalisées sur un système ABI Prism7500 rapide PCR en temps réel en utilisant le logiciel v2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA, États-Unis ). Vingt nanogrammes de ADNg et un contrôle non-modèle ont été analysés en quatre. Des échantillons de muqueuse gastrique normale ont été utilisés comme calibrateurs. Quantification de SOX2 de numéro de copie du gène a été effectué en utilisant la méthode et les données ΔΔCt analyse a été effectuée par la v2.0 du logiciel CopyCaller (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). L'amplification du gène est défini à chaque fois que le nombre de copies du gène était 2 fois plus élevée que celle de la muqueuse gastrique normale. Pliez augmentation entre 1,5 et 2 a été considéré comme une copie gain de numéro.
Analyse statistique
Le test du chi carré a été utilisé pour évaluer l'importance des différences dans les caractéristiques clinico dans toutes les catégories de SOX2 et d'expression de CDX2, sauf avec l'âge, où le l'importance des différences de moyens a été calculé en utilisant le T
-test. la survie globale des patients a été calculé selon la méthode de Kaplan-Meier et la signification des différences entre les courbes de survie brut a été testé par le test du log-rank. Cox modèle des risques proportionnels a été utilisé pour calculer les ratios de risque univariée et multivariée. La durée médiane de suivi pour les patients survivants était de 62 mois. Le taux de survie à 5 et 10 ans a été estimée en utilisant la méthode des tables. Les différences ont été considérées comme statistiquement significative lorsque les p
valeurs étaient < 0,05. Les analyses ont été effectuées en utilisant le logiciel SPSS v21.0 (Chicago, IL, USA) et Stata v11 (College Station, TX, USA).
SOX2 expression de résultats dans les carcinomes gastriques
caractéristiques clinicopathologiques du cancer gastrique 201 des cas, ainsi que les profils d'expression des SOX2, CDX2, MUC2 et MUC5AC sont résumées dans le tableau 1. nucléaire SOX2 expression a été trouvée dans 52% (104/201) des cancers gastriques et l'expression était hétérogène entre et dans les tumeurs (Figure 1A, B et C). Dans 13% (18/134) de l'expression de cas SOX2 était plus élevé à l'avant invasive (figure 1D et E) (cette évaluation n'a été effectuée que dans les cas non inclus dans le TMA, où cette évaluation n'a pas été possible) .Table 1 Résumé des paramètres clinicopathologiques de cancer gastrique selon l'expression de SOX2 et CDX2
SOX2
CDX2
négative positive



négative positive

N
%
N
%

p
N
%
N
%
p
Âge, ans1
moyenne ± SD
65,8 ± 12,7 63,4 ± 13,5

0,2
64,1 ± 13,6 65,2 ± 12,6

0,6
médian (Range)
69 (34- 85)
66,5 (24-89)
69 (24-89)
67 (36-89)
sex1 Masculin
52
41,9
72
58,1
0,02
75
60,5
49
39,5
0.1
45
58,4
32
41,6
Femme 38
49,4
39
50,6
TNM stage2
I /II
35
54,7
29
45,3
0,09
26
40,6
38
59,4
0,002
III /IV
59
44,7
73
55,3
83
62,9
49
37,1
T stage3
T1 /T2
22
62,9
13
37,1
0,03
13
37,1
22
62,9
0,007
T3 /T4
75
45,5
90
54,5
99
60,0
66
40,0
N stage1
N0
28
62,2
17
37,8
0,03
20
44,4
25
55,6
0,07
N +
69
44,2
87
55,8
93
59,6
63
40,4
Margins4
R0
85
47,5
94
52,5
0.5
98
54,7
81
45,3
0,2
R1
11
55,0
9
45,0
14
70,0
6
30,0
Vascular invasion4
négatif
39
55,7
31
44,3
0.1
37
52,9
33
47,1
0.5
57
44,2
72
55,8
75
58,1
54
41,9
Láuren5 positif
Intestinal
44
49,4
45
50,6
0,9
45
50,6
44
49,4
0,3
diffuse
20
48,8
21
51,2
26
63,4
15
36,6
Non classés 31
46,3
36
53,7 <32
53,3
28
46,7
0.5
28 de
br> 40
59,7
27
40,3
Ming6
expansif 46,7
32
53,3
0.1
Infiltrative
60
45,8
71
54,2
81
61,8
50
38,2
Non classés 2
66,7 1
33,3 1
33,3 2
66,7
négatif
58 de
SOX21 59,8
39
40,2
0.3
55
52,9
49
47,1
CDX21
positif
négatif
58
51,3
55
48,7
0,3
39
44,3
49
55,7
MUC5AC1
négatif
39
44,8
positif 48
55,2
0.4
42
48,3
45
51,7
0,05
positive
58
51,3
55
48,7
70
61,9
43
38,1
MUC21
négatif 69
48,6
73
51,4
0,9
84
52,2
58
40,8
0.1
positive
27
48,2
29
51,8
26
46,4
30
53,6
1 N = 201; 2N = 196; 3N = 200; 4N = 199; 5 N = 197; 6N = 194.
de la figure 1 SOX2 l'expression des protéines dans les carcinomes gastriques, détectée par immunohistochimie. (A) Hétérogénéité de l'expression SOX2 dans les tumeurs gastriques. Dans le même échantillon de la tumeur, les zones avec des niveaux élevés de SOX2 sont observés (B) à proximité des zones avec des niveaux inférieurs d'expression de SOX2 (C). (D, E) expression SOX2 à l'avant invasive des tumeurs.
Ensuite, nous avons évalué si l'expression de SOX2 en corrélation avec les caractéristiques clinico des cas. Cette analyse a révélé que l'expression de SOX2 était significativement associée au sexe masculin (p
= 0,02), à l'étage de T supérieur (p
= 0,03) et avec la présence de ganglions régionaux métastases ganglionnaires (stade N) (p
= 0,03). Les autres paramètres clinicopathologiques, qui comprenaient l'âge, le stade TNM, la clairance de la tumeur avec des marges de résection (catégorie R), invasion vasculaire, la classification Laurén et de classification Ming n'a pas été significativement associés à l'expression de SOX2 (tableau 1).
Depuis SOX2 est associée à différenciation gastrique [14], nous avons étudié si cela a été maintenu dans le cancer, en utilisant MUC5AC comme marqueur gastrique. Cependant, aucune association n'a été trouvée entre SOX2 et expression MUC5AC. De même, aucune association inverse a été trouvée entre SOX2 et CDX2 /MUC2 (utilisés comme marqueurs de différenciation intestinale). À noter, l'expression de CDX2 était significativement associée à un stade TNM inférieur (p
= 0,002) et avec un stade T inférieur (p
= 0,007). En outre, bien que non statistiquement significative, il y avait une tendance à une relation inverse entre CDX2 et MUC5AC (p =
0,05). L'analyse de survie

La survie globale à 5 ans, sur la base du suivi des 199 patients, était de 35% (de fichier supplémentaire 1: Figure S1). Nous avons ensuite observé que l'expression de SOX2 dans les tumeurs était associée, en analyse univariée, avec une survie globale plus faible (p
= 0,02), stratifier les patients en deux groupes pronostiques (Figure 2A), avec une survie à 5 ans de 45 % pour les patients atteints de tumeurs SOX2- contre 26% pour les patients avec SOX2 + tumeurs. Au contraire, l'expression de CDX2 associée à une amélioration de la survie globale, bien que la différence ne soit pas significative (données non présentées). Figure 2 Courbes de Kaplan-Meier montrant la probabilité de survie globale des patients atteints d'un cancer gastrique selon l'expression SOX2 (A) et selon le phénotype moléculaire SOX2 - /+ et CDX2 SOX2 + /CDX2 - (B).
Sur la base de l'association des SOX2 et CDX2 avec la survie pire et mieux ainsi que plus ou moins agressifs caractéristiques clinico, respectivement, nous avons étudié en outre le résultat de patients selon les phénotypes moléculaires définis par les deux protéines. Quatre groupes de patients pourraient être définis (fichier supplémentaire 1: Figure S2) dont l'un avec la meilleure survie avaient des tumeurs négatives pour SOX2 et positifs pour CDX2 (SOX2- /CDX2 +), alors que la survie était le plus faible chez les patients porteurs de tumeurs avec le profil inverse, positif pour SOX2 et négatif pour CDX2 (SOX2 + /CDX2-) (p = 0,01
) (fichier supplémentaire 1: Figure S2 et la figure 2B). Les cas avec l'expression des deux SOX2 et CDX2 ou sans expression de deux marqueurs présentaient une survie similaire et intermédiaire (fichier supplémentaire 1: Figure S2). Le SOX2- /CDX2 + et SOX2 phénotypes moléculaires + /CDX2-, contre SOX2 seul, prédisent des taux très similaires de survie à 5 ans (49% vs 26% et 45% vs 26%, respectivement). Cependant, le taux de survie à 10 ans prédite en se basant sur l'expression de SOX2 seule est de 34% (SOX2-) vs 22% (SOX2 +) alors que, en utilisant les phénotypes moléculaires SOX2 /Cdx2, il devient 41% (SOX2- /CDX2 +) vs 14% (SOX2 + /CDX2-).
Nous avons exploré davantage l'impact sur la survie des phénotypes moléculaires définis par SOX2 + vs SOX2-, CDX2 + vs CDX2- et SOX2- /CDX2 de patients + contre SOX2 + /CDX2- stratifiée en fonction des paramètres clinicopathologiques. Dans ce cas, la survie de traçage selon l'une SOX2 ou le statut de CDX2 seul donné les différences pronostiques significatives pour le premier, dans certains des paramètres (tumeurs intestinal- et de type expansion) et aucune différence pour CDX2 seul (fichier supplémentaire 1: Figures S3 et S4). Les résultats du modèle proportionnel de Cox sont présentés dans les fichiers supplémentaires 1: Tableau S1. Une fois de plus, l'utilisation de l'expression combinée de SOX2 et CDX2 affiné les résultats précédents (Figure 3). SOX2 + /CDX2 - profil prédit un résultat significativement plus faible de patients atteints de l'intestin (p
= 0,005) et l'expansion (p = 0,002)
tumeurs, avec des ratios de 3,18 et 4,84, respectivement danger et de ceux sans signes d'invasion veineuse (p = 0,009
), présentant un rapport de risque de 3,84. Bien que la limite de non-significative, une tendance similaire a été observée chez les patients sans métastases ganglionnaires (p
= 0,08) (Figure 3). Les ratios de risque et les intervalles de confiance à 95% pour tous les groupes sont présentés en détail dans le tableau 2 et restent significatives après ajustement pour l'âge et le sexe dans une analyse multivariée. Figure 3 courbes de Kaplan-Meier montrant la probabilité de survie globale pour les patients atteints de cancer gastrique selon la phénotypes moléculaire SOX2 - /CDX2 + et SOX2 + /CDX2 - stratifié en fonction des paramètres clinicopathologiques: classification Laurén (A), la classification des Ming (B) , l'invasion veineuse (C) et les métastases des ganglions lymphatiques (D).
Tableau 2 risques proportionnels de Cox Les modèles de survie en fonction des phénotypes moléculaires (SOX2 + /CDX2- vs SOX2- /CDX2 +) pour chaque paramètre clinicopathologique
Paramètre
rapport de risque (IC à 95%)

non désaisonnalisés
P
Adjusteda
P

Dans l'ensemble
1,95 (1.15 à 3.31)
0,01
1,90 (1,10 à 3,28)
0,02
Laurén classement
Intestinal type
3,18 (1,33 à 7,58)
0,009
2,93 (1.21 à 7.10)
0,02
diffuse type
1,35 (0,35 à 5,17)
0,7
Non classés
1,34 (0,60 à 3,02)
0.5
Ming classification
expansion
4,84 (1,64 à 14,29)
0,004
4,53 (1,29 à 15,85)
0,02
Infiltrative
1,13 (0,60 à 2,13)
0.7
invasion vasculaire
négatif
3,84 (1,30 à 11,35)
0,02
3,82 (1,29 à 11,40)
0,02
positif
1,10 (0.60- 2.02)
0,8
N stade
N0
2,96 (0,82 à 10,65)
0,1
3,98 (0,72 à 21,83)
0,1
N +
1,29 ( 0,72 à 2,30)
0.4
Abréviation: CI
intervalle de confiance
un ajustement pour l'âge et le sexe (analyse multivariée selon le modèle de régression de Cox)
SOX2 amplification
Considérant ce gène.. l'amplification est un événement spécifique de la tumeur lors de la transformation maligne, et que locus SOX2 est soumis à cette altération dans d'autres tumeurs, notamment du poumon et de l'œsophage [17], nous avons supposé que SOX2 amplification pourrait expliquer son expression et de l'hétérogénéité, tant au sein des les tumeurs gastriques. L'appui de cette hypothèse, une étude réalisée sur la base de données Oncomine a montré que SOX2 classé parmi les meilleurs 10% des gènes avec le nombre de copies des gains dans le cancer gastrique (fichier additionnel 1: Figure S5).
Basé sur les données d'immunohistochimie, nous avons sélectionné 14 cas avec expression SOX2 et 7 cas négatifs à analyser par 2 couleurs FISH test. Nous avons observé que SOX2 a été amplifié dans 14% (2/14) des cas avec l'expression et dans aucun des cas, sans expression (0/7). Un cas positif représentant à la fois pour l'expression de SOX2 et l'amplification est représentée sur la figure 4A et B. Un cas avec l'expression de SOX2 mais aucune amplification est représentée sur la figure 4C et D. En outre, l'analyse FISH a démontré la présence d'un haut degré de copie gain de numéro et de l'hétérogénéité au sein des tumeurs, observée non seulement avec la sonde cible pour SOX2
locus, mais aussi avec la sonde de référence, situé à 3p bras (fichier supplémentaire 1: Figure S6). Figure 4 cas de cancer gastrique avec expression de la protéine SOX2 (A et C) peuvent présenter avec ou sans SOX2 amplification (B et D, respectivement) déterminée par FISH. Vert sondes marquées ciblent SOX2
, tandis que des sondes marquées rouges ciblent le bras 3p. Nuclei sont colorées avec du DAPI (bleu). (E) Soixante-deux ADNg échantillons de cancer gastrique ont été évalués pour la copie de SOX2 état de nombre et par rapport à la muqueuse gastrique normale (calibrateur). (F) le nombre de copies de SOX2 était significativement associée à l'expression de la protéine, déterminée par IHC (p
< 0,05).
Pour clarifier la fréquence de SOX2
nombre de copies de locus altérations dans le cancer gastrique, nous avons réalisé une copie -nombre PCR en utilisant l'ADNg de 62 cas de cancer gastrique, en utilisant une sonde
ARNase P situé dans le chromosome 14 comme référence. La majorité des échantillons (93%) a présenté un certain degré de SOX2
copie variation du nombre, allant de 3 à 9 copies (Figure 4E). Une association positive significative entre le gain du nombre de copies et l'expression de SOX2 (p
< 0,05). On a observé (Figure 4F) de la discussion
cancer gastrique est une maladie avec des résultats multiples qui ne peuvent pas être prédits par les seules caractéristiques clinico [6]. Par conséquent, l'identification de biomarqueurs moléculaires qui peuvent permettre à d'autres décisions résultats de stratification et de traitement est d'une importance cruciale.
Dans cette étude, nous avons caractérisé l'expression du SOX2 facteur de transcription dans le cancer gastrique et en rapport avec les caractéristiques clinico et marqueurs de différenciation à savoir MUC5AC (marqueur gastrique) et Cdx2 et MUC2 (marqueurs intestinaux). Cela a conduit à l'identification de deux groupes pronostiques différentes, en fonction de l'expression du SOX2, qui pourrait encore être affiné en prenant en compte l'expression combinée avec CDX2. Enfin, nous démêlé l'hétérogénéité des SOX2
locus et chromosome 3 nombre de copies dans le cancer gastrique, ce qui démontre une association entre l'augmentation du nombre de copies et l'expression de la protéine SOX2.
Une des principales conclusions de cette étude était l'observation que SOX2 expression seule, et encore affiné par la combinaison avec CDX2, permet la stratification des patients en sous-groupes avec significativement différents résultats cliniques. De plus, lorsque nous avons combiné ces profils moléculaires avec des données clinico, il est devenu évident que le SOX2 + /CDX2 - le profil associé à un mauvais pronostic, au sein des sous-ensembles de tumeurs qui ont en général un meilleur pronostic: type intestinal , de type expansion et sans aucun signe d'invasion veineuse [21, 22]. Bien que non statistiquement significative, la même tendance a été observée pour les tumeurs présentant sans métastases des ganglions lymphatiques. Ces profils moléculaires indiquent un comportement biologique différent de la tumeur la plus probable en raison de la progression de la maladie ou de la résistance au traitement et peuvent être utilisés pour charger une thérapie plus efficace ou le suivi des horaires.
Notamment, comme métastase ganglionnaire est l'un des principaux risques facteurs de récidive du cancer de l'estomac, après une chirurgie R0, tous les patients présentant des métastases ganglionnaires reçoivent un traitement adjuvant [23]. Cependant, nos résultats montrent que les patients sans facteur de risque, et donc ne sont pas traitées, présentent un résultat étonnamment pire lorsque la tumeur présente une SOX2 + /CDX2 - profil moléculaire. Cela met en avant l'hypothèse que, dans les tumeurs N0, les patients au sein de ce sous-groupe moléculaire seraient probablement bénéficier d'un traitement adjuvant. Néanmoins, ces observations doivent être validées dans les grandes cohortes et il serait également très instructif pour ajouter des informations cliniques sur le traitement du patient.
SOX2 émerge aussi comme une cible potentielle pour des interventions thérapeutiques. Bien que des facteurs de transcription sont des cibles de médicaments classiques, des approches de thérapie ciblée SOX2 sont déjà abordées dans le cancer du sein. Dans une étude récente, le gène SOX2 a été ciblé de manière sélective à l'aide artificielle approche des facteurs de transcription à base de doigt de zinc, ce qui entraîne dans son très spécifique, puissante et durable régulation à la baisse, se traduisant par une tumorigénicité atténuée, à la fois in vitro

• Glutathion gène S-transférase GSTM1, interaction gène-gène et la prédisposition au cancer gastrique: la preuve d'une méta-analysis
• Une bouffée d'air frais: une étude d'amélioration qualitative comparant une technique à circulation d'air par rapport à la technique classique pour empêcher le tube nasogastrique dysfunction