L'utilité de cytokératines 7 et 20 (CK7 /20) immunohistochimie dans la distinction du court segment de l'oesophage de Barrett de métaplasie intestinale gastrique: Est-il fiable

L'utilité des cytokératines 7 et 20 (CK7 /20) immunohistochimie dans la distinction de courte? -segment oesophage de Barrett de métaplasie intestinale gastrique:? est-il fiable
Résumé
Contexte
le but de l'étude immunohistochimique corrélative présente était d'évaluer l'utilité de la cytokératine (CK7 et CK20) expression dans le diagnostic de court -segment l'oesophage de Barrett, en particulier son efficacité dans la différenciation Barrett muqueuse de la métaplasie intestinale du cardia gastrique et corpus.
Méthodes
Deux groupes de biopsies endoscopiques ont été examinés, dont 20 biopsies endoscopiques de court segment de l'oesophage de Barrett ( Groupe A) et nombre égal présentant Helicobacter pylori associées métaplasie intestinale du cardia gastrique et corpus (Groupe B). Tous ont été étudiés par immunohistochimie en utilisant la méthode ABC standard pour CK7 et d'expression CK20. Le test exact de Fisher a été utilisé pour l'analyse statistique de Barrett CK7 /20 et CK7 gastrique /Résultats de 20 modèles entre les groupes en Le modèle attendu de réactivité dans Barrett muqueuse (CK7:. positivité forte diffuse dans les glandes superficielles et profondes; CK20: positivité dans l'épithélium de surface et les glandes superficielles) a été observée dans 2 cas de spécimens du groupe a. Le motif gastrique attendu (CK7: immunocoloration inégale avec la participation variable de glandes profondes; CK20: immunocoloration inégale des glandes superficielles et profondes dans incomplète intestinale métaplasie /absence de CK7 immunoréactivité avec une forte coloration CK20 dans les glandes superficielles et profondes dans la métaplasie intestinale complète) a été vu dans 8 cas de spécimens du groupe B. La sensibilité et la fausse-négativité des valeurs respectives de CK7 /20 coloration pour motif Barrett dans le groupe A étaient de 10% et 90%, respectivement. Ces valeurs de modèle gastrique dans le groupe B étaient de 40% et 60%, respectivement. Les valeurs de spécificité et de faux-positivité des deux modèles étaient les mêmes (100% et 0%, respectivement). Il n'y avait pas de différence statistiquement significative pour le modèle Barrett entre les deux groupes (P = 0,487
), tandis que l'observation du motif gastrique était significativement plus élevée dans le groupe B que dans le groupe A (P
= 0,02).
Conclusions
Nous avons conclu que ces émis l'hypothèse et a récemment appliqué des critères de diagnostic impliquant CK7 et CK20 immunoréactivité ne sont pas fiables pour distinguer court segment de l'oesophage de Barrett de métaplasie intestinale comme on le voit dans le cardia gastrique et corpus.
Contexte
oesophage de Barrett ( BE) est associée à un risque accru de l'adénocarcinome oesophagien, une tumeur maligne qui a eu une incidence croissante rapide récemment [1-3]. L'étiologie de la BE est inconnue, mais la prédisposition génétique aux changements ulcéreuse de la maladie de reflux gastro-oesophagien (RGO) pourrait être responsable [4] Be doit être suspectée à l'endoscopie. Lorsque l'épithélium malpighien blanchâtre apparaissant normale est remplacée par une muqueuse rouge veloutée apparaissant dans l'oesophage distal. Le diagnostic fiable d'EBO est difficile lié à des erreurs d'échantillonnage dues à la détermination de l'emplacement exact de la jonction gastro-oesophagien tel que dans une hernie hiatale. difficultés de diagnostic surviennent lorsque les endoscopiste porte sur le segment court BE. Junctional, types (intestinaux) fundiques et spécialisés de l'épithélium glandulaire ont été décrits pour la définition de BE par Paull et al.
[5]. Mais il a été récemment rapporté que la détection de celui-ci est un critère fiable pour le diagnostic de BE [4, 6]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) pourraient être associés à la cardite et la métaplasie intestinale du cardia [7]. Par conséquent, la métaplasie intestinale impliquant le cardia liée à Helicobacter de la gastrite peuvent être histologiquement indiscernable de la métaplasie intestinale de l'œsophage distal.
Il a été suggéré que des sous-ensembles de cytokératine 7 et 20 (CK7 et CK20) pourraient être utiles pour distinguer les deux à long et à court segment du BE de la métaplasie intestinale de l'estomac proximal [8-11]. Le but de cette étude était d'évaluer la cytokératine (CK7 et CK20) expression dans le diagnostic de court segment de l'oesophage de Barrett, en particulier son utilité dans le diagnostic différentiel de la muqueuse de Barrett de la métaplasie intestinale du cardia gastrique et corpus.
Méthodes
spécimens d'endoscopie des patients référés par Marmara University Institute of Gastroenterology ont été examinées à partir des fichiers du département de pathologie à la même université entre 1998 et 2002. au moins 4 biopsies ont été prises à partir irrégulière jonction squamo-colonnaire (SCJ) avec péninsules ou des langues de l'épithélium cylindrique et les îles de l'épithélium malpighien ou colonnaire pour chaque cas. Lorsque plus d'une péninsule ou de la langue de l'épithélium cylindrique dans l'oesophage distal a été observé endoscopically, 4 biopsies ont été prélevés dans chaque péninsule et ils ont été envoyés à l'examen histopathologique dans des tubes Eppendorf séparés. Les petites péninsules avec des navires linéaires distale à l'SCJ et toute anomalie focale ont également été biopsiées.
Oesophagien et des biopsies gastriques ont été prises antérograde ou rétrograde avec rétroflexion de l'endoscope quand il était nécessaire. L'approche rétrofléchi a été préférée pour l'échantillonnage des cardia. Les cas qui ont été diagnostiqués comme histopathologique court segment de BE ont été inclus à l'étude. Court segment BE a été défini endoscopically comme langues de moins de 3 cm de longueur au-dessus de la jonction oeso-gastrique (JOG) avec sa ressemblance avec l'intestin grêle ayant microvillosités bien formés et la métaplasie intestinale, soit avec l'hématoxyline et l'éosine (H & E) (Figure 1) ou des cellules Alcian caliciformes positives de pH 2,5 bleu (figure 2) sur l'examen microscopique. Figure 1 Section de la jonction montrant gastro-oesophagien BE avec des cellules caliciformes, H & E, × 40
Figure 2 Intense coloration au bleu de cellules caliciformes avec Alcian pH bleu 2.5 /PAS, × 40
Le groupe d'étude se composait de 20 les patients atteints de court segment de BE (Groupe A) et le même nombre de patients atteints de la métaplasie intestinale gastrique (cardia et corpus) accompagné de H. pylori
gastrite (Groupe B). Les biopsies qui ont été obtenus dans les 5 mm distance au-dessous du EGJ ont été considérés comme la muqueuse cardiaque.
échantillons ont été fixés à 10% du formol tamponné et inclus dans la paraffine. Des coupes en série ont été découpés dans chaque échantillon. Toutes les sections ont été colorées avec la routine H & E tache. Schiff périodique acide (PAS), Alcian pH 2,5 et bleu Alcian pH bleu 0,5 ont été utilisés pour identifier les mucine neutre, sialomucine et sulphomucin, respectivement. Giemsa a été utilisé pour révéler H. pylori
. Nous avons exclu les cas sans détecté métaplasie des cellules caliciformes par bleu alcian pour les deux groupes A et BH infection pylori
a été confirmée au Giemsa pour les cas dans le groupe B.
endoscopiques biopsies ont été regroupés comme complet (type I) ou incomplètes (type II) métaplasie intestinale selon les critères définis précédemment [12]. Le modèle proposé Barrett CK7 /CK20 (de CK7: positivité forte diffuse dans les glandes superficielles et profondes; CK20: positivité dans l'épithélium de surface et les glandes superficielles) et /motif de CK20 gastrique CK7 (CK7: immunocoloration inégale avec la participation variable de glandes profondes; CK20: inégale immunocoloration des glandes superficielles et profondes de la métaplasie intestinale incomplète /absence d'immunoréactivité avec CK7 CK20 une forte coloration dans les glandes superficielles et profondes de la métaplasie intestinale totale) ont été évalués pour tous les cas. Six biopsies de contrôle ont été constituées rétroactivement à partir des patients dont les biopsies a montré SCJ normale (n = 3) et cardia normale (n = 3) microscopiquement.
Groupe A de cliniques données, y compris l'âge, le sexe, les symptômes de reflux gastro-oesophagien, et les résultats endoscopiques et court segment de Barrett muqueuse ont été obtenus à partir de chaque cas. Les patients atteints de BE dans les 3 derniers cm de l'oesophage distal ont été inclus pour le Groupe A. Les patients atteints de H. pylori positif
ont été exclus de l'étude.
Du groupe B de données cliniques, y compris l'âge, le sexe, gastro symptômes -esophageal de reflux, les résultats endoscopiques, et le statut de H. pylori ont été obtenus à partir de chaque cas. Les patients atteints de H. pylori positif
ont été inclus à l'étude. Vingt biopsies endoscopiques (cardia, n = 9 et corpus, n = 11) avec des signes histologiques de la métaplasie intestinale ont été étudiés.
Études immunohistochimiques
Un bloc de tissu a été sélectionné pour chaque cas. Les blocs ont été coupés à 5 um sections. Les lames ont été déparaffinées et réhydratées par des alcools gradués. La récupération d'antigène a été effectuée en utilisant un tampon citrate à micro-ondes à la fois pour CK7 et CK20. Les lames ont été incubés dans 3% de peroxyde d'hydrogène /méthanol pendant 20 min pour bloquer la coloration de fond non spécifique due à la peroxydase endogène. Utilisation de la méthode complexe de peroxydase streptavidine-biotine standard (ABC), CK7 (clone OV-TL 12/30, Neomarkers, Fremont, CA, USA) et CK20 (clone K20.4, Neomarkers, Fremont, CA, USA) ont été effectuées sur toutes les diapositives. Les lames ont été mises en incubation pendant 30 minutes dans une solution d'anticorps secondaire. Diaminobenzidine (DAB) a servi chromogène. Les lames ont été contre-colorées avec de l'hématoxyline. Les échantillons de carcinome du sein et le carcinome du côlon ont été utilisés comme témoins positifs pour CK7 et CK20, respectivement. Des témoins négatifs ont été réalisés avec les mêmes échantillons de tumeurs et des procédés de coloration par l'omission des anticorps primaires de l'analyse statistique.
test exact de Fisher a été utilisé pour l'analyse de Barrett et modèles gastriques. Un résultat était considéré comme statistiquement significatif si la valeur P
était inférieure ou égale à un niveau alpha de 0,05.: Résultats
Au total, 40 patients ont été inclus à l'étude. L'âge médian des patients était de 46 (gamme, 28-77) ans dans le groupe A et 50 (extrêmes, 25-73) ans dans le Groupe B. Le ratio homme-femme était 4 à 1 dans le groupe A, alors qu'il était 2 à 3 dans le groupe B. Les caractéristiques cliniques et immunohistochimiques ont été résumés dans le tableau 1.Table 1 Les résultats cliniques et immunohistochimiques chez les patients atteints à court segment BE et métaplasie intestinale gastrique

court segment BE (n = 20)
métaplasie intestinale gastrique (n = 20)
Age (an) une
28-77
25-73
Homme /Femme
4/1 2/3

Barrett CK7 /20 patternb (%)
10
0
Gastric CK7 /20 patternc (%)
5
40
Autres motifs (%)
85
60
une plage b Défini en référencec définies en référence
Groupe a de symptômes reflux ont été trouvés dans 14 cas (70%) avec BE. Haute fréquence de hernie hiatale (65%) a été trouvé dans ce groupe. Trois cas ont montré une dysplasie de bas grade sur un total. Treize cas ont révélé une métaplasie intestinale incomplète et 7 cas étaient complets métaplasie intestinale en utilisant bleu alcian. Le attendu Barrett CK7 /20 modèle a été identifié seulement 2 des 20 cas (figure 3). Un cas a montré prévu CK7 gastrique /motif CK20. Le rappel avait des motifs de coloration variable; comme aucun immunomarquage (n = 6) ou immunocoloration focale (n = 11) pour CK7 avec immunomarquage focale ou diffuse pour CK20, qui ne cadrait pas avec le /20 motif Barrett CK7 prévu (figure 4). La sensibilité, la spécificité, la fausse positivité, et le faux-négativité de CK7 /20 coloration pour motif Barrett étaient de 10%, 100%, 0% et 90%, respectivement. La figure 3a. Diffuse modérée CK7 immunocoloration des glandes superficielles et profondes dans BE, × 40, b. Band-like immunocoloration CK20 de l'épithélium de surface et les glandes superficielles BE, × 40
Figure 4 a. Absent immunocoloration CK7 en BE, × 100, b. Ensoleillé immunocoloration CK20 des glandes superficielles et profondes dans BE, × 100
Groupe B
Onze cas ont montré une métaplasie intestinale complète, alors que 9 cas ont montré une métaplasie intestinale incomplète en utilisant bleu alcian. Huit cas ont exprimé le CK7 /20 motif gastrique (cardia, n = 5 et corpus, n = 3). Six d'entre eux ont montré complet et 2 incomplète gastrique CK7 /20 motif. Barrett CK7 /20 motif n'a pas été observé chez tous les patients avec métaplasie intestinale gastrique. Les caractéristiques de coloration des 12 cas restants ne correspondaient pas avec l'estomac CK7 /20 motif prévu; en raison de la CK7 inégale et /ou focale immunopositivité CK20 dans les cas avec métaplasie intestinale complète et l'absence de CK7 immunopositivité et /ou diffuse immunopositivité CK20 dans les cas avec métaplasie intestinale incomplète. La sensibilité, la spécificité, la fausse positivité, et le faux-négativité de CK7 /20 coloration pour motif Barrett était de 40%, 100%, 0% et 60%, respectivement.
Il n'y avait pas de différence significative pour le modèle Barrett entre le deux groupes (2/20 dans le groupe A par rapport à
0/20 dans le groupe B, P
= 0,487), alors que l'observation du motif gastrique était significativement plus élevé dans le groupe B que dans le groupe A (20.8 vs .
1/20, P
= 0,02) normal SCJ
. montré immunopositivité inégale pour CK7 sans aucune immunoréactivité pour CK20, mais cardia gastrique normale a révélé immunonegativity pour CK7 combiné avec immunopositivité inégale pour CK20, qui est limitée à la surface de discussion
Intestinal métaplasie épithélium. peut se développer dans le cardia chez les patients soit avec court segment BE ou cardite surtout causée par H. pylori
. La distinction entre ces deux entités est importante, car l'étiologie et le risque de développer adénocarcinomes sont différentes [7]. BE est estimée être causée par GERD et associé à un risque accru d'adénocarcinome œsophagien [1, 2, 4]. Microscopiquement, BE peut être définie comme le remplacement de l'épithélium malpighien de l'œsophage par métaplasique spécialisé (intestinalized) épithélium cylindrique. D'autres types épithéliales sont de type jonctionnel et le type fundal des épithéliums. Le diagnostic de BE nécessite une confirmation de biopsie de la métaplasie intestinale avec des cellules caliciformes Alcian de pH 2,5 bleu positifs en plus de résultats endoscopiques typiques. Le niveau exact de SCJ, aspect proximal des plis gastriques, et linéairement orienté vaisseaux de la muqueuse de l'oesophage distal et EGJ doit être identifié [13]. SCJ correspond normalement à la marge proximale des plis gastriques linéaires qui signifie EGJ. Les petits vaisseaux orientés parallèlement à l'axe long de l'oesophage disparaissent à la CSJ située normalement. Cependant, la détection de l'extension anormale de ces vaisseaux en dessous du SCJ et au-dessus de la marge proximale de plis gastriques est une preuve de la présence d'épithélium dans l'oesophage distal [14].
Distinguer BE d'autres entités qui peuvent rendre histopathologique similaires caractéristiques est primordiale. En raison de pas de critères histologiques absolue pour le diagnostic de Barrett muqueuse n'a pas encore été établie, des études récentes [8-11, 15-19] dépendent principalement des motifs de certains sous-ensembles de cytokératine, en particulier deux modèles distincts de CK7 /20 coloration. Cytokératines sont des polypeptides hautement conservés et représentent un groupe de protéines structurales cytosquelette présentes dans toutes les épithéliums. Il existe au moins 20 formes distinctes de cytokératines dans les cellules épithéliales et des motifs d'expression variables selon le type, l'emplacement et la différenciation de l'épithélium [20]. CK7, pour l'essentiel, ne sont pas exprimés dans l'épithélium normal du tractus gastro-intestinal, alors que CK20 est exprimée dans l'épithélium intestinal, l'épithélium gastrique fovéolaire et les cellules endocrines dans les parties supérieures des glandes du pylore. Barrett CK7 /20 motif a été défini par Ormsby et al.
[8] que la coloration de l'épithélium superficiel pour CK20 et la coloration des deux épithélium métaplasique superficiel et profond pour CK7. Le CK7 /20 motif gastrique désigné ont été regroupés en deux modèles en ce qui concerne le type de la métaplasie intestinale (incomplet /complet) par les mêmes auteurs. Selon leur suggestion, l'expression de CK7 inégale avec la participation variable de glandes profondes a été observée dans incomplète métaplasie intestinale gastrique, tandis que l'expression de CK20 forte dans les glandes superficielles et profondes avec l'absence d'expression CK7 a été observée dans toutes les métaplasie intestinale gastrique. Dans cette étude pionnière, Barrett CK7 /20 motif était très sensible et spécifique par rapport aux cas avec métaplasie intestinale gastrique. Cependant, le statut de H. pylori des cas n'a pas été mentionné. Des études menées par Glickman et al
[9] et Jovanovic et al.
[15] a confirmé les conclusions de Ormsby dans 91% et 94% de leurs cas avec de longs segments BE, respectivement. D'autre part, des études menées par d'autres chercheurs ont pas été en mesure de soutenir les conclusions de Ormsby; le projet de Barrett CK7 /20 motif a été trouvé dans 54% des patients atteints de long segment de BE par Mohammed et al.
[16] et seulement 39% des patients atteints de long segment de BE par El-Zimaity et al.
[17].
Ormsby et al.
[11] plus tard évalué l'utilité de CK7 /20 modèles dans le segment court BE dans une autre étude et a constaté que "diagnostic" /20 motif Barrett CK7 était présent dans 82 % des patients atteints de court segment de BE. Bien que Mohammed et al.
[16] ont presque le même pourcentage (81%) pour le court segment BE cas avec Ormsby et al.
[11], ils ont trouvé le même modèle dans 30,7% des patients métaplasie intestinale dans cardia et plus intéressant dans 55% des biopsies qui avaient soit la muqueuse gastrique normale ou enflammée sans métaplasie intestinale.
dans la présente étude, 10% des patients atteints de court segment de BE ont montré la /20 motif de CK7 anticipé et 40 % des patients ayant une métaplasie intestinale gastrique a montré l'estomac CK7 /20 motif attendu avec métaplasie intestinale complète ou incomplète appropriée. La sensibilité de Barrett CK7 /20 motif était très faible (10%) dans le groupe BE malgré sa haute spécificité (100%). La sensibilité de l'estomac CK7 /20 motif était également faible (40%) dans le groupe de la métaplasie intestinale gastrique, bien que la spécificité était élevée (100%) dans ce groupe aussi. Gastric CK7 /20 motif était significativement plus élevée dans le groupe de la métaplasie intestinale gastrique que dans le groupe de BE (P
= 0,02), alors que Barrett CK7 /20 motif ne différait pas significativement entre les deux groupes (P = 0,487
). Sur la base de ces résultats, d'utiliser deux modèles distincts de CK7 /20 coloration ne pouvait pas être acceptée comme une méthode fiable pour différencier court segment de BE de métaplasie intestinale gastrique puisque les deux modèles ont une très faible sensibilité et des valeurs très élevées de fausse négativité.
dans l'étude de l'Couvelard [10] 31% des patients et dans l'étude de 15% de la Ormsby des patients atteints de court segment BE associé à Barrett CK7 /20 motif avait H. pylori
infection. Bien que le pourcentage des cas de H. pylori positifs chez les patients atteints à court segment BE associé à un /20 motif Barrett CK7 n'a pas été mentionné dans l'étude de Mohammed [16], 6% des patients avaient H. pylori
l'infection par le court segment de BE. Depuis la métaplasie intestinale peut être vu aussi bien dans H. pylori
infection et BE, combinaison de ces entités ne devrait pas être de l'interpréter pour évaluer l'utilité des sous-ensembles de cytokératine. Nous avons exclu les cas positifs de H. pylori, même si elle a été diagnostiqué comme BE. Résultats Par conséquent, les différences entre notre étude et précédemment rapportés peuvent avoir été en raison de cette distinction stricte des cas de BE positifs de H. pylori dans la présente étude. Les différences dans les protocoles de biopsie entre les études précédentes et la présente étude (nombre, taille ou du site de l'échantillon, anterograd ou approche rétrofléchi) aurait pu être une autre raison de différences dans les résultats. Pour identifier l'emplacement exact de l'approche anterograd du cardia doit être utilisé. Cependant, en ce qui concerne l'épithélium cardiaque normal, son existence reste incertaine, puisque les résultats de différentes études sont contradictoires [21-23]. Alors que les deux études suggèrent que l'épithélium cardiaque normale représente une forme de l'épithélium métaplasique secondaire à reflux gastro-oesophagien [21, 22], une autre étude rapportée par Kilgore et al suggère que la muqueuse cardiaque existe en tant que structure native [23]. Conclusions de nouvelles études peuvent fournir des informations sur la muqueuse cardiaque, en particulier sa «relation avec les changements de reflux et BE.
Sur la base de nos résultats, nous sommes moins confiants dans l'utilisation des propositions CK7 /20 modèles pour différencier court segment de BE de métaplasie intestinale gastrique. Il est important de reconnaître les caractéristiques endoscopiques qui aident le diagnostic de BE pour endoscopistes, depuis l'histologie de la métaplasie intestinale cardia liée à d'autres étiologies et l'oesophage de Barrett est identique. Nous suggérons que la définition de BE devrait être basée sur la clinique, endoscopique, et les résultats histologiques plutôt que le modèle de CK7 /20 immunocoloration
de Liste des abréviations
BE:.
Barrett Œsophage

RGO:
Reflux gastro-oesophagien
H. pylori
:
Helicobacter pylori

CK7:
Cytokeratin 7
CK20:
Cytokeratin 20
SCJ:
squamo-Columnar Junction
EGJ:
oeso-gastrique Junction
H & E:
hématoxyline et éosine

PAS:
acide périodique Schiff
ABC:
standard streptavidine-biotine peroxydase Complex

DAB:
diaminobenzidine
GEJ:
gastro-oesophagien Junction
Déclarations
Auteurs 'origine des fichiers soumis pour images
Voici les liens vers les fichiers soumis originaux des auteurs pour les images. de fichier d'origine pour la figure 1 12907_2003_16_MOESM2_ESM.jpeg Auteurs Auteurs 12907_2003_16_MOESM1_ESM.jpeg fichier d'origine pour la figure 2 Auteurs 12907_2003_16_MOESM3_ESM.jpeg de fichier d'origine pour la figure 3 Auteurs 12907_2003_16_MOESM4_ESM.jpeg de fichier original pour la figure 4 Intérêts concurrents Aucun déclaré
.

• Diminution de l'expression de la prényl diphosphate synthase sous-unité 2 est en corrélation avec la survie réduite des patients atteints de cancer gastrique
• modification de Helicobacter pylori lipopolysaccharide, Lewis expression de l'antigène et la colonisation gastrique sont le cholestérol dépendant