PLoS ONE: Klinički značaj Mir-137 u bolesnica s rakom želuca nakon radikalne gastrektomije

Sažetak pregled

deregulacija Mir-137 igra ključnu ulogu u onkogcnczom i napredovanje različitih vrsta raka, ali njegova uloga u prognozi bolesnika s rakom želuca ostaje nepoznat. Ova studija je osmišljen kako bi istražili su ekspresiju i prognostički značaj Mir-137 kod pacijenata s rakom želuca nakon radikalne gastrektomije. Kvantitativni PCR u realnom vremenu (QRT-PCR) se provodi da bi se ekspresija Mir-137 u ljudskim staničnim linijama karcinoma želuca i tkiva u bolesnika s želučanim adenokarcinoma. Rezultati su procijenjeni za povezanost s kliničkim čimbenicima i ukupno preživljavanje korištenjem Kaplan-Meier analiza. Prognostički vrijednosti Mir-137 ekspresije i kliničkih ishoda su ocijenjeni od strane Cox regresijska analiza. Rezultati izloženi da je razina ekspresije Mir-137 smanjena je u ljudskim staničnim linijama karcinoma želuca i tkiva, te podregulirani ekspresiju Mir-137 je bio povezan s tumor staničnu diferencijaciju, N fazi i TNM fazi. Smanjena Mir-137 ekspresija u želučanom tkivu raka pozitivno korelira sa slabom ukupno preživljenje pacijenata s rakom želuca. Nadalje multivarijatna Cox regresijska analiza sugerira da Mir-137 je izraz bio neovisan prognostički indikator za rak želuca, osim TNM fazi. Primjena prognostičke vrijednosti Mir-137 izražavanja TNM stadij III grupa je pokazala bolje stratifikaciju rizika za ukupno preživljenje. Zaključno, rezultati ojačana kritičnu ulogu regulirano Mir-137 izražavanja kod raka želuca i predložio da Mir-137 ekspresija može biti prognostički pokazatelj za ovu bolest. Osim toga, ovi bolesnici s TNM stadij III rakom želuca i niske Mir-137 izraza možda je potrebno više agresivno postoperativni tretman i bliži praćenje pregled

Izvor:. Gu Q, Zhang J, Hu H, Tan Ye, Shi s, Nian Y (2015) Klinički značaj Mir-137 u bolesnica s rakom želuca nakon radikalne gastrektomije. PLoS ONE 10 (11): e0142377. doi: 10,1371 /journal.pone.0142377 pregled

Urednik: Hiromu Suzuki, Sapporo Medicinski fakultet, JAPAN pregled

Primljeno: 14. kolovoza 2015. godine; Prihvaćeno: 21. listopada 2015; Objavljeno: 6. studenoga 2015 pregled

Copyright: © 2015 Gu i sur. Ovo je otvoreno pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

Podaci Dostupnost: sve relevantne podatke su u radu pregled

financiranje:.. autori nemaju podršku ili sredstva za prijaviti pregled

suprotstavljenih interesa. autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod

Kina je jedna od zemalja s najvećom incidencijom karcinoma želuca i račune za više od 40% svih novih slučajeva u svijetu [1,2]. Unatoč agresivnoj terapiji, prognoza za uznapredovali rak želuca u Kini ima tendenciju da bude tužan [3,4]. Trenutačno, tumor-čvor-metastaza (TNM) inscenacije sustav Unije za međunarodnu kontrolu raka /American Zajednički odbor na karcinoma (UICC /AJCC) je najvažniji prognostički čimbenik za rak želuca [5]. Međutim, budući da ne postoji heterogenost na molekularnoj razini raka želuca, što je nedovoljno za samo osloniti na TNM stadiju predvidjeti prognozu raka želuca [6]. Dakle, identifikacija molekularnih markera za koje je predviđeno želučane agresivnosti raka i prognozi pacijenta kao dopuna TNM stadiju ima potencijal da poboljša sposobnost liječenja bolesnika i mogao dati klinički relevantne uvide važnost u upravljanju bolesti. Osim toga, odabir pacijenata koji bi mogli imati koristi najveći od preciznost obrade misli kao najbolji način da se niže stope smrtnosti od raka želuca, osim za operaciju. Pregled

mikroRNA (miRNAs) su male endogeni 19-25 nukleotida nekodirajuće RNA koji reguliraju ekspresiju gena posta transkripcijski putem sparivanja baza s 3'-netranslatiranu regiju (3'-UTR) ciljanog glasničke RNA (mRNA), koja rezultira degradacijom mRNA ili inhibiciju prevođenja [7]. Kod mnogih humanih karcinoma, miRNAs mogu funkcionirati kao onkogena ili gena za suzbijanje tumora za suzbijanje prijevoda ili induciraju degradacije mRNA, ovisno o prirodi njihove ciljeve [8]. Ranije studije su pokazale da je ekspresija Mir-137 je dolje regulirano i smatra se kao prognostički biljeg u različitim vrstama raka, uključujući rak pluća [9], rak debelog crijeva [10], rak jajnika [11], multiplog mijeloma [12] , tumora gastrointestinalne strome [13], glioblastom [14], i karcinoma pločastih stanica glave i vrata [15]. Nedavno je pokazalo da miR-137 ekspresija značajno smanjena u želučanom tkivu karcinoma, i suzbijanje bilo istovremeno sa stupnjem patoloških promjena, što upućuje na potencijalnu Tumor supresor ulogu Mir-137 u želučanom raka [16]. Međutim, opsežna analiza ekspresije Mir-137 u korelaciji s prognozom bolesnika s rakom želuca nije provedena i čeka daljnje razjašnjavanje. Pregled

Načelo Cilj ovog istraživanja je procijeniti odnos između ekspresije Mir -137 i ukupno preživljenje pacijenata s rakom želuca u nastojanju da se identificiraju prognostičku značajnost Mir-137 izražavanja. Rezultati ove studije pokazuju da je razina ekspresije Mir-137 je Smanjivanje se u želučanim stanicama raka i tkiva, a Mir-137 je izraz bio neovisan prognostički indikator za rak želuca. Pregled

Materijali i metode

Etika izjava pregled

Ova studija je pregledan i odobren od strane Institutional Review Board drugog SRODNE bolnici Xi'an Jiaotong i njenih povezanih bolnice Sveučilišta yan'an (pokrajini Shanxi, Kina). Svi sudionici studije, odnosno njezin zakonski zastupnik, pod uvjetom da je obavijestio pisani pristanak prije studija upis.

Kultura Cell pregled

ovjekovječio normalne ljudske želučane epitelnih stanica linija Ges-1 i pet ljudskih staničnih linija raka želuca, uključujući MKN-45, SGC7901, BGC-823, MGC-803 i AGS, dobiveni su izravno iz Shanghai Cell banke kineske akademije znanosti (Shanghai, Kina). Sve ove stanice se rutinski uzgajaju i održavani u RPMI-1640 (Gibco) mediju za kulturu uz dodatak 10% fetalnog goveđeg seruma (Invitrogen), kod 37 ° C u vlažnoj stanične kulture s atmosferi 5% CO ₂

kliničkih uzoraka

Svježe želučani adenokarcinoma tkiva i susjedna normalna tkiva su prikupljeni iz dva neovisna kompleta koji sadrži 154 bolesnika s želučanog adenokarcinoma. Svi pacijenti uključeni u ovu studiju su bili podvrgnuti radikalna gastrektomije (R0 resekcija prema UICC /AJCC i D2 Limfadenektomija). Primjerci trening set (n = 67) su dobiveni u razdoblju od siječnja 2005. do prosinca 2009. godine, od drugog SRODNE bolnici Xi'an Jiaotong (pokrajina Shanxi, Kina), a dobiveni su primjerci potvrde za set (n = 87) u razdoblju od siječnja 2008. godine i prosinca 2010. godine od povezanih bolnice Sveučilišta yan'an (pokrajina Shanxi, Kina). Uzorci su brzo smrznuti u tekućem dušiku do upotrebe. Uzorci su ponovno procijeniti dva patologa samostalno i stadij raka želuca je klasificiran prema TNM stadij sustavu UICC /[5] AJCC. Pacijenti su bili isključeni ako su prethodno bili izloženi bilo je ciljana terapija, radioterapija, kemoterapija i /ili intervencija terapiju za rak želuca. Pregled

QRT-PCR pregled

Ukupna RNA sadrži Mirna je izvađen iz kulturan stanice ili tkiva koriste miRNeasy Mini Kit (Qiagen). cDNA bila je sintetizirana pomoću miScript reverzne transkripcije Kit (Qiagen) prema uputama proizvođača. Reverzna transkripcija provedena je s 50 ng ukupne RNA pomoću primer specifičan za Mir-137, zajedno sa SYBR Green mikrornk reverzne transkripcije kit. miRNAs su utvrđene pomoću testa SYBR Green Mirni QRT-PCR prema protokolu proizvođača (Applied Biosystems). QRT-PCR reakcija je provedena na 7500 Fast realnom vremenu sustavom (Applied Biosystems). Sve kvantitativne RT-PCR su izvedene u triplikatu. Podaci su analizirani pomoću automatiziranog osnovica. Prag ciklusa (Ct) je definirana kao broj ciklusa frakcijskom u kojoj fluorescentni premašila određeni prag. Podaci dobiveni iz QRT-PCR analizirani su pomoću ΔΔCt metodu (2 ^{ΔΔCt). PCR primera postavlja ovdje se koriste za Mir-137 je dizajniran kako slijedi: miR-137 premaz naprijed: 5'-GCGCGC TTATTGCTTAAGAATAC-3 ', a obrnuti primer: 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3'. U6 je korištena kao interna kontrola i pojačan s primerom: 5'-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3 ', a obrnuti primer: 5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3'. Pregled}

Statistička analiza pregled

Statistička analiza je provedena je pomoću GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA) i SPSS 19,0 (SPSS, Chicago, IL, USA). Cjelokupni opstanak bio definiran kao vrijeme između prvog dana dijagnoze i datuma vezanih za rak smrti ili zadnji praćenja posjeta. Pearsonov χ ^{2 ili Fisherov egzaktni test korišten je za analizu odnosa između Mir-137 izražavanja i kliničkopatološkim faktora. Kumulativna stopa preživljavanja je izračunata Kaplan-Meier metodi i razlike između podskupina su ispitani od strane log-rank testa. Brojevi u opasnosti su izračunate na početku svakog razdoblja. Prognostička vrijednost Mir-137 bila je određena pomoću univarijantne i multivarijatne analize. Sve vrijednosti P su dvostrani, a P < 0,05 smatra se statistički značajna pregled}

Rezultati

Izražavanje analiza Mir-137 u ljudskim stanicama raka želuca

Da. utvrditi razinu ekspresije Mir-137 ljudskih stanica raka želuca, prvo procijenjena miR-137 ekspresijom QRT-PCR u besmrtnom normalne ljudske epitelne stanične linije želučane GES-1 i pet ljudskih staničnih linija raka želuca, uključujući MKN-45, SGC7901, BGC-823, MGC-803 i AGS. Kao što je prikazano na slici 1A, je ljudske stanice raka želuca izraženi značajno niže razine Mir-137 od GES-1. Zajedno, ova promatranja sugeriraju da Mir-137 ekspresija je smanjen u želučanim stanicama raka u usporedbi s besmrtnim normalnog ljudskog epitelnih stanica želuca, te je smanjen Mir-137 ekspresija može se odnose na onkogcnczom raka želuca.

povezanosti Mir-137 izražavanje i kliničko faktori

razina ekspresije Mir-137 dodatno su mjereni analizirati njihov odnos s kliničko faktora. Bolesnici su bili podijeljeni u visoke i niske ekspresije skupine prema udjelu njihovih normalnih /rak tkiva prosječne razine ekspresije Mir-137, prema rezultatima QRT-PCR (cut-off omjer = 1,5). A prema kriteriju, oko 56.72% (trening seta, 38 od 67) i 49.43% (Provjera set, 43. 87) tumori su označeni kao niska Mir-137 izražavanja. Kao što je prikazano u tablici 1, ekspresija Mir-137 je značajno povezano s tumor staničnom diferencijacijom (P = 0,009 i p = 0,002, odnosno), N fazi (P = 0,019 i P < 0,001) i TNM fazi (P = 0.007 i p = 0.007, redom) u dva nezavisna seta. Osim toga, u setu trening, Mir-137 ekspresija je također značajno povezana s T fazi (P = 0,002). Osim toga, postotak bolesnika s niskim Mir-137 izrazu porastao popraćeno s progresijom bolesti iz TNM stadija I do III u dva nezavisna seta (Slika 1B i 1C). Pregled

Prognostička vrijednost Mir-137 izražavanja u bolesnika uz rak želuca pregled

kako bi se dodatno istražiti prognostičku vrijednost Mir-137 ekspresije u bolesnika s rakom želuca, usporedili smo ukupno preživljenje prema Mir-137 izražavanja, te analiza Kaplan-Meier preživljavanje je provedena. Kao što je prikazano na slici 2, pacijenata s niskom miR-137 ekspresije bila je znatno kraće ukupno preživljenje nego oni veliki oni u dva nezavisna seta (p < 0.001 i P < 0,001), što ukazuje na ključnu utjecaj miR-137 izrazu klinički ishod u bolesnika s rakom želuca. Osim toga, univarijantna analize za ukupno preživljavanje u ovoj studiji izlagao da niske Mir-137 Izraz je značajan negativan prognostički pokazatelj za pacijente s rakom želuca u trening seta (omjer rizika [HR], 6.30; 95% CI, 2,17 - 18,27; P = 0,001) i skup za validaciju (HR, 3.74; 95% CI, 1,81-7,73; P < 0,001). Osim toga, diferencijaciju stanice tumora (P = 0.023 i p = 0,048, redom), T faza (P = 0.002 i p = 0,012, redom), N fazi (P = 0.004 i p = 0,001), TNM fazi (P < 0,001 i P < 0,001), sve također značajno utjecao na preživljavanje raka želuca (Tablica 2). Nadalje, Cox multivarijatna regresijska analiza provedena je za dobivanje procjene neovisnih rizika koji se odnose na ukupno preživljenje. Kao što je prikazano u sljedećoj tablici 3, TNM stadij i Mir-137 ekspresija su oba priznata kao nezavisna i značajnim prognostičkim parametrima u dva nezavisna seta (set treninga: TNM stadij: HR, 12.83; 95% CI, 3,48 do 47,30; p < 0.001, Mir-137 izraz: HR, 6.80; 95% CI, 2,06 - 22,48; p = 0,002; valjanosti postaviti: TNM stadij: HR, 5.21; 95% CI, 2,04 do 13,31; p = 0,001, Mir-137 izraza: HR, 2.41; 95% CI, 1,13-5,11;. p = 0,023, respektivno) pregled

Slojevito analiza TNM stadij Netlogu

Kako bi se utvrdilo je li mir-137 ekspresija može stratifikaciju pacijenata s različitim TNM stadiju sloj, nismo slojevitih analize pacijenata oboljelih od raka želuca s TNM stadija i + II i TNM stadij III i ocijeniti prognostičku vrijednost Mir-137 izraza u dva nezavisna seta respektivno. Kao što je navedeno u tablici 4, samo pacijenti s rakom želuca s TNM stadij III mogao biti stratificirani po Mir-137 izražavanja bitno, prognozu TNM stadij III pacijenata oboljelih od raka želuca s visokim Mir-137 izražavanja bio je znatno bolji od onih s niskim Mir-137 izraz u dva neovisna kompleta (komplet trening: p = 0.006, Validation postaviti: p = 0,016, odnosno, Slika 3). pregled

Rasprava pregled

Kina je još uvijek jedna od zemalja s najvećim incidencija karcinoma želuca iako je to u mnogim industrijskim zemljama se smanjila tijekom posljednjih nekoliko desetljeća, i napredni stadij bolesti već prisutne u velikoj većini pacijenata [1,2,4]. Trenutno TNM sustav UICC /AJCC je najvažniji prognostički čimbenik za rak želuca [5]. Međutim, budući da ne postoji heterogenost na molekularnoj razini raka želuca, što je nedovoljno za samo osloniti na TNM stadiju predvidjeti prognozu raka želuca [6,17]. Dakle, identifikacija molekularnih markera za koje je predviđeno želučane agresivnosti raka i prognozi pacijenta kao dopuna TNM stadiju ima potencijal za poboljšanje sposobnosti za upravljanje pacijentima i može pružiti važne klinički važne uvide u liječenju bolesti. Osim toga, odabir pacijenata koji mogu imati koristi najveći od preciznost obrade i ciljane terapije misli kao najbolja metoda za smanjenje stope smrtnosti od raka želuca. Istraživanje se odnosi na odnos između miRNAs i raka želuca postupno je stekao pozornost od istraživača u općoj kirurgije polju, a ovo istraživanje je postao važan predmet istraživanja u posljednjih nekoliko godina [7]. U ovom istraživanju, možemo vrednovati razinu ekspresije Mir-137 u ljudskim staničnim linijama karcinoma želuca s kvantitativnog real-time PCR, rezultati izloženi da su ljudske stanice raka želuca, uključujući MKN-45, SGC7901, BGC-823, MGC- 803 i AGS, izrazio je značajno niže razine Mir-137 od GES-1, koji je vječiti normalno ljudsko želučanog epitela stanične linije. Ovaj rezultat pokazuje da nenormalan miR-137 ekspresija može biti povezana s onkogenezom raka želuca. Međutim, razjašnjavanje temeljni mehanizam regulacijom Mir-137 u želučanom stanica raka i tkiva čeka daljnje istraživanje. Pregled

Isto je s ostalim miRNAs, to je izvijestio da je Mir-137 bio je usko povezana sa stvaranjem i razvojem humanih karcinoma [8,18]. Kao važne komponente regulacije gena, u mnogim ljudskim stanicama raka, Mir-137 može regulirati različite gene i utječu na svoje funkcije u mnogim staničnim putevima. stanična proliferacija i migracija od raka dojke može se potisnuti Mir-137 potiskivanje estrogena vezanih receptora (ERRA) [19]. Dok u kolorektalnog stanice karcinoma, ektopična miR-137 ekspresija također može zaustavljanje staničnog ciklusa, potiskuje rast stanica, i inhibiraju staničnu invaziju putem ciljanja diobu kontrolni protein 42 homologa (Cdc42) [20]. Nedavno, Wu et al. pokazala da je Mir-137 je djelovao kao supresor tumora na želučanih stanica raka ciljajući Akt2 i dalje utječe na loše i GSK-3β, i potencijalno uključen u nastanku tumora i metastaziranja raka želuca [16]. Zheng i njegovi suradnici pokazali su da izvanmaternične izraz Mir-137 bila je dovoljna da se inhibira želučanu proliferacije stanica raka [21]. Osim toga, Steponaitiene R et al. Izlagao je da je Mir-137 metilacije je čest događaj u gastrointestinalnih karcinoma koji se javlja u ranom postepeno tijekom želučane karcinogeneze i obrnuto korelira s globalnim metilacije [22]. Navedene studije potvrdile da je Mir-137 igra ulogu koja je slična suzbijanje tumora miRNAs. Međutim, sve ove istraživanja uglavnom izvode u staničnim linijama karcinoma želuca, odnos između razine ekspresije Mir-137 i kliničkim karakterističnih čimbenika u bolesnika s karcinomom želuca nije utvrđena. U ovom istraživanju, istražili smo povezanost između ekspresije Mir-137 i prognozi bolesnika s rakom želuca nakon radikalne gastrektomije, te je utvrdio da Mir-137 je izraz bio neovisan prognostički čimbenik za ukupno preživljenje tih bolesnika uz TNM stadiju te je prognoza bolesnika s niskim mir-137 izražavanja bila je značajno lošija od one s visoka. Prema našim saznanjima, ovo je prvo istraživanje koje identificiraju Mir-137 izričaj kao samostalna slabe prognostički faktor za ukupno preživljenje pacijenata s rakom želuca sljedećem radikalne gastrektomije. Na temelju ovog stanja, primjenjujući prognostičke vrijednosti Mir-137 izražavanja TNM stadij III grupa je pokazala bolje stratifikaciju rizika za ukupno preživljenje u bolesnika s kasnim stadijem raka želuca. Međutim, potencijalni mijenjanje kliničkoj praksi treba biti potvrđen u randomiziranom kontroliranom ispitivanju u budućnosti. Pregled

Do danas, jer miRNAs predstavlja u nastajanju Hotspot za istraživanje raka, postoji sve veći interes s obzirom na Mirne odgovora izloženosti okoliša i načina života, uključujući i socijalnog statusa, uvjeta života i životnog stila ponašanja, kao što su pušenje i konzumiranje alkohola. Stánitz E et al. pokazala je da Mir-21 i Mir-143 bili regulira prema gore, a Mir-34a se regulirati na dolje u uzorcima karcinoma želuca u zapadnim zemljama. [23] U svjetlu tih uvjeta, bilo Mir-137 underexpression također promatrana u uzorcima bolesnika iz zapadnih zemalja rak želuca treba vrednovati u budućnosti. Osim toga, rak želuca iste histopatologijom iz populacije različitih geografskih regiona mogao pokazati diferencijalne miRNAs i proteina uzoraka, koje bi mogle nastati zbog postojanja različitih faktora rizika karcinogeneze. Pregled

Postoji nekoliko ograničenja ove studije. Prvo, ova studija je ograničena retrospektivne prirode analize i predrasuda odabir se ne može u potpunosti eliminirati, iako smo prikupili podatke iz prospektivno održava bazu podataka. Drugo, postoji heterogenost u pragova koji se koriste za određivanje granične Mir-137 izraza u ovom istraživanju. Srednje vrijednosti su najviše dosljedno koristi, zabilježene su ipak različite pragove. Treće, ne uključujući podacima preživljenja bez bolesti u ovoj studiji. Postoje mnogi faktori, kao što su follow-up pregleda i postoperativnom liječenju, može utjecati na bolesti slobodan opstanak. I slobodni podaci preživljavanje bolesti trebaju biti prikupljeni u budućim istraživanjima. Konačno, broj pacijenata uključenih u ovo istraživanje je relativno mali. Veliki potencijalni randomizirana kontrolirana klinička ispitivanja su potrebna za utvrđivanje prognostičke vrijednosti Mir-137 ekspresije u bolesnika s karcinomom želuca. Pregled

Ukratko, rezultati ovog istraživanja pokazuju da Mir-137 je obećavajući marker predvidjeti ukupno preživljenje pacijenata s rakom želuca nakon radikalne gastrektomije. Štoviše, ovi TNM stadij III pacijenata s rakom želuca s niskim Mir-137 izraza možda je potrebno više agresivno postoperativni tretman i bliži follow-up. Pregled

• PLoS ONE: Značaj serumskih Pepsinogens kao biomarker za rak želuca i atrofičnog gastritisa projekcije: sustavni pregled i meta-Analysis
• PLoS ONE: Deregulacija Iskazivanje SRC Lyn i CKB kinaza metilacije DNA i njegove potencijalne uloge u rak želuca invazivnost i Metastasis