Stomach Health > gyomor egészség >  > Gastric Cancer > gyomorrák

PLoS One: MED30 Szabályozza a és -motilitást gyomorrák Cells

absztrakt katalógusa

MED30 nélkülözhetetlen tagja a közvetítő komplex képező a hub közötti transzkripciós aktivátorok és az RNS-polimeráz II. Azonban a kifejezések és szerepei MED30 már rosszul jellemezve rák. Ebben a tanulmányban megvizsgáltuk a funkcionális szerepek MED30 alatt gyomorrák progresszió. Azt találtuk, hogy MED30 ben túltermelõdik gyomorrák szövetekben és sejtvonalakban. Sőt, MED30 túltermelése fokozott elterjedése, a migráció, és invázió gyomorrák sejtek, míg MED30 kiütése gátolta ezeket a hatásokat. Továbbá a leütést szignifikánsan gátolták tumorgenézisre SCID egerekben. MED30 is elősegítette kifejezései kapcsolatos gének epithelialis mesenchymalis átalakulás és indukált fibroblaszt morfológia. Ez a tanulmány azt mutatja, MED30 van kórélettani szerepet a proliferáció, migráció, és invázió gyomorrák sejtek és javasolja, hogy MED30 kell tekinteni, mint egy lehetséges terápiás célpont rosszindulatú gyomorrák katalógusa

Citation: Lee YJ, Han ME, Baek SJ, Kim SY, Oh SO (2015) MED30 szabályozza a és -motilitást gyomorrák sejtek. PLoS ONE 10 (6): e0130826. doi: 10,1371 /journal.pone.0130826 katalógusa

Szerkesztő: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: szeptember 22, 2014; Elfogadva: 26. május 2015; Megjelent: június 25, 2015 katalógusa

Copyright: © 2015 Lee et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra katalógusa

Az adatok elérhetősége: Minden lényeges adatot belül a papír. katalógusa

Forrás: Ezt a munkát segítette a Bio & Medical Technology Development Program (2012M3A9C6050213) és Basic Science Research Foundation (2012R1A1A3010521) a Nemzeti Kutatási Alapítvány (NRF) finanszírozza a koreai kormány (MEST) és a támogatás a Nemzeti R &D Program Rákellenes, Egészségügyi Minisztérium, Népjóléti és Családügyi Minisztérium, a Koreai Köztársaság (0920050). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a gyomorrák egyik fő oka a daganatos halálok világszerte [1, 2]. Mintegy 95% -a gyomor adenokarcinóma és az epidemiológiai vizsgálatokban gyomorrák sorolta anatómiai mint cardia /proximális vagy noncardia /disztális [3] és szövettani fenotípus bél, diffúz, vagy vegyes /osztályozhatatlan leírtak szerint Lauren [4 ]. Emellett a betegeknek proximalis gyomorrák rosszabb túlélési független TNM [5]. Helicobacter pylori
fertőzés kimutatták, hogy egy etiológiai ágens gyomorrák, különösen rákos megbetegedések megtalálható a disztális gyomor idősebb férfiakban, amelyek általában a bél típusát. Újabban több molekuláris osztályozási gyomorrák javasoltak megállapításai alapján a teljes genom génexpressziós vizsgálatok és /vagy gén kópiaszám tanulmányok [6-10]. Katalógusa

A transzkripció szabályozása egy fontos lépés, hogy az ellenőrzések sejt identitás, növekedésének, differenciálódásának és fejlődés. Humán mediátor (MED) komplex, amely tartalmaz ~ 30 proteineket, egy kulcsfontosságú koaktivátor /aktivátor a kifejezések az RNS polimeráz II (Pol II) -transcribed gének [11]. MED komplex megkönnyíti a pre-iniciációs komplex (PIC) összeszerelés által kölcsönhatás Pol II és a génspecifikus transzkripciós faktorok (TFS), mint például, TFIIA, TFIIB, TFIID, TFIIE, TFIIF, és TFIIH [12, 13]. MED komplexum három különálló szerkezeti almodulokat (fej, középső és hátsó). A fejrész közvetlenül kölcsönhatásba Pol II, míg a hosszúkás farok modul együttműködik gén-specifikus szabályozó fehérjék [12, 13], és a középső modul jár szabályozó jelátviteli egy poszt-kötő szakaszban [13]. Bár a mechanizmus még nem teljesen tisztázott, MED komplex szorosan kötődik a Pol II megváltoztatja felépítése és befolyásolja a transzkripció kezdetét folyamat [14, 15]. Mivel MED komplex lényeges eleme a transzkripciós gépezet, a legtöbb alegységek a lényege MED szükséges embrionális növekedés és a sejtek életképességét [16]. Katalógusa

A rák genom szekvenálása tanulmány arról számolt be mutációk vagy változtatások az RNS transzkripciós gépezet alkotóelemeit MED alegységek, és összefüggéseit néhány ilyen változások MED alegységek (MED1, MED12, MED19, MED23, MED28, CDK8 és ciklin C) és a rák progressziója számoltak különféle rákok, bár felelős mechanizmusok ezek az összefüggések ismertek [17].

Nemrégiben azt jelentették, hogy egy MED19 részt vehet gyomorrák progresszió, mint a knockdown szignifikánsan gátolta a sejtproliferációt és kolónia-képződés kapacitás, és az indukált G1 fázis sejtciklus letartóztatása két humán gyomorrák sejtvonalakon (SGC7901 és MGC803) [18]. Azonban a funkcionális szerepek és patológiás jelentősége más MED alegységek gyomorrák továbbra sem tisztázott. Katalógusa

A jelen tanulmányban, hogy felfedje a funkcionális jelentőségét MED30 alatt gyomorrák progresszió, megvizsgáltuk a szerepek proliferáció, migráció, invázió és tumorgenézisre a gyomor rákos sejteket. Mielőtt a funkcionális vizsgálat, megnéztük az expressziós mintázata MED30 gyomorrákban sejteket és szöveteket. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Sejttenyészetek és transzfekció katalógusa

A gyomorrák-sejtvonalak (SNU1 , SNU16, SNU216, SNU620, SNU638 és N87) vásároltunk a koreai sejtvonal Bank (Szöul). A sejteket RPMI1640 egészítve 25 mM HEPES, 10% magzati borjúszérumot (FBS) és 100 ng /ml penicillin /sztreptomicint (1 × P /S), 5% CO 2/95% levegő, 37 ° C-on. A sejteket transzfektáltuk siRNS felhasználásával DharmaFECT reagens 1 vagy 3 (Dharmacon, Lafayette, CO), a gyártó utasításai szerint. A szekvenciák siRNS használt a következők voltak: MED30 siRNS (Bioneer, Daejeon, Korea), 5'-CGA GCA ACU UAU UCC AUA U (dTdT) -3 ', 5'-GCU GCC AAA UGG UGU CAC U (dTdT) - 3 ', és az 5'-CGA GAA AUU GCU GAA GUA A (dTdT) -3'; zavart (SCR) siRNS (Dharmacon, Lafayette, CO), 5'GAU CCG CAA AAG AGC GAA A (dTdT) -3 '. katalógusa

MED30 túltermelése katalógusa

Annak érdekében, hogy össze MED30- felett expressziós vektor, használtuk pLenti6.3-V5 /DEST lentivirális vektorba (Invitrogen, Carlsbad, CA). Röviden, MED30 cDNS-t klónoztuk pLenti6.3-V5 /DEST vektor a in vivo
rekombináció-alapú átjáró Cloning System (Invitrogen). A donor vektor (pDONR221), amely a kódoló szekvenciát MED30 (MED30 cDNS) vásároltunk a végső TM ORF klónt (Invitrogen), és rekombinált a számláló által választható ccdB
gén a Gateway célállomás vektor pLenti6.3-V5 /DEST az LR clonase enzim keverék (Invitrogen). Az üres vektor pLenti6.3 /V5-DEST használtunk MOCK ellenőrzés. Rekombináns lentivírusok gyártottak 293FT sejtekben, és fertőzésére alkalmaztuk SNU638 szerinti sejteket a gyártó utasításai (ViraPower lentivirális rendszer; Invitrogen). Stabil sejtvonalak által létrehozott szelekcióval Blasticidin (7,5 ng /ml) (Invitrogen). Katalógusa

Real-time PCR katalógusa

A gyomorrák szöveteket szerezhető írásos beleegyezést átesett betegek műtéti reszekció a Pusani Nemzeti Egyetemi Kórház, vagy Pusani Nemzeti Egyetem Yangsan Kórház. A tanulmány által jóváhagyott Pusani Nemzeti Egyetemi Kórház-Institutional Review Board (PNUH-IRB), valamint a Pusan ​​Nemzeti Egyetem Yangsan Kórház-Institutional Review Board (PNUYH-IRB). A teljes RNS-t vontunk ki a szövetekben vagy sejtekben Trizol reagens (Invitrogen), vagy az RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA), a gyártó utasításai szerint. cDNS-t szintetizáltunk MMLV reverz transzkriptáz (Promega, Madison, WI), dNTP-t, és az oligo-dT láncindítók. A szekvenciákat a használt primerek a következők voltak: MED30, 5'-ACC GGT TAA CAA AGC TAC AGG A 3 '(szensz), és 5'-TAA GTT GCT CGA CTG GAA TGG G-3' (antiszensz); Cdh1, 5'TGG GCC AGG AAA TCA CAT CC-3 'és 5' CTC AGC CCG AGT GGA AAT GG-3 '; CDH2, 5'CAC TGT GGA GCC TGA TGC CA -3 'és 5' TCC CCA ATG TCT CCA GGG TG-3 '; CDH3, 5'CCC CCA GAA GTA CGA GGC CC-3 'és 5' ACG CCA CGC TGG TGA GTT GG-3 '; TWIST1, 5'CGG GAG TCC GCA GTC TTA-3 'és 5' TGG ATC TTG CTC AGC TTG TC-3 '; TWIST2, 5'CTT ATG TTT GGG GGG AGG TT-3 'és 5' TAG CCA AGC AAT CAC GGA GA-3 '; VIM, 5'TGA GTA CCG GAG ACA GGT GCA G-3 'és 5' TAG CAG CTT CAA CGG CAA AGT TC-3 '; SNAI1, 5'GAG GCG GTG GCA GAC TAG-3 'és 5' GAC ACA TCG GTC AGA CCA G-3 '; SNAI2, 5'TAG GAA GAG ATC TGC CAG AC-3 'és 5' CCC CAA GGC ACA TAC TGT TA-3 '; GAPDH, 5'GCA GCC TCC CGC TTC GTC CT-3 'és 5' TGG TGA CCA GGC GCC CAA TAC G-3 '. Real-time PCR-t végeztünk egy LightCycler TM 96 Real-time PCR System (Roche, Nutley, NJ, USA) FastStart esszenciális DNS Zöld Master (Roche), a gyártó utasításai szerint. GAPDH alkalmaztunk belső kontrollként.

Western-blot-analízis

A sejteket lizáltuk RIPA pufferrel, proteáz inhibitor koktélt adtunk hozzá, és a protein koncentrációkat határoztuk meg Bio-Rad fehérje vizsgálati készlettel ( Bio-Rad, Hercules, CA). A mintákat (80 ng /üreg) vetettük alá SDS-PAGE, majd átvittük PVDF-membránokra. Anti-MED30 (1: 500, Protein Tech§87-1-AP, Chicago, IL), anti-E-kadherin (1: 1000, BD Bioscienceɢ181, San Jose, CA), anti-N-kadherin (1 : 1000, BD Bioscienceɢ920), anti-P-kadherin (1: 1000, BD Bioscienceɢ227), anti-Twist1 /2 (1: 750, santa Cruz Biotechnology # SC-15393, santa Cruz, CA), anti -vimentin (1: 1000, DAKO # M7020, Carpentaria, CA) és anti-β-aktin (1: 2000, santa Cruz Biotechnology # SC-47778) antitesteket hígítottunk 5% lefölözött tej, és inkubáltuk membránok 4 ° C hőmérsékleten éjszakai. A megfelelő szekunder antitestet alkalmaztunk (1: 2000, torma peroxidázzal konjugált anti-egér vagy anti-nyúl) szobahőmérsékleten 1 órán át. Kemilumineszcencia detektálás (GE Healthcare, Little Chalfont, Egyesült Királyság) alkalmaztunk láthatóvá MED30, E-cadherin, N-kadherin, a P-kadherin, Twist1, vimentin, és β-aktin. Western-blot-analízist végeztünk három példányban.

Immunhisztokémia

Tissue microarray tartalmazó részek gyomorrák szöveteket betegektől nyertünk SuperBiochip (Szöul). Kórszövettani diagnózisok végeztük a Department of Pathology, Pusani Nemzeti Egyetemi Kórház, a klinikopatológiai stádium végeztünk a TNM osztályozás (AJCC, 7. szerk.). Valamennyi beteg szövettanilag igazolt gyomorrák, és a tumor mintákat ellenőrizni annak érdekében, hogy a tumorszövet álló több mint 80% a minták. Az immunhisztokémiai metszeteket paraffint és rehidratáltuk, kezeltük 0,3% -os hidrogén-peroxid 30 percig, hogy leállítsuk az endogén peroxidáz aktivitás, és blokkoltuk 10% normál szamár-szérum (NDS), és 1% BSA-val 1 × foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS). A lemezeket azután éjszakán át inkubáljuk 4 ° C-blokkoló pufferben tartalmazó primer antitest (anti-humán MED30; 01:50, Proteintech). Másodlagos antitestet (HRP-konjugált) kötést végeztünk hígításban 1: 200 blokkoló pufferben 2 órán át szobahőmérsékleten kevertük. Lemezeket ezután megfestjük HRP (Vector Laboratories) és ellenfestjük hematoxilin festést pufferrel (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), 1 percig. A százalékok sejtek festettük MED30 szakaszban meghatároztuk, és metszeteket ezután osztályozva egy 1-4 skálán (1, < 24%, 2, 25-49%, 3, 50-74%, 4, 75-100% ). Intenzitásai tumorsejt festés osztályoztuk mint a 0, 1, 2, vagy 3, amely megfelelt a bazális, gyenge, közepes, és erős volt. Összességében festést majd képviseli összetett mutatókat, amelyek szorzata a két évfolyamon. Ennek megfelelően az általános festett osztályoztuk 0 és 12 katalógusa

Cell proliferációs assay katalógusa

hatásának vizsgálata siRNS szaporodására gyomorrák sejtek, táptalaj váltották 1% FBS közegben egy nap után a siRNS transzfekció. Öt nappal a transzfektálás után 10 ul EZ-Cytox (ITSBIO, Szöul) adtunk hozzá, és a sejteket inkubáltuk 0,5-2 hr normál tenyésztési körülmények között. Ezután mértük az abszorbanciát 450 nm-en, ELISA leolvasóval (TECAN, Mannedorf, Svájc). Annak vizsgálata hatását MED30 overexpresszió, sejteket szélesztettünk 1% FBS közegben. Három nappal a vetés 10 nl Ez-Cytox adunk. Katalógusa

Boyden kamra assay katalógusa

Az alsó kamrájába Transwell kamrába közegben, amely 10% FBS-el. Transzfekció után egy nappal a kódolt (SCR) vagy MED30 siRNS, gyomorrák sejteket oltottunk a felső kamrába sűrűségben 5 × 10 5 sejt /ml 50 ul szérummentes közegben. Hatásainak vizsgálata a MED30 overexpresszió, sejtek (ál és MED30-over) oltottunk sűrűségben 1 × 10 5 sejt /ml. Kiküszöbölése proliferációs összefüggő hatások, a mitomicin C (0,01 ng /ml, Sigma-Aldrich) adtunk hozzá. A sejteket hagytuk vándorolni négy vagy hat óra. A membránokat ezután fixáltuk és használatával Diff-Quik-oldatot (Sysmex, Kobe, Japán), és desztillált vízzel mossuk. Cell számok 10 véletlenszerűen kiválasztott területeken számoltuk fénymikroszkóppal.

Matrigel inváziós vizsgálat

Az a képesség, a gyomor rákos sejteket, hogy támadják alkalmazásával vizsgáltuk 24 lyukú BioCoat TM Matrigel TM kamra betétek (BD Bioscience, San Jose, CA, USA). A felső felülete lapkák inváziós kamrák vontunk be 0,5 mg /ml növekedési faktor-csökkentett Matrigel (BD Bioscience), és az alsó felület 0,5 mg /ml a fibronektin (Sigma-Aldrich). Transzfekció után egy nappal SCR vagy MED30 siRNS, sejteket oltottunk sűrűségben 5 × 10 4 sejt /ml szérummentes tápközegben a 8-um porózus BioCoat Matrigel kamra betétek, és elhelyezni a kutak tele 750 ul a táptalajban, amely 10% FBS-sel, mint egy kemoattraktáns. Hatásainak vizsgálata a MED30 overexpresszió, sejtek (ál és MED30 overexpresszáló sejtek) oltottunk sűrűségben 1 × 10 4 sejt /ml volt. Eltávolításához proliferációs összefüggő hatások, a mitomicin C (0,01 ng /ml, Sigma-Aldrich) adtunk hozzá. Az inkubálás után 24 órán, nem-behatoló sejtek felső felületén membránokat eltávolítjuk kaparás. Betörő sejtek alsó felülete fixáltuk, festettük Diff-Quik-oldatot. Kísérleteket végeztünk három példányban, és legalább 5 mezőt értékeltünk egy kísérletben. Katalógusa

xenograft esszé katalógusa

A SNU638 sejteket SCR vagy MED30 siRNS. 2 nap után a sejteket tripszinezéssel összegyűjtjük, kétszer mossuk PBS-sel, és szubkután (1 × 10 6 sejt 100 ul PBS-ben) a súlyos kombinált immunhiányban (SCID) egerekbe. Kiszámítottuk a tumorok térfogatát hetente hétről három hétre hét után az injekció a következő képlet segítségével: a tumor térfogata (mm 3) = ( egy fiatal × b katalógusa 2 ) /2, ahol a egy fiatal = hossz mm és b katalógusa = szélesség mm-ben. A hét héttel az egereket leöljük, és a tumor térfogatát, és tömegét feljegyeztük. Ezt a kísérletet végeztünk szoros összhangban az ajánlásokat a útmutató a Care and Use of Laboratory Animals által kiadott National Institute of Health. A Pusan ​​Nemzeti Egyetem Intézményi Animal Care and Use Committee (PNUIACUC) jóváhagyta a kísérleti protokoll. Katalógusa

A statisztikai elemzés katalógusa

Az eredményeket átlag ± SD-k. A nem paraméteres Mann-Whitney U-tesztet vagy t-próba (párosítatlan) használtunk, hogy meghatározzák a significances közötti különbségek az átlagos értékek a két csoport, és az egyirányú variancia analízis (ANOVA), majd Tukey-féle többszörös összehasonlítás használtuk elemezni három vagy több csoport. * A P katalógusa értéke < 0,05. Túlélési idő az az idő között eltelt kezelés és a halál, vagy amíg az utolsó objektív nyomon követési információkat kapunk. A Kaplan-Meier-módszerrel, hogy meghatározza a viszonyát túlélés és MED30 kifejezést. Görbéket összehasonlítva a log-rank teszt szignifikancia szinten 95%. P katalógusa értékei < 0,05 tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. A statisztikai analízist SPSS 12.0 verzióját (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Katalógusa

Eredmények katalógusa

túltermelése MED30 gyomorrákban szövetek katalógusa

Annak vizsgálatára szerepeket játszott által MED30 a gyomorrák, először kifejeződését vizsgáltuk állapotát MED30 a daganatos szövetek 23 gyomorrákos betegek. MED30 fehérje találták, hogy széles körben túlexpresszálódik rákos szövet régiókban (ábra Az 1A-1D) volt, és nyilvánvalóan túltermelõdik betörő gyomorrák-sejtek (ábra 1C), és áttétes rákos sejtek belsejében érintett nyirokcsomók (1d). Annak érdekében, hogy érvényesítse a immunhisztokémiai eredmények végeztünk kvantitatív valós idejű PCR gyomorrák szöveteket MED30-specifikus primerek. Ábrán látható 1F, DPY30 volt overexpresszált 10 esetben (10/23, 43%). Vizsgáltuk azt is, expressziós mintázata MED30 gyomorrákban sejtvonalak real-time PCR, és azt találta, hogy túl expresszálódik öt a gyomor vizsgált rákos sejtvonalak (kivéve SNU1) versus normál gyomor szövetekben (ábra 1E). Annak vizsgálatára, a korreláció MED30 expresszió és a klinikai jellemzők végeztünk immunhisztokémiával 41 gyomorrák szövetminták (1. táblázat). Érdekes, hogy a kifejezés a MED30 pozitív korrelációt mutatott a N stádium (ábra 1G), de nem a beteg túlélési (nem közölt adatok). Katalógusa

Szerepét MED30 a proliferáció, migráció, és invázió gyomorrák sejtek

Annak vizsgálata szerepei MED30 a gyomor karcinogenezis megvizsgáltuk a hatásait MED30 hatást vagy túltermelése a proliferáció, migráció, és invázió a hat gyomor rákos sejtvonalak (SNU1, SNUI16, SNU216, SNU620, SNU638, és az NCI -N87 sejtek). Real-time PCR és Western blot segítségével elemeztük a leütést és túlzott mértékű MED30 a SNU216 és SNU638 sejtekben (a 2A-2C). Amikor ezeket a sejteket transzfektáltunk MED30 siRNS (100 nM), MED30 expressziója csökkent a fehérje és mRNS-szintek körülbelül 80% -kal, két nappal később versus SCR siRNS, és MED30 overexpresszió cDNS transzfekció fokozott MED30 mRNS és fehérje szinten versus üres kontroll vektor- transzfektált sejtek (ál-sejtek) több mint 3-szorosára emelkedett. katalógusa

a következőkben betöltött szerepét vizsgáltuk MED30 elterjedése a rákos sejteket. Proliferációs vizsgálati eljárásokat végeztünk, 5 nappal a transzfektálás után SCR vagy MED30 siRNS. Kiütése MED30 gátolta a proliferáció az összes gyomor rákos sejtek tesztelt (SNU16, SNU216, SNU620, és SNU638) versus SCR 18% -kal, 68%, 98%, és 42% -kal (ábra 2D). Hasonló eredményeket figyeltünk meg, amikor végeztünk proliferációs vizsgálati eljárások, két vagy három nappal a transzfekció után (adatokat nem mutatjuk). Következetesen, MED30 túltermelése fokozott a növedékek SNU216 és SNU638 sejteket 1,9 és 2,2-szeres, illetve versus színlelt sejteket. Katalógusa

Annak megállapításához, hogy milyen szerepet játszik MED30 a migráció gyomorrák sejtek, használtuk a Boyden kamra próba. Kiütése MED30 csökkent FBS-indukált vándorlásaival SNU216 és SNU638 sejtek 90% -kal és 52% -kal, versus SCR transzfektált sejtek (ábra a 3A és 3C). Sőt, MED30 túltermelése növelte FBS-indukált vándorlását SNU216 és SNU638 sejteket 3,2 és 2,8-szeres, illetve versus színlelt sejtek (3B ábra 3C). Ezek az eredmények vezettek bennünket, hogy mi a szerepe a MED30 az invázió gyomor rákos sejteket. Egy Matrigel inváziós vizsgálat, MED30 siRNS gátolta FBS-indukált betörései SNU216 és SNU638 sejtek versus SCR siRNS 64% -kal és 47% -kal (ábra 4A és 4C), és MED30 overexpressziója felgyorsult az FBS-indukált betörései SNU216 és SNU638 sejtek versus színlelt sejteket 2,5 és 2,2-szeres volt (ábra 4B és 4C). katalógusa

hatása MED30 kiütése a in vivo katalógusa tumorgenézisre katalógusa

hatásának vizsgálata MED30 on a tumor növekedését, azt szubkután injektált SNU638 transzfektált sejtek SCR vagy MED30 siRNS SCID egerekbe, majd monitorozni tumornövekedés hét hétig (5A). Tapintható tumorokat észlelt három héten belül az SCR kontroll oldalon. A daganatsejtek azonban transzfektált MED30 siRNS mutatott lassabb növekedés. Hét héttel az injekció beadása után az egereket leöljük, és a tumor térfogatát, és súlyokat mértük (5B és 5C). Az eredmények azt mutatták, MED30 kiütése jelentősen csökkentette a tumor térfogatát és súlyát. Katalógusa

rendeletre EMT útvonal által MED30 katalógusa

Az egyes mechanizmusának támogatása gyomor carcinogenesis által MED30 megvizsgáltuk expressziós mintázatát gének részt epithelialis-mesenchymalis tranzíció (EMT: a legfontosabb folyamat a metasztázis és invázió) real-time PCR. Kiütése MED30 kissé emelkedett a szint az E-cadherin (Cdh1) mRNS SNU638 sejtek versus SCR transzfekció, de csökkent kifejezések N-cadherin (CDH2), P-cadherin (CDH3) és vimentin (VIM) 42% -kal, 36% , és 41% -kal (ábra 6a). Egyenletesen, MED30 overexpressziója csökkent Cdh1-mRNS-szint 35% versus színlelt sejtek, de növelte a kifejezések N-cadherin (CDH2), p-cadherin (CDH3), csavar család bHLH transzkripciós faktor 1 és 2 (TWIST1 /2), és a vimentin (VIM) 2,9, 3,3, 3,4, 2,4, 2,2, és 4,2-szeres, illetve (ábra 6a). A mRNS-szintje a csiga család cink ujj 1 és 2 (SNAI1 /2) változatlan maradt. Ezután megerősítette, hogy MED30 overexpressziója is növelte a fehérje szint az E-cadherin, N-kadherin, a P-kadherin, Twist1, és vimentin (6B). Vizsgálata morfológiájának SNU638 sejtek feltárta, hogy MED30 overexpressziója kiváltott egy átmenetet egy macskaköves-szerű, hogy egy hosszúkás, fibroblaszt-szerű morfológiájú (ábra a 6C), mivel MED30 kiütése nem változtatta morfológia (az adatokat nem mutatjuk be). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy MED30 pozitívan szabályozza EMT. Katalógusa

Vita katalógusa

A funkcionális szerepek a MED alegység MED30 (más néven TRAP25) nehezen érthető. Egy friss jelentés, MED30 találták játszanak jelentős szerepet szabályozásában mitokondriális funkciók és integritását homozigóta egerekben [19]. A jelen tanulmányban azt vizsgáltuk, hogy a funkcionális szerepek MED30 alatt gyomorrák progresszió. Azt találtuk, MED30 szabályozta a proliferáció, migráció, és invázió gyomorrák sejtek és az in vivo katalógusa tumorogenitás. Miután biztosítva knockdown és overexpresszió hatékonyság kvantitatív, valós idejű PCR-rel és Western blot analízis (2. ábra), azt találtuk, hogy MED30 knockdown figyelemreméltóan elnyomta a proliferáció, migráció, és invázió gyomorrák-sejtek, és hogy MED30 overexpressziója volt az ellenkező hatásokat (ábrák 2-4). Sőt MED30 akciós csökkentett in vivo katalógusa tumorgenézisre (5. ábra). Továbbá azt is megállapította, hogy MED30 volt túltermelõdik gyomorrák szövetek és gyomorrák sejtvonalak (1. ábra). Ezek az eredmények azt sugallják, hogy MED30 játszhatnak fontos kórélettani szerepet közben gyomor carcinogenesis.

Mivel specifikus MED alegységek társított jel-aktivált transzkripciós faktorok és az RNS-polimeráz-II (Pol II) [20] és a funkciója, mint vezetékek és integrátorok számára csatornázás különböző jelátviteli útvonalak, mint például, a nukleáris hormon receptor útvonal (via MED1) [21], a TGF-β-szignalizációs (via MED12 vagy MED15) [22, 23], a Wnt-szignalizációs (via MED12) [ ,,,0],24], és a Ras-MAPK jelátviteli (via MED23) [25-27]. Azt javasolták, hogy ezekre a jeltovábbítási útvonalakra indukálhat EMT [28-32], amelyről ismert, hogy társítható a metasztázis, invázió, proliferációt és kemorezisztencia az epitheliális rák [29, 33, 34]. Ezért kértük, hogy MED30 kiváltja EMT. MED30 indukált kifejezései EMT kapcsolatos gének (N-cadherin; CDH2, a P-cadherin; CDH3, twist rokon fehérje az 1. és 2.; TWIST1 /2, vimentin, VIM), de gátolta a kifejezés a E-cadherin (Cdh1) egy ismert, hogy tumor szuppresszor (ábra 6A és 6B). Továbbá MED30 túltermelése okozta a fibroblaszt-morfológia (ábra 6C), ami arra utal, MED30 kiváltja EMT gyomorrákban sejtekben. Katalógusa

Összegezve, a jelen tanulmány alátámasztja azt az elképzelést, hogy a MED30 viselkedik, mint egy onkogén során gyomor carcinogenesis és javasolja MED30 lehet szabályozni EMT gyomorrákban. Bár további vizsgálatok szükségesek annak megállapítására, hogy milyen MED30 kiváltja EMT, eredményeink arra utalnak, hogy MED30 tekinthető új molekuláris célpontja kezelésére gyomorrák. Katalógusa

Köszönetnyilvánítás katalógusa

Ezt a munkát támogatja a Bio & Medical Technology Development Program (2012M3A9C6050213) és Basic Science Research Foundation (2012R1A1A3010521) a Nemzeti Kutatási Alapítvány (NRF) finanszírozza a koreai kormány (MEST), valamint a támogatás a Nemzeti R &D Program Rákellenes, Egészségügyi Minisztérium , Szociális és Családügyi Minisztérium, a Koreai Köztársaság (0920050). katalógusa