PLoS One: Glyoxalase-én egy új prognózisa tényező kapcsolódó gyomorkarcinóma Progression

absztrakt katalógusa

Glyoxalase I (GLO1), egy Metil méregtelenítő enzim szerepet játszik a progresszió a humán daganatos betegségek. A szerepe GLO1 gyomorrákban fejlődés vagy progresszió Jelenleg még nem világos. A kifejezés a GLO1 határoztuk primer gyomorrák mintákat kvantitatív polimeráz láncreakció, immunhisztokémiai (IHC), és Western-blot analízissel. GLO1 expresszió nagyobb volt gyomorrák szövetekben, összehasonlítva, hogy a szomszédos nem-rákos szövetekben. Emelkedett kifejezése GLO1 szignifikáns összefüggést gyomorfal invázió, nyirokcsomó-metasztázis és kóros színpadi, ami arra utal, egy újszerű szerepére GLO1 gyomorrákban kialakulásában és előrehaladásában. Az 5 éves túlélési arány az alsó GLO1 kifejezés csoportok szignifikánsan nagyobb volt, mint a magasabb expressziós csoport (log-rang P katalógusa = 0,0373) a IHC kísérletek. Túlzott expressziója GLO1 a gyomorrák sejtvonalakon növeli a sejtproliferációt, migrációt és invazivitását. Ezzel szemben, leszabályozza GLO1 az shRNS vezetett érezhetően csökkent a migrációs és behatolás képességeit. Adataink arra utalnak, hogy a magas expressziója GLO1 gyomorrákban fokozza a metasztázis képessége tumorsejtek in vitro katalógusa és in vivo katalógusa, és támogatja annak hatékonyságát, mint potenciális marker érzékelésére és prognózis a gyomorrák. katalógusa

Citation: Cheng WL, Tsai MM, Tsai CY, Huang YH, Chen CY, Chi HC, et al. (2012) Glyoxalase-én egy új prognózisa tényező kapcsolódó gyomorkarcinóma Progression. PLoS ONE 7 (3): e34352. doi: 10,1371 /journal.pone.0034352 katalógusa

Szerkesztő: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, Amerikai Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: december 8, 2011; Elfogadva: február 27, 2012; Megjelent: március 29, 2012 katalógusa

Copyright: © 2012 Cheng et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka ben támogatták Chang-Gung Egyetem, Taoyuan, Tajvan (NMRPD 150311, NMRPD170441-42, CMRPG 640042-43, CMRPG 670291-93), valamint a Nemzeti Tudományos Tanács, a kínai Köztársaság (NSC 95-2314-B-182 -027, 97-2314-B-182-009-MY2, 99-2314-B-182-022). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a gyomorrák a negyedik leggyakoribb formája a rák, és a második legnagyobb oka a rák összefüggő halálozás világszerte [1]. A rosszindulatú daganat a hatodik vezető oka a daganatos betegséghez kapcsolódó halálesetek Tajvan [2]. Megfelelő szűrés megkönnyítheti kimutatására gyomorrák előtt tünet fejlesztési egy gyógyítható stádiumban [3]. Meghatározása expressziós profilok kulcsfontosságú molekulák számos útvonalban résztvevő gyomorrák progresszió segíthet a diagnózis, prognózis és előrejelzése a tumor progresszióját. Katalógusa

A tumor invázió és metasztázis létfontosságú lépések meghatározásában agresszív fenotípusa emberi rákok jelent, és a fő oka a rák okozta halál [4]. Magas expressziója migrációval kapcsolatos tényezők, mint például a ciklooxigenáz 2 (COX-2) [5], a vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF) [6], CXC kemokin ligandumot (CXCL) -8 [7], kemokin (CXC motívum) receptor (CXCR) -2, és CXCL-1 [8], amelyek kapcsolatban vannak a gyomor rák progresszió. Számos potenciális onkogén utak (proliferáció /őssejt, NF-kB, és Wnt /β-catenin) szabályozatlan a legtöbb gyomor rák [9]. Így további vizsgálatokat a pontos molekuláris vezető események gyomorrák progresszió és azonosítását értékes diagnosztikai vagy prognosztikai markerek és új terápiás stratégiák jelentős klinikai értéke. Katalógusa

Glyoxalase I (más néven GLO1) lényeges eleme az utak vezetnek a méregtelenítő metil-glioxál (MG), az egyik oldalán termékek glikolízis [10], [11], [12]. GLO1 expressziója megnő számos humán rák a vastagbél-, emlő-, prosztata-, és melanoma [13], [14], [15], [16], [17]. A legújabb tanulmányok arról számoltak be, hogy a túlzott expressziója GLO1 társul rák progressziójának és gyógyszer-rezisztencia [17]. A mi korábbi adat, GLO1 upreguláció volt megfigyelhető gyomorrák példányok cDNS microarray [18]. Ugyanakkor a konkrét szerepe GLO1 során gyomor tumorigenezis és a klinikai jelentősége még meg kell teremteni. Katalógusa

A kísérleteink egyértelműen mutatják, hogy GLO1 gyakran túlzottan kifejezett gyomorrák és rákkal kapcsolatos áttét. Figyelemre méltó, hogy expressziója GLO1 lényegesen magasabb, előrehaladott gyomorrák. Továbbá, a változtatásokat a kifejezés GLO1 gyomorrákban sejtvonalak befolyásolja a sejtek migrációját és invázióját képességeit. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai Nyilatkozat katalógusa

A vizsgálati protokollt jóváhagyta az Egészségügyi Etikai és humán klinikai vizsgálat Bizottsága Chang Gung Memorial Hospital (IRB NO. 95-0472B). Írásos beleegyezését adta a minden beteg. Katalógusa

Témák katalógusa

A 114 beteg (64 férfi és 50 nő; átlagéletkor 66 év; tartomány 28-86 év) diagnosztizáltak gyomorrák a Chang Gung Memorial Kórház 2000-2005 vontak be a vizsgálatba. Minden beteg műtét elsődleges gyomorrák előzetes kemoterápia vagy sugárkezelés. Minden pácienst gyomor reszekció (35 betegnél összesen gastrectomián és 79 részleges gastrectomián). Katalógusa

Klinikopatológiai tanulmányok

reszekált mintákat vizsgált kórosan kritériumok alkalmazásával a japán általános szabályok gyomorrák Study [19] és az American Joint Committee on Cancer (AJCC) (pTNM) osztályozási rendszer [20]. Klinikopatológiai paraméterek szerepelnek a beteg életkora, neme, a tumor helye és mérete, bruttó (Borrmann a) a daganat típusa, fali invázió, reszekciós, szövettani típus, nyirokcsomó áttét, vaszkuláris invázió, nyirokér invázió és perineurális invázió. Kibocsátás után, minden betegnél rendszeres nyomon követési látogatást járóbeteg Chang Gung Memorial Kórház, míg a halál vagy az elején készítmény ezt a cikket. Katalógusa

Valós idejű kvantitatív reverz transzkripciós polimeráz láncreakció (qRT-PCR ) hotelben

qRT-PCR-t írja le a korábbi jelentésben [21]. A következő primereket használtuk: humán GLO1
QRT-PCR (forward primer, 5'-TGAGGATAAAAATGACATCCCTA- AAGA-3 ', és a reverz primer, 5'-TGTGTCAGCTCAAGTGTAGCTTTC-3'), humán 18S rRNS QRT-PCR (forward primer, 5'-CGAGCCGCCTGGATACC-3 ', és a reverz primer, 5'-CCTCAGTT CCGAAAACCAACAA-3').

Az anti-GLO1 ellenanyag

A cDNS-t kódoló teljes hosszúságú GLO1 katalógusa kiónoztuk pGEX-4T1. Lizátumát E. coli
BL21 törzset tisztítottuk glutation-agaróz gyöngyök (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Oldható proteineket tisztítottunk kromatográfiával glutation-agaróz gyöngyök, szerint a gyártó utasításait, emulgeált adjuváns, és használt nyulak immunizálására. Poliklonális antitesteket termelt és affinitás-tisztított, a korábban leírtak szerint [22]. A sajátossága házon GLO1 validált western blot analízis (ábra S1). Katalógusa

immunfoltelemzés katalógusa

Egész sejtlizátumok, nukleáris kivonatok, valamint a feltételes média állítottuk elő az emberi szövetek vagy stabil GLO1 knockdown sejtvonalakban. Western-blot alkalmazásával végeztük elleni monoklonális antitestek humán HIF-1α (ABCAM, San Francisco, CA), p65 (Epitomic, Burlingame, CA), vagy a p50 (Millipore, Billerica, MA) vagy poliklonális antitestek elleni humán GLO1 (in-house, hígítás, 1:500), CXCL1 (PeproTech. Inc., Rocky Hill, NJ), CXCL8 (R &D Systems Inc., Minneapolis, MN), VEGF (santa Cruz Biotechnology, santa Cruz, CA).

immunhisztokémiai (IHC)

formalinnal fixált és paraffinba ágyazott szövetek vizsgáltuk az IHC segítségével elleni poliklonális antitest emberi GLO1 elő-házban (hígítás, 1:3000), és az avidin-biotin komplex (ABC ) módszer, a korábban leírtak szerint [23], [24]. Összehasonlításokat hajtottunk végre intenzitása között festődése karcinóma sejteket és jóindulatú felületes hámszövet, amely kerültek ugyanazon a lemezen. A szemi-kvantitatív analízis fénycsíkra-1 immunreaktivitás, egy Histoscore (H) -scoring rendszert alkalmaztunk [25]. Röviden, a negatív csoportba rákos sejtek nem kimutatható (-), vagy csak nyomokban festéssel GLO-1 (1). A pozitív csoportba ráksejtek mérsékelt (2), illetve magas (3) A GLO-1 immunreaktivitás. A H-scoring számítottuk, és átlagosan két független patológusok, tudták, hogy a kezdeti pontszám minden beteg esetében. Az eredményeket pontoztuk szorozni a pozitív sejtek százalékos aránya (P) által az intenzitás (I), az alábbi képlet szerint: H = P × I. Például, egy szakaszt, amelyben 10% a szövet volt festődés +1 pontot, 60% a pontszám 2, és 30% a pontszám 3, H = (10 × 1) + (60 × 2) + (30 × 3) = 220.

létrehozása GLO1 túlzott expresszió az SC-M1 sejtvonal

A SC-M1 sejtvonal expresszáló alacsonyabb szintű GLO1 használtunk. A transzfekció GLO1
cDNS végeztünk Lipofectamine reagenssel (Life Technologies, Grand Island, NY). Az inkubálás után 24 órán, a sejteket tartalmazó tápközegben G418 a kiválasztás, és ezután használják a proliferáció, migráció, és behatolás vizsgálatokban.

létrehozása GLO1 knockdown a TSGH és AGS sejtvonalak

Két humán gyomor rákos sejtvonalak, AGS, és TSGH, alkalmaztunk. A rövid hajtű RNS (shRNS) szekvencia célzás GLO1 katalógusa (TRCN0000118630 ​​és TRCN0000118631) beszerezve az Országos RNS interferencia Core Facility (Institute of Molecular Biology, Academia Sinica, Tajvan). A konkrét elnyomása GLO1 alkalmazásával bizonyítottuk Western blot analízissel.

Cell proliferációs vizsgálati

sejteket (1 × 10 ^{4) növesztjük egy 6 cm-es lemez, 37 ° C hőmérsékleten 5 % CO _{2. Az egyes időpontokban, a növekedési ütem a sejtek határoztuk meg sejt számlálás. Az eredményeket a szeres változást képest minden kontroll értéket. Katalógusa}}

In vitro katalógusa vizsgálatban a migráció és az invazív tevékenység katalógusa

A hatás GLO1 kimerülése, vagy túl-on a migráció és invazív aktivitását gyomor rákos sejtvonalak alkalmazásával vizsgáltuk a gyors in vitro
assay (Transwell technika), a korábban leírtak szerint [26].

RNS-készítmény és microarray katalógusa

A GLO1-hangtompítós klón TSGH (kg2) és kontroll sejt klón (C1) öblítjük röviden jéghideg PBS-sel és lizáltuk TRIzol reagenssel (Invitrogen) az RNS kivonása. Génexpressziós profilokat között kg2 és C1 sejteket elemeztük az emberi U133A GeneChip (Affymetrix, Santa Clara, CA) alkalmazásával a gyártó protokollja [27].

Statisztikai analízis

A GLO1 megnyilvánulásai minden egyes alcsoportja clinicopatholgoical paraméterek 1. táblázatban átlag ± standard deviáció (SD) az IHC pontszám a betegek ezen alcsoportjában. A Kolmogorov-Smirnov teszt egy paraméteres teszt összehasonlítani minták referencia valószínűségi eloszlás. Adott esetben a Mann-Whitney U vagy Fisher-féle egzakt tesztet alkalmaztuk összehasonlítást a két csoport között, míg a Kruskal-Wallis, vagy a Pearson-féle chi-négyzet próbát alkalmaztunk összehasonlítani több mint két csoport között. A kapcsolat a kapott adatokat a két különböző vizsgálatok elemezték a Spearman-féle korrelációs tesztet. A betegeket megfigyelés alatt, amíg az idő kézirat előkészítése vagy halál. Rák-specifikus túlélés kimenetel alkalmazásával határozzák meg a Kaplan-Meier módszer minden beteg számára, kivéve azokat, akik meghaltak a műtéti szövődmények. A log-rank tesztet alkalmazunk, hogy összehasonlítsuk a prognosztikai az egyes változók a túlélésre. A Cox-féle arányos kockázati modellt alkalmaztuk a többváltozós elemzés azonosítani független előrejelzője a túlélésre. P katalógusa értékek < 0,05 értéket tekintettük szignifikánsnak. Katalógusa

Eredmények katalógusa

GLO1 mRNS és fehérje szinteket fokozódik gyomorrákos betegek katalógusa

A cDNS microarray, mi azonosítottak több serkentett gének gyomor szövetek, szemben a szomszédos nontumorous szövetekben [18]. Ezek közül a gének arra koncentráltunk, hogy GLO1 katalógusa molekuláris célpontja gyomorrák. Expression of GLO1 mértük rákos szövet, és összehasonlítottuk a párosított nontumorous gyomornyálkahártya segítségével QRT-PCR (n = 89) (2. táblázat), vagy az IHC (n = 114) (1. táblázat). Az adatok a QRT-PCR kísérletek felfedték GLO1 overexpresszió (≥1.5-szeresére) 51 (57,3%) mennyiségben a gyomorrák szövetekben, összehasonlítva jóindulatú szöveteket. Az átlagos GLO1 kifejezés a daganatos szövetekben volt 2,87-szerese a rákos szövetekben. Eredményeink megerősítik jelentős növekedését GLO1 expresszió a tumor szövetekben ( P
= 0,005, egymintás Kolmogorov-Smirnov teszt).

expresszáltatása GLO1 fehérje párosított mintákban tovább analizáltuk Western blot. 1A mutatja GLO1 kifejezés nyolc reprezentatív betegeknél. Azonos mennyiségű teljes fehérjék Coomassie blue SDS-PAGE után alkalmaztuk a terhelési kontrollként. Minden rákos szöveteket a gyomorrák minta (G1 G8) megjelenített serkentett GLO1 expressziót, míg a kiegyenlített jóindulatú szomszédos mucosa (1A.).

Immunfestést bizonyítja GLO1 fehérje túlzott expressziója a gyomor rákos szövetekben

további megállapítása, hogy GLO1 upreguláció korrelál a klinikai progresszió gyomorrák, IHC végeztünk paraffinba ágyazott gyomorrák szövetek és kiegyenlített jóindulatú nyálkahártyájában 114 beteg. Négy pár reprezentatív esetben (A /B, C /D, E /F, és g /h) ábrán mutatjuk be az 1B. IHC adatokat nem rákos nyálkahártya társaik (A, C, E, és g) és rákos szövet (B, D, F és H) hasonlítottuk össze párban. Sötétbarna immunfestést többnyire elterjedt a rákos sejtekben, míg szintje festés alacsonyabb volt stroma sejtek vagy a fibroblasztok a gyomorrák szövetekben. Erős festés GLO1 ben gyakran megfigyelhető előrehaladott gyomorrák tumorsejtek, ellentétben a gyenge vagy semmilyen festődés normál gyomornyálkahártya sejtek (ábra. 1B, felső panel). Festési intenzívebb volt az előrehaladott gyomorrák szakaszában [stádiumú látható. 1B (f, h)], míg a szakaszok I [Fig. 1B (b)] és II [Fig. 1B (D)]. Között a 114 beteg elemzett, az átlagos IHC pontszám a tumor szövetekben 139,8 ± 62,8 volt, ami szignifikánsan nagyobb, mint az (36,7 ± 40,4), a megfelelő szomszédos mucosa (n = 87) ( p
< 0,001 , Wilcoxon signed rank teszt). Továbbá, páros összehasonlítása immunreaktivitást GLO1 (n = 87) feltárta, hogy a IHC pontszámok a rákos szövetek magasabb volt, mint a nontumorous társaik 77 (88,5%) betegnél, egyenlő három betegnél (3,4%), és az alsó hét betegnél (8,0%). katalógusa

GLO1 kifejezés és klinikai összefüggések katalógusa

GLO1 kifejezés a tumor szövetben nem volt szignifikáns összefüggést az életkor, a tumor helye vagy a szövettani típus (1. és 2. táblázat). A magasabb szintű GLO1 nyilvánvalóak voltak a T3 /T4 csoportok, ahol az üreg felületén a gyomorfal megszállta a rák, összehasonlítva a T1 /T2 csoportban, ahol nem invázió egyértelmű volt ( P katalógusa = 0,015 QRT - PCR és P = 0,001 katalógusa IHC; 2A., 1. és 2. táblázat). Kifejeződése GLO1 szignifikánsan növekedett, áttétes a nyirokcsomókban ( P katalógusa = 0.001 qRT-PCR és P katalógusa < 0,001 IHC mutatja be. 2B 1. és 2. táblázat) . Magasabb kifejezés nyilvánvaló volt a betegek nyirokér invázió ( P katalógusa = 0,001 és P katalógusa = 0,016 QRT-PCR és IHC volt; 1. és 2. táblázat), és perineurális invázió ( P
= 0,024 qRT-PCR-rel, 2. táblázat). Fokozott GLO1 expresszió nem vaszkuláris invázió vagy a távoli áttét, beleértve a peritoneális vetés vagy a máj metasztázis, mind qRT-PCR és IHC kísérletek. Expression of GLO1 szignifikánsan magasabb volt azoknál a betegeknél, fejlettebb patológiai szakaszokban (III /IV) gyomorrák, azokhoz képest, a korábbi patológiás szakaszokban (I /II) ( p
= 0,001 és P
< 0,001 qRT-PCR és IHC esetében) (ábra. 2C 1. és 2. táblázat). katalógusa

túlélési eredmények katalógusa

a átlagos időtartama a nyomon követési időszak 52 túlélő volt 70,4 hónap (28-119 hónap). Négy beteg halt meg a posztoperatív szövődmények és hat más okok miatt. Ötvenkét beteg halt miatt gyomorrák progresszió. A teljes kumulatív ötéves túlélési arány a 114 beteg 49,3% volt gastrectomia után. Hogy milyen módon befolyásolja a GLO1 expresszió túlélésben, a beteget két csoportra oszthatók, a magasabb és alacsonyabb kifejezések szerint a cutoff érték, amely azt igazolja, szignifikáns különbség (log-rang P katalógusa < 0,05) túlélési arányok között 2 csoport. A medián (= 140), a felső kvartilis (= 180 vagy 75 ^{percentilisbe), és az alsó kvartilis (= 90 vagy 25 percentilisbe) IHC pontszámot betegünk kezdetben megvizsgálni a cutoff értékek. Ezek közül csak az alsó kvartilist mutathat szignifikáns különbség a túlélés kimenetelét. Ábra. 2D ábra a kumulatív túlélési görbék a betegek az alsó és magasabb expressziós GLO1 csoportok szerint megosztott vágási IHC pontszám 90. Az 5 éves túlélési arány az alsó GLO1 kifejezés csoportok szignifikánsan nagyobb volt, mint a magasabb expressziós csoportok ( 69,6% vs. 43,3%; log rank P katalógusa = 0,0373) a IHC kísérletek. Egyváltozós analízis nyilvánosságra számos jelentős prognosztikai tényezők, beleértve a status nyirokcsomó-metasztázis, távoli áttétek, hashártya vetés, vaszkuláris invázió, nyirokér invázió, mélysége invázió, patológiai stádium, a máj metasztázis és perineurális invázió, ráadásul GLO1 kifejezést. Ilyen lényeges paraméterek voltak szövettani típus, a daganat mérete, és a bruttó típusú (1. táblázat). Továbbá, a többváltozós elemzés, a független prognosztikai tényezők betegek túlélési benne nyirokcsomómetastasis (relatív kockázat = 5,954, 95% CI = 1,183-29,977, P katalógusa = 0,031), és a távoli áttétek (relatív kockázat = 2,464, 95% CI = 1,030-5,896, P katalógusa = 0,043). katalógusa}

Túlzott kifejezése GLO1 SC-M1 fokozza a sejtburjánzást, migrációs és behatolás tevékenységét. katalógusa

határozhatják meg a túlzott kifejeződése GLO1 katalógusa SC-M1 sejtek, szaporodása, migrációja és invázió tevékenységek vizsgáltuk. Két hét után a transzfekció stabil expresszióját GLO1 protein jött létre. 3a ábra 2,36-szeres és 2,29-szor magasabb GLO1 expressziójával. A sejt proliferációt úgy határoztuk meg, sejtszámlálási megjelölt és a hajtás a kontroll legfeljebb öt napig. GLO1 katalógusa -overexpressing sejtek állatkísérletekben szignifikánsan ( P katalógusa < 0,01) magasabb proliferációs ráta (1.86- vagy 2,06-szeres), mint a transzfektált kontroll vektor az 5. napon (ábra. 3B). Sőt, GLO1 katalógusa -overexpressing sejtek szignifikánsan ( P katalógusa < 0,01) magasabb migrációs ráták (5.53- vagy 4,57-szeres) és invazív képességek (3.7- vagy 3,47-szeres), mint a kontroll társaik (ábra. 3C és D). Képek a sejtsűrűség mutattak a két vezérlő és két túl-expresszáló sejtvonal (bal oldali panelek ábrákon. 3C és D).

Le-expresszióját GLO1 a TSGH vagy AGS sejtek csökkenti a sejtmigrációt és invázió tevékenységek

az eredmények megerősítik a magas expresszióját GLO1 előrehaladott gyomorrákban, míg a rákos gyomor nyálkahártyáját. Annak meghatározásához, hogy GLO1 kifejezés társul invazivitását gyomor rákos sejtvonalak, a hatásait GLO1 kimerülése a rövid hajtű (sh) RNS plazmidok a tumorsejtek invázióját tevékenysége TSGH vagy AGS sejteket vizsgálták. ShRNS kódoló expressziós vektorok az antiszensz GLO1 szekvencia-t transzfektáltunk TSGH és AGS expresszáló sejtvonalak magas szintű endogén GLO1. GLO1 expresszió szignifikánsan represszált TSGH-KG1, -KG2 (0,32 és 0,14-szeres) és AGS-KS1, -KS2 (0.26- és 0,21-szeres) altermékvonal, illetve képest, hogy a transzfektált sejtekben a kontroll vektorok ( C1, C2; 4A. és B). KG1 és kg2 GLO1 kimerített sejtek állatkísérletekben szignifikánsan ( P katalógusa < 0,05) csökkentette migrációs ráták (0.16- vagy 0,044-szeresére) és inváziós képességek (0.43- vagy 0,29-szoros volt), mint a kontroll vektor -transfected sejtek (ábra. 4C és D). Hasonló eredményeket kaptunk AGS-KS-sejteket (KS1 és KS2) (ábra. 4E és F). Eredményeink arra utalnak, hogy együttesen GLO1 pozitívan szabályozza a migrációs és behatolás képességeit gyomorrák sejtek. Katalógusa

Le-kifejezése GLO1 csökkenéséhez vezet szerepet játszó gének a metasztázis-asszociált utak katalógusa

Annak ellenőrzésére, hogy a GLO1 fehérje befolyásolja metasztázis kapcsolatos gének, összehasonlítottuk a genomot kifejezése kg2 és C1. Számos gén serkentett (≥1.5-szeres) a C1, összehasonlítva kg2, választottak ki. MetaCore ™ elemzés [28] kimutatta, hogy a felső szintű molekuláris útvonalakat változtatták KG klón adhesion_cytokines és tapadást utak. Fehérjék [például a mátrix metalloproteináz (MMP), CXCL8 és CXCL1] részt az utakat is leszabályozott upon GLO1 hangtompító. Között a citokin kapcsolatos útvonalaknak, magas szintű expresszióját a VEGF, CXCL8, CXCR2, és CXCL1 társított rák metasztázis és progressziója [8], [29]. Korábban, Daniel J. et al.
[30] beszámolt arról, hogy túlzott expressziója GLO1 fokozhatja stroma sejt-eredetű faktor-1 (SDF-1), CXCR4, és a VEGF expresszió hipoxiás endotéliás progenitor sejtek kultúra magas glükóz. Ezért is elemeztük a VEGF expresszióját a KG stabil vonalak.

további validált az expressziós mintázatát fehérjék VEGF vagy citokin-kapcsolatos útvonalaknak a Western-blot-analízis. A szinteket a megcélzott gének, beleértve CXCL1, CXCL8, CXCR2, és a VEGF, szignifikánsan gátolta TSGH-KG stabil sejtvonalak (KG1 és kg2), szemben az vektorral transzfektált kontroll (ábra. 5A). Továbbá, a szintek az NF-kB és HIF1a-α, a jól ismert transzkripciós faktorok pro-angiogén növekedési faktorok (mint például a CXCL8, CXCL1, és VEGF) [31], csökkent a magok TSGH-KG stabil sejtvonalak , szemben a kontroll sejtek (ábra. 5A). MMP2 és MMP9, a kulcs enzimek megalázó IV típusú kollagén, úgy gondolják, hogy kritikus szerepet játszanak a tumor invázió és metasztázis [32]. Nevezetesen, az ózonréteg GLO1 vezetett jelentős elnyomása MMP2 és MMP9 tevékenység (ábra. 5B). Adataink azt mutatják, hogy GLO1 szabályozza az aktiválás a metasztázis-asszociált jelátviteli mechanizmusok gyomor rákos sejtekben. A fenti eredmények alapján azt javasoljuk, hogy GLO1 közvetíti gyomorrák sejtek migrációját és invázióját legalább részben közvetített aktiválása révén CXCL1, CXCL8, és a VEGF. Katalógusa

IHC mutatja koexpressziójának GLO1 a CXCL1 és CXCR2 fehérjék és túl- kifejezés a gyomor rákos szövetekben katalógusa

a korábbi vizsgálatok szerint a citokin receptor kölcsönhatás és a VEGF által közvetített jelátviteli mechanizmusok a rosszindulatú daganatokkal kapcsolatos jellemzők gyomorrákban [8], [33]. Korábban, a csoport mutatott szignifikáns összefüggést a CXCR2 és CXCL1 túlzott kifejeződése (n = 116) a gyomor daganatos progresszió [8]. Következetesen, a IHC analízis szignifikáns pozitív korrelációt találtak a kizárólag a pontszámok GLO1 és CXCL1 vagy CXCR2 a rákos szövetekben (Spearman-féle korrelációs együttható = 0,238 és 0,293; P katalógusa = 0,013 és P
= 0,003, sorrendben). Továbbá immunfestésével egymást követő szakaszok szignifikáns kifejezése GLO1, CXCL1 és CXCR2 fehérjék tumor hámsejtek [Fig. 5C (B), (D) és (F)], szemben a nem, vagy alacsony expressziót nem-rákos szövetekben [Fig. 5C (a), (c) és (e)]. Katalógusa

Vita katalógusa

Mivel a második leggyakoribb oka a rák okozta halál, gyomorrák továbbra is kihívást jelent a betegség. Az adatok a jelenlegi vizsgálat igazolta, hogy túlszabályzását GLO1 gyomorrákban szövetekben jelentősen összefügg a tumor progresszióját és előrehaladott szakaszában a betegséget. Egybehangzóan a betegek, akiknek alacsonyabb GLO1 szinten jobb volt a betegség prognózisa. Sőt, qRT-PCR és IHC kísérleteket ismertetett korrelációs fokozott GLO1 kifejezés a helyi tumor progresszió és a nyirokcsomó invázió. Megfigyeltük jelentős csökkenést a metasztázis és invázió képességeit GLO1-deficiens sejtek egyidejű a csökkent szintek több metasztázis-asszociált faktorok, beleértve a VEGF, a CXCL1, CXCL8, MMP-k, és CXCR2. Az IHC vizsgálat pozitív szignifikáns korrelációt GLO1 és CXCL1 expressziós mintázat volt megfigyelhető kimetszett mintákat a gyomorrák. Továbbá, emelkedett GLO1 és az egyidejű CXCL1 túlzott expresszió az gyomorrákos betegeknél szignifikánsan korrelált a túlélést. Eredményeink közvetlen bizonyítékokat bevonásával GLO1 gyomorrákban progresszió és a hatalom révén váltakozása downstream migrációs és behatolás utak. Katalógusa

Nagy kifejezése GLO1 összefüggésbe hozták a különböző rákos [16], [17] . A legújabb vizsgálatok arra utaltak, létfontosságú szerepe GLO1 számos rák típusok in eltávolítását metil-glioxál (MG), amely tekinthető karcinosztatikus, így a fejlesztés a GLO1 inhibitorok tumorellenes szerek [34], [35]. Így magas expresszióját GLO1 részt vesz a rákos sejtek ellenállás által indukált apoptózisra tumorellenes szerek [36]. Sakamoto et al.
[36] javasolta, hogy GLO1 nem csak egy tumor, hanem egy gyógyszer-rezisztencia markert. Ezzel összhangban a GLO1 knockdown-klónok voltak érzékenyek a számos kemoterápiás szerek, mint például kamptotecin, az etopozid (az adatokat nem mutatjuk). Klinikailag, eredményeink azt mutatják, hogy GLO1 erősen expresszálódik a gyomorrák és jelentősen összefügg a tumor progresszióját és előrehaladott szakaszában a betegséget.

glikolitikus elváltozások rákos sejtek jelentenek metabolikus alkalmazkodás hipoxiás tumorok keresztül az intézkedés a hipoxiával indukált transzkripciós faktor (HIF-1) [37], [38]. Ezen túlmenően, a transzkripciós faktorok, HIF1a-α és az NF-kB, döntő szerepet játszanak különböző folyamatok, mint például a gyulladás, a mikrobiális leölés és a rák progressziójának [39]. Tumor hipoxia úgy tűnik, szorosan összefügg a tumor terjedését, rosszindulatú progresszió, és ellenáll a terápiát. A HIF-1α útvonal egyértelműen részt vesz a karcinogenezis gyomorrák [39]. Ezen túlmenően, immunhisztokémiai expressziója HIF-1α célgének (Glut1, VEGF, CA9, iNOS) van társítva gyomor tumor progresszióját [40]. Között a onkogén utak, NF-kB jelátvitel emelkedett a jelentős része a gyomor rákos megbetegedések [9]. Sőt, számos bizonyíték mutat arra támogatás áthallás közötti NF-kB és a HIF-1α jelátviteli útvonalak [41]. Kísérleteinkben szintje egyaránt HIF-1α és az NF-kB csökkentették atommagok upon GLO1 hangtompító gyomorkarcinómában sejtvonalak, valamint a downstream célgének (VEGF, CXCL1, CXCL8, MMP-k).

A mi tanulmány, abnormálisan emelkedett GLO1 expressziós társult progresszív fenotípusok, mint például a gyomor fal invázió, nyirokcsomó-metasztázis, patológiai stádiumban, és nyirokrendszeri invázió. Korábban azt jelentette, hogy az emelkedett CXCL1 és CXCR2 gyomorrákban társul tumorprogresszió, és hogy a plazma CXCL1 szint hasznos lehet a keringő biomarker gyomorrák diagnózis [8]. Itt kaptunk közvetlen klinikai bizonyíték erős korrelációt expressziós mintázata GLO1 és CXCL1 vagy CXCR2. GLO1 expresszió összefüggésben lehet aktiválás citokin-receptor társított és a VEGF jelátviteli utak, ami lehetséges mechanizmusa fokozott motilitást és az invazív képességét. Eredményeink megerősítik túlzott kifejeződése GLO1 a gyomorrák és erős szövetség az előrehaladott és rossz prognózissal. Korábbi tanulmányok szerint a csoport kimutatta, hogy a SPARC [18], CLIC1 [42], SLPI [43], CXCL1, CXCL8 és CXCR2 nagymértékben expresszálódik és kapcsolódó előrehaladott stádiumaiban és szegény gyomorrák prognózisa [8]. Ezek az új potenciális biomarker lehet tehát alkalmazni, hogy javítsa a specificitása és érzékenysége gyomorrák diagnózist. A további fejlesztések és megerősítése a hasznosságát ezen markerek nagyobb betegcsoportok potenciálisan vezetnek klinikai alkalmazásokhoz. Katalógusa

Támogató információ
ábra S1.
Sajátosságait házon GLO1 validált western blot analízis. Nyúl poliklonális anti-GLO1 antitest (jobb oldali kép) és a negatív kontroll pre-immun szérumot (bal oldali kép) használtunk. A GLO1 fehérje szinten határoztuk TSGH-C1 és -KG2 gyomor sejtvonalak az in-house GLO1 antitest. β-aktin használtunk belső kontrollként teljes sejtlizátumok.
doi: 10,1371 /journal.pone.0034352.s001 katalógusa (TIF) katalógusa

• PLoS One: a térbeli eloszlást LGR5 + sejtek korrelál gyomorkarcinóma Progression
• PLoS One: Stathmin1 Plays onkogén szerepe van és az a cél, mikro-RNS-223 Gyomor Cancer