Stomach Health > gyomor egészség >  > Gastric Cancer > gyomorrák

PLoS One: klinikai jelentősége a miR-137 expressziója a gyomorrákos betegeknél után Radical gasztrektómiának

absztrakt

A szabályozási zavarának miR-137 játszik fontos szerepet a onkogenezisben és progressziójában különböző típusú rák, de szerepe a gyomorrák prognózisa betegek továbbra is ismeretlen. Ez a tanulmány célja az volt, hogy vizsgálja meg a véleménynyilvánítás és prognosztikai jelentősége miR-137 gyomorrákos betegek után radikális gastrectomián. Kvantitatív valós idejű PCR (QRT-PCR) végeztünk, hogy értékelje a kifejezés a miR-137 humán gyomorrák sejtvonalak és szövetek betegeknél gyomor adenokarcinóma. Eredmények meghatározásához való társulásra klinikai tényezők és a teljes túlélés adatait Kaplan-Meier-analízis. Prognosztikai értéke miR-137 expresszió és a klinikai eredmények kiértékelését Cox regressziós analízis. Az eredmények mutatott, hogy az expressziós szintje a miR-137-ra csökkentettük a humán gyomor rákos sejtvonalak és szövetekben, és le-szabályozott expressziójának miR-137 társult tumor sejtek differenciálódását, az N szakaszban, és TNM-beosztása. Csökkent a miR-137 expressziója gyomorrákban szövetekben pozitív korrelációt mutatott a gyenge teljes túlélése gyomorrákos betegek. További többváltozós Cox regressziós analízis azt javasolta, hogy a miR-137 expresszió független prognosztikai mutató gyomorrák kivéve TNM. Alkalmazása a prognosztikai miR-137 kifejezést TNM III csoport mutatott jobb rizikóstratifikáció teljes túlélésre. Összefoglalva, az eredmények megerősítették a kritikus szerepet a alulszabályozott miR-137 expresszió gyomorrák, és azt javasolta, hogy a miR-137 expressziós lehet prognosztikus indikátor erre a betegségre. Ezen túlmenően, ezek a betegek TNM III gyomorrák és alacsony miR-137 expressziós szükség lehet agresszívabb posztoperatív kezelés és a szorosabb nyomon követést.

bevezető hivatkozás: Gu Q, Zhang J., Hu, H Tan Ye, Shi S, Nian Y (2015) klinikai jelentősége a miR-137 expressziója a gyomorrákos betegeknél után Radical gasztrektómiának. PLoS ONE 10 (11): e0142377. doi: 10,1371 /journal.pone.0142377 katalógusa

Szerkesztő: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japán katalógusa

Beérkezett: augusztus 14, 2015; Elfogadva: október 21, 2015; Megjelent: november 6, 2015 katalógusa

Copyright: © 2015 Gu és mtsai. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra katalógusa

Az adatok elérhetősége: Minden lényeges adatot belül a papír. katalógusa

Forrás: a szerzők nem támogatja vagy finanszírozási jelenteni. katalógusa

Érdekütközés: a szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. katalógusa

Bevezető

Kína egyik országban a legmagasabb előfordulási gyomorrák és a számlák több mint 40% -a az összes új eset világszerte [1,2]. Annak ellenére, hogy az agresszív terápia, a prognózis előrehaladott gyomorrák kezelésére Kínában általában a lehangoló [3,4]. Jelenleg tumor-node-metasztázis (TNM) stádium rendszerben az Unió Nemzetközi Rákellenes /American Joint Committee on Cancer (UICC /AJCC) a legfontosabb prognosztikai faktor a gyomorrák [5]. Azonban, mivel van heterogenitás a molekuláris szinten a gyomorrák, ez elegendő ahhoz, hogy csak azon múlik, TNM-beosztása megjósolni a gyomorrák prognózisa [6]. Ezért a molekuláris markerek azonosítása, amelyek jelzik a gyomorrák agresszivitás és a prognózist a beteg, mint kiegészítő TNM rendelkezik azzal a potenciállal, hogy javítsa a képességét, hogy betegek kezelésére nyújthatnak klinikailag releváns betekintést fontos a betegség kezelése. Ezen túlmenően, adja meg a betegeket, akiknek hasznára válhat a legnagyobb precíziós kezelés gondolt, mint a legjobb módszer, hogy csökkentse a halálozási arány a gyomorrák, kivéve a műtét. Katalógusa

A mikroRNS (miRNS) apró endogén 19-25 nukleotid nem kódoló RNS-ek, amelyek szabályozzák a génexpressziót utáni transzkripcionálisan a bázispárosodás a 3'-nem transzlatált régió (3'-UTR) target messenger RNS-ek (mRNS-ek), hogy így az mRNS degradációját vagy gátlása fordítás [7]. Számos emberi rák, miRNS működhet onkogének vagy tumor szuppresszor gének, hogy elnyomja fordítás vagy indukálják az mRNS degradáció jellegétől függően azok célkitűzések [8]. Korábban vizsgálatok igazolták, hogy a kifejezés a miR-137 alulszabályozott és úgy, mint egy prognosztikus markereként a különböző típusú rákok, beleértve a tüdőrák [9], a kolorektális rák [10], petefészekrák [11], mieloma multiplex [12] , gasztrointesztinális sztróma tumor [13], a glioblastoma, [14] és pikkelysejtes karcinóma, a fej és a nyak [15]. Ez volt a közelmúltban kimutatták, hogy a miR-137 expresszió szignifikánsan csökkent a gyomorrák szövetekben, és a szuppresszió egyidejűleg súlyosságával kóros elváltozásokat, ami arra utal, a potenciális tumor szuppresszor szerepe miR-137 gyomorrákban [16]. Ugyanakkor kiterjedt elemzést kifejezése miR-137 korrelált a gyomorrák prognózisa betegeknél nem végeztek, és várja a további tisztázása. Katalógusa

Az elv Célom, hogy értékelje a kapcsolat kifejezése miR -137 és teljes túlélési gyomorrákos betegek annak érdekében, hogy azonosítsa a prognosztikai jelentősége miR-137 expresszió. A tanulmány eredményei mutatnak, hogy a kifejezés szintjén miR-137 volt, leszabályozza a gyomorrák sejtek és szövetek miR-137 expresszió független prognosztikai tényező gyomorrák. Katalógusa

Anyagok és módszerek

Etikai nyilatkozat katalógusa

Ez a tanulmány áttekintette és jóváhagyta az Institutional Review Board második Affiliated Kórház Xi'an Jiaotong Egyetem és a kapcsolt Kórház Yan'an Egyetem (Shanxi tartomány, Kína). Minden tanulmány résztvevői, vagy a törvényes gyám, feltéve tájékozott írásos hozzájárulása vizsgálat előtt beiratkozás. Katalógusa

Sejtkultúra katalógusa

halhatatlanná normális emberi gyomornyálkahártya sejtvonal GES-1 és öt emberi gyomor rákos sejtvonalak, beleértve MKN-45, SGC7901, BGC-823, MGC-803, és AGS kaptuk közvetlenül Shanghai Cell Bank of kínai Tudományos Akadémia (Sanghaj, Kína). Mindezek a sejteket rutinszerűen tenyésztettük és RPMI-1640 (Gibco) tápközegben, kiegészítve 10% borjúembrió-szérumot (Invitrogen), 37 ° C-on, nedvesített sejt inkubátorban, atmoszférában, 5% CO 2

Klinikai minták

Friss gyomor adenokarcinóma szövetek és szomszédos normál szövetben gyűjtöttünk két független készlet tartalmaz 154 beteg gyomor adenokarcinóma. Minden beteget vontak be ebben a vizsgálatban is gyökeresen gastrectomián (R0 reszekció szerint UICC /AJCC és D2 nyirokcsomó). Példányai tanító (n = 67) kaptunk januártól 2005. decemberi és 2009. A második Kapcsolt Kórház Xi'an Jiaotong Egyetem (Shanxi tartomány, Kína), valamint példányai validálási sorozatban (n = 87) kaptunk között január 2008 és 2010. december A kapcsolt Kórház Yan'an Egyetem (Shanxi tartomány, Kína). A mintákat gyorsan lefagyasztottuk folyékony nitrogénben tároljuk felhasználásig. A mintákat újra meg két patológusok függetlenül, és a színpadon a gyomorrák besorolása szerint a TNM rendszer az UICC /AJCC [5]. A betegeket Kizártuk azokat előzőleg kitett bármely célzott terápia, radioterápia, kemoterápia, és /vagy a beavatkozás terápiás gyomorrák.

QRT-PCR

Teljes RNS-tartalmú miRNS-t extraháltunk a tenyésztett sejtek vagy szövetek használatával miRNeasy Mini Kit (Qiagen). cDNS-t szintetizálunk miScript Reverse Transcription Kit (Qiagen), a gyártó utasításai szerint. A reverz transzkripciót vállalta alkalmazásával 50 ng teljes RNS-t egy primerrel specifikus miR-137, valamint a SYBR Green mikro-RNS reverz transzkripciós kit. miRNS mennyiségi meghatározását a SYBR Green miRNS QRT-PCR vizsgálattal, a gyártó protokollja (Applied Biosystems). A QRT-PCR reakciót végeztünk egy 7500 gyors, valós idejű rendszer (Applied Biosystems). Minden kvantitatív RT-PCR-eket három párhuzamosban végeztük. Az adatokat elemeztük egy automatizált alapvonal. A küszöb ciklus (Ct) definíció szerint a frakcionált ciklus számot, amelynél a fluoreszcencia meghaladta a megadott küszöbértéket. A kapott adatok a QRT-PCR segítségével analizáltuk ΔΔCt módszer (2 ΔΔCt). A PCR-láncindítókat készlet használt ide miR-137 volt a célja, az alábbiak szerint: a miR-137 menetirányú primer: 5'-GCGCGC TTATTGCTTAAGAATAC-3 ', és reverz primer: 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3'. U6 használtuk, mint belső kontroll, és amplifikáltuk menetirányú primer: 5'-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3 ', és reverz primer: 5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3'.

Statisztikai analízis

A statisztikai elemzést GraphPad PRISM 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA) és az SPSS 19.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). A teljes túlélés definíció szerint az idő az első napon a diagnózis és a dátumot a rák okozta halál vagy az utolsó vizit. Pearson-féle χ 2 vagy Fisher-féle egzakt tesztet alkalmaztuk közötti kapcsolat elemzése miR-137 expresszió és a klinikopatológiai faktorok. Összesített túlélés számoltuk Kaplan-Meier módszerrel, és a különbség az alcsoportok vizsgáltuk a log-rank teszt. Numbers veszélyeztetett számoltunk az elején minden időszakban. A prognosztikai miR-137 expresszió vizsgálatát egyváltozós és többváltozós analízis. Az összes p érték kétoldalú volt, és a P < 0,05 értéket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Katalógusa

Eredmények katalógusa

Expression elemzése miR-137 humán gyomorrák sejtek

hogy meggyőződjenek a expressziós szintjének miR-137 humán gyomorrák sejtek, először értékeltük miR-137 expresszióját qRT-PCR in immortalizált normál humán gyomornyálkahártya sejtvonal GES-1 és öt emberi gyomor rákos sejtvonalak, ideértve a MKN-45, SGC7901, BGC-823, MGC-803, és AGS. Amint az 1A ábra, a humán gyomorrák sejtek expresszálták szignifikánsan alacsonyabb miR-137, mint a GES-1. Együttesen ezek a megfigyelések arra utalnak, hogy a miR-137 expresszió csökkent gyomor rákos sejtek összehasonlítva a immortalizált normál humán gyomornyálkahártya sejt, és a csökkent miR-137 expressziós összefüggésben lehet a onkogenezisben gyomorrák.

Egyesületek között miR-137 a klinikopatológiai faktorokkal

expressziós szintje a miR-137 tovább mérni, hogy elemezzék a kapcsolatot klinikopatológiai tényezők. A betegeket osztva a magas és alacsony expressziót csoport szerint az arány a normál /rákos szövetet medián expressziós szintje a miR-137 szerint az eredmények qRT-PCR (cut-off arány = 1,5). És kritérium szerint, mintegy 56,72% (tanító, 38, 67), és 49,43% (Validation beállítva, 43. 87) tumort szerzett alacsony miR-137 expresszió. Amint az 1. táblázatban látható, a kifejezés a miR-137 szignifikánsan összefüggött a tumorsejt-differenciálódást (p = 0,009 és p = 0,002, illetve), N stádium (p = 0,019 és a P < 0,001), és TNM-beosztása (P = 0,007 és p = 0,007, illetve) a két független készletek. Ezen túlmenően, a képzés Set, miR-137 expressziója szintén szignifikánsan kapcsolódik a T stádium (p = 0,002). Különben is, a betegek aránya alacsony miR-137 expressziója fokozott kísért betegség progressziója TNM I-III a két független készletek (1B ábra és 1C). Katalógusa

prognosztikai miR-137 expresszió betegek a gyomorrák katalógusa

Ahhoz, hogy tovább vizsgálják a prognosztikus miR-137 expresszió gyomorrákos betegek, összehasonlítottuk a teljes túlélés szerint miR-137 kifejezést és Kaplan-Meier túlélési analízist végeztünk. Amint a 2. ábrán látható, a betegek alacsony miR-137 expressziós szignifikánsan rövidebb teljes túlélés, mint azok, magas azokhoz, amelyeket a két független készletek (P < 0,001 és a P < 0,001), ami azt jelezte, létfontosságú hatása miR-137 expresszió klinikai kimenetellel gyomorrákos betegek. Ezen túlmenően, az egyváltozós elemzések teljes túlélés ebben a vizsgálatban mutatott, hogy az alacsony miR-137 expresszió szignifikáns negatív prognosztikai előrejelzője gyomorrákos betegeknél a tanító (kockázati arány [HR]: 6,30; 95% CI, 2,17-18,27; P = 0,001), valamint a validálási sorozatban (HR, 3,74; 95% CI, 1,81-7,73; P < 0,001). Emellett, a tumor sejtek differenciálódása (P = 0,023, illetve P = 0,048, illetve), T-stádium (p = 0,002, illetve P = 0,012, illetve), N stádium (p = 0,004 és p = 0,001, illetve), TNM-beosztása (P < 0,001 és a P < 0,001) az összes is jelentősen befolyásolja a túlélés a gyomorrák (2. táblázat). Továbbá Cox többváltozós regressziós elemzést végeztünk, hogy ebből a független kockázati becsléseket kapcsolatos teljes túlélés. Amint azt a 3. táblázat mutatja, TNM és miR-137 expresszió mind önálló és szignifikáns prognosztikai paraméter a két független készletek (tanító: TNM: HR, 12,83; 95% CI, 3,48-47,30; P < 0,001; miR-137 expresszió: HR, 6,80; 95% CI, 2,06-22,48; P = 0,002; Validation be: TNM: HR, 5,21; 95% CI, 2,04-13,31; P = 0,001; miR-137 expresszió: HR, 2,41; 95% CI, 1,13-5,11; p = 0,023) kapcsolatosan. katalógusa

rétegzett elemzés TNM katalógusa

Annak meghatározására, hogy a miR-137 expresszió rétegződik betegek különböző TNM stratum, mi rétegzett elemzés gyomorrák betegek TNM I + II és III TNM és értékelte a prognosztikus miR-137 expresszió a két független készlet volt. Ahogy a 4. táblázatban felsorolt, csak a gyomorrák betegek TNM III lehetne rétegezni miR-137 expressziója szignifikánsan, a prognózis TNM III gyomorrákos betegek nagy miR-137 expressziója szignifikánsan jobb volt, mint az alacsony miR-137 kifejezést a két független készletek (tanító: P = 0,006, validálása be: P = 0,016, illetve, 3. ábra). katalógusa

Vita katalógusa

Kína még mindig az egyik országban a legmagasabb előfordulási gyomorrák bár ez sok iparosodott országban csökkent az elmúlt évtizedekben, és előrehaladott stádiumú betegségben már jelen van a betegek túlnyomó többsége [1,2,4]. Jelenleg TNM stádium rendszerben az UICC /AJCC a legfontosabb prognosztikai faktor a gyomorrák [5]. Azonban, mivel van heterogenitás a molekuláris szinten a gyomorrák, ez elegendő ahhoz, hogy csak azon múlik, TNM-beosztása megjósolni a gyomorrák prognózisa [6,17]. Ezért a molekuláris markerek azonosítása, amelyek jelzik a gyomorrák agresszivitás és a prognózist a beteg, mint kiegészítő TNM rendelkezik azzal a potenciállal, hogy javítsa a képességét, hogy kezelni a betegek és ez fontos, klinikailag releváns betekintést betegség kezelésére. Ezen túlmenően, adja meg a betegeket, akik hasznot legnagyobb precíziós kezelés és célzott terápiák gondolt, mint a legjobb módszer, hogy csökkentse a halálozási arány a gyomorrák. Kutatási közötti kapcsolatra vonatkozó miRNS és gyomorrák fokozatosan szerzett figyelmet a kutatók az általános sebészet területén, és ez a kutatás egyik fontos kutatási téma az elmúlt években. [7] A jelen vizsgálatban értékeltük expressziós szintjének miR-137 humán gyomorrák sejtvonalak kvantitatív valós idejű PCR-rel, az eredmények mutatott, hogy az emberi gyomor rákos sejtek, beleértve az MKN-45, SGC7901, BGC-823, MGC- 803, és AGS kifejezve jelentősen alacsonyabb a miR-137, mint a GES-1, amely egy immortalizált normál humán gyomornyálkahártya sejtvonal. Ez az eredmény azt mutatta, hogy abnormális miR-137 expressziós összefüggésben lehet a onkogenezisben gyomorrák. Azonban tisztázása mögöttes mechanizmusának zavara miR-137 a gyomorrák sejtek és szövetek várja a további vizsgálatot. Katalógusa

Ugyanez a helyzet más miRNS, arról számoltak be, hogy a miR-137 szoros korrelációt mutatott a kialakulását és fejlődését a humán rákok [8,18]. Mivel fontos összetevői a gén szabályozása, számos humán rákos sejtekben, miR-137 képes-e szabályozni a különböző gének és befolyásolják, hogy mely sok celluláris utak. Sejtek proliferációját és migrációját a mellrák gátolhatja a miR-137 elnyomásával ösztrogén kapcsolatos receptor (Erra) [19]. Míg a kolorektális rákos sejtek, ectopiás miR-137 expressziós is lehetne letartóztatni sejtciklus, elnyomják a sejtek növekedését, és gátolják a sejtek invázióját keresztül célzási sejtosztódás kontroll fehérje 42 homológját (Cdc42) [20]. Újabban Wu és munkatársai. jelezte, hogy a miR-137 járt el, mint a tumor szuppresszor a gyomor rákos sejtek megcélzásával Akt2 és további befolyásoló Bad és a GSK-3β, és potenciálisan részt vesznek tumorigenezis és metasztázis gyomorrák [16]. Zheng és munkatársai kimutatták, hogy a méhen kívüli expressziója miR-137 volt elegendő ahhoz, hogy gátolja a gyomor rákos sejtburjánzást [21]. Ezen túlmenően, Steponaitiene R et al. mutatott, hogy a miR-137 metiláció gyakori esemény emésztőrendszeri rákok bekövetkező korai lépésenként során a gyomor carcinogenesis és fordítottan korrelál globális metiláció [22]. A fent említett vizsgálatok megerősítették, hogy a miR-137 szerepet játszik, amely hasonló a tumorszuppresszor miRNS. Azonban ezek a kutatások elsősorban végezzük a gyomor rákos sejtvonalak, a kapcsolat expressziós szintjének a miR-137 és a klinikai jellemző tényezők gyomorrákos betegeknél nem állapították. A jelen kutatás során értékelték a szövetség között a kifejezés a miR-137 és a prognózist betegek gyomorrák után radikális gastrectomián és megállapította, hogy a miR-137 expresszió független prognosztikai tényezője a teljes túlélés az ilyen betegek mellett TNM és a prognózis a betegek alacsony miR-137 expressziója szignifikánsan rosszabb, mint a magas. Tudomásunk szerint ez az első tanulmány, amely azonosítja a miR-137 expressziós önálló rossz prognózisú teljes túlélése gyomorrákos betegek következő radikális gastrectomián. Ennek alapján a feltétel alkalmazása a prognosztikus miR-137 kifejezést TNM III csoport mutatott jobb rizikóstratifikáció az összesített túlélés késői stádiumú gyomorrák. Ugyanakkor a potenciális változó klinikai gyakorlatban érvényesíteni kell egy randomizált, kontrollált vizsgálatban a jövőben. Katalógusa

A dátum, hiszen miRNS képviselnek feltörekvő hotspot rákkutatás, egyre nagyobb jelentőséggel bírnak a miRNS válaszok a környezeti kockázatok és az életmód, beleértve a társadalmi státusz, az életkörülmények és életmód, mint például a dohányzás és az alkoholfogyasztás. Stanitz E et al. azt mutatta, hogy a miR-21 és miR-143 volt akár szabályozott, és a miR-34a-t lefelé szabályozni mintákban gyomorrák nyugati országokban [23]. Ennek fényében ezeket a feltételeket, hogy a miR-137 underexpression is megfigyelhető gyomorrákos mintákban a betegek a nyugati országokban értékelni kell a jövőben. Ezen túlmenően, a gyomorrák azonos szövettani különböző földrajzi térség lakossága mutathat eltérés miRNS és fehérje expressziós mintázatot, ami származhat a létező különböző kockázati tényezők kialakulásában. Katalógusa

Van számos korlátja a tanulmány. Először is, ez a tanulmány korlátozza retrospektív elemzés jellege és a kiválasztási torzításokat nem lehet teljesen kiküszöbölni, bár mi összegyűjtöttük az adatokat a jövőre nézve fenn adatbázist. Másodszor, volt heterogenitás a küszöbértékek meghatározására használt cutoff miR-137 expresszió ebben a kutatásban. A medián értékeket leginkább következetesen használják, azonban a különböző küszöbértékeket számoltak be. Harmadszor, nincs adataival betegségmentes túlélés ebben a vizsgálatban. Sok tényező van, mint például a nyomon követési vizsgálatok és a műtét utáni kezelés befolyásolhatja a betegségmentes túlélés. És a betegségmentes túlélés adatokat kell gyűjteni a jövőben kutatások. Végül, a bevont betegek kis száma ebben a vizsgálatban viszonylag kicsi. Nagy prospektív, randomizált, kontrollált klinikai vizsgálatok szükségesek azonosítani a prognosztikus miR-137 expresszió a gyomorrákos betegeknél. Katalógusa

Összefoglalva, a vizsgálat eredményei azt mutatják, hogy a miR-137 ígéretes marker megjósolni a teljes túlélés betegek gyomorrák után radikális gastrectomia. Sőt, ezek a TNM III gyomorrákos betegek alacsony miR-137 expressziós szükség lehet agresszív posztoperatív kezelés és szorosabb nyomon követése. Katalógusa

Other Languages