Stomach Health > gyomor egészség >  > Gastric Cancer > gyomorrák

PLoS One: HIF-1α indukál multidrog gyomorrákban Cells kiváltása miR-27a

absztrakt katalógusa

Ezen tanulmány célja, hogy meghatározza az összefüggést a HIF-1α és miR-27a kifejezés és hatásának értékelésére gátlásának HIF-1α expresszió miR-27a véleménynyilvánítás és a gyógyszer-rezisztencia gyomorrákban ( GC). A jelen vizsgálatban, Real Time-PCR és Western blot végeztünk kimutatására expresszióját HIF-1α GC szövetekben és sejtvonalakban. Ezután OCUM-2MD3 /L-OHP sejteket transzfektáltunk a HIF-1α-siRNS, egy miR-27a utánozzák vagy pcDNA-HIF-1α, és a sejtek túlélését úgy határozzuk keresztül az MTT assay. A kifejezés a HIF-1α, miR-27a, és az MDR-kapcsolatos gének mértük keresztül Real Time-PCR és Western-blottal. Chip és kettős luciferáz aktivitás vizsgálatokat végeztünk, hogy megállapítsuk a transzkripciós szabályozása HIF-1α és miR-27a. Az eredmények azt mutatták, hogy a transzfekciót HIF-1α-siRNS jelentősen csökkent szintje miR-27a, ami drámaian megnövekedett gátlását szaporodási sebessége OCUM-2MD3 /L-OHP sejtekben. Összehasonlítva a nem transzfektált sejtek, a túlélési arány szignifikánsan csökkent a transzfektált sejtekben a HIF-1α-siRNS-kezelés után az L-OHP. A sejt túlélési arány szignifikánsan emelkedett volt OCUM-2MD3 /L-OHP transzfektált sejtek miR-27a utánozzák, mivel a HIF-1α túltermelése nem eredményezheti semmilyen egyértelmű változás a sejtek túlélését. Az eredmények a kettős luciferáz aktivitás assay kimutatták, hogy a HIF-1α fokozza a transzkripciós aktivitását miR27a promoter transzfektált sejtekben egy riporter tartalmazó plazmidot az upstream promóter régiójában miR27a együtt pcDNA-HIF-1α. Chip analízis azt javasolta, hogy a HIF-1α közvetlenül kötődik a promoter régió miR27a. Gátlása HIF-1α vagy miR27a expresszió csökkent MDR1 /P-gp, LRP, és Bcl-2-expresszió OCUM-2MD3 /L-OHP sejtekben. Így azt találtuk, hogy a HIF-1α szorosan kapcsolódik a MDR GC, és hogy a HIF-1α elnyomhatja MDR1 /P-gp, LRP és a Bcl-2-expresszió gátlása miR-27a expressziót.

bevezető hivatkozás: Zhao Q, Li Y, Tan Bb, ventilátor Lq, Yang Pg, Tian Y (2015) HIF-1α indukál multidrog gyomorrákban Cells kiváltása miR-27a. PLoS ONE 10 (8): e0132746. doi: 10,1371 /journal.pone.0132746 katalógusa

Szerkesztő: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: január 5, 2015; Elfogadva: június 17, 2015; Megjelent: augusztus 20, 2015 katalógusa

Copyright: © 2015 Zhao et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra katalógusa

Az adatok elérhetősége: Minden lényeges adatot belül a papír és az azt támogató információs fájlokat. katalógusa

Forrás: Ezt a munkát támogatják az alábbi támogatás: a tartományi Természettudományi Alapítvány Hebei tartomány (No. H2013206311 a Qun Zhao). katalógusa

Érdekütközés: a szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. katalógusa

Bevezető katalógusa

a gyomorrák (GC) az egyik leggyakoribb rosszindulatú, súlyos károkat okoz az egész világon [1, 2] Miután évekig a technológiai fejlődés, a diagnózis és a kezelés a GC, a megbetegedések és halálozások száma is csökkent világszerte, de továbbra is magas az ázsiai országok [3, 4]. Jelenleg gyomor reszekció az egyetlen rendelkezésre álló módszerrel gyógyítani GC. Azonban nehéz elérni a teljes gyógyulást ellenére a műtéti eltávolítása a daganat, mert a legtöbb beteg szenved előrehaladott GC upon diagnózis [5, 6]. Ezért a kemoterápia játszik rendkívül fontos szerepet játszik a átfogó kezelését GC. Bár a kemoterápia nagymértékben előrehaladt tekintetében a kezelést a fejlett GC, [7, 8] a prognózis a GC továbbra is elégtelen, az 5 éves túlélési arány kevesebb, mint 30% [9]. Ez prognózis elsősorban a több szerrel szembeni rezisztencia (MDR) GC sejteket. MDR GC gyakran vezet a hiba a kemoterápia [10-12]. Ezért van sürgős szükség, hogy dolgozzon új ígéretes terápiás stratégiák, hogy hatékonyan csökkentik az MDR GC.

oxigénhiány elterjedt szilárd tumorokban, és együtt jár a különböző biológiai funkciókat. Jelenleg hipoxia-indukálható faktor (HIF) -1α tekinthető szorosan kapcsolódó hypoxia. HIF-1α erősen expresszálódik a különböző rosszindulatú daganatok [13, 14], és működik, mint egy lényeges tényező, hogy szabályozza az adaptálása tumorsejtek hypoxia [15]. HIF-1α javasolták, hogy szoros kapcsolatot tart GC MDR [16, 17]. Azonban nem világos, hogy melyik útvonal közvetíti a szerepe a HIF-1α GC MDR.

Az elmúlt években, a szerepe a mikroRNS (miRNS-ek), a rák vált széles körben vizsgálták mechanizmusa tumor iniciációs és a kezelés. miR-27a, tagja a miRNS család, kimutatták, hogy befolyásolja az MDR GC [18]. Továbbá, a kifejezés a miR-27a növeljük hipoxiás környezet [19]. Ezek az eredmények azt sugallják, hogy a HIF-1α szabályozhatják expresszióját miR-27a, és befolyásolhatja a GC MDR. Ugyanakkor a konkrét szabályozási mechanizmusok még nem tisztázott. A jelen tanulmány azt mutatta, hogy a kifejezés a HIF-1α és miR-27a szignifikánsan up-szabályozott GC szövetekben és sejtvonalakban, különösen a rezisztens sejtvonalban.

transzfektálása egy specifikus kis interferáló RNS, hogy blokkolja az endogén HIF -1α csökkenését eredményezte a miR-27a expresszió és a enyhítéséhez MDR GC sejtvonalakban. Ezek az új eredmények azt sugallják, hogy gátolja a HIF-1α expressziója gátolja a transzkripciós MDR kapcsolatos gének MDR1 /P-gp, LRP, és Bcl-2 gyengítésére MDR GC sejtek elnyomják a miR-27a kifejezést. Katalógusa

anyagok és módszerek katalógusa

1.1 anyagok katalógusa

a gyomor sejtvonal OCUM-2MD3 volt professzor Masakazu Yashiro Japán Oita Medical Surgery [20]. A stabil gyógyszer-rezisztens sejtvonal OCUM-2MD3 /L-OHP2 kapunk keresztül tenyésztés és kiválasztás kutatócsoportunk által. A GSE-1 sejtvonal vásárolt a Cell kutatóközpontunkba Shanghai Institutes for Biological Sciences a Kínai Tudományos Akadémia. RPMI 1640 táptalaj és a tripszin vásárolt Gibco Company; Trizol reagens és Lipofectamine 2000 transzfekciós reagenssel szereztük Invitrogen. A reverz transzkripciós kit és a fluoreszcencia kvantitatív PCR reagenst a Promega Corporation. PCR-primerek és a kis interferáló RNS-t szintetizáltunk Shanghai biológiai Engineering Company. A fehérjét extrakciós kit kapunk Beyotime Company, Kína. Primer antitestek ellen HIF-1α, MDR1 /P-gp, GST-π, LRP, Bcl-2, TS vagy GAPDH vásároltunk a Santa Cruz. MTT-t a Sigma. Vizsgálatunk jóváhagyta az etikai bizottság a negyedik Kapcsolt Kórház Hebei Medical University. Katalógusa

1.2 Klinikai minta előkészítése katalógusa

Minden 65 beteg GC követően kiválasztott gyomor reszekció és kóros visszaigazolást a negyedik Kórház Hebei Medical University, köztük 42 férfi és 23 nő, életkoruk 60,5 ± 8,1 év, akik nem kaptak preoperatív sugárkezelés vagy kemoterápia. Rák és para-karcinóma szövetek (körülbelül 1,0 cm x 0,5 cm x 0,5 cm) vettük minden beteg, és a mintákat gyorsan lefagyasztottuk folyékony nitrogénben, és ezt követően át -80 ℃ megőrzése. Minden résztvevő aláírta a beleegyező nyilatkozatot. Katalógusa

1.3 Sejttenyésztés és transzfekció katalógusa

A OCUM-2MD3, OCUM-2MD3 /L-OHP és GSE-1 sejtvonal RPMI 1640 közegben kiegészített 10% magzati borjúszérumot (FBS), 100 E /ml penicillint és 100 mg /ml sztreptomicinnel egészítettünk ki. Figyelemre méltó, hogy a közeg a OCUM-2MD3 /L-OHP sejteket kezeltünk L-OHP koncentrációjú 75μg /ml, hogy fenntartsák a gyógyszer-rezisztencia fenotípus, egy héttel a műtét előtt, hogy hagyja abba a kezelést. A sejteket inkubáltuk párásított, 5% CO 2 atmoszférában 37 ° C-on.

Három HIF-1α-siRNS-szekvenciákat terveztünk alkalmazásával BLOCK-iT RNAi tervező (sorrend 1: GAGGAAACUUCUGGAUGCUGGUGAUtt; szekvencia 2: GGAUGCUGGUGAUUUGGAUAUUGAAtt szekvencia 3: CAGGACAGUACAGGAUGCUUGCCAAtt), amelyek mindegyike volt összeforrasztjuk azok komplementer szekvenciát, és transzfektáltuk illetőleg a OCUM-2 MD3 /L-OHP GC sejteket. A nem-specifikus siRNS szekvencia (NS-siRNS: GAGUGGGUCUGGGUCUUCCCGUAGAtt) alkalmaztunk negatív kontrollként. A miR27a mimetikus szekvencia 5'-UUCACAGUGGCUAAGUUCCGC-3 '. , Emberi teljes hosszúságú HIF-1α CODEN szekvenciát szubklónoztuk pcDNA3.1 vektorba. pGL3-miR27a-Luc, pcDNA-HIF-1α, pGL3-Basic és pRL-TK plazmidokat szerkesztettünk és konzervált a laboratóriumunkban.

A GC sejteket szélesztettünk 6 lyukas lemezeken 24 órán transzfekció előtt a sűrűsége 4 × 10 5 sejt /ml. A plazmid vektorok, siRNS vagy miR27a utánozzák transzfektáltuk a GC-be sejtekbe vagy gyógyszer-rezisztens sejtek felhasználásával transzfekciós reagens Lipofectamine követve a gyártó utasításait. Ezután a sejteket mostuk szérummentes RPMI 1640 hiányzik antibiotikumok. A transzfekciós hatékonyság mértük 24 órával később, majd a további kísérletekben.

1.4 MTT assay

GC szövetek és normál para-karcinóma szövetet homogenizáltuk készíteni egyetlen sejtszuszpenziókat szűréssel keresztül egy 300 -mesh réz hálót. A GC-sejtek emésztettük 0,02% EDTA-0,25% -os tripszin oltottunk sűrűséggel 5 × 10 4 sejt /ml 96 mérőhelyes lemezeken. Miután a sejtek elérték a körülbelül 60% -os összefolyásig, HIF-1α-siRNS-t transzfektáltunk vagy egy kemoterápiás szert (150μg /ml L-OHP) vittünk. Minden csoport hat vájat. Ezután 20 jil 5 mg /ml MTT-t adtunk, 4 órán vége előtt a kísérletet. A sejteket 4 órán, majd a tápközeget elöntöttük. Ezután 150 ul DMSO-t adunk az egyes lyukakhoz, és az OD-értékeket mértük 490 nm-en egy mikrotiterlemez-leolvasó rázás után a lemezt 15 percig, szobahőmérsékleten. A kísérleteket háromszor megismételtük.

1,5 RNS izolálás és kvantitatív RT-PCR

Teljes RNS-t extraháltunk Trizol egylépéses eljárás, és 2 ug RNS-t használjuk a reverz transzkripció generálni cDNS templát. A relatív mRNS-szinteket határoztuk meg kvantitatív PCR, GAPDH szolgált egy belső referencia gént. A PCR paraméterei a következők voltak: 95 ° C-on 5 percig, majd 45 ciklus követett denaturálással 94 ° C-on 30 s és illesztés 60 ° C-on 30 másodpercig. A primer szekvenciák alkalmazásával terveztük Primer 5.0 és keresték jellegét. A primer szekvenciák a következők: a HIF-1α (93 bp): (F) 5'-GACAGCCTCACCAAACAGAG-3 'és (R) 5'-CTCAAAGCGACAGATAACACG-3'; MDR1 (126 bp): (F) 5'-GAATGTTCAGTGGCTCCGAG-3 'és (R) 5'-ACAATCTCTTCCTGTGACACC-3'; GST-π (151 bp): (F) 5'-ATACCATCCTGCGTCACCTG-3 'és (R) 5'-TCCTTGCCCGCCTCATAGTT-3'; Bcl-2 (98 bp): (F) 5'-TGTGTGGAGAGCGTCAACC-3 'és (R) 5'-TGGATCCAGGTGTGCAGGT-3'; LRP (129 bp): (F) 5'-TTTCTGACGGCAACTTCAAC-3 'és (R) 5'-AGTCCAATGTCCAGCCCAT -3'; TS (129 bp): (F) 5'-TTTCTGACGGCAACTTCAAC-3 'és (R) 5'-AGTCCAATGTCCAGCCCAT -3'; és GAPDH (138bp): (F) 5'-GACCCCTTCATTGACCTCAAC-3 'és (R) 5'-CGCTCCTGGAAGATGGTGAT-3'. A kvantitatív PCR-eredmények kiszámítása a 2 -ΔΔCt módszerrel.

1.6 Western blot

A szövet és sejt mintákat lizáltuk segítségével RIPA lízis pufferben: 1% Triton X-100, 150 mM NaCl, 10 mM Tris-HCI, pH = 7,4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, pH = 8,0, 0,2 mM Na3VO4, 0,2 mM fenil-metil-fluorid, és 0,5% NP-40. Azonos mennyiségű fehérje mintákat elválasztottuk a 10% -os poliakrilamid SDS gélen (SDS-PAGE), és ezeket elektrotranszferrel egy polivinilidén-fluorid (PVDF) membránra (Amersham Pharmacia Biotech). A membránokat blokkoltuk 5% BSA-t, 2 H, és inkubáltuk a primer antitesttel éjszakán át 4 ° C-on. A membránokat 2 órán keresztül inkubáljuk, egy tormaperoxidázzal konjugált másodlagos antitesttel. A célpont sávok alkalmazásával detektáltuk fokozott kemilumineszcencia (ECL) detektálási kit (Santa Cruz, USA). β-aktin használtunk egy endogén kontroll gén. A kísérletet háromszor ismételtünk.

1.7 kromatin immunprecipitáció (chip) assay

ChIP vizsgálatokat végeztünk módszer szerint Wang et al. [21]. A sejteket különböző kezelés fixáltuk 1% -os formaldehid 15 percig szobahőmérsékleten keverjük, és megszűnik a végső koncentráció 0,125 M glicin. Ezután a sejteket lizáltuk használva 300 mikroliter lízis-pufferben (50 mM Tris-HCl, pH = 8,0, 150 mM NaCI, 5 mM EDTA-t, 1% Nonidet P-40, 0,5% dezoxikolát, és proteáz inhibitorok). A sejt lizátumokat szonikáltuk jeges vízfürdőben, így kapjuk a kromatin fragmensek körülbelül 600 bp hosszú, amint értékelni agaróz gél elektroforézissel. Centrifugálás után 13000 rpm-en 10 percen keresztül, a felülúszót vettünk, és pre-törlődik 15 percen át 4 ° C-n keresztül végzett inkubálás 30 pl protein A-Sepharose gyöngyök és nyírt lazac sperma DNS-t. Centrifugálás után 13000 rpm, 5 perc, a felülúszókat osztva három egyenlő részre: az egyik a bemeneti, a másik kettő a immunprecipitációval vagy anélkül HIF-1α antitest. A következő napon, az immun komplexeket precipitáltuk protein A-Sepharose gyöngyök és nyírt lazac sperma DNS-t, majd a gyöngyöket összegyűjtöttük, miután kétszer mostuk mosópufferrel I (20 mM Tris-HCl, pH 8,1, 150 mM NaCi, 0,1% SDS, 1% Triton X-100 és 2 mM EDTA), majd mosópufferrel II (20 mM Tris-HCl, pH 8,1, 500 mM NaCl, 0,1% SDS, 1% Triton X-100 és 2 mM EDTA) és mosópuffer III (10 mM Tris-HCl, pH 8,1, 0,25 M lítium-klorid, 1% Nonidet P-40, 1% dezoxikolát, és 1 mM EDTA), és a végső mosópuffer IV (10 mM Tris-HCI, pH = 8,1, és 1 mM EDTA). Az immunprecipitátumokat eluáljuk 200 ul elúciós pufferrel (1% SDS-t és 0,1 M NaHCO 3), ezt követi az inkubálás 65 ° C-on egy éjszakán át. A következő napon, a DNS minden egyes minta izoláltuk, és PCR-t végeztünk amplifikálására a promoter szegmensek tartalmazó HIF-1α kötőhely.

1.8 luciferáz assay

növesztett sejteket 70% -os összefolyásig és majd transzfektált három példányban pGL3-miR-27a-luc, pcDNA-HIF-1α vagy pGL3-Basic együtt pRL-TK. 48 óra múlva a transzfekciós, sejteket összegyűjtöttük, és a luciferáz aktivitást mértük a Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega, Madison, WI) alkalmazásával a gyártó protokollja. A luciferázaktivitás PRL-TK arra szolgált belső ellenőrzés. Katalógusa

1.9 Statisztikai analízis katalógusa

Az eredményeket az azt jelenti, ± S ANOVA és Dunnett tesztet végeztünk SPSS 11.5 szoftver segítségével. Katalógusa

Eredmények katalógusa

1 HIF-1α és miR27a egymástól eltérő módon fejeződnek között gyomor- para-karcinómaszövet és GC tissue katalógusa

A expressziója HIF-1α GC szövetben képest gyomor para-carcinoma szövet határoztuk keresztül qRT-PCR és Western blot, és érzékenysége az L-OHP sejtek határoztuk keresztül az MTT assay. HIF-1α (ábra 1A, 1B és 1C, qPCR és Western blot) és miR27a (ábra 1D qPCR eredmények) nőttek szabályozott GC szövet képest gyomor para-carcinoma szövetben. Az MTT assay bizonyította, hogy a sejt túlélési aránya nagyobb volt a GC szövetben, mint a gyomor para-carcinoma szövet ha L-OHP adtunk a egysejtű szövet szuszpenziók (ábra 1E, hisztogram eredmények).

2 HIF -1α és miR27a differenciáltan expresszált között egy gyomornyálkahártya-epiteliális sejtvonal és egy GC sejtvonal

expresszióját a HIF-1α volt a legmagasabb OCUM-2MD3 /L-OHP és OCUM-2MD3 sejtek, egymás után, és volt a legalacsonyabb GES-1 sejtekben (2A, 2B és 2C, qPCR és Western-blot). Ezen túlmenően, a kifejezés miR27a megjelenik a tendenciát, amelyben OCUM-2MD3 /L-OHP sejteket mutatja a legmagasabb expressziós, majd OCUM-2MD3 sejtek és GSE-1 sejtek mutatja a legalacsonyabb expresszióját miR-27a (ábra 2D, qPCR eredmények). Az MTT assay során kiderült, hogy ha L-OHP adunk a három sejtvonal, OCUM-2MD3 /L-OHP sejtek mutatták a legmagasabb sejt túlélési arány, majd OCUM-2MD3 sejtekben, és a GSE-1-sejtek mutatták a legalacsonyabb sejtek túlélését arány (ábra 2E, hisztogram eredmények). katalógusa

3 HIF-1α-siRNS gátolja a kifejezése miR27a és a gyógyszer-rezisztencia OCUM-2MD3 /L-OHP sejtek katalógusa

Western blot analízis azt mutatta, hogy az mRNS és fehérje szinten HIF-1α csökkent különböző mértékben OCUM-2MD3 /L-OHP transzfektált sejtek három pár HIF-1α-siRNS, míg a HIF-1α expressziója nem változott a transzfektált sejtek a kontroll-siRNS. HIF-1α kifejezés jelent meg a leginkább fognak csökkenni meredeken, mintegy 90% -os, a HIF-1α-siRNS-2 (3A ábra). Ábrán látható a 3B, HIF-1α expressziója csökkent ezekben a sejtekben dózistól függő módon, amelyben a HIF-1α expressziója csökkent több mint 95% transzfektált sejtekben 80 nM HIF-1α-siRNS-2, ha HIF- 1α-siRNS-2-t transzfektáltunk további dózisban 20 nM, 40 nM vagy 80 nM. Ezen túlmenően, a maximális gátló hatást detektáltunk 48 órával a transzfekció után (ábra 3C).

miR27a expressziója szignifikánsan csökkent a transzfektálás után a OCUM-2 MD3 /L-OHP sejtek HIF-1α-siRNS-2 (ábra 3D). Az MTT vizsgálat azt jelzi, hogy a sejt túlélési arány szignifikánsan csökkent a kezelést követő HIF-1α-siRNS-2-transzfektált OCUM-2 MD3 /L-OHP sejteket L-írásvetítő, mint a nem-transzfektált sejtek (ábra 3E).

4 hatásai miR27a az MDR a OCUM-2MD3 /L-OHP sejtek katalógusa

a kifejezés a miR27a került fel-szabályozták OCUM-2MD3 /L-OHP sejtek, amikor a miR27a utánzó volt társ transzfektáljuk ezeket a gyógyszer-rezisztens GC sejtekben, amelyet előzőleg transzfektált HIF-1α-siRNS (ábra 4A). Azonban nincs szignifikáns különbség a kifejezés a HIF-1α mutattunk OCUM-2MD3 /L-OHP sejteket a transzfekció után (ábra 4B és 4C, qPCR és Western-blot).

Az MTT assay bizonyította, hogy a túlélés aránya OCUM-2MD3 /L-OHP sejtek egyértelműen növekedett transzfekciót követően a miR27a utánzó (4d, hisztogram eredmények). katalógusa

5 HIF-1α indukálja átírását miR27a a OCUM-2MD3 sejtek katalógusa

a expresszióját HIF-1α szignifikánsan fokozódott OCUM-2MD3 transzfektált sejtek eukarióta expressziós plazmid pcDNA-HIF-1α, 48 h (5A). Továbbá miR27a kifejezés egyértelműen fel szabályozott (5B). Így ezek az eredmények azt javasolta, hogy a HIF-1α egy kritikus tényező, amely befolyásolja a transzkripcióját miR27a. Ezért létrehoztunk egy luciferáz riporter gént hordozó plazmid egy 2 kb szekvencia upstream promoter régiójának miR27a volt, ami együtt transzfektálunk pcDNA-HIF-1α a sejtekbe. A DLA adatok azt mutatták, hogy a HIF-1α fokozott promoter aktivitását miR27a következő kotranszfektálásra (ábra 5C). Chip analízis alátámasztotta, hogy a HIF-1α közvetlenül kötődik a promoter régió miR27a (ábra 5D). Az eredmények azt mutatták, hogy a HIF-1α elősegítheti transzkripcióját miR27a a OCUM-2MD3 sejtek által közvetlenül kötődik a promoter régió miR27a.

6 gátlása HIF-1α segítségével siRNS elnyomja a kifejezés a gyógyszer-rezisztencia-kapcsolt gének

Amint azt a 6. ábra, a gátlás a HIF-1a drámaian elnyomta a kifejezés a MDR1 /P-gp, LRP, és a Bcl-2 OCUM-2MD3 /L-OHP sejtek, de nem változtatja meg szignifikánsan a kifejezés a GST-π vagy TS. (6. ábra). Katalógusa

7 gátlása miR27a csökkenti a gyógyszer-rezisztencia kapcsolatos génexpresszió OCUM-2MD3 /L-OHP sejtek katalógusa

miR27a ben elfojtották a gyógyszer-rezisztens GC OCUM-2MD3 /L-OHP transzfektált sejtek anti-miR27a szekvencia (7A). Továbbá, ezt követően transzfekció, a kifejezés a MDR1 /P-gp, LRP és Bcl-2-t jelentősen csökkent, mivel nincs szignifikáns különbség volt kimutatható a kifejezés a GST-π vagy TS (7B, 7C és 7D, qPCR és Nyugat folt). (7. ábra) hotelben

Vita katalógusa

Bár a világszerte előfordulási aránya GC úgy tűnik, hogy csökkent az elmúlt években, a magas előfordulási GC fennáll, súlyosan veszélyeztetve a személyek egészségének Ázsiában [22] . Az MDR GC sejtek hozzájárul a rossz prognózist GC, amelyben oxigénhiány kritikus szerepet játszik. A jelen tanulmányban, létrehoztuk a stabil OCUM-2MD3 /L-OHP sejtvonal, amely ellenáll a L-OHP. Eredményeink azt mutatták, hogy a GC szövetekben és sejtvonalakban mutatnak erősebb gyógyszer-rezisztencia, mint a normál gyomornyálkahártya szövetekben és sejtvonalakban. Azt is megállapították, hogy a gyógyszer-rezisztens sejtek fejleszteni sokkal erősebb MDR. Eredményeink azt mutatták, fokozott expressziója a HIF-1α GC szövetekben és sejtvonalakban, és a legmagasabb expressziós HIF-1α volt kimutatható a gyógyszer-rezisztens sejtvonal. Ezért azt javasoljuk, hogy a HIF-1α hozzájárul a MDR GC sejtekben.

A HIF-1α gén olyan fehérjét kódol, amely a következőkből áll 826 aminosavból álló, molekulatömege 120 kDa [23]. Számos tanulmány igazolta, hogy fokozott expressziója a HIF-1α szoros összefüggésben van a előfordulása és tumorok kifejlődésére [24-28]. Más tanulmányok arra utalnak, hogy a túlzott expressziója a HIF-1α fokozza a gyógyszer-rezisztens tulajdonságait különféle tumorsejtek [29-32]. Ezen felül, a vizsgálat kimutatta, hogy a GC szövetekben és sejtvonalakban mutatnak erősebb kemoterápiás drogokkal szembeni rezisztencia, mint a gyomor para-karcinóma szövetek és gyomornyálkahártya sejtvonalakban. Azt is kimutatható a leghatásosabb gyógyszer-rezisztencia GC sejtekben. Azonban azok a mechanizmusok, amelyek a HIF-1α szabályozza MDR kell még egyértelműen azonosítani GC sejtekben. Ezért tovább vizsgáltuk az HIF-1α a MDR tulajdonságait GC sejtekbe gén interferencia és klónozási technikákkal. RNS interferencia (RNSi) már megjelenik előnyöket specifikusság, a hatékonyság és a tartósság, hogy a rendelet génexpresszió [33]. Adataink azt mutatják, hogy a gátlás a HIF-1α szignifikánsan csökkentette a gyógyszer-rezisztencia az OCUM-2MD3 /L-OHP sejtekben. Sőt, azt bizonyította, hogy a gyógyszer-rezisztencia drámaian nőtt, amikor pcDNA-HIF-1α, amelynek felhasználásával a overexpresszáló HIF-1α, t transzfektáltunk a nem gyógyszer-rezisztens GC sejtvonalakban. Eredményeink azt mutatták, hogy a HIF-1α lényeges szerepet játszik a fejlesztés a MDR GC.

A legújabb vizsgálatok azt mutatták, hogy az MDR szorosan összefügg miRNS tumorokban [34-36]. Hu azt jelentette, hogy inaktiválja a miR-27a visszafordíthatja a MDR tulajdonságait GC-sejtek [18]. Sőt, azt is leírták, hogy a miR-21, miR-27a, miR-210 és miR-181B voltak akár szabályozott keresztül a HIF útvonal a hipoxiás környezetben alapuló gén-chip vizsgálati eljárás [19]. Összhangban Eredményeink HIF-1α pozitívan expressziójával kapcsolatos miR-27a GC szövetekben és sejtvonalakban, és gátolja a HIF-1α csökkent miR-27a. Ezzel ellentétben, a túlzott expressziója a HIF-1α indukált expresszióját miR-27a. Ezek az eredmények azt mutatták, hogy a HIF-1α expresszióját szabályozza miR-27a. Továbbá, a mi tanulmány azt mutatta, hogy a miR-27a utánozza megmentette a gyógyszer-rezisztencia tulajdonságai HIF-1α-knockdown sejteket. A legfontosabb, hogy a HIF-1α közvetlenül kötődik, és elősegíti a miR27a transzkripció, jelezve, hogy a HIF-1α szabályozza a MDR GC keresztül miR-27a.

jellemezve gének expresszióját, amelyek szorosan kapcsolódnak a MDR, beleértve MDR1 /P-gp, GST-π, LRP, a Bcl-2 és a TS, előtt és után a moduláció HIF-1α expresszió GC sejtekben tisztázására a mechanizmus, amely a HIF-1α-miR-27a útvonal szabályozza a MDR GC . Kimutattuk, hogy gátolja a HIF-1α expressziója csökkentette a kifejezés a MDR1 /P-gp, LRP és a Bcl-2. Az expressziós szintek ezen gének jelentősen nőtt, amikor a sejteket transzfektáltunk a miR-27a utánozzák, míg a expressziós szintjei GST-π és a TS nem változtatta meg lényegesen. Ezzel összhangban a megállapítás, túlzott expressziója a HIF-1 alfa hatásosan felfelé szabályozott expressziójának MDR1 /P-gp, LRP, és a Bcl-2, a GC OCUM-2MD3 sejtvonalban. Ezért adataink azt mutatják, hogy a HIF-1α-miR-27a út közvetíti MDR tulajdonságait GC indukálva MDR1 /P-gp, LRP és Bcl-2-expresszió. Katalógusa

A tanulmányok azt mutatják, hogy a HIF-1α és miR -27a up-szabályozott GC szövetekben és sejtvonalakban. HIF-1α viselkedik, mint egy upstream szabályozó miR-27a. HIF-1α-miR-27a jelátviteli javítja a tulajdonságait MDR indukálásával expressziójának MDR1 /P-gp, LRP és a Bcl-2 GC. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a HIF-1α-miR-27a útvonal döntő szerepet játszik a kezdeményezését MDR humán GC, amely szolgálhat, mint új terápiás célpont MDR GC. Katalógusa

alátámasztó információk katalógusa S1 fájl. Adatok MTT és a nyugati. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0132746.s001 katalógusa (ZIP) katalógusa

Other Languages