Antiulcera attività della fluvoxamina nei ratti e il suo effetto sulla ossidante e parametri antiossidanti in tessuto dello stomaco

Antiulcera attività della fluvoxamina nei ratti e il suo effetto sulla ossidante e parametri di antiossidanti nei tessuti dello stomaco
Abstract
sfondo
Anche se molti farmaci sono disponibili per il trattamento delle ulcere gastriche, spesso questi farmaci sono inefficaci. Molti farmaci antidepressivi hanno mostrato di avere attività antiulcera in vari modelli di ulcera sperimentale. Uno di questi farmaci, la mirtazapina antidepressivo, è stato segnalato per avere un effetto antiulcera che comporta un aumento di antiossidanti, e una diminuzione ossidante, parametri. Ad oggi, tuttavia, non ci sono informazioni disponibili per quanto riguarda l'attività antiulcera per un antidepressivo simile, fluvoxamina. Questo studio ha lo scopo di studiare gli effetti antiulcera di fluvoxamina e di determinare il suo rapporto con gli antiossidanti.
Metodi
gruppi di ratti a digiuno per 24 ore ha ricevuto fluvoxamina (25, 50, 100 e 200 mg /kg), ranitidina (50 mg /kg) o acqua distillata mediante sonda gastrica. Indometacina (25 mg /kg) è stato somministrato per via orale a ratti come agente ulcerosa. Sei ore dopo l'induzione ulcera, lo stomaco dei ratti sono stati asportati e un indice ulcera determinati. distinti gruppi di ratti sono stati trattati con le stesse dosi di fluvoxamina e ranitidina, ma non con indometacina, per testare gli effetti di questi farmaci solo su parametri biochimici. Gli stomaci sono stati valutati biochimicamente per determinare ossidanti e antiossidanti parametri. Abbiamo utilizzato uno ANOVA e minima differenza significativa opzioni (LSD) per l'analisi dei dati.
Risultati
Il mg 25, 50, 100 e 200 /kg dosi di fluvoxamina esercitata antiulcera effetti di 48,5, 67,5, 82,1 e 96,1 %, rispettivamente, rispetto al gruppo di controllo di ratto. Ranitidina ha mostrato un effetto antiulcera 86,5%. Nessuna differenza è stata osservata in assenza di trattamento indometacina per ogni dose di fluvoxamina o ranitidina. I livelli di parametri antiossidanti, glutatione totale e l'ossido nitrico, sono stati aumentati in tutti i gruppi fluvoxamina e nel gruppo ranitidina rispetto al gruppo indometacina sola. Inoltre, fluvoxamina e ranitidina diminuito i livelli dei parametri ossidanti, mieloperossidasi e malondialdeyhyde, nei tessuti dello stomaco dei ratti rispetto al gruppo indometacina.
Conclusione
Abbiamo concludere che fluvoxamina ha effetti antiulcera, e che queste si verificano da un meccanismo che coinvolge l'attivazione dei parametri di antiossidanti e l'inibizione di alcuni parametri ossidanti tossici.
Sfondo
steroidi e non steroidei farmaci, sigarette, uso di alcol, il trauma, la sepsi, shock, Helicobacter pylori
, e lo stress hanno dimostrato di contribuire alla formazione dell'ulcera gastrica [1-4]. Lo stress è uno dei fattori più aggressivi e alla base di molte altre malattie oltre ulcere, per esempio, la depressione. Lo stress è uno dei metodi più comunemente utilizzati per la produzione di modelli ulcera [5, 6]. Depressione, accompagnata da sintomi psicotici e somatici, è presente nella maggior parte dei pazienti con sistema gastro intestinale (GIS) ulcere [7]. Di interesse per questo studio sono rapporti che dimostrano che alcuni antidepressivi possono anche avere effetti anti-ulcerative [8].
Il primo uso di antidepressivi segnalato per gastro intestinale (GI) malattia era l'uso di antidepressivi triciclici (TCA) per il trattamento di ulcera peptica [8]. -B (MAO-B) inibitori, imipramina, amiltriptiline, mirtazapina, tra gli altri, da allora sono stati segnalati antiulcera effetti di alcuni altri farmaci antidepressivi, come fluoksetin, bupropione, dothiepin, maprotilina, mianserin, Trimipramine, idazoksan, monoaminoossidasi [9-16 ]. Una maggiore vulnerabilità alla depressione [17] e l'ansia [18] negli animali da esperimento è in parallelo con lo sviluppo di ulcera e lo stesso vale per gli esseri umani [19, 20]. antidepressivi Inoltre, classici [21, 22] e ansiolitici [23, 24] in grado di ridurre in modo significativo la formazione di ulcere stress, forse in misura maggiore rispetto a quello visto con le terapie tradizionali, come cimetidina e antiacidi [25].
fluvoxamina, un selettivo inibitore della ricaptazione della serotonina (SSRI) di droga, inibisce l'enzima CYP1A2 [26], che è noto per la produzione di specie reattive dell'ossigeno [27]. Tuttavia, fattori eziologici sono ambigui in circa il 60% -80% delle malattie ulcera, e le condizioni fisiopatologiche nel processo di malattia sono simili [1]. Ad esempio, un aumento dei livelli di specie reattive dell'ossigeno (ROS) sono indicati nel meccanismo di entrambi stress e danno gastrico indometacina indotta [28]. I ruoli importanti del ROS e lipidi perossidi ossigeno-derivati ​​(LPO) a lesioni gastriche acute, che sono indotte da farmaci non-steroidei anti-infiammatori (FANS) come l'indometacina, sono stati sostenuti da dati sperimentali [29, 30].
Mentre alcuni farmaci SSRI sono stati segnalati per migliorare superiore sanguinamento GIS quando combinato con i FANS [31-33], fluvoxamina può essere utile per il tratto GI come conseguenza del suo effetto inibitorio sull'enzima CYP 1A2, e conseguente riduzione ossidativa danno. L'importanza di aumentare i parametri di antiossidanti e la diminuzione dei parametri ossidanti nel meccanismo effetto antiulcera della mirtazapina, un farmaco antidepressivo, è stata riportata anche [16]. Ad oggi, tuttavia, non ci sono informazioni disponibili per quanto riguarda l'attività antiulcera di fluvoxamina. Lo scopo di questo studio è stato quindi di esaminare gli effetti di fluvoxamina in un modello di ulcera indometacina indotta sui ratti, e di valutare i suoi effetti sui parametri ossidanti e antiossidanti nei tessuti di ratto stomaco
. Metodi
animali
gli animali sono stati ottenuti dal Centro di ricerca medica Sperimentale, Università Atatürk. Un totale di 78 ratti maschi Wistar albini, di peso compreso tra 190 e 210 g, sono stati utilizzati per questo studio. Gli animali sono stati alimentati in condizioni normali (22 ° C) in gruppi separati. Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida nazionali per l'uso e la cura degli animali da laboratorio e sono stati approvati dal comitato di cura degli animali locali di Atatürk University.
Chemicals
Tutti i prodotti chimici per la sperimentazione di laboratorio sono stati acquistati da Sigma Chemical (Germania) . Indometacina, fluvoxamina, ranitidina, e tiopentale sodico sono stati ottenuti rispettivamente da Deva Tenere-Turchia, Solvay-Turchia, Fako-Turchia e IE Uluagay-Turchia.
Test ulcera indometacina indotta
Le attività antiulcera della fluvoxamina sono stati studiati in un indometacina indotta modelli ulcera nei ratti [34]. Fluvoxamina in dosi di 25, 50, 100 o 200 mg /kg [35, 36] e ranitidina in una dose di 50 mg /kg sono stati somministrati per 24 ore gruppi ratto a digiuno mediante sonda gastrica. Un volume uguale di acqua distillata è stato somministrato al gruppo di controllo come un veicolo. Cinque minuti dopo la somministrazione del farmaco, tutti i gruppi hanno ricevuto 25 mg /kg per via orale indometacina. Sei ore dopo la somministrazione indometacina, tutte le ratto sono stati uccisi con una dose elevata di tiopentale sodico (50 mg /kg, intraperitoneale). Gli stomaci di tutti i ratti sono stati asportati. aree ulcera sulle superfici degli stomaci sono stati esaminati macroscopicamente e misurati su carta quadrata millimetri. I risultati ottenuti dai gruppi fluvoxamina sono stati valutati confrontandoli con quelli dei gruppi di controllo e ranitidina. Poi, tutti i stomaco (gruppi fluvoxamina, gruppo di controllo negativo, gruppo di controllo positivo, e gruppi intatto) sono stati tenuti in -80 ° C per le indagini biochimiche del glutatione (GSH), l'ossido nitrico (NO), mieloperossidasi (MPO) e malondialdeide . (MDA) livelli
I gruppi utilizzati per questo esperimento ulcera possono essere riassunti come segue:
Gruppo 1: fluvoxamina 25 mg /kg + indometacina 25 mg /kg
Gruppo 2: fluvoxamina 50 mg /kg + indometacina 25 mg /kg
Gruppo 3: fluvoxamina 100 mg /kg + indometacina 25 mg /kg
Gruppo 4: fluvoxamina 200 mg /kg + indometacina 25 mg /kg
Gruppo 5: ranitidina 50 mg /kg + indometacina 25 mg /kg
gruppo 6: acqua distillata + all'indometacina 25 mg /kg
gruppo 7:. Intact gruppo che ha ricevuto solo acqua distillata
In aggiunta a questo esperimento ulcera, abbiamo valutato se la somministrazione di fluxoxamine ( 25, 50 100 e 200 mg /kg dosi) e ranitidina (50 mg /kg) a 24 ratti ore digiuno, in assenza di un trattamento indometacina, sarebbe anche modificare i parametri biochimici. Per questo scopo, un totale di 36 ratti sono stati digiuno da 24 ore con libero accesso all'acqua. Poi i ratti sono stati divisi in 6 gruppi (n = 6) e trattati con fluvoxamina alle dosi di 25, 50, 100 o 200 mg /kg e ranitidina alla dose di 50 mg /kg. L'ultimo gruppo ha ricevuto solo acqua distillata come veicolo mediante sonda gastrica. Sei ore dopo la somministrazione del farmaco, tutti i ratti in tutti i gruppi sono stati uccisi con una dose elevata di tiopentale sodico (50 mg /kg, intraperitoneale). Gli stomaci di tutti i ratti sono stati asportati e sono stati valutati sia macroscopicamente e biochimicamente, come descritto sopra
Gruppi per questo esperimento di controllo possono essere riassunti come segue:.
Gruppo 1: fluvoxamina 25 mg /kg
Gruppo 2: Fluvoxamine 50 mg /kg
gruppo 3: fluvoxamina 100 mg /kg
gruppo 4: fluvoxamina 200 mg /kg
gruppo 5: La ranitidina 50 mg /kg
gruppo 6: gruppo che ha ricevuto intatto solo acqua distillata
. analisi biochimiche
indagine biochimica dei tessuti dello stomaco
Dopo le analisi macroscopiche, il glutatione (GSH), catalasi (CAT), superossido dismutasi (SOD), mieloperossidasi (MPO), e malondialdeide ( MDA) attività enzimatiche e dei livelli nei tessuti dello stomaco di ratto sono stati determinati. A questo scopo stomaco dei ratti sono stati congelati a -80 ° C prima fino indagini biochimiche. Per preparare gli omogenati di tessuto, tessuti dello stomaco sono stati macinati con azoto liquido in un mortaio. I tessuti di terra (0,5 g ciascuno) sono stati poi trattati con 4,5 ml di un tampone appropriato. Le miscele sono stati omogeneizzati in ghiaccio utilizzando un omogeneizzatore Ultra-Turrax per 15 min. Gli omogenati sono stati filtrati e centrifugati utilizzando una centrifuga refrigerata a 4 ° C. I supernatanti sono stati utilizzati per la determinazione delle attività enzimatiche. Tutti i saggi sono stati eseguiti a temperatura ambiente in triplicato
. Determinazione totale GSH
La quantità di GSH nella mucosa gastrica è stata misurata secondo il metodo di Sedlak e Lindsay [37]. La superficie mucosa dello stomaco è stata raccolta raschiando, pesato, e quindi omogeneizzata in 2 mL di buffer 50 mM Tris-HCl contenente 20 mM EDTA e 0,2 mM di saccarosio, pH 7.5. L'omogenato è stato immediatamente precipitato con 0,1 mL di acido tricloroacetico al 25%, ed il precipitato è stato rimosso mediante centrifugazione a 4200 rpm per 40 min a 4 ° C. Il surnatante è stato utilizzato per determinare GSH usando 5,5'-ditiobis (acido 2-nitrobenzoico. Assorbanza è stata misurata a 412 nm utilizzando uno spettrofotometro. I risultati del livello di GSH nella mucosa gastrica sono stati espressi come nanomoli per tessuti milligrammo (nmol /mg di tessuto).
livelli di NO
tissue livelli di NO sono stati misurati come totale di nitriti + nitrati con l'uso del reagente di Griess come precedentemente descritto [38]. il reagente Griess consiste sulfanilamide e N- (1-napthyl ) -.. il metodo si basa su una-due fasi di processo etilendiammina il primo passo è la conversione del nitrato in nitrito utilizzando un nitrato riduttasi il secondo passo è l'aggiunta del reagente di Griess, che converte il nitrito in un azo viola profondo. composto; misurazione fotometrica di absobance a 540 nm è dovuta al fatto che questo azo cromoforo determina accuratamente concentrazione di nitrito livelli di NO sono stati espressi come micromoli /g
attività MPO
attività MPO è stata misurata secondo il metodo modificato di.. Bradley et al. [39]. I campioni sono stati omogeneizzati congelati e scongelati tre volte, e centrifugati a 1500 g per 10 min a 4 ° C. attività MPO nel supernatante è stata determinata aggiungendo 100 ml del surnatante in 1,9 mL di tampone /L di fosfato 10 mmol (pH 6,0) e 1 ml di 1,5 mmol /L o-dianisidina cloridrato contenente 0,0005% (peso /volume) di perossido di idrogeno . Sono stati registrati i cambiamenti di assorbanza a 450 nm di ogni campione su uno spettrofotometro UV-vis. l'attività MPO nei tessuti gastrici è stato espresso come minimoles al minuto per il tessuto milligrammo (mmol /min /tessuto mg).
Determinazione della perossidazione lipidica o la formazione di MDA
Le concentrazioni di gastrica perossidazione lipidica della mucosa sono stati determinati stimando MDA utilizzando il tornasole tiobarbiturico [40]. In breve, lo stomaco di ratto sono stati prontamente asportati e risciacquati con soluzione salina fredda. Per minimizzare la possibilità di interferenza dell'emoglobina con i radicali liberi, il sangue aderente alla mucosa stato accuratamente rimosso. La mucosa corpus è stato raschiato, pesato, e omogeneizzato in 10 ml di 100 g /L KCl. L'omogenato (0,5 mL) è stato aggiunto ad una soluzione contenente 0,2 mL di 80 g /L lauril solfato di sodio, 1,5 mL di acido acetico 200 g /L, 1.5 mL di 8 g /L 2-thiobarbiturate, e 0,3 mL di acqua distillata. La miscela è stata incubata a 98 ° C per 1 h. Dopo raffreddamento, 5 mL di n-butanolo: è stato aggiunto: (l 15) piridina. La miscela è stata in agitazione per 1 min e centrifugato per 30 min a 4000 rpm. L'assorbanza del supernatante è stata misurata a 532 mn. Una curva standard è stata generata utilizzando 1,1,3,3-tetramethoxypropane. Il recupero è stato superiore al 90%. I risultati sono stati espressi come nanomoli MDA al tessuto bagnato grammo (nmol /mg di tessuto) analizza
. Statistica
I dati sono presentati come media ± errore standard (SE). attività e punteggio ulcera risultati enzimatici sono stati sottoposti ad ANOVA, con presenza di controlli negativi e positivi, utilizzando il software SPSS 11.0. Le differenze tra i gruppi sono stati raggiunti utilizzando differenza meno significativa (LSD) opzione, e il significato è stato dichiarato in P
< 0.05
. Risultati
ulcera prova Indometacina indotta
lesioni macroscopiche con confini evidenti in varie forme e dimensioni sono stati dispersi in modo irregolare su tutte le superfici dello stomaco nel tessuto dello stomaco dei ratti di controllo che hanno ricevuto indometacina. Iperemia era più evidente nel gruppo di controllo che ha ricevuto indometacina rispetto ai gruppi che hanno ricevuto fluvoxamina e ranitidina. La gravità di iperemia stato parallelo con un aumento ulcere. Come si vede nella tabella 1, una diminuzione ulcera verificarsi di 48%, 67,5%, 82,1% e 96,1% verificato nello stomaco di gruppi di ratti che hanno ricevuto 25, 50, 100, e 200 mg /kg fluvoxamina. L'effetto antiulcera di 50 mg /kg ranitidina era 86,5%. Nessuna differenza è stata osservata in assenza di trattamento indometacina dopo qualsiasi dose di fluvoxamina o ranitidine.Table 1 Effetti della flovoksamine (FLU) e ranitidina (RAN) di indometacina (IND) indotta ulcere nei ratti.
Farmaci
Dose
(mg /kg)
Numero di animali
zona Ulcer (mm2)

antiulcera effetto (%)
P
INFLUENZA
25
< 0.05
+
6
15,3 ± 1,5
48,5
IND
25
INFLUENZA
50
< 0.02
+
6
9,7 ± 0,9
67,5
IND
25
INFLUENZA
100

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