Presenza e significato di Helicobacter spp. nella mucosa gastrica del portoghese Presenza dogs

e il significato di Helicobacter spp.
nella mucosa gastrica di portoghese cani
Abstract
sfondo
non-Helicobacter pylori
Helicobacters (NHPH) sono anche in grado di causare malattie negli esseri umani. I cani sono un serbatoio naturale per molte di queste specie. Chiudere e intenso contatto umano con gli animali è stato identificato come un fattore di rischio e, quindi, un importante significato zoonosi è stata attribuita a NHPH.
Metodi
per determinare la prevalenza di Helicobacter
specie e le gastrici cambiamenti istopatologici associati , sono stati valutati i campioni di mucosa gastrica di 69 cani.
Risultati
Solo un cane hanno presentato una normale mucosa istopatologico con assenza di organismi a forma di spirale. Un normale mucosa gastrica e la presenza di batteri a forma di spirale è stata osservata in due cani. Tutti gli animali restanti hanno presentato cambiamenti istopatologici rappresentante della gastrite. Helicobacter
specie sono state rilevate in 60 cani (87,0%) di almeno un metodo di rilevazione. Istologico, valutazioni istochimiche e immunoistochimiche ha rivelato che l'Helicobacter
spp. erano presenti in 45 (65,2%), 52 (75,4%) e 57 (82,6%) i cani, rispettivamente. batteri a forma di spirale sono stati rilevati attraverso l'analisi qPCR in 33 (47,8%) cani. H. heilmannii-
come gli organismi sono stati identificati in 22 animali (66,7%) e prevalentemente nella regione gastrica antrale. H. Salomonis
era la seconda specie più diffuse (51,5%), anche se è stato trovato principalmente in associazione con altri Helicobacter
spp. e nella regione gastrica corpo. H. bizzozeronii e H. felis
sono stati meno frequentemente rilevati.
Conclusioni
Si è concluso che, nonostante l'alta incidenza e la distribuzione mondiale di NHPH gastrica nei cani, la presenza di specifici Helicobacter
specie possono variare tra regioni geografiche. infezioni NHPH erano significativamente accompagnati da lieve a moderata intraepiteliale infiltrazione linfocitaria e da lieve a moderata lesioni epiteliali gastriche, ma non è stato possibile stabilire una chiara relazione tra la gastrite da Helicobacter e
infezione.
Parole
Canine mucosa gastrica Cani Non- Helicobacter pylori
helicobacters (NHPH) Istochimica immunoistochimica (IHC) reazione a catena della polimerasi (PCR) Stomaco Introduzione
Il genere Helicobacter
è composto da almeno 40 specie [1]. Tra questi, H. pylori
è considerato come un importante patogeno il cui ospite naturale è l'uomo, ma la sua presenza nello stomaco del cane è stata raramente segnalata [2-4].
Un gran numero di non-Helicobacter pylori Helicobacter
specie (NHPH) sono anche stati riconosciuti negli esseri umani e in diversi animali. In precedenza, NHPH sono stati generalmente indicato come H. heilmannii sensu lato
(sl) e comprendeva H. suis
, una specie colonizzatrici stomaco dei maiali e di un gruppo di specie conosciute di colonizzare la mucosa gastrica di cani e gatti : H. felis
, H. bizzozeronii
, H. Salomonis
, H. cynogastricus
, H. baculiformis
e H. heilmannii in senso stretto
(ss) [5] . La maggior parte di questi NHPH gastrica sono anche in grado di provocare malattie negli esseri umani [6,7]. Chiudere e intenso contatto umano con gli animali è stato identificato come un fattore di rischio e, quindi, un importante significato zoonosi è stata attribuita a NHPH [6,8,9].
In animali da compagnia, gastrico Helicobacter
spp. sono stati spesso descritti con una prevalenza che varia 67-86% nei cani clinicamente sani e 61-100% negli animali che presentano vomito cronico [10-14]. Questi microrganismi sono stati rilevati nello stomaco di circa il 100% del laboratorio cani Beagle e cani da rifugi locali [15-17]. Il predominante gastrico Helicobacter spp.
Nei gatti e cani sono H. felis
, H.
bizzozeronii e H. heilmannii in senso stretto
(ss
), mentre H. Salomonis
è meno spesso rilevato e la prevalenza di H. cynogastricus
e H. baculiformis
non è ancora stato studiato [9,18-20]. possono anche verificarsi infezioni miste con specie diverse [3,19].
Mentre molti studi hanno riportato che il fondo ed il corpo hanno una maggiore densità batterica e una maggiore probabilità di trovare Helicobacter
spp. [17,21,22] altri hanno trovato differenze significative tra la densità del NHPH nel fondo, corpo e dell'antro [2,23-26] dello stomaco canino. Le discrepanze in questi risultati possono essere attribuiti alle diverse metodologie diagnostiche di laboratorio utilizzati dai vari gruppi di ricerca.
I metodi diagnostici utilizzati per Helicobacter
spp.
Può essere non invasiva e invasiva [24]. I metodi non invasivi come la sierologia o il rilevamento del DNA batterico e antigeni nelle feci non richiedono una biopsia gastrica o anestesia. I metodi invasivi, come colture batteriche, istopatologia, sbavature, microscopia elettronica o reazione a catena della polimerasi (PCR) possono richiedere una biopsia gastrica, che è spesso ottenuto attraverso l'endoscopia in anestesia o necroscopia. Tipicamente Helicobacter
organismi non sono facilmente visualizzate con l'ematossilina ed eosina (HE) macchia e così, la loro osservazione diretta in campioni biopsiati è evidenziata dall'uso di macchie speciali, come la macchia modificato Giemsa (MG). Helicobacter
metodi di rilevamento delle più elaborati e sensibili come l'immunoistochimica (IHC) o la reazione a catena della polimerasi (PCR) sono strumenti di ricerca raramente utilizzati in un ambiente diagnostico.
Diversi studi hanno discusso la prevalenza di Helicobacter spp.
nei cani [2,10,11,14,16], ma solo in pochi studi sono stati determinati specie specifici presenti nello stomaco del cane [4,19,27,28]. L'identificazione accurata delle helicobacters gastrici a livello di specie è essenziale al fine di determinare la prevalenza e significato clinico dei taxa. Lo scopo di questo studio è stato quello di determinare la prevalenza di diverse Helicobacter
specie gastrici presenti nelle regioni di stomaco distinte dello stomaco canina (corpo e dell'antro) utilizzando istologica, istochimica, immunoistochimica e tecniche diagnostiche molecolari. Il grado di colonizzazione è stata caratterizzata e correlati con i rispettivi cambiamenti istopatologici della mucosa gastrica canino
. Metodi
Esempio di raccolta
tessuti gastrici sono stati ottenuti da 69 cani (45 maschi e 24 femmine, di età compresa tra 3 mesi a 15 anni). I campioni sono stati selezionati in modo casuale dagli archivi del Laboratorio di Patologia, ICBAS-UP (Portogallo), dove sono stati ricevuti tra il 2010 e il 2013. I campioni sono stati ottenuti da 20 cani durante le procedure endoscopiche, da cinque durante l'intervento chirurgico e da 44 cani durante necroscopia esami. Tutte le procedure (asportazione chirurgica e l'esame necroscopico), sono state eseguite in un contesto clinico di tentare di trattare gli animali in base al miglior giudizio clinico dei loro professionisti che frequentano. L'uso dei tessuti asportati per la ricerca è stato spiegato ai proprietari e di un consenso informato è stato ottenuto per ciascun caso. Nessuna delle azioni sono state prese esclusivamente per scopi di ricerca e gli investigatori avevano alcuna influenza sulla selezione e l'esecuzione di tali procedure. Solo i campioni gastrici in buone condizioni di conservazione sono stati inclusi in questo studio.
I tessuti sono stati fissati nel 10% formalina tamponata neutra ed inclusi in paraffina. Tre sezioni consecutivi di 3 micron sono state fatte, uno dei quali colorate con HE, un altro con una macchia MG e il terzo è stato utilizzato per la colorazione immunoistochimica.
Valutazione del campione
I campioni gastrici sono stati valutati in modo indipendente da due osservatori (IA e FG ). parametri istopatologici, come alterazioni della cellularità, fibrosi della lamina propria
e ghiandola atrofia sono stati analizzati secondo il World Small Animal Veterinary Association (WSAVA) le linee guida [29]. Il grado di caratteristiche morfologiche e di alterazioni infiammatorie è stata classificata come normale, lieve, moderato o marcato utilizzando la WSAVA standardizzazione gastrointestinale analogica visiva disponibili [29].
La valutazione microscopica è stata effettuata analizzando l'intera sezione del tessuto gastrico. La presenza di Helicobacter
spp.
È stata valutata da SE e le macchie MG e IHC. Un cane è stato classificato come Helicobacter
positive quando uno di questi metodi hanno dato un risultato positivo. Inoltre, la colonizzazione densità batterica è stato quantificato: +, alcuni organismi (< 10 organismi /400x); ++, Discreto numero di organismi (da 10 a 50 organismi /400x); +++, Gran numero di organismi. (≫ 50 organismi /400x) [24]
immunoistochimica
Per lo studio immunoistochimico, le sezioni sono state deparaffinised, il recupero idratata e l'antigene è stata effettuata in una pentola a pressione a 10 mmol /L tampone sodio citrato, pH 6,0, per 2 minuti (min). I vetrini sono stati raffreddati per 10 min a temperatura ambiente e lavato due volte in trifosfato salina tamponata (TBS) per 5 min. Il sistema di rilevamento NovolinkTM Max-Polimero (Novocastra, Newcastle, UK) è stato utilizzato per la visualizzazione, in base alle istruzioni del produttore. Dopo aver bloccato perossidasi endogena con perossido di idrogeno al 3% in metanolo per 10 minuti, le sezioni sono state incubate overnight a 4 ° C, con un antisiero policlonale contro H. pylori
(RBK012; Zytomed, tedesco) che mostra immunoreattività con una vasta gamma di batteri appartenenti al genere Helicobacter
. Le sezioni sono state lavate con TBS tra ogni passo della procedura. Colore stato sviluppato per fino a 7 min a temperatura ambiente con 3,3'-diammino-benzidina (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) e le sezioni sono state poi leggermente di contrasto con ematossilina, disidratate e montate. immunoreattività positivo è stato registrato come una distinta etichettatura d'oro-marrone dei batteri si trovano sulla superficie della mucosa, in fossette gastriche o ghiandole e cellule parietali.
estrazione, amplificazione PCR e il sequenziamento del DNA
DNA è stato estratto da 5 fette consecutivi di 20 micron utilizzando un DNeasy Sangue e Kit Tissue (Qiagen), secondo le istruzioni del produttore. Helicobacter
specie-specifici qPCRs sulla base di un breve frammento di geni ureasi A e B sono stati sviluppati per l'identificazione di H. heilmannii ss
, H. felis
, H. bizzozeronii
e H. Salomonis
. Per la generazione di standard per ogni qPCR, una gran parte del cluster genico ureAB da H. heilmannii
ASB1 (1224 bp), H. felis
CS1 (1228 bp), H. Salomonis
R1053 (1224 bp) e H. bizzozeronii
R1051 (1230 bp) è stato amplificato utilizzando primer U430F e U1735R, come descritto in precedenza [30]. Lo standard era costituito da 10-fold-diluizioni a partire da 10 8 ampliconi della PCR per ogni 10 ml di miscela di reazione. Un ml di modello di DNA estratto è stato sospeso in una miscela di reazione 10 ml costituito da 0,25 ml di avanti e primer (Tabella 1), acqua HPLC 3,5 ml e 5 ml SensiMix ™ SYBR No-ROX (Bioline Reagenti Ltd, Regno Unito) inversa. Entrambi gli standard ei campioni sono stati eseguiti in duplicato su un sistema CFX96 ™ RT-PCR con una C1000 Cycler termico (Bio-Rad, Hercules CA, USA). L'(versione 1.6) del software Bio-Rad CFX Manager è stato utilizzato per il calcolo dei cicli soglia (Ct) -Valori e analisi della curva di fusione del DNA amplificato. I valori medi dei duplicati sono stati utilizzati per la quantificazione di Helicobacter
DNA nei campioni di tessuto. Per escludere campioni falsi positivi, gli ampliconi di ciascun campione positivo sono stati sequenced.Table 1 Elenco dei primer utilizzati per qPCR
nome Primer
sequenza nucleotidica
Specificità
Hfel_F2
GCT GGT GGC ATC GAT ACG CAT
H. felis
Hfel_R2
TTT TTA GAT TAG CGC GTC CGG GA
H. felis
HH_FQ
GGC TCT GCG TAG GAC CTG CTA CAG AAG CTC TC
H. heilmannii ss
HH_RQ
GGC TGT AGG GAT TTG TTG AGG AGA AAT G
H. heilmannii ss

Hsal_FQ
CTC TTA TGA GTT GGA CTT GGT GCT CAC CAA T
H. Salomonis
Hsal_RQ
TTT GCC ATC TTT AAT TCC AAT GTC GGC
H. Salomonis

Hbizz_FQ
AAT CTT TGC GTG GGC CCT GCT ACT GAG
H. bizzozeronnii
Hbizz_RQ
CTG GCA AAT GCT GTG GGG ATT TGT TGG
H. bizzozeronnii

analisi statistica
test chi-quadrato di Pearson e il test esatto di Fisher sono stati utilizzati per determinare la dipendenza tra due categorie. valori e lt; p 0,05 sono stati considerati statisticamente significativi. L'analisi statistica è stata effettuata utilizzando il pacchetto statistico SPSS 16.0 (SPSS Inc., Produtos e Serviços de Estatística Lda, Lisbona, Portogallo).
Risultati
Un totale di 117 campioni gastrici (66 dalla regione del corpo e 51 dal regione antro) sono stati analizzati. con gli 69 animali, entrambe le regioni gastrici erano disponibili per la valutazione in 48 cani, mentre soltanto le regioni del corpo o antro erano disponibili in 18 e tre cani, rispettivamente.
dei 69 cani, uno solo presentato una mucosa istopatologico normale con assenza di organismi a forma di spirale. Un normale mucosa gastrica e la presenza di batteri a forma di spirale è stata osservata in due cani (2,9%). Il resto degli animali, presentata cambiamenti istopatologici rappresentativi di gastrite (66/69 o 95,7%) (Tabella 2). Sulla base delle variazioni istopatologiche della mucosa gastrica, abbiamo diagnosticato un lieve a moderata gastrite cronica nel 88,4% (61/69) che interessano il corpo gastrico del 51,5% (34/66) e la regione antrale del 92,2% (47/51 ) della Tabella animals.Table 2 riassume le alterazioni istopatologiche e la colonizzazione della densità osservata nello stomaco del cane, secondo i risultati positivi NHPH specie-specifici PCR, risultati genus positivi e risultati negativi
PCR risultati positivi con determinate specie l'identificazione, la posizione a prescindere gastrica (cento & numero) (n = 33)
risultati positivi per Helicobacter spp. (Cento & numero) (n = 27)
risultati negativi (per cento & numero) (n = 9)
p
Hh

Hf
Hb
Hs
Hf + Hb
Hh + Hs
Hh + Hf
Hb + Hs
Hf + Hb + Hs
istopatologia classificazione
(Day et al., 2008)
normale
3.0 (1/33)
0
0
3.0 (1/33)
0 0

0 0

0
7.4 (2/27)
11.1 (1/9 )
NS
gastrite Mild
15.2 (5/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
0
18.2 (6/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
44.4 (12/27)
33.3 ( 3/9)
gastrite moderata
12.1 (4/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
0
3.0 (1/33)
9.1 (3/33)
0 0

0
48,1 (13/27)
44.4 (4/9)
Contrassegnato gastrite
0
0 0

0 0

6.1 (2/33)
0 0

0 0

11.1 (1/9)
lesioni epiteliali
Mild
27.3 (9/33)
3,0 (1/33)
0
9.1 (3/33)
3,0 (1/33)
30,3 (10/33)
0
3,0 1/3 (3)
6.1 (2/33)
77,8 (21/27)
33,3 (3/9)
0,003
moderato
3.0 (1/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
0 0

0
3.0 (1 /33)
0 0

14.8 (4/27)
11.1 (1/9)
fibrosi /mucosa atrofia
Mild
18.2 (6/33)
6,1 (2/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
18.2 (6/33)
0 0

3.0 (1/33)
55.6 (15/27)
33,3 (3/9)
NS
moderato
3.0 (1/33)
0
0
0
3.0 (1/33)
0 0

0 0

3,7 (1/27)
11.1 (1/9)
linfociti intraepiteliali
Mild
15.2 (5/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
0
15.2 (5 /33)
0 0

6.1 (2/33)
29,6 (8/27)
11.1 (1/9)
0,016
moderato
3.0 (1/33)
3,0 (1/33)
0 0

3.0 (1/33)
9.1 (3/33)
0
0
0
14.8 (4/27)
0
Lymphofollicular iperplasia
Mild 6.1 (2/33)
0 0

0
3.0 ( 1/33)
0 0

0 0

29,6 (8/27)
11.1 (1/9)
NS
densità batterica (sulla base di i risultati IHC)
NA
+
0 0

0 0

0 0

0 0

0
14,8 (4/27)
++
3.0 (1/33)
0 0

0
3.0 (1/33)
0 0

0 0

25.9 (7/27)
+++
24.2 (8/33)
6.1 (2/33)
6.1 (2/33)
9.1 (3/33)
0
33.3 (11/33)
3,0 (1/33)
3,0 (1/33)
6.1 (2/33)
51,9 (14/27)
Legenda: Hh
, H. heilmannii simile
; Hf
, H.felis
; Hb
, H. bizzozeronnii
; Hs
, H. Salomonis
densità batterica:. +, Alcuni organismi; ++, Moderato numero di organismi; +++, Gran numero di organismi. NA, non applicabile. NS, non significativo (p > 0,05).
Sia da lieve a moderata lesioni epiteliali e da lieve a moderata intraepiteliale infiltrazione linfocitaria sono stati trovati in 88,4% (61/69)
gastrico atrofia della mucosa, la nidificazione ghiandolare o fibrosi era. presente nel 44,9% cani (31/69). Nel 18,2% degli animali è stato osservato questa alterazione nella regione di body (12/66) e in 47,1% nella regione dell'antro (24/51) dello stomaco canino.
Abnormal infiltrazione neutrofila è stata rilevata in antro dello stomaco di due animali: in uno, questa alterazione era mite e nell'altro, è stato marcato e associato con ulcere gastriche. Altre cellule infiammatorie, consistenti nella infiltrazione lieve dei mastociti, sono stati osservati nella regione di body di quattro animali e nel antro di due animali.
Tra tutti gli animali, 87,0% era positivo (60/69) (Figura 1A) e 13,0% sono risultati negativi per Helicobacter
spp. (9/69), indipendentemente dal test utilizzato per rilevare i batteri. Indipendentemente dalla posizione dello stomaco, Helicobacter
spp. sono stati osservati usando HE, MG e IMC a 65,2% (45/69), 75,4% (52/69) e il 82,6% (57/69) dei cani, rispettivamente. Con HE colorazione, batteri a forma di spirale sono stati rilevati nel 62,1% dei campioni di corpo (41/66) e nel 70,6% dei campioni antrali (36/51). Utilizzando la macchia MG, questo è stato del 68,2% per i campioni del corpo (45/66) e 78,4% per i campioni antrali (40/51). Helicobacter
antigene è stato rilevato dal immunochimica a 84,9% (56/66) dei campioni corpo e 80,4% (41/51) dei campioni antrali (Tabella 3). Figura 1 Helicobacter
spp. nello stomaco del cane. A) Numerosi batteri a forma di spirale che colonizzano l'epitelio di superficie della fossa gastrica. HE. Bar = 10 micron; B) Si noti l'infiltrazione linfocitaria intraepiteliale all'interno delle ghiandole gastriche più profondi della mucosa antrale di un cane NHPH-positivo. HE. Bar = 20 micron. C) Presenza di NHPH all'interno delle cellule parietali della regione canina corpo gastrico (freccia nera). MG. Bar = 10 micron; D) Grandi quantità di Helicobacter
antigene all'interno del muco gastrico superficiale e nel lume delle ghiandole gastriche della regione di corpo dello stomaco canino. macchia dell'immunoperossidasi-diaminobenzidina con di contrasto ematossilina di Mayer. Bar = 50 micron. Inserto mostra Helicobacter
antigene all'interno delle cellule parietali, organismi a forma di spirale, come ben conservate a volte rilevabili o punti rotonde marroni. macchia dell'immunoperossidasi-diaminobenzidina con di contrasto ematossilina di Mayer. Bar = 10 micron.
Tabella 3 Individuazione di Helicobacter spp. nei diversi comparti dello stomaco dello stomaco cane ricorso a diversi metodi diagnostici
regione gastrica
metodi di rilevamento
positivo (per cento & numero)
HE

MG
IHC *
PCR
corpo (n = 66)
62.1 (41/66)
68.2 (45/66)
84,8 (56/66)
37,9 (25/66)
Antrum (n = 51)
70.6 (36/51)
78.4 (40/51)
80,4 (41 /51)
51.0 (41/51)
Legenda: HE: ematossilina-eosina; MG: modificato Giemsa; IHC: immunoistochimica; qPCRs
maggiori identificazione della specie è stata effettuata utilizzando Helicobacter
specie-specifici; reazione a catena della polimerasi
* I risultati positivi ottenuti con IHC non differivano significativamente su ogni regione dello stomaco (0,05 p >): PCR.. . Helicobacter
spp. sono stati individuati 47,8% degli animali (33/69) (Tabella 3). La maggior parte dei campioni è risultato positivo nel H. heilmannii
specifiche qPCR. Tuttavia, gli ampliconi ha mostrato solo circa il 92% omologia con H. heilmanni S.S.
. Pertanto, questi casi sono stati riclassificati come H. heilmannii-
piace.
Nel 51,5% (17/33) dei campioni positivi, solo uno Helicobacter
specie è stato identificato mentre infezioni miste sono stati rilevati nel 48,5% (16/33) (Tabella 2). H. heilmannii-
come gli organismi sono stati i più comunemente (22/33 o 66,7%), essere identificati in dieci cani come una singola infezione e in 12 cani infezioni come misti. H. Salomonis
era la seconda specie più diffuse (17/33 o 51,5%) anche se è stato trovato principalmente in associazione con altri NHPH (42%) piuttosto che da solo (9,1%). Proporzioni uguali di H. felis
e sono stati rilevati H. bizzozeronnii
(6/33 o 18,2%), sia come infezioni singole (6,3%) o misti (12,1%). infezioni miste con H. heilmannii
-come e H. Salomonis
sono stati riscontrati più frequentemente (33,3%) (Tabella 2). Nella zona del corpo, la specie più frequentemente identificata era H. Salomonis
(44,0%), mentre nel antro la specie più diffusa è stata H. heilmannii-
come (57,7%) (Tabella 4) .table 4 specifico specie Helicobacter rilevati mediante PCR nei diversi comparti dello stomaco del cane stomaco
specifico PCR-Helicobacter spp. risultati positivi
regione gastrica (cento & numero)
corpo
Antrum
(n = 25)
(n = 26)
H. heilmannii simile
24,0 (6/25)
57,7 (15/26)
H. Salomonis
44.0 (11 /25)
7.7 (2/26)
H. felis
8,0 (2/25)
3,8 (1/26)
H. bizzozeronnii
4,0 (1/25)
11.5 (3/26)
H. felis + H. bizzozeronnii
4,0 (1/25)
3,8 (1/26)
H . heilmannii-like + H. Salomonis
8,0 (2/25)
11.5 (3/26)
H. heilmannii-like + H. felis
4.0 (1 /25)
3,8 (1/26)
H. felis + H. Salomonis
4,0 (1/25)
0
C'è stata una significativa correlazione tra la presenza di Helicobacter
spp. ed entrambi da lieve a moderata lesioni epiteliali e da lieve a moderata intraepiteliale infiltrazione linfocitaria (Figura 1B) dello stomaco del cane (p < 0,05). No statisticamente significativa correlazione è stata trovata tra Helicobacter
infezione e gastrica atrofia della mucosa o fibrosi, lamina propria
linfoplasmacellulare infiltrazione o iperplasia lymphofollicular. Non sono state rilevate differenze significative per quanto riguarda la densità di colonizzazione batterica tra le due regioni dello stomaco (p > 0,05).
Il numero di Helicobacter
casi -positive rilevati con i diversi metodi significativamente differente (p < 0,05). risultati IHC positivo non differiscono in modo significativo su ogni regione dello stomaco (p > 0,05), mentre i numeri ottenuti con SE, GM e qPCR differivano in modo significativo tra il corpo e l'antro (p < 0,05).
Discussione
In questo studio, è stata osservata un'alta prevalenza di gastrite (95,7%). Questi risultati sono in accordo con altri studi che riportano la presenza di gastrite come un reperto comune nei cani [14,31,32]. Al contrario, erosioni gastriche o ulcere sono stati raramente si trovano in questi animali.
Infezione NHPH è stato determinato da quattro metodi (HE, MG, IHC e qPCR) e una prevalenza del 87,0% nei cani è stato rilevato. Questi risultati sono coerenti con quelli disponibili in letteratura, che ha documentato alta prevalenza di NHPH nella mucosa gastrica canino [12,19,33-35]. Nel nostro studio canino infezione NHPH era significativamente accompagnato da lieve a moderata intraepiteliale infiltrazione linfocitaria e da lieve a moderata lesioni epiteliali gastriche, indipendentemente dalla posizione dello stomaco. Una chiara relazione tra la gastrite da Helicobacter canina e
infezione è stata, tuttavia, non ha stabilito che è in accordo con i risultati degli altri [11,14,15,34].
In una precedente inchiesta, la percentuale di Helicobacter
casi -positive rilevati dopo HE colorazione dei campioni gastrici canini è stata del 17,5% [24]. Nel corso di studio, tutti i campioni sono stati esaminati da due patologi di grande esperienza nella rilevazione di Helicobacter
spp.
Organismi dopo la colorazione di routine. Questo può aver giocato un ruolo nella percentuale di individuazione più elevato (65,2%) hanno riportato qui.
In accordo con gli studi precedenti, NHPH sono stati spesso osservato non solo nel muco superficiali e nei ghiandole gastriche, ma anche intracellulare, nel citoplasma di cellule parietali [31,33,36] (Figura 1C e D). organismi a forma di spirale presenti in questa particolare posizione subcellulare erano difficili da rilevare dopo che lui e MG colorazione dovuta alla granulazione citoplasma delle cellule parietali. Nelle nostre mani, IHC sembrava essere una tecnica molto utile per identificare NHPH all'interno di queste cellule (Figura 1D). Nel complesso, IHC colorazione ha mostrato i più alti Helicobacter
valori -positive (82,6%). Questo risultato è in accordo con gli altri risultati che mostra che gli anticorpi disponibili in commercio contro H. pylori Quali sono utili per il rilevamento di Helicobacter
spp. . In campioni incorporati paraffina da stomaci cane [24,26,36]
Precedenti studi hanno riportato alcuna differenza statisticamente significativa tra il rilevamento di Helicobacter
organismi da IHC e PCR tecniche (p > 0,05) [24]. Chung et al.
(2014) hanno riportato che il saggio PCR ha una maggiore sensibilità e specificità rispetto agli altri metodi [4]. Tuttavia, nel nostro studio, il tasso di prevalenza di Helicobacter
spp.
Ottenuto con la qPCR era il più basso (47,8%). indagini precedenti hanno dimostrato che la fissazione in formalina e inclusione in paraffina ostacolare l'analisi PCR [37,38]. Sjödin et al.
(2011) hanno confrontato l'efficienza dell'amplificazione del DNA da fresco (n = 28) e inclusi in paraffina (n = 28) campioni per l'identificazione di Helicobacte
r spp.
Da diversi organi ( felino stomaco, duodeno, fegato e pancreas) e ha concluso che il valore medio di concentrazione di DNA ottenuto era più alta quando ottenuti da tessuti freschi [39]. analisi del DNA di campioni di tessuto inclusi in paraffina utilizzando PCR /qPCR può essere compromessa a causa della frammentazione del DNA, sostanze inibenti, o una combinazione di entrambi. La fissazione in formalina può infatti provocare la frammentazione del DNA e distruzione parziale del DNA [38,40] e le reazioni di PCR può essere inibito dal residuo di formalina [37]. Gli effetti negativi di formalina sono direttamente correlati alla durata della fissazione [40]. Anche se i campioni inclusi in questo studio sono stati tutti trattati nello stesso laboratorio e quindi sottoposto agli stessi protocolli standard, la durata della fissazione può variare tra i campioni a causa della variazione di intervallo di tempo tra la raccolta dei campioni e il loro arrivo al laboratorio.
Diverso approcci molecolari per l'identificazione di specie NHPH sono stati affrontati [4,14,24,28]. Tecniche basate sul rilevamento o sequenziamento dei geni 16S o 23S rRNA-codifica può, tuttavia, non distinguere tra i diversi Helicobacter
specie felina gastrici canina e, mentre i test in base alla rilevazione o sequenziamento del gene HSP60
, l'ureasi a e B geni o gyrB
gene consentono l'identificazione di questi batteri a livello di specie [9].
nel nostro studio, ampliconi ottenuti nel H. heilmannii
specifico qPCR ha mostrato solo circa il 92% di omologia con H . heilmannii,
che finora è stato solo in coltura dalla mucosa gastrica dei gatti. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

• Meccanismi molecolari di adesione delle cellule epiteliali gastriche e l'iniezione di CagA di Helicobacter pylori
• L'incidenza e la sopravvivenza di cancro esofageo e gastrico in Inghilterra tra il 1998 e il 2007, uno studio basato sulla popolazione