Selenoprotein S (SEPS1) gene -105G > Un polimorfismo del promotore influenza la suscettibilità al cancro gastrico nella popolazione giapponese

Selenoprotein S (SEPS1) gene -105G > Un polimorfismo del promotore influenza la suscettibilità al cancro gastrico nella popolazione giapponese
Abstract
sfondo
L'infiammazione è un fattore chiave nel processo di carcinogenesi da gastrite cronica indotta da Helicobacter pylori
. Selenoprotein S (SEPS1) è coinvolto nel controllo della risposta infiammatoria nel reticolo endoplasmatico (ER). Recentemente il -105G > Un polimorfismo nel promotore di SEPS1 ha mostrato di aumentare l'espressione di citochine pro-infiammatorie. Abbiamo esaminato l'associazione tra questo polimorfismo e il rischio di cancro gastrico.
Metodi
Abbiamo preso biopsie gastriche durante endoscopie di 268 pazienti giapponesi cancro gastrico (193 maschi e 75 femmine, età media 65,3) e 306 pazienti di controllo ( 184 maschi e 122 femmine, età media 62,7) ed estratto il DNA da campioni bioptici. Tutti i soggetti hanno fornito consenso informato scritto. Per la genotipizzazione del polimorfismo SEPS1 promotore nella posizione -105G > A, metodi PCR-RFLP sono stati utilizzati ed i prodotti di PCR sono stati digeriti con PspGI
analisi di regressione logistica è stata utilizzata per stimare gli odds ratio (OR) e il 95% di fiducia. . intervalli (CI), aggiustato per età, sesso, e H. pylori
stato di infezione
Risultati Con gli casi, la distribuzione dei genotipi è stata la seguente: 88,4% erano GG, 11,2% erano GA, e 0,4% erano AA. Tra i controlli, la distribuzione è la seguente: 92,5% erano GG, 7,2% erano GA, e 0,3% erano AA. Tra i maschi, che trasportano l'allele era associata ad un aumentato le probabilità di cancro gastrico, rispetto al genotipo GG (OR: 2,0, 95% CI 1,0-4,1, p = 0,07). Rispetto al genotipo GG, portando l'allele era significativamente associato con un aumentato rischio di tipo intestinale cancro gastrico (OR: 2,0, 95% CI 1,0-3,9, p < 0,05), così come di cancro gastrico situato nel terzo medio lo stomaco (OR: 2,0, 95% CI 1,0-3,9, p < 0,05).
Conclusione
il -105G > Un polimorfismo del promotore di SEPS1 è stato associato con il tipo intestinale del cancro gastrico. Questo polimorfismo può influenzare le condizioni infiammatorie della mucosa gastrica. Più grandi studi di popolazione sono necessari per chiarire la relazione tra le risposte infiammatorie e SEPS1 polimorfismo.
Sfondo
cancro gastrico rimane un notevole problema di salute pubblica in tutto il mondo. Anche se i tassi di incidenza e mortalità di cancro gastrico sono diminuiti gradualmente, il cancro gastrico è secondo solo al cancro del polmone come la principale causa di morte per cancro in tutto il mondo [1, 2]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) è stato designato come un agente patogeno per carcinogenesi gastrica [3]. L'infiammazione può essere un fattore chiave nel processo di carcinogenesi da gastrite cronica indotta da H. pylori
[4]. Tuttavia, solo un piccolo numero di pazienti infetti in realtà sviluppare il cancro gastrico. Questo suggerisce che fattori genetici, come i geni associati a risposte infiammatorie, possono anche svolgere un ruolo importante nella cancerogenesi stomaco.
Selenoprotein S (SEPS1, noto anche come SELS, SELENOS, VIMP) è un romanzo selenoproteina situato nel endoplasmatico reticolo (ER) e la membrana plasmatica. . Esso è coinvolto nel controllo della risposta infiammatoria in ER [5]
SEPS1 protegge le cellule dal danno ossidativo e apoptosi, ed è ampiamente espresso in una varietà di tessuti [6-8]
Recentemente, il. - 105G > Un polimorfismo del promotore di SEPS1 ha dimostrato di essere fortemente associata con livelli plasmatici di citochine pro-infiammatorie, come l'interleuchina 1 beta (IL-1β), interleuchina 6 (IL-6) e fattore di necrosi tumorale alfa (TNF-α) . Il -105G > Un polimorfismo del promotore di SEPS1 può influenzare i livelli di mRNA SEPS1 [9]. La sostituzione della A allele per l'allele G alla posizione -105 ridotto l'attività del promotore in cellule HepG2 [10].
Dopo la relazione di un polimorfismo nella regione promoter SEPS1, alcuni studi clinici hanno dimostrato associazioni tra polimorfismo SEPS1 con malattia coronarica e di ictus ischemico [11] e preeclampsia [12], mentre altri studi non hanno riportato associazioni tra questa variante con malattia infiammatoria intestinale [13] o malattia cerebrovascolare [14].
Tuttavia, l'associazione tra il -105G > Un polimorfismo del promotore di SEPS1 e il rischio di cancro gastrico non è ancora stato studiato
livelli di iL-1b sono stati associati con cancro gastrico [15], e perché il polimorfismo SEPS1 colpisce i livelli di iL-1β, polimorfismo SEPS1 maggio. essere un importante fattore genetico per lo sviluppo del cancro gastrico.
in questo studio caso-controllo, abbiamo esaminato le associazioni tra polimorfismo SEPS1 promotore e sia il rischio di cancro gastrico e le risposte infiammatorie nella mucosa gastrica come misurato nei campioni bioptici gastrici .
Metodi
pazienti e controlli
lo studio ha incluso pazienti che hanno ricevuto una endoscopia gastrointestinale superiore presso l'Fujita University Hospital Salute in Giappone. Consecutivamente soggetti arruolati sono stati sottoposti a screening per il cancro gastrico mediante endoscopia gastrointestinale superiore seguita da una di bario esame radiografico. I casi erano 268 pazienti giapponesi (193 maschi, 75 femmine, età media 65,3 ± 12,0 anni) che sono stati diagnosticati con cancro gastrico primaria, e controlli erano 306 persone (184 maschi, 122 femmine) senza cancro gastrico che ha anche sottoposti a endoscopia gastrointestinale superiore. Il cancro gastrico è stato diagnosticato istologicamente presso la Divisione di Patologia del nostro ospedale, e tumori è stata classificata secondo la classificazione di Lauren s '[16]. La messa in scena il cancro e le informazioni sulla posizione anatomica sono stati ottenuti anche. I pazienti affetti da malattie sistemiche e tumori in altri organi, o che avevano ricevuto farmaci anti-infiammatori non steroidei sono stati esclusi.
Il Comitato Etico della Facoltà di Medicina presso Fujita University Health approvato il protocollo. Consenso informato scritto è stato ottenuto da ciascun partecipante allo studio.
Studio istologico e DNA Estrazione
gastrici campioni bioptici sono stati presi dalla mucosa non-cancerose nel antro e la grande curvatura dello stomaco, utilizzando un ambito gastrointestinale superiore. Alcune parti di ciascun campione sono state fissate in 10% formalina tamponata e inclusi in paraffina, mentre le altre parti sono stati immediatamente congelati e conservati a -80 ° C fino al momento dell'estrazione del DNA. Tutte le diagnosi istologiche sono state effettuate presso la Divisione di Patologia del nostro ospedale. La gravità della gastrite cronica è stata classificata da un patologo che non hanno accesso a tutte le informazioni cliniche, secondo il sistema aggiornato Sydney [17] con ogni fattore viene segnato da 0 (normale) a 3 (marcato).
Il genomico DNA è stato estratto da campioni conservati a -80 ° C con proteinasi K e kit di estrazione del DNA (Quiagen, Valencia, CA). Analisi polimorfismo di SEPS1 Gene
il genotipo per la regione SEPS1 promotore alla posizione -105 è stato determinato utilizzando basati sulla PCR polimorfismi di restrizione dei frammenti (PCR-RFLP). Abbiamo usato primer che comprendeva l'area polimorfismo SEPS1 (-105). Successivamente, l'identificazione è stato fatto dopo PCR-amplificazione, utilizzando i seguenti primer 5'-AAATCCGTGAACGAGGTCCG-3'and 5'-GAGCAACTAATCTGAATCAGG-3 '. PCR è stata effettuata con 0,1 mg di DNA genomico in un volume di 20 microlitri. Il DNA è stato denaturato a 94 ° C per 5 minuti, seguito da 35 cicli a 94 ° C per 20 secondi, 53 ° C per 20 secondi, e 72 ° C per 40 secondi, con una estensione finale a 72 ° C per 7 minuti . Le reazioni di PCR sono stati fatti usando Miscela Taq (Toyobo Co., Ltd., Osaka, Giappone). I prodotti della PCR amplificati sono stati digeriti durante la notte con 5 unità di PspGI (New England Biolabs, Inc., Beverly, MA, USA) a 75 ° C. Successivamente, i prodotti digeriti sono stati analizzati su gel di agarosio al 3%. Questi gel sono stati colorati con bromuro di etidio (0,5 mg /mL), e le genotipi sono stati determinati mediante analisi di bande diverse. La presenza di un sito PspGI è stato indicato dalla scissione del prodotto amplificato 324 bp per produrre frammenti di 179 e 145 bp. La genotipizzazione è stata confermata da sequenziamento diretto in alcuni campioni scelti a caso.
Rilevazione di H. pylori
H. pylori
positività è stata determinata mediante esame microscopico, test del respiro di urea, o siero titoli anticorpali anti-HP. L'infezione è stata diagnosticata quando almeno uno di questi test era positivo
. Analisi statistica
Hardy-Weinberg del gene allele SEPS1 nei controlli e pazienti affetti da cancro gastrico sono stati valutati da χ 2 statistiche. Caratteristiche cliniche tra i pazienti con o senza cancro gastrico, e le differenze nei punteggi gastrite tra un vettori e G /G sono stati esaminati con il test di Mann-Whitney U. analisi di regressione logistica è stata utilizzata per stimare gli odds ratio (OR) e gli intervalli di confidenza al 95% (CI) per i genotipi, con aggiustamento per età, sesso, e H. pylori
stato infettivo. Un valore di p < 0.05 è stato considerato statisticamente significativo
. Risultati
caratteristiche dei soggetti
Le caratteristiche dei casi e controlli sono riassunti nella tabella 1. H. pylori
infezione e l'età erano più elevati nei pazienti affetti da cancro gastrico che in controlli (p < 0,05) .table 1 caratteristiche dei soggetti

GC
controlli
P

numero
268
306
maschi /femmine
193/75
184/122
NS
età media (± SD)
65,3 ± 12,0
62,7 ± 13,2
< 0.05A
HP tasso positivo (%) 86,2

68,0
< 0.05A
GC: cancro gastrico, HP: Helicobacter pylori
AGC vs controlli, Mann-Whitney U test di
I principali risultati endoscopici per il gruppo di controllo sono stati:. Ulcera gastrica in 68 pazienti ( 22,2%), ulcera duodenale in 35 (11,4%), ulcera gastrica e duodenale a 5 (1,7%), e gastrite in 198 (64,7%).
distribuzione dei genotipi SEPS1
la tabella 2 mostra le frequenze genotipiche di SEPS1 in pazienti con cancro gastrico e il gruppo di controllo. Il polimorfismo in posizione -105 del SEPS1 è stato digitato in tutti i 574 soggetti. Tra casi, la distribuzione dei genotipi era la seguente: 88,4% erano GG, 11,2% erano GA, e 0,4% erano AA. Tra i controlli, la distribuzione è la seguente: 92,5% erano GG, 7,2% erano GA, e 0,3% erano AA (Tabella 2). La frequenza del polimorfismo SEPS1 nei controlli e pazienti affetti da cancro gastrico non si discosti significativamente da quelli attesi (p = 0.42, 0.96 rispettivamente), sotto l'equilibrio di Hardy-Weinberg. Tra i maschi, rispetto al genotipo GG, i genotipi GA e AA combinazione è stata associata ad un aumentato le probabilità di cancro gastrico (OR: 1,97, 95% CI 0,95-4,06, p = 0,067; Tabella 3) .table 2 SEPS1 polimorfismo e GC rischio
genotipi
pazienti con GC
n (%)
pazienti di controllo
n (% )
OR (95% CI)
P
G /G
237 (88,4)
283 (92,5)
di riferimento
G /
a 30 (11,2)
22 (7.2)
1,66 (0,91-3,01)
0,097
A /A
1 (0,4)
1 (0,3)
0,77 (0,05-12,44)
0.852
G /A + A /A
31
23
1,61 (0,90-2,89)
0,112
GC: cancro gastrico, CI: fiducioso intervallo
Tabella 3 di associazione tra il polimorfismo SEPS1 e genere


genotipo
G /G vs G /A + A /A



G /G
G /A
A /A
OR (98% CI)
P
pazienti
controllo
maschio
171
12
1 riferimento
femminile
112 10
0
GC pazienti
maschio 169
23
1 1,97 (0,95-4,06)
0,067
femminile
68 7
0
1,17 (0,42-3,23)
0,764
GC: cancro gastrico, CI: fiducioso intervallo
In ulteriori analisi, le associazioni tra polimorfismo SEPS1 e le caratteristiche clinico-patologiche di cancro gastrico, come ad esempio la posizione del tumore, lo stadio, e la classificazione istologica di Lauren, sono stati valutati. Portando una -105 A allele era significativamente associata ad un aumentato rischio di tipo intestinale di Lauren di cancro gastrico (OR: 1,99, 95% CI 1,01-3,93, p < 0,05) e di cancro gastrico situato nel bel mezzo terza parte dello stomaco (OR : 2,01, 95% CI 1,03-3,92, p < 0,05) (Tabella 4) .table 4 di associazione tra il polimorfismo SEPS1 e la posizione del tumore, messa in scena e la classificazione di Lauren
Variabili (n)
genotipo
G /G vs G /A + A /A


G /G
G /A
A /A
OR (95% CI)
P

I pazienti senza GC (306)
283
22
1 Riferimento
localizzazione del tumore
Cardia (5)
5
0 0

1.93 (0,40-9,22)
0,411
non-cardias (263)
232
30
1 2.81 (0,69-11,48)
0.15
terzo superiore ( 16)
14 2
0
ND

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