Stomach Health > Mo. Gesondheet >  > Gastric Cancer > Gastric Cancer

PLOS NËMMEN: Anthraquinone G503 Induces Apoptosis zu Gastric Cancer BTS duerch d'Kënschtlech Passerelle

Wat VerfÜgung

G503 ass eng anthraquinone Massa aus dem Lycée metabolites vun engem lescht endophytic Iwwelzegkeet vun der South China Sea isoléiert. Déi heiteg Etude elucidates der anti-entholl Aktivitéit an der Basisdaten Mechanismus vun G503. Zell Nuetsvolen assay an néng Kriibs Zell Versen an zwee normal Zell Linnen standing bewisen, dass d'gastric Kriibs Zell Linn SGC7901 déi G503-senisitive Kriibs Zellen ass. G503 SGC7901 Zell Doud via apoptosis entschlof. G503 aussetzt ageschalt caspases-3, -8 an -9. Pretreatment mat der Pan-caspase inhibitor Z-VAD-FMK an caspase-9 inhibitor Z-LEHD-FMK, mä net caspase-8 inbibitor Z-IETD-FMK, attenuated den Effet vun G503. Dës Resultater ugeholl, datt d'Ausriichtung Kënschtlech apoptosis Passerelle, anstatt de extrinsic Passerelle, war zu G503-entschlof apoptosis Équipe. Doriwwer eraus, fräi G503 d'Verhältnis vun Bax zu BCL-2 an der Mitochondrie a rofgaang d'Verhältnis zu dem Zytosol importéiert. G503 Behandlung schéinen Kënschtlech depolarization, cytochrome c release an der nächster Rëss vun caspase -9 a -3. Ausserdeem, ass et confirméiert, datt de endoplasmic reticulum apoptosis Passerelle och vun G503 vun Pinguin capase-4 Rëss ageschalt ginn. An Contrepartie vun der manner wéi 50% inhibitory Konzentratioun fir gastric Kriibs Zellen, kann G503 wéi eng villverspriechend Kandidat fir gastric Kriibs Chimiotherapie déngen VerfÜgung

Fro:. Huang L, Zhang T, Li S, Duan J, Ye F, Li H, et al. (2014) Anthraquinone G503 Induces Apoptosis zu Gastric Cancer BTS duerch d'Kënschtlech Passerelle. PLoS NËMMEN 9 (9): e108286. Doi: 10.1371 /journal.pone.0108286 VerfÜgung

Redakter: Javier S. Castresana, Universitéit vun Navarra, Spuenien VerfÜgung

Arnaque: 19. Abrëll 2014; Akzeptéiert: 19 August 2014; Publizéiert: 30. September 2014 VerfÜgung

Copyright: © 2014 Huang et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung

Data Disponibilitéit:. D' Auteuren confirméieren datt all Daten d'Conclusiounen si voll sinn ouni Restriktioun Basisdaten. All Daten sinn bannent de Pabeier a seng Ennerstëtzung Informatiounen Fichieren VerfÜgung

Funding: Dës Etude vum National Natur Science Foundation vu China, Grant Number ënnerstëtzt huet:. 30973449, 81172163, 81272515, 81272338, 81200706; National Key SCI-Tech Special Project vu China, Grant Number: 2009ZX09103-642, 2013ZX09102053; Programm fir Promotioun Station zu University, Grant Number: 20120171110053, 20130171110053; Key Project vun Natur Science Foundation vun Guangdong Province, China, Grant Number: 10251008901000009; Schlëssel SCI-Tech Fuerschungsprojet Guangdong Province, China, Grant Number: 2011B031200006; Guandong Natural Science Fund, Grant Number: S2012010009250, S2012040006986; Schlëssel SCI-Tech Research Project vun lousoihong Gemeng, China, Grant Number: 2011Y1-00017-8, 12A52061519; Programm fir Jonk Teacher zu University, Grant Number: 10YKPY28; Changjiang Geléiert an innovativ Fuerschung Team zu University, Nummer:. 985 Projet PCSIRT 0947. D'funders keng Roll am Etude Design huet, Daten Kollektioun an Analyse, Décisiounen ze publizéieren, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft VerfÜgung

Wettsträit Interessen: D' Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren. VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

befënnt, radiotherapy an Chimiotherapie sinn der Primärschoul Medeziner entholl Behandlungen. Allerdéngs sinn Agrëff an radiotherapy zu metastatic Kriibs effikass; wann Chimiotherapie richteg benotzt gëtt, kann Metastasen inhibited ginn [1]. Mat wat fir Anti-Kriibs Drogenofhängeger Entwécklung, sinn anthracyclines der efficaceste Anti-Kriibs Drogen [2]. Natural Produiten aus Mier sinn wichteg Quelle vun Roman Anti-Kriibs Drogen [3]. Marine microorganism metabolites mat eenzegaarteg Strukturen an pharmacological Aktivitéite sinn normalerweis als Spëtzekandidat antitumor awer benotzt [4]. Anthraquinone awer, wéi daunorubicin, doxorubicin, epirubicin an mitoxantrone, sinn déi meescht effektiv Medeziner Anti-Kriibs Drogen [2]. D'Marine anthraquinone SZ-685C Hien d'Prolifératioun vu mënschlechen Broscht Kriibs [5] - [6] a mënschlech nasopharyngeal carcinoma (dach) Zellen [7]. Huang et al. bewisen, datt anthraquinones aus Rubarb, wéi emodin, Aloe-emodin an RHEIN, de Wuesstem an d'Verbreedung vu verschiddenen Kriibs Zellen, wéi haett adenocarcinoma, myelogenous Leukämie, neuroblastoma, hepatocellular carcinoma, BBC Kriibs an aneren [8] inhibit. VerfÜgung

de Mechanismus vun der antitumor Aktivitéit vun anthraquinones ass an de folgenden Aspekter allem Équipe [9] - [10]: DNA Interaktioune duerch bindend, intercalating an Trennung vun der DNA duebel staarkt interfering; direkt Membran Effekter; DNA Schued an Äntwert II inhibition oder d'Generatioun vun gratis Radikaler fräigesat, wéi reaktiv Sauerstoff Aarten (Ros), an der Aféierungs- vun apoptosis via topoisomerase II inhibition, funktionell p53 oder Ros Generatioun zu topoisomerase. Zousätzlech, anthraquinones och apoptosis duerch d'JNK Iwwerleeung (c-Jun N-Uschloss kinase) [11], Akt /PKB (Protein Kinase B) [5], [12] an Kënschtlech Weeër [13] -. [14]

G503 ass eng anthraquinone Massa aus dem Lycée metabolites vun der lescht endophytic Iwwelzegkeet Nr 1403 aus der South China Sea isoléiert [15] .However, ob G503 anticancer Potential wéi eng anthraquinone Massa leie huet propagéieren net ginn. Dofir, war de Moment studéieren entworf der anti-entholl Aktivitéit vun G503 an der Basisdaten Mechanismus Équipe ze entschlësselen. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

Chemikalien a Reagents VerfÜgung

3- (4 , 5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenylterazolium bromide (MTT) an Ros Ralley N-acetyl-cysteine ​​(NAC) aus Fläch-Aldrich (St. Louis, MO, USA) kaaft huet. Hochest 33342, carboxy-H2DCFDA, MitoProbe DiOC2 (3) Assay Kit an MitoProbe Transitioun Pore Assay Kit (M34153) sech aus Invitrogen (USA) kritt. Annexin V-FITC (fluorescein isothiocyanate) /PI (propidium Kaliumiodid) Apoptosis Detektioun Kit war vun Keygen (Nanjing, Jiangsu, CHINA) kaaft. RPMI1640 mëttel- a An et Bovine serum (FBS) sech aus Hyclon (Logan, féier, USA ). VerfÜgung Caspase-8 inhibitor Z-IETD-FMK, caspase-9 inhibitor Z-LEHD-FMK an caspase-Famill inhibitor Z-VAD-FMK sech aus Calbiochem (Gibbstown, NJ, USA) an Beyotime (CHINA). Antibodies géint caspase-3, caspase-4, caspase-8, caspase-9 an COXIV antibody sech aus Zell sécher Technology (Beverly, MA, USA). Antibodies géint cytochrome c VerfÜgung, Bax, BCL-2, p38, p-p38 an Anti-Geess LgG-HRP sech vu Santa Cruz Déi (Santa Cruz, CA, USA). Mouse anti-β-actin an Anti-GAPDH Primärschoul antibodywere aus Fläch-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Anti-Kanéngchen LgG-peroxidase an Anti-Maus IgG-peroxidase sech aus Vecteure (Burlingame, CA, USA) .Mitochondria Isolatioun Kit vun Pierce (Pierce, IL, USA) kaaft gouf, FAQ assay Kit aus Bio-Rad (Hercules kaaft huet , CA, USA), an der ECL erkennen Kit sech aus Applygen Technologies INC (Peking, CHINA). VerfÜgung

Fermentatioun, Reduktioun an Isolatioun vun G503 vun Nigrospora VerfÜgung sp. Nr 1403 VerfÜgung

NO.1403 war vun délabréiert Holz vun Kandeliacandel VerfÜgung (L.) Druce an reidentified wéi Nigrospora VerfÜgung sp isoléiert. (Genebank Bäitrëtt Nummer: HQ891110), déi aus Mai Po, Hong Kong, an e Salz Séi an de Bahamas. G503 huet isoléiert a sidd aus dem Lycée metabolites vun NEE. 1403 [15]. Starter Kulturen sech op cornmeal iwwerschwemmt Agar haten. Stroum vun Agar mycelial Wuesstem förderen sech Géigewier an transferéiert aseptically zu engem 250 ml Erlenmeyer flask mat 100 ml vu flëssegem mëttelfristeg (Zocker 10 g /L, peptone 2 g /L, Happ Extrait 1 g /L, NaCl 2 g /L, pH D 7.0). D'flask war bei 28 ° C incubated. Nom fir 3-5 Deeg op enger Raemerich Shaker verzweifelt, war d'mycelium aseptically zu engem 500 ml Erlenmeyer flask transferéiert der Kultur flësseg (200 ml) mat. D'flask war dann fir 25 Deeg op 28 ° C incubated. VerfÜgung

D'Kulturen (150 L) sech duerch cheesecloth Filter. D'filtrate war ënner 50 ° C bis 5 L Konzentratioun a Quecksëlwer dräimol duerch eng gläichberechtegt Volume vun ethyl acetate verzweifelt. D'kombinéiert Bio dovu goufen zu engem Silikatsubstrat gelies Kolonn ënnerworf, a mat engem packt vu Petrol ETHER zu ethyl acetate eluted de Massa, nozeginn. VerfÜgung

De Massa war an Police sulfoxide (DMSO) op enger Bourse Konzentratioun vun 50 opgeléist mmol /L an verdënntem ze bestëmmter Konzentratioune virewech ze benotzen VerfÜgung

Zell Kultur VerfÜgung

HUVECs vun der mënschlecher umbilical verfeelt Nuebelschnouer vun normal parturitions an cultured folgenden e Protokoll isoléiert sech beschriwwe virdrun [16] -. [ ,,,0],17]. Chang Liewer Zellen an entholl Zell Linnen Hone-1, CNE-2, 5-8F, HepG2, B7402, RB, PC3, A549 an SGC7901, goufen AGS haten vun eisem Laboratoire an cultured zu RPMI1640 mëttelfristeg ergänzt mat 10% FBS, 100 U /mL streptomycin an 100 u /mL penicillin (Gibco) bei 37 ° C an enger humidified Atmosphär vu 5% CO 2. Dës Etude entsprécht den Prinzipien vun der Deklaratioun vun Helsinki duergestallt, déi vun der Medical IFLA- Comité vun Sun Yat-Sen Universitéit ugeholl, an schrëftlech informéiert Averständnes war vun der Donateur kritt. VerfÜgung

Zell Nuetsvolen assay VerfÜgung

BTS op eng Dicht vun 2 × 10 4 Zellen /mL zu 24-gutt Placke (HUVECs zu gelatin-Beschichtete 24-gutt Placke rakommen waren) géint goufen. Wann d'Zellen eng Dicht vu 60% -70% erreecht, waren se fir 48 h am RPMI1640 mëttelfristeg mat verschiddenen Konzentratioune vun G503 behandelt (1 ml /gutt) ouni FBS; déi negativ Kontroll Gruppe waren mat PBS behandelt. Duerno, 100 μL MTT (5mg /ml) war dat fir eng zousätzlech 4 h un all gutt an incubated vun PBS opgeléist Zousatz fir d'Équipe vun formazancrystals ze erlaben. D'Kristaller waren an 1 ml DMSO an all gutt solubilized. D'optesch Dicht (sel) Wäerter vun der mauve Léisung datt Zell Nuetsvolen vertruede waren um 570nm gemooss [18] - [19]. No dräi onofhängeg Experimenter, war Zell Iwwerliewe mat de folgenden Formule berechent: Iwwerliewe (%) = (mengen experimentellen sel Wäert /Kontroll sel Wäert heeschen) × 100%. Déi Wäerter sech als 50% inhibitory Konzentratioun (IC 50) ausgedréckt, dat duerch de Réckgang Method am linear Rei berechent huet. VerfÜgung

Hoechst 33342 staining assay VerfÜgung

SGC7901 Zellen sech plated zu 6-gutt Placken op eng Dicht vu 10 5 Zellen pro gutt a mat G503 Konzentratioune vun 0 μmol /L bis 40 μmol /L fir 24 h rangéiert behandelt. D'Zellen sech mat 10 μg /ML Hoechst 33342 [20] fir 10 min bei 37 ° C Fortgeschratten an observéiert fluorescence microscopy benotzt (Olympus X71-A12FL /PH). VerfÜgung

Annexin V-FITC /PI staining assay

SGC7901 Zellen sech op eng Dicht vu 5 × 10 5 bis 5 × gesammelt 10 6 /mL der G503 Behandlung um Konzentratioune rangéiert vun 0 μmol /L bis 40 μmol /L fir 24 h an 6-gutt Placke; Zellen behandelt mat 25 μmol /L colchicine sech als positiv Kontroll benotzt. D'Zellen sech dann gewäsch a Kierchefënster laut den Hiersteller d'Instruktioune (Annexin V-FITC /PI Apoptosis Detektioun Kit). Kuerz, goufen d'Zellen zu 500 μL 1 × bindend gefiermt resuspended. Next, 5 μL AnnexinV-FITC a 5 μL 20 μg /ML PI war fir 15 min an der donkel bei Raumtemperatur fir d'Echantillonen an incubated notéiert. D'grousst Echantillon sech dann duerch onkontrolléiert cytometry (Becton Dickinson, NJ, USA) évaluéieren zu apoptotic Zellen z'identifizéieren. VerfÜgung

Entschlossenheet vun Kënschtlech Membran Potential VerfÜgung

SGC7901 Zellen sech zu 6-gutt Placke plated. Op eng Dicht vu 60% ze erreechen, goufen d'Zellen fir 18 h mat 20 μmol /L G503 behandelt an da fänke d'Kënschtlech Membran Potential no den Hiersteller d'Recommandatiounen (MitoProbe DiOC2 (3) Assay Kit) ze bewäerten. Kuerz, waren 1 × 10 6 /ML Zellen zu 37 ° C PBS resuspended. De positiven Kontroll Gruppen sech fir 5 min bei 37 ° C mat 1 μL vun 50mmol /L CCCP Pre-behandelt. All d'Gruppen sech dann mat 5 μL vun 10 μmol /L DiOC 2 (3) fir 30 min bei 37 ° C an évaluéieren Flux cytometry behandelt. D'Kënschtlech Membran Potential war baséiert op folgend Equatioun berechent:. Kënschtlech Membran Potential = (rout fluorescence Intensitéit) /(gréng fluorescence Intensitéit) VerfÜgung

Detektioun der Ouverture vun Mitochondrie Permeability Transitioun Pore (mPTP) VerfÜgung

SGC7901 Zellen sech zu 6-gutt Placke plated. Op eng Dicht vu 60% ze erreechen, goufen d'Zellen mat 20μmol /L G503 fir 18h behandelt a gesammelt mPTP Ouverture vun Flux cytometry (Becton Dickinson, NJ, USA) laut den Hiersteller d'Protokoll (MitoProbe Transitioun Pore Assay Kit) ze bewäerten. Kuerz, war all Prouf an 3 aliquots ënnerdeelt a behandelt wéi follegt zesummen: aliquot 1 mat 5 μL 2 μmol /L Calcein AM am däischteren behandelt gouf; aliquot 2 war mat 5 μL Calcein AM a 5 μL 80 mmol /L CoCl 2 an d'Donkel behandelt; an aliquot 3 war behandelt mat 5 μL Calcein AM, 5 μL CoCl 2 an 5 μL vun 100 μmol /L ionomycin. D'aliquots sech dann fir 15 min am däischteren bei 37 ° C incubated. No mat HBSS /Ca gewäsch ginn 2+ ae-Spär vun 400 μL HBSS /Ca 2+, goufen d'Zellen duerch onkontrolléiert cytometry bannent 1 h évaluéieren. D'mPTP Ouverture Conditioun sech wéi follegt: (fluorescence vun aliquot 2- der fluorescence vun aliquot 3) /(d'fluorescence vun aliquot 1- der fluorescence vun aliquot 3). Calcein AM penetrates der Zytoplasma an organelles dorënner de Mitochondrie. CoCl 2 quenches Calcein AM fluorescence an der Zytoplasma awer net zu der Mitochondrie. Calcein AM zu der Zytoplasma aus der Mitochondrie translocates wann der mPTP opgemaach ass, an der fluorescence ass attenuated vun CoCl 2. VerfÜgung

Isolatioun vun Zell Mitochondrie an Zytoplasma VerfÜgung

SGC7901 Zellen sech plated an 100-mm Placke; all Grupp war an zwou Placken plated. 60% -70% Niewebaach no erreechen, goufen d'Zellen fir 18 h, mat oder ouni 20 μmol /L G503 behandelt. No Behandlung, goufen d'Kënschtlech an cytoplasmic ufale laut den Hiersteller d'Instruktioune kritt (Mitochondrie Isolatioun Kit). VerfÜgung

Western blotting Analyse VerfÜgung

Wéi virdru beschriwwen, goufen d'Zellen am Ripa lysed gefiermt [21] . D'FAQ Konzentratioune vun der Mitochondrie, Zytoplasma a ganz-Zell sech duerch d'BCA Method mat der Bio-Rad FAQ assay Kit fonnt. Am Ganzen, 60 μg Proteinen vun all Grupp sech déi 12% oder 15% Natrium dodecylsulfate-polyacrylamide gelies electrophoresis (SDS-PAGE) getrennt. D'Proteinen vun SDS-PAGE sech zu engem PVDF Membran transferéiert. No der nonspecific bindend Siten vun de Schläimhait fir 1-2 h bei Raumtemperatur mat TBST gefiermt mat 10% Net-Fett Mëllech blockéiert waren, goufen d'Schläimhait Nuecht op 4 ° C mat Primärschoul antibody laut den Hiersteller d'Instruktioune incubated. D'Première antibodies mat oder ouni fluorescence un den zoustännege Primärschoul antibodies conjugated ware fir 2 h bei Raumtemperatur incubated. D'Schläimhait mat unisse Secondaire antibodies sech mat der Odyssee System (Li-Cor, Nebraska, USA) évaluéieren d'unisse Bands ze scannen [22], an d'Schläimhait mat normal Secondaire antibodies sech mat der ECL erkennen Kit fir immunoblots visualized. D'Schläimhait goufen ewechgeholl an du-Komedie mat β-actin oder COXIV antibodies. β-actin war wéi déi intern Norm fir d'total Zell lysate an cytoplasmic extractions benotzt hierkommen COXIV wéi d'Kontroll vun der Kënschtlech extractions benotzt gouf. Densitometric Analyse vun Interpreten war benotzen ech sinn standing One (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) [23]. VerfÜgung

statistique Analyse VerfÜgung

All Donnéeën presentéiert sech als ± Fils mannst triplicate alles heescht . SPSS 13,0 Software war fir Student d'T-Test an eent-Manéier Analyse vun Varianz (ANOVA) an all Statistik analyséiert ginn. A P VerfÜgung Wäert 0,05 war als statistesch relevant an all Fäll. VerfÜgung

Resultater VerfÜgung

G503-mediated inhibition op Prolifératioun ass déi mächtegst zu SGC7901 Zellen ënnert de 11 Zell Linnen iwwerpréift VerfÜgung

Mir der MTT assay benotzt fir festzestellen, ob de anthraquinone Massa G503 ass cytotoxic an de folgende Zell Linnen: zwee normal Zell Linnen (Human umbilical verfeelt endothelial Zellen (HUVECs) an Chang Liewer Zellen an néng entholl Zell Linnen (Hone -1, CNE-2, 5-8F, HepG2, B7402, RB, PC3, A549 an SGC7901). waren All Zellen mat 0 incubated, 2,5, 5, 10, 20 oder 40 μmol /L G503 fir 48 h. Zell viabilities mat der MTT assay als uginn, an d'IC ​​ 50 Wäert fir SGC7901 Zellen sech gemooss gouf de niddregsten hierkommen d'IC ​​ 50 Wäerter fir déi normal Zell Linnen, HUVEC an Chang Liewer Zellen, waren däitlech méi grouss wéi SGC7901 ( Table 1). VerfÜgung

G503 induces apoptosis zu SGC7901 an AGS gastric Kriibs Zellen VerfÜgung

Tatsaach, datt de SGC7901 Zell Linn déi sensibel fir G503 vun der eelef Zell Linnen war iwwerpréift (Table 1), mir weider dës Zell Linn getrennt ze propagéieren. SGC7901 Zellen sech Kierchefënster mat Hoechst 33342 fir festzestellen, ob de inhibitory Effekt war bis apoptosis dinn. D'Resultater weisen, eng Erhéijung vun der Zuel vun Zellen nuklear ageet an chromatin Kondensatioun mat waarden G503 Konzentratioune (Dorënner 1A) ginn. Zousätzlech, z'ënnersichen, ob G503 sech apoptosis an anere gastric Kriibs Zell Linnen, AGS gastric Kriibs Zellen och iwwerpréift induces. Annexin V /PI staining war d'Auswierkunge vun G503 zu SGC7901 an AGS gastric Kriibs Zellen vun Flux cytometry ze analyséieren agestallt. Fir dës Experimenter, 25 μmol /L colchicine war als positive Kontroll benotzt. No Behandlung mat 0 μmol /L, 2,5 μmol /L, 5 μmol /L, 10 μmol /L, 20 μmol /L a 40 μmol /L G503 an 25 μmol /L colchicines fir 24 h, huet de Prozentsaz vun apoptotic SGC7901 Zellen 5,625% ± 0,50%, 6,19% ± 0,13%, 10,25% ± 0,47%, 16,99% ± 1,73%, 25,72% ± 0,55%, 31,03 ± 1,03% an 20,69% ± 1,91%, respektiv (Dorënner 1B); de Prozentsaz vun apoptotic AGS Zellen huet 15,37% ± 2,36%, 19.30% ± 4,45%, 22,72% ± 4,89%, 24,93% ± 4,76%, 30,44% ± 9,42%, 47,51% ± 18,29% an 31,49% ± 2,45%, respektiv (Well 1c). Der Detektioun vun apoptosis zu AGS Zellen an der uewen Resultater uginn dass G503 gastric Kriibs Zell apoptosis an enger Portioun-ofhängeg Manéier induces. VerfÜgung

G503 apoptosis zu engem caspase-ofhängeg Manéier VerfÜgung

induces weider ze ermëttelen de Mechanismus vun G503-entschlof apoptosis zu gastric Kriibs Zellen Équipe, studéiert mir SGC7901 Zellen. Caspase-3 ass eng effector caspase datt Keimzell gitt kann an direkt mat senge Realitéiten zesummekomm, doduerch Spur Zell apoptosis [24]. Caspse-9 ass d'gemaach hunn caspase datt caspse-3 [25] activéiert. D'Zellen sech mat verschiddenen G503 Konzentratioune fir uginn Mol behandelt a gesammelt caspase-3 an -9 vun Western blotting ze bewäerten. Den Ausdrock vun der caspase-3 Virleefer Verréngerung vun engem dose- an Zäit-ofhängeg Manéier hierkommen caspase-3 Rëss Fragmenter vun engem dose- an Zäit-ofhängeg Moud fräi (Dorënner 2A, B). Den Ausdrock vun der caspase-9 Virleefer ofgeholl och an der Rëss Fragmenter fräi no der Zellen fir 24 h (Dorënner 2C) mat 20 μmol /L G503 behandelt goufen. Dës Auswierkunge vun der Pan-caspase inhibitor Z-VAD-FMK (Dorënner 2C, D) ofgeschaaft. Konsequent mat der Aktivatioun vun caspase-9 an -3 entschlof de apoptotic Zell Tariffer entschlof vun 20 μmol /L G503 zu SGC7901 Zellen sech no pretreatment mat Z-VAD-FMK (Dorënner 2E) Ofstand reduzéiert. Dës Donnéeë ugeholl datt G503 apoptosis zu SGC7901 Zellen zu engem caspase-ofhängeg Manéier induces. VerfÜgung

G503-entschlof apoptosis ass net ofhängeg op caspase-8 VerfÜgung

Fir ze kucken, ob den Doud receptor-mediated apoptotic Passerelle vun G503 entschlof ass, mir studéiert caspase-8, déi gemaach hunn caspase vun den Doud receptor-mediated apoptotic Passerelle [26]. SGC7901 Zellen sech fir uginn mol mat verschiddene Dosis vun G503 behandelt. D'Zellen sech gesammelt caspase-8 vun Western blotting ze moossen. D'Resultater uginn dass caspase-8 Virleefer ofgeholl an eenalecn caspase-8 zu engem time- fräi a Kribbelen-ofhängeg Manéier (Dorënner 3A, B). D'Zellen sech fir 30 min mat 20 μmol /L caspase-8 inhibitor Z-IETD-FMK Pre-behandelt an duerno mat 20μmol /L G503 fir 24 h behandelt. D'caspase-8 proform vun Zellen fräi mat der caspase-8 inhibitor an G503-Co behandelt Verglach mat mat G503 behandelt Zellen nëmmen. Allerdéngs, d'caspase-9 proform, eenalecn caspase-9 an der caspase-3 waren op ähnlechen Niveau vun Zellen behandelt mat der caspase-8 inhibitor an G503 oder G503 eleng (Dorënner 3C) haten. Konsequent mat Dorënner 3C, G503-entschlof apoptotic Zell Tauxe SGC7901 Zellen sech net duerch pretreatment mat Z-IETD-FMK (Dorënner 3D) reduzéiert. Dës Donnéeë ugeholl, datt trotz der Aktivatioun vun G503, caspase-8 ass net an pro-apoptotic Aktivitéit vun G503 Équipe. VerfÜgung

G503-entschlof apoptosis ass ofhängeg op caspase-9 VerfÜgung

Caspase-9, - d'gemaach hunn caspase vun der Kënschtlech apoptotic Passerelle, kann duerch kombinéiert mat cytochrome c VerfÜgung (Cyto c VerfÜgung) an apoptotic protease-activating Faktor-1 (Apaf-1) [25] ageschalt sinn [26]. Fir weider z'ënnersichen, ob de Kënschtlech Passerelle an G503-entschlof apoptosis Équipe ass, den Aktivéierungscode vu caspase-9 huet op verschiddene Konzentratioune an mol no G503 Behandlung iwwerpréift. Ausserdeem war de apoptotic Zell Taux och op Co-Behandlung mat G503 an caspase-9 inhibitor Z-LEHD-FMK gemooss. D'Resultater uginn, datt d'caspase-9 proform rofgaang ass an de Rëss Fragmenter vun engem time- a Kribbelen-ofhängeg Manéier fräi (Dorënner 4A, B). Next, goufen d'Zellen mat 20 μmol /L Z-LEHD-FMK fir 24 h 30 min an Co-incubated mat 20 μmol /L G503 Pre-behandelt. Fir d'apoptotic Zellen ofgedonkelt, goufen d'Zellen Kierchefënster mat AnnexinV /PI an duerch onkontrolléiert cytometry analyséiert. D'Resultater uginn, datt d'apoptotic Zell Quote ofgeholl wou d'Zellen sech mat Z-LEHD-FMK an G503 (Dorënner 4C) Co-behandelt. Geholl zesummen, uginn dës Donnéeën, déi G503-entschlof SGC7901 Zell apoptosis op caspase-9 Aktivéierung ofhängeg ass. VerfÜgung

G503 apoptosis via de Kënschtlech apoptotic Passerelle induces VerfÜgung

Et ass bekannt, datt d'Kënschtlech Passerelle ass eng wichteg apoptotic Passerelle. Ze ermëttelen, ob G503 apoptosis via de Kënschtlech Passerelle induces, mir iwwerpréift apoptosis-Zesummenhang Proteinen, déi Kënschtlech Membran Potential (MMP), an d'Ouverture vun mPTP der Aféierungs- vun der Kënschtlech apoptotic Passerelle ze confirméieren. Solde vun G503 Behandlung, Kënschtlech fluorescence erofgaangen am Verglach mat Kontroll Grupp (Dorënner 5A), doduerch suggeréiert, dass d'mPTP war vun G503 opgemaach. Ausserdem war an der Kontroll Grupp observéiert wéi zu Dorënner 5B, bedeitend rout /gréng fluorescence Intensitéit gewisen. Allerdéngs, an der Behandlung mat 20 μmol /L G503, war d'rout /gréng fluorescence Intensitéit reduzéiert. Dëst Resultat ugeholl datt G503 der Kënschtlech Membran Potential vun SGC7901 Zellen Verloschter. Zousätzlech, total Cyto c VerfÜgung FAQ Niveauen net gëlt tëscht der Kontroll an Drogenofhängeger Grupp änneren gemaach; Ee, Cyto c VerfÜgung war fir d'Zytoplasma aus der Mitochondrie (Dorënner 5C) relocalized. Bax an BCL-2 si wichteg Facteure zu der Regelung vun Kënschtlech Chaînen an der Verëffentlechung vun verschiddenen apoptosis-Zesummenhang Proteinen [27]. Dofir, studéiert Mir der Verdeelung vun Bax an BCL-2 zu verschiddenen bewosst compartments an net eng groussarteg Ännerung am Ganzen FAQ Niveau vun Bax an BCL-2 tëscht der Kontroll an Drogenofhängeger Grupp fest; Ee, gefördert G503 der br vun Bax aus dem Zytoplasma zu der Mitochondrie souwéi de br vun BCL-2 vun der Mitochondrie zu der Zytoplasma (Dorënner 5D). Geholl zesummen, induces G503 apoptosis zu SGC7901 Zellen via de Kënschtlech Passerelle. VerfÜgung

G503 induces apoptosis zu SGC7901 Zellen an Deel duerch caspase-4 Aktivéierung VerfÜgung

Caspase-4 kann direkt aktivéieren caspase-9 awer net duerch de Kënschtlech Passerelle [28] - [29]. Ze ermëttelen, ob caspase-4 ass vun G503 ageschalt an ob ageschalt caspase-4 activéiert caspase-9, iwwerpréift mir de Rëss Fragmenter vun caspase-4 a -9. D'Resultater uginn, datt d'caspase-4 Rëss ofgesprengt mat G503 bedeitend an Zellen fräi behandelt Verglach mat der Kontroll Grupp (Dorënner 6A). Behandlung mat der caspase-4 inhibitor Z-LEVD-FMK fräi caspase-9 proform, déi net zu der G503 Behandlung Grupp (Dorënner 6B) fonnt gouf. Dës Resultater uginn dass G503 SGC7901 gastric Kriibs Zell apoptosis an Deel duerch d'Aktivatioun vun caspase-4 induces. VerfÜgung

Diskussioun VerfÜgung

Et ass confirméiert datt p VerfÜgung -quinone moiety vun quinone -containing molekulare spillt eng ganz wichteg Roll an Anti-Kriibs Potential [30]. Perchellet et al. och fonnt dass J4 p-quinone, o-quinone J1 an unsubstituted Modell J7 p-quinone déi L1210 entholl Zell Nuetsvolen ënnert aacht awer Wierderbuch an opgefouert an hir virleefeg Etude [31] reduzéiert. Ze verstoen, d'Relatioun tëscht der Anti-Kriibs Potential vun altersolanol A a Struktur-Aktivitéit, Teiten et al. den Effet vun altersolanol A évaluéiert an hir wëssenschaftlech anthracene Projet: tetraacetylaltersolanol A, tetrahydroaltersolanol B an ampelanol. Si fonnt dass nëmmen altersolanol A a seng acetylated kuckt virdrun tetraacetylaltersolanol A presentéieren engem cytotoxic Effekt op K562 Zellen, am Ufank Projet mat Reduktioun vun eent vun de Saachen Gruppen, wéi tetrahydroaltersolanol B an ampelanol, hun keen Effekt [32]. D' p VerfÜgung -quinone Struktur vun G503 (Dorënner S1) kann och zu Kriibs Zell apoptosis bedeelegt ginn, an an den nächsten Fuerschung gëtt mir d'G503 a sengem Projet analyséieren der virleefeg Struktur-Aktivitéit Relatioun ze identifizéieren. An dëser Etude, fanne mir, datt d'gastric Kriibs Zell Linn SGC7901 déi G503-senisitive Kriibs Zell Linn ass eng Zell Nuetsvolen assay an néng Kriibs Zell Versen an zwee normal Zell Linnen iwwerpréift benotzen. G503 induces SGC7901 via apoptosis gastric Kriibs Zell Doud vun enger Portioun-ofhängeg täteg. Aner gastric Kriibs Zellen AGS ass och iwwerpréift, an ass empfindlech ze G503-entschlof apoptosis wéi gutt. Als Resultat, 20 μmol /L G503 ass d'beschtméiglecher Konzentratioun datt schwéieren apoptosis induces. VerfÜgung

De Mënsch Nepgen encodes mannst 10 Zorte vun caspase homologs. Déi folgend caspase homologs Bedeelegung apoptosis: Caspase-2, -3, -8, -9 a -10 [33]. Obwuel caspases eng Roll an apoptosis Leeschtung, ginn et verschidden caspase onofhängeg Weeër existéieren. Zum Beispill, an der Präsenz vun caspase inhibitors, entholl necrosis Faktor (TNF) induces Zell necrosis, déi de Charakter vun apoptosis an necrosis leie [34] - [36]. Ausserdeem, ass apoptosis-Pinguin Faktor (AIF) eng DNA Aktivitéit dass direkt DNA degrades. Wann der Kënschtlech Membran Potential verännert ass, ass AIF zu der Zytoplasma aus der Mitochondrie Hit an ass duerch seng Interaktioun mat cyclophilinA ageschalt [37] - [38]. Endo G kann och DNA direkt zu engem caspase-onofhängeg Manéier dauert [39]. VerfÜgung

An eiser Etude, G503 aussetzt activéiert caspase-3, -8 an -9 zu engem dose- an Zäit-ofhängeg Manéier (Dorënner 2A, B; 3A, B; 4A, B). Ass G503-entschlof apoptosis ofhängeg op caspases? Wann Zellen sech Co-behandelt mat Z-VAD-FMK an G503, Z-VAD-FMK bremst caspase-9 an -3 Aktivéierung (Dorënner 2C, D), an d'Zuel vun apoptotic vun G503 entschlof Zellen ofgeholl (Dorënner 2E), datt G503-entschlof SGC7901 Zell apoptosis domat besot ass caspase-ofhängeg. Ze ënnerscheeden ob G503-entschlof apoptosis op caspase-8 ofhängeg ass, -9 oder zwee, goufen SGC7901 Zellen pretreated mat Z-IETD-FMK an Z-LEHD-FMK an dann Co-behandelt mat G503. D'Resultater weisen, datt Z-IETD-FMK do inhibit net caspase-9 an -3 Aktivéierung (Dorënner 3C) nach d'Zuel vun apoptotic Zellen vun G503 (Dorënner 3D) entschlof erfgoe geloss huet; Ee, Z-LEHD-FMK ofgeholl d'Zuel vun apoptotic Zellen (Dorënner 4C). Sou, apoptosis G503-entschlof SGC7901 Zell ass net ofhängeg op caspase-8 mä ass op caspase-9. VerfÜgung

D'Mitochondrie begräifen vun enger aler Membran, Membran Plaz an Matrixentgasung. Apoptosis-Zesummenhang Proteinen, wéi caspase proenzymes, Cyto c VerfÜgung an AIF existéieren an der Membran Plaz. Allerdéngs, wann an de baussenzege Kënschtlech Membran oder der permeability geformt Pore verännert ass, dës apoptosis-Zesummenhang Proteinen sinn op der Zytoplasma lassgelooss. Membere vun der BCL-2 Famill Kontroll der permeability vun de baussenzege Kënschtlech Membran, an kann an zwee Memberen opgedeelt ginn, datt apoptosis (wéi Bax an BAK) Promotioun oder apoptosis (wéi BCL-2 an BCL-XL) inhibit. D'Pro-apoptotic Memberen Promotioun der Verëffentlechung vun apoptosis-Zesummenhang Proteinen, wéi Cyto c VerfÜgung, aus der Mitochondrie hierkommen, déi anti-apoptotic Memberen eng entgéintgesate Wierkung hunn [40]. Bax gëtt haaptsächlech vun der Zytoplasma hierkommen BCL-2 mat hydrophobic Gruppen bei der C-Uschloss vun der Bio-Membran senger Zell kombinéiert [41]. Bax Struktur ass während externen Stress geännert, sou datt et mat der aler Kënschtlech Membran kombinéiert tospontaneously enger Galerie vun homologous oligomerization Form. Dëst Aktioun induces der Verëffentlechung vun apoptosis-Zesummenhang Proteinen [42] oder der Opstellung vun der Mitochondrie Permeability Transitioun Pore (mPTP), déi op de baussenzege Kënschtlech Membran an adenine Nukleotid translocator (ANT) vun Volt-ofhängeg anion Kanal (VDAC) besteet op den zentrale Membran [43]. Bax openee nëmme mat VDAC oppener pore ze schafen wou Bax Konzentratioune niddreg sinn. Am Géigesaz, openee Bax zäitgläich mat VDAC an ANT wou Konzentratioune Bax sinn héich de Pore am bannenzegen a baussenzege Membran opzemaachen. Dëst Aktioun verklengert sech den zentrale Membran Potential, hëlt d'osmotic Drock vun der Kënschtlech Matrixentgasung, ënnerstëtzt zentrale Membran Reservéiert an erhéigt de osmotic Drock vun de baussenzege Membran, domat d'Verëffentlechung vun apoptosis-Zesummenhang Spur Proteinen [26], [44] - [46 ]. Eng wichteg Etapp an der Kënschtlech apoptotic Passerelle ass d'Verëffentlechung vun Cyto c VerfÜgung [47] - [49]. Cyto c VerfÜgung combinéiert mat Apaf-1 an der caspase-9 proform der apoptosome ze schafen. Apaf-1 kritesch seng oligomerization Domän, an der N-Uschloss Caspase Aktivéierung an Rekrutement Beräicher (WEISEN) kombinéiert mat der caspase-9 proform WEISEN. Sou, caspase-9 ausgeléist, an d'Noutbrems caspase-9 cleaves afgerappt caspases, wéi caspse-3 an -7. D'effector caspases cleave dér hir entspriechend heescht de Législateur Zell apoptosis [47], [49] zu induce -. [50] VerfÜgung

An dëser Etude, G503 erhéigt den Undeel vun Bax /BCL-2 op der Kënschtlech Membran an erof de Bax /BCL-2 Verhältnis zu der Zytoplasma (Dorënner 5D). G503 ënnerstëtzt och mPTP Ouverture an d'Reduktioun vun der Kënschtlech Membran Potential (Dorënner 5A, B). Dunn, Cyto c VerfÜgung war vun der Mitochondrie zu der Zytoplasma (Dorënner 5C) transferéiert. Zousätzlech, ënnerstëtzt G503 den Transfert vun Bax zu der Mitochondrie aus dem Zytoplasma an BCL-2 fir d'Zytoplasma aus der Mitochondrie. Geklomm Bax an BCL-2 an der Mitochondrie Erhéijung der permeation vun der Kënschtlech baussegt Membran an förderen der Verëffentlechung vun Cyto c VerfÜgung reduzéiert. D'Regulatioun vun Bax /BCL-2 vun G503 kann observéiert ginn, well G503 engem klenge molekulare Massa ass. Et ass méiglech, datt G503 direkt enters Zellen a Kombinatioun mat Bax an BCL-2 hire Strukturen ze vergréisseren, doduerch dauernd Bax aus der Mitochondrie zu de bausseschte Kënschtlech Membran an BCL-2 release bindend. VerfÜgung

puer Etuden hu gewisen, datt Ros Generatioun ass wiesentlech fir anthraquinone-entschlof apoptosis zu Kriibs Zellen [51] - [52]. Ros ass eng mächtegst inducer vun oxydéiert blesséiert datt souwéi depurinated an huel Puer oxydéiert Resultat kann an aldehydic DNA [44], [46], [48], trotz dëser Verletzung kann Konter vun antioxidants equilibréiert ginn, deem Ausdrock si vun Maut mediated

Other Languages