Am virdrun eng Etude, déi mer e Roman thermosensitive Magnéitfeld Liwwerung System baséiert op liposomes entwéckelt. Dës Etude fir d'Effizienz vun deem System fir d'Co-Liwwerung vu béiden Drogen a Genen un d'selwecht Zell a sengen anti-entholl Auswierkungen op gastric Kriibs ze diskutéieren. Doxorubicin (DOX) an SATB1 shRNA Vecteure waren an der Co-Liwwerung System iwwerlaascht, an eng kënschtlech DOX thermosensitive release Aktivitéit, cibléiert Gentherapie Effizienz silencing, cibléiert bewosst Notzong, kënschtlech cytotoxicity, wéi och zu VIVO Aktivitéit anti-entholl huet alles. D'Resultater weisen, datt dëst Co-Liwwerung System wënschenswäert geziilte Liwwerung Efficacitéit, DOX thermosensitive release an SATB1 Gentherapie silencing haten. Desweideren, Schatzkummer de Co-Liwwerung vun DOX an SATB1 shRNA verstäerkter Aktivitéit gastric Kriibs Zell Wuesstem an eng kënschtlech ze inhibit an VIVO, am Verglach zu Single Liwwerung. Zu der Konklusioun, d'Verfilmung thermosensitive Magnéitfeld Alkohol- an der Gentherapie Co-Liwwerung System villverspriechend Applikatioun huet an kombinéiert Chimiotherapie an Gentherapie fir gastric Kriibs VerfÜgung
Fro:. Peng Z, Wang C, Fang E, Lu X, Wang G, Tong Q (2014) Co-Liwwerung vun Doxorubicin an SATB1 shRNA vun Thermosensitive Magnéitescht Cationic Liposomes fir Gastric Cancer Therapie. PLoS NËMMEN 9 (3): e92924. Doi: 10.1371 /journal.pone.0092924 VerfÜgung
Redakter: Elena A. Rozhkova, Argonne National schafft, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung
Arnaque: Dezember 4, 2013; Akzeptéiert: 26. Februar 2014; Publizéiert: 27. Mäerz 2014 VerfÜgung
Copyright: © 2014 Peng et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung
Funding:. Dës Etude gouf vun der National Natural Science Foundation of China (Nr 81172186) ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung
Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung
Gastric Kriibs ass de véiert gemeinsam Kriibs an der zweeter Virwaat Ursaach vum Kriibs Doud weltwäit [1]. Am Joer 2008 goufen et nach ronn 989.000 nei Fäll vu Kriibs gastric an 738.000 Doudesfäll vun der Welt, déi virun allem am Osten, South Priedegt, a Central Asien; Ost- a Mëtteleuropa; a Südamerika [2], [3]. An China, ass gastric Kriibs der drëtter gemeinsam Kriibs mat geschate 380.000 nei Fäll an engem héchste veruerteelt Taux ëm 26,3 pro 100.000 all Joer [4], [5]. Chirurgesch resection ass d'gemeinsam curative Optioun, mee et ass net gëeegent fir déi meescht vu Patienten, déi am spéide Etapp vun gastric Kriibs ginn. Aner Therapien wéi radiotherapy an Chimiotherapie weisen puer Efficacitéit, mee sinn oft versprach [4], [6]. Ausserdeem, och systemesch Administratioun vun Chimiotherapie bewierkt ongewollt Effekter [7], [8]. VerfÜgung
Duerch d'Entwécklung vun Drogenofhängeger Resistenz zu Chimiotherapie, traditionell Chimiotherapie huet Schatzkummer limitéiert anti-entholl Efficacitéit [9]. Dofir, huet Multi-Agent Co-Liwwerung System méi Opmierksamkeet kuerzem Reih, well et verschidden Zorte vun Agenten op der selwechter entholl Zellen liwwere kéint dat dann synergistic anti-entholl Effekter Collectioun. Zum Beispill, zwou verschidde chemesch Agenten kënnen kombinéiert ginn oder e chemesche Agent ka mat klenge interfering RNS (siRNA) géint eng oncogene kombinéiert ginn. Desweideren, kann d'cibléiert Liwwerung a kontrolléiert Drogenofhängeger release Anti-entholl Effekter revaloriséiert an ongewollt Effekter reduzéieren. VerfÜgung
Special OP-räiche bindend FAQ (SATB1) ass eng global chromatin Organisateur datt Gentherapie Ausdrock reguléieren an ass zu der Équipe modulation vun malignant biologescher Verhaalen vun Kriibs [10]. [13] - Aberrant Ausdrock vun SATB1 gouf zu gefördert Broscht Kriibs, haett Kriibs an lymphoma [11] gewisen. Eis virdrun Studie berichten iwwer propedeutësch SATB1 eng wichteg Roll an gastric Kriibs spillt, a vläicht eng onofhängeg hätt Bewaacher fir gastric Kriibs [14], [15] ginn. Suppressing den Ausdrock vun SATB1 vun siRNA oder plasmid Zeechesaatz spezifesch interfering kuerz harpin RNS (shRNA) géint SATB1 ugebuet hätt d'Verbreedung an Invasioun, inhibit an apoptosis vun entholl Zellen [16], [17] förderen. Dës Resultater hindeit, datt SATB1 e Potential therapeutesch Zil fir gastric Kriibs ass. VerfÜgung
Mir spekuléieren, datt d'Formatioun vum Gentherapie an Chimiotherapie vill therapeutesch Efficacitéit géint gastric Kriibs verbesseren kéint. An eiser leschter Etude, entwéckelt mer eng cibléiert thermosensitive Co-Liwwerung System baséiert op thermosensitive Magnéitfeld cationic liposomes (TSMCL). Vun calcein release assay, hu mir d'thermosensitive liposomal Formuléierung, optimiséiert an gemooss dann d'Magnéitfeld Eegeschaften a Gentherapie Liwwerung Effizienz vun TSMCL. An dëser Etude, iwwerlaascht mir doxorubicin an SATB1-shRNA Vecteure an dësem System fir d'Formatioun vun der Gentherapie an Chimiotherapie goen, a bewäert hir synergistic Effekt anti-entholl géint gastric Kriibs kënschtlech an VIVO. VerfÜgung
spontan VerfÜgung
während dësem Weekend, 1,2-Dipalmitoyl-SN-glycero-3-phosphocholine (DPPC), an 3β- [dräi (N ', N'-dimethylaminoethane) -carbamoyl] Cholesterol (DC-Chol) sech aus Avanti polare Fetten (USA) kaaft. Dimethyldioctadecylammonium bromide (DOAB) sech aus Fläch-Aldrich (USA) kritt. Magnéitescht Flesseggassystem géréiert 3O 4 war vun Galaxy Nanotech (China) Wierderbuch. FAM Fortgeschratten siRNA an plasmid pGFP-SATB1 shRNA sech duerch GenePharma (Shanghai, China) gëtt. Doxorubicin war vun Hisun Gitt mir eng Waassermeloun (Zhejiang China) kaaft. An et Bovine serum (FBS), Kultur Medien, penicillin /streptomycin (Wierm) an trypsin sech aus Invitrogen (Karlsbad CA, USA) geliwwert. SATB1 Kanéngchen monoclonal antibody war vun Epitomics (Abcam, UK). All anere Chemikalien sech vu kommerziellen analytesch Schouljoer an ouni weider Offäll benotzt. VerfÜgung Virbereedunge Co-Liwwerung System VerfÜgung Dës Co-Liwwerung System op thermosensitive cationic liposomes war baséiert, déi mat engem thermosensitive bereet waren cationic Formuléierung vun DPPC, DC-während dësem Weekend, DOAB a während dësem Weekend bei engem Dokter Verhältnis vun 80:5:5:10 an eiser virleefeg Experimenter optimiséiert. Liposomes (TSCL) waren déi dënn Film hydration Method bereet, gefollegt vun extrusion [18]. D'ammonium sulfate packt Method gouf benotzt DOX an TSCL (TSCL-DOX) zu Laaschten. Ze preparéieren Magnéitfeld liposomes (TSMCL), Magnéitfeld Flesseggassystem géréiert 3O 4 war den Kär a Co-nemmen dei ouni mat ammonium sulfate gefiermt an der liposomes benotzt. No der Opstellung vun dënn Film vun der Ronn ënnen flask, war ee Milliliter vun Ophiewe vun Eisen- a ammonium sulfate notéiert de Film ze hydrate, an duerno duerch de polycarbonate Filter- extruded a mat DOX (TSMCL-DOX) vun der ammonium sulfate packt Method iwwerlaascht . Endlech, goufen d'Produiten aus der gelies filtration bei 1.000 g fir 15 min centrifuged zu unencapsulated géréiert 3O ewechhuelen 4. VerfÜgung pGFP-SATB1-shRNA (shSATB1) Vecteure war mat verschiddene liposomes incubated zu serum fräi Medien bei Raumtemperatur fir 30 min, TSCL-shSATB1, TSCL-DOX-shSATB1, TSMCL-shSATB1 an TSMCL-DOX-shSATB1, respektiv ze preparéieren. VerfÜgung Entschlossenheet vun Zeta Potential, ëm Gréisst, an polydispersity VerfÜgung d'Moyenne ëm Gréisst an der polydispersity vun de Bierger-Gréisst Verdeelung vun de liposomes sech op 25 ° C duerch dynamesch liichtem Effekt mat engem ZetaPALS ëm vu Instrument (Brookhaven Instrumenter Corporation, USA) sech. D'Catherine Zeta Potential vun der liposomal dispersions war vun der electrophoretic Mobilitéit bei 25 ° C mat der selwechter Instrument gemooss. VerfÜgung Entschlossenheet vun Doxorubicin iwwerlaascht Effizienz VerfÜgung DOX Konzentratioun am liposomes vun engem fluorimeter gemooss gouf ( Perkin Elmer, USA) mat 485 nm excitation an 590 nm Emissioun Filtere mat enger dilution Serie vun gratis DOX wéi de Standard. DOX iwwerlaascht Effizienz berechent war baséiert op DOX Konzentratioun. VerfÜgung Ënnerscheed Scannen Calorimetry (DSC) VerfÜgung DSC war standing zu der thermosensitivity vun liposomes diskutéieren vun der Phas Transitioun Temperatur (TM) bestëmmend. TM war mat 20 mg /ml phospholipid mat engem Nanotechnike DSC (TA Instrumenter, USA) op enger Heizung Taux vun 20 ° C /h bewäert. VerfÜgung An kënschtlech thermosensitive DOX release assay VerfÜgung 20 μl DOX iwwerlaascht liposomes waren an 1 ml PBS an PBS mat 50% an et Bovine serum (FBS) incubated déi der an VIVO Ëmwelt getrennt an Eppendorf Krunn mimics. D'Echantillon waren am Waasser Bad bei 37 ° C an 42 ° C fir 1 h gehëtzt, bzw.. Dunn der fluorescence Intensitéit vun DOX gouf zu engem fluorimeter (Perkin Elmer, USA) mat 485 nm excitation an 590 nm Emissioun Filter- gemooss. Fir 100% release Echantillon waren fir 1 min an 1 ml PBS mat 1% Triton X-100 incubated. D'DOX release Prozentzuelen sech als gefollegt berechent: wou F s de fluorescence vun Echantillon der Heizung war, F 0 war den initial fluorescence vun Echantillon virun Heizung, an F 100 gouf de fluorescence vun Echantillon behandelt mat Triton X-100. VerfÜgung Zell Kultur VerfÜgung Mënscherechter gastric adenocarcinoma MKN-28 Zell Linn war vun KeyGEN Biotech (Nanjing, China) kaaft an cultured an héich-Zocker DMEM ergänzt mat 10% FBS, 100 u /mL penicillin an 100 μg /mL streptomycin zu engem humidified Atmosphär vu 5% CO 2 op 37 ° C. VerfÜgung an kënschtlech Zell transfection VerfÜgung MKN-28 Zellen sech géint am 12-gutt Placken op eng Dicht vu 4 × 10 Real-Zäit grouss polymerase Kette Reaktioun (RT-qPCR) VerfÜgung Total RNS ofgebaut gouf TRIzol Régent (Invitrogen, Karlsbad CA) folgenden Fabrikant d'Uweisunge vum MKN-28 Zellen benotzt, an cDNA war mat Wierderbuch PrimeScript RT Master Mëschung (Takara, Dalian). Hinnen alleguer war mat SYBR Premix Ex Taq II (Takara, Dalian) op engem StepOne Plus Real-Time Hinnen alleguer System (Obwuel Biosystems, USA) gesuergt. De Message vun der primers sech wéi follegt zesummen: SATB1 Sënn 5'-ACAGAACCCTGTGGGAGAAC-3 ", an antisense 5'-GCGTTGCTCTCCTGTTCATA-3" GADPH Sënn 5'-ACAGAACCCTGTGGGAGAAC-3 ", an antisense 5'-GCGTTGCTCTCCTGTTCATA-3". SATB1 mRNA Niveau war normalized fir datt vun GAPDH. VerfÜgung Western blot Analyse VerfÜgung MKN-28 Zellen sech am Ripa gefiermt gesammelt an lysed. D'supernatants sech no centrifugation bei 10.000 g fir 10 min gesammelt. Protein Konzentratioun vun der supernatant war mat engem BCA Protein Assay Kit alles. Dunn 40 μg vun Echantillon waren op enger 15% SDS-PAGE lafen an Proteinen sech ze PVDF Schläimhait transferéiert. d'Schläimhait sech fir 1 h zu 5% Nët-Fett Mëllech incubated Net-spezifesch bindend ze blockéieren an dann landen bei 4 ° C mat SATB1 oder β-actin antibody (1:500 dilution) incubated Next,. D'Schläimhait sech dann mat HRP-conjugated Geess anti Kanéngchen Secondaire antibody fir 30 min Komedie. Endlech, goufen d'Schläimhait mat enger verstäerkter chemiluminescence System visualized (ECL, Pierce) an X-Ray Film ausgesat. VerfÜgung An kënschtlech Evaluatioun vun bewosst Notzong VerfÜgung Fir d'intracellular Lag vun geliwwert DOX diskutéieren an pGFP-SATB1 shRNA an der verstäerkter Pénétratioun vun liposomes an der gastric Kriibs Zellen vum Magnéitfeld cibléiert, eng FAM Fortgeschratten siRNA (gréng fluorescence) benotzt gouf pGFP-SATB1 shRNA, an DOX vun selwer leie en em rout fluorescence ze kontrolléieren bewosst Notzong zu imitéiert . MKN-28 Zellen sech am 12-gutt zappen rakommen um 4 × 10 MTT assay VerfÜgung MKN-28 Zellen op enger Dicht vun 2 × 10 géint goufen cytometry Flow VerfÜgung Apoptosis war mat engem Annexin V-FITC Apoptosis Detektioun Kit fonnt (eBioscience, USA). MKN-28 Zellen sech am 12-gutt Placke rakommen a behandelt wéi uewe beschriwwen. No 24 h, goufen d'Zellen gesammelt, zweemol mat PBS gewäsch an zu 500 μl bindend gefiermt gespaart. Next sech d'Zellen duebel mat Annexin V-FITC an propidium Kaliumiodid (PI) geschriwwen. Zellen am fréie Phase vun apoptosis mat Annexin V-FITC Kierchefënster awer net mat PI Kierchefënster duerch onkontrolléiert cytometery laachen huet. VerfÜgung Xenograft Maus Modell VerfÜgung Five fir sechs Wochen al männlech Balb /c Sauna Mais sech vun der Center fir Déieren Experimenter vun Tongji Medical College gëtt. All Maus huet subcutaneously an der rietser Säit mat 5 × 10 iwwerleen Analyse VerfÜgung Data goufen als déi mengen ± normale deviation ausgedréckt behandelt (Fils). Statistesch Bedeitung tëscht verschiddene Gruppe war mat Student d'T-Test an eent-Faktor Analyse vun Varianz (ANOVA) Test bewäert. Fir d'Iwwerliewe Zäit vun den Déieren, goufen d'Kaplan-Meier Kéiren vun all Grupp gegrënnt a Platz Test Logbuch war standing Iwwerliewe Tarif ze vergläichen. p &Si besteet; 0,05 war statistesch relevant als VerfÜgung Characterization vun liposomes VerfÜgung Als zu Table 1 gewisen, war den Duerchmiesser vun TSCL 83,6 ± 5,7 nm, iwwerdeems déi vun TSCL. -DOX war bis 118,5 ± 7,9 nm fräi wéinst der encapsulation vun DOX. Mëttlerweil, huet den Duerchmiesser vun TSCL-shSATB1 an TSCL-DOX-shSATB1 geklomme ze 161,1 ± 11,8 nm an 238,1 ± 20,6 nm, respektiv, wéinst der Haftung an Fusioun vun plasmid DNA zu liposomes. Fir Magnéitfeld liposomes, goufen d'ëm Gréisste vun TSMCL, TSMCL-DOX, TSMCL-shSATB1 an TSMCL-DOX-shSATB1 135,0 ± 11,6 nm, 157,2 ± 14,3 nm, 221,3 ± 15,7 nm an 319,4 ± 20,1 nm, respektiv, vill méi grouss wéi déi vun TSCL, TSCL-DOX, TSCL-shSATB1 an TSCL-DOX-shSATB1 wéinst dem Réckzuch vum Magnéitfeld nanoparticles. Doriwwer eraus, huet sech d'Gréisst vun TSMCL-shSATB1 an TSMCL-DOX-shSATB1 vill méi grouss, dass vun TSMCL an TSMCL-DOX, bzw. (p &Si besteet; 0,05). All liposomes haten schmuel Gréisst Verdeelung well hir polydispersities kee sech méi wéi 0.3. VerfÜgung Zeta Potenzialer vun TSCL, TSCL-DOX, TSCL-shSATB1 an TSCL-DOX-shSATB1 goufen 52,0 ± 7.3 mV, 50,1 ± 7,7 mV, 31,3 ± 5.2 mV an 26,7 ± 4.5 mV, bzw.. No incubation mat pGFP-SATB1- shRNA, ofgeholl der Uewerfläch charges vill (p &Si besteet; 0,05), zu der electrostatic Interaktioun tëscht der cationic Fetten an plasmid DNA zoumaachen. Allerdéngs, Réckzuch vun Magnéitfeld nanoparticles net am Magnéitfeld liposomes zu engem groussen Verloscht vun Zeta Potential Resultat. VerfÜgung Fir DOX iwwerlaascht Effizienz, déi DOX encapsulating Taux war 89 ± 3% an 78 ± 8% (n = 3) fir TSCL-DOX an TSMCL-DOX, respektiv, a 85 war ± 7% an 73 ± 9% (n = 3) fir TSCL-DOX-shSATB1 an TSMCL-DOX-shSATB1, bzw.. Dës Donnéeë weisen, datt d 'Zesummespill tëschent liposomes an plasmid net zu DOX Auslafe Resultat gemaach. VerfÜgung D'thermosensitivity vun der liposomes VerfÜgung Ënnerscheed Scannen Calorimetry Leeschtung war d'Phase Transitioun Temperatur vun TSCL ze bestëmmen. Als zu Lalumi gewisen. 1, TSCL komponéiert vun DPPC, DC-während dësem Weekend, DOAB a während dësem Weekend bei engem Dokter Verhältnis vun 80:5:5:10 no engem TM vun 40.8 ° C mat engem relativ breede Iwwergank tëscht deenen d'Fusioun Transitioun Héichpunkt vun DPPC kann an DOAB . VerfÜgung an kënschtlech thermosensitive DOX release vun der liposomes VerfÜgung Als zu Lalumi gewisen. 2, DOX release Taux vun TSCL-DOX an TSMCL-DOX war nëmmen 12% an 16% nom incubation mat PBS bei 37 ° C, an huet zu 20% an 19% nom incubation mat 50% FBS, bzw.. Fir TSCL-DOX-shSATB1 an TSMCL-DOX-shSATB1, DOX release Taux war 12% an 15% nom incubation mat PBS bei 37 ° C, an huet zwee 16% no incubation mat 50% FBS beweist, dass d'Aktivitéiten vun plasmid Équipe kee groussen Effet op d'Stabilitéit vun liposomes (p > 0,05). VerfÜgung DOX release Taux vun TSCL-DOX an TSMCL-DOX war bei 42 ° C mat PBS zu 37% der incubation fräi, a sech zu 45% an 49% an der incubation mat 50% FBS, bzw.. Fir TSCL-DOX-shSATB1 an TSMCL-DOX-shSATB1, DOX release Taux war 35% an 43% nom incubation mat PBS an FBS bei 42 ° C, respektiv, souwuel bedeitend méi héich wéi dat bei 37 ° C (p &Si besteet; 0,05). Dës Resultater weisen, datt TSCL-DOX, TSMCL-DOX, TSCL-DOX-shSATB1 an TSMCL-DOX-shSATB1 hunn wënschenswäert thermosensitivity, a konnt fir hyperthermia benotzt ginn ausgeléist Kontroll release vun DOX. VerfÜgung Silencing vun SATB1 Ausdrock vun MKN-28 Zellen mat liposomes VerfÜgung transfected Next bewäert mir d'Effizienz vun der liposomes shSATB1 Vecteure an MNK-28 Zellen ze liwweren. Typesch fluorescence Biller vun Zellen transfected mat TSCL-shSATB1 an TSMCL-shSATB1 sech zu Lalumi gewisen. 3A. Flow cytometry Analyse gewisen, datt d'transfection Effizienz vun TSCL-shSATB1 nëmmen 15,4 ± 0,15% war. Allerdéngs, no der Demande vun Magnéitfeld Orientatioun, war d'transfection Effizienz vun TSMCL-shSATB1 34,3 ± 0,93%, vill méi héich wéi déi vun TSCL-shSATB1 (Figebam. 3B). VerfÜgung Fir erauszefannen, ob de geliwwert shSATB1 Vecteure silencing vun SATB1 Ausdrock vun MKN-28 Zellen Mediate konnt, standing mir grouss Hinnen alleguer a Western blot Analyse Real-Zäit. D'Resultater weisen, dass souwuel SATB1 mRNA an FAQ Niveau vun Zellen ofgeholl transfected mat TSCL-shSATB1 an TSMCL-shSATB1, am Verglach zu Kontroll Zellen. Ausserdeem, war TSMCL-shSATB1 mat der Hëllef vum Magnéitfeld méi mächtegst wéi TSCL-shSATB1 zu SATB1 Ausdrock vun MKN-28 Zellen (Figebam. 3C, D). VerfÜgung Magnéitescht geziilte kënschtlech bewosst Notzong VerfÜgung inhibit fir d'penetrations an d'Zellen tëscht Net-magnéitesch a magnéitesch liposomes mat der Applikatioun vum Magnéitfeld geziilte Orientatioun, souwéi d'intracellular Lag vun geliwwert DOX an shSATB1 vergläichen, eng FAM-Label siRNA wéi d'Luucht benotzt gouf. D'Feele vu gréngen fluorescence an mat Free siRNA behandelt Zellen uginn, datt se net an d'Zellen heemlech hätt (Donnéeën net gewisen). Mir gesinn, dass mat TSMCL-siRNA behandelt méi Zellen gréng fluorescence wéi Zellen behandelt mat TSCL-siRNA (Figebam. 4A) Schatzkummer. Ausserdem, mat TSMCL-DOX behandelt méi Zellen zougedréckt rout fluorescence wéi mat TSCL-DOX behandelt Zellen (Figebam. 4B). An Zellen mat TSMCL-DOX-siRNA behandelt, war héich fluorescence Intensitéit observéiert, an d'Zellen wossten rosa wéinst der wärd vu blo, rout a gréng Faarf (Figebam. 4C). Dës Observatioune hindeit datt TSMCL méi mächtegst ass zu liwweren siRNA an DOX an d'Zellen wéi TSCL, no der Demande vum Magnéitfeld. VerfÜgung Ausserdeem, mir iwwerpréift der intracellular Lag vun geliwwert DOX an siRNA. Red fluorescence war zu souwuel d'Kären an d'Zytoplasma observéiert, wat beweist, datt geliwwert DOX etabléiert war esouwuel an der Kären an der Zytoplasma. Am Géigesaz, wossten gréng fluorescence allem am Zytoplasma suggeréiert, dass d'siRNAs an der Zytoplasma geliwwert goufen (Figebam. 4D). D'wärd vun rout a gréng wossten am Zytoplasma giel, an déi geduecht vu blo a rout wossten Lavendel am Kären. Geholl zesummen, weg dës Donnéeën, déi souwuel TSCL an TSMCL an gastric Kriibs Zellen heemlech kann a liwweren hir Inhalter an de Zytoplasma (DOX an siRNA) an d'Kären (DOX). VerfÜgung An kënschtlech anti-entholl Effekter vun der VerfÜgung liposomes Mir Uschléi kënschtlech anti-entholl Effekter vun dëser Co-Liwwerung System vun cytotoxicity an apoptosis Aféierungs- Aktivitéit. D'cytotoxicity vun der liposomes war vun MTT assay évaluéieren. Fir d'Auswierkunge vun DOX an plasmid Konzentratioune op der cytotoxicity vun liposomes festzestellen, iwwerpréift mir liposomes iwwerlaascht mat verschiddenen Konzentratioune vun DOX a verschiddene Montanten vun SATB1 shRNA. Mat der Erhéijung vun DOX Konzentratioun, d'cytotoxicity vun der liposomes war fräi (Figebam. 5A). Allerdéngs huet de Zousätzlech vun SATB1 shRNA Konzentratioun net zu fräi cytotoxicity Resultat, an et waren nëmmen liicht Erhéijung vun cytotoxicity wann SATB1 shRNA Konzentratioun iwwer 4 μg war (Figebam. 5B). Sou benotzt mir 25 μM DOX a 4 μg SATB1 shRNA der cytotoxicity ënnert Free DOX, Free shRNA, TSCL, TSMCL, TSCL-DOX, TSMCL-DOX, TSCL-shSATB1, TSMCL-shSATB1, TSCL-DOX-shSATB1 an TSMCL- ze vergläichen DOX-shSATB1. VerfÜgung Als zu Lalumi gewisen. 5C, gratis shRNA, TSCL an TSMCL hu wéineg cytotoxicity. Zell Nuetsvolen war 40,3 ± 3,4%, 73,6 ± 3,5% an 51,3 ± 4.5% fir gratis DOX, TSCL-DOX an TSMCL-DOX, respektiv, suggeréiert datt cytotoxicity vun TSMCL-DOX war méi héich wéi TSCL-DOX, mä manner wéi gratis DOX . Zell Nuetsvolen war 79,2 ± 6,9% an 71,6 ± 4,7% fir TSCL-shSATB1 an TSMCL-shSATB1, respektiv, weist nach iwwerleen Bedeitung (p > 0,05). Fir Drogenofhängeger an der Gentherapie Co-Liwwerung, war Zell Nuetsvolen nëmmen 35,0 ± 3,2% an 22.3 ± 3,4% fir TSCL-DOX-shRNA an TSMCL-DOX-shRNA, respektiv, däitlech méi niddreg wéi déi vun Free DOX, TSCL-DOX, TSMCL- DOX an SATB1shRNA iwwerlaascht liposomes (p &Si besteet; 0,05). Zousätzlech, Zell Nuetsvolen vun TSMCL-DOX-shRNA war wesentlech méi déif wéi déi vun TSCL-DOX-shRNA (p &Si besteet; 0,05). Dës Resultater hindeit, datt e synergistic cytotoxicity Effet vum Co-liwweren DOX an SATB1 shRNA erreecht ass. Ausserdem, mat der Applikatioun vum Magnéitfeld cibléiert, eng weider gestäerkt cytotoxicity kritt kann. VerfÜgung Fir déi zousätzlech anti-entholl Mechanismus niewt cytotoxicity vun der Co-Liwwerung System festzestellen, iwwerpréift mir de apoptosis Taux vun MKN-28 Zellen behandelt mat Free DOX, TSCL-DOX, TSMCL-DOX, TSCL-shSATB1, TSMCL-shSATB1, TSCL-DOX-shSATB1 an TSMCL-DOX-shSATB1 duerch onkontrolléiert cytometry. Als zu Lalumi gewisen. 5D, war apoptosis Taux 22.3% vun Zellen mat Free DOX behandelt, 8,9% vun Zellen mat TSCL-DOX behandelt huet, mä mat TSMCL-DOX a magnéitesche behandelt an Zellen zu 13,4% geklommen. Den Zerfall, war apoptosis Taux 9,4% vun Zellen mat TSCL-shSATB1 behandelt, mä fräi zu 17,4% vun Zellen mat TSMCL-shSATB1 a magnéitesche behandelt. Am Géigesaz, war apoptosis Taux 27,7% vun Zellen mat TSCL-DOX-shSATB1 behandelt, méi héich wéi déi vun der TSCL behandelt Zellen mat DOX oder shSATB1 eleng iwwerlaascht. D'apoptosis Taux war 32,4% vun Zellen behandelt mat TSMCL-DOX-shSATB1, déi héchste ënnert all Gruppen. Dës Resultater weisen, dass de Ko-liwweren DOX an SATB1 shRNA féiert zu kombinéiert Auswierkunge vun apoptosis kopéiert. An engem Wuert, dat Co-Liwwerung System geet staark anti-entholl Effekter kënschtlech. VerfÜgung An VIVO anti-entholl Aktivitéit vun der liposomes VerfÜgung Fir d'zu VIVO anti-entholl Aktivitéit ze bestëmmen vun der Co-Liwwerung System, gegrënnt mir MKN-28 murine xenograft Modeller a heijen Free DOX, TSMCL-DOX, TSCML-shSATB1, TSCL-DOX-shSATB1 oder TSMCL-DOX-shSATB1 an der Mais duerch Schwäif äusseren. D'Behandlung war eemol all 3 Deeg kritt, an der erhéijen sech Leschten (Figebam. 6A). Op den Dag 15, war entholl Volumen 0,44 ± 0,05 cm Ausserdem, wéi zu Lalumi gewisen. 6 (C), d'Steiren Zäit fir entholl Volume 2 cm ze erreechen Trotz rezent Entwécklung an Agrëff, radiotherapy an Zil- Therapie, Chimiotherapie ass ëmmer ee vun de wichtege Approche fir gastric Kriibs Therapie. Allerdéngs, therapeutesch Auswierkunge vun Chimiotherapie sinn oft onzefridden an hätt net vill Iwwregens hätt vun Kriibs Patienten [19] verbesseren. One Haaptgrond ass de tumorigenesis an Werdegang vun gastric Kriibs enger Rei vu verschiddene Mechanisme handelt; Zentralstaat anti entholl Mechanismus vun traditionell Chimiotherapie huet hir therapeutesch Effekter limitéiert, also d'Kombinatioun vun Chimiotherapie mat Gentherapie kann anti-entholl Effekter verbesseren. Weideren Hindernis vun Chimiotherapie ass datt systemesch Drogenofhängeger Administratioun féiert zu limitéiert Drogenofhängeger Konzentratioun vun entholl Siten iwwerdeems dauernd vill ongewollt Effekter [8]. De Schlëssel dës Problemer ze léisen berout op nei Manéieren vun Drogenofhängeger Liwwerung, also, Multi-Agenten geziilte Entwécklungslänner System Iech dat d'entholl Site mat kontrolléiert fräiginn direkt leede kann kann dëse Problem iwwerwonnen an revaloriséiert therapeutesch Effekter [20] - [25] . VerfÜgung Ënnert verschidde Systemer Drogenofhängeger Liwwerung, liposomes sinn villverspriechendst fir gutt biocompatibilities déi wéineg oder keen antigenic, allergescher, an gëfteg Reaktioune féieren, an deen einfach biodegradation. Als souwuel Alkohol- an der Gentherapie wwerreeche, liposomes net nëmmen kann de Provider aus well Effekter vun der nemmen dei ouni Drogenofhängeger schützen, mee och d'bis Inhalter vun virzäitegen inactivation vun der gestallt mëttelfristeg [26] verhënneren. Ausserdeem, ass liposome eng potenziell geziilte Drogenofhängeger Liwwerung System, ob et duerch verstäerkte permeability an Datespäicherung (EPR) Effet (Popup- geziilte), oder duerch Magnéitfeld Orientatioun an immun Verbindung (Aktiv geziilte) [27] erreecht ass. Zousätzlech, besëtzen puer liposomes ausgeléist Drogenofhängeger release Fonctiounen, wéi Thermo Sensibilitéit, pH Empfindlechkeet a Schleck erëm Empfindlechkeet kontrolléiert haten. VerfÜgung Kuerzem haten mir e Roman Magnéitfeld geziilte thermosensitive Alkohol- an der Gentherapie Co-Liwwerung System (TSMCL) entwéckelt. Baséierend op engem electroneutral thermosensitive Formuléierung (DPPC:Cholesterol = 80:20), hu mir verschidde cationic Komponente an optimiséiert der thermosensitivity vun liposomes vun calcein release assay notéiert. D'Resultat huet uginn, datt mir eng wënschenswäert thermosensitivity vun z'ersetzen 10 mol Deeler während dësem Weekend vum 5. mol Deeler DC-während dësem Weekend a 5 mol Deeler DOAB (DPPC:DC-Cholesterol:DOAB:Cholesterol = 80:5:5:10) kritt hätt, an calcein release vun der liposomes géif bei 37 ° C méi niddreg sinn awer bedeitend méi héich bei 42 ° C an dëser Formuléierung. Magnéitescht Flesseggassystem géréiert 3O 4 hu wéi de Kär benotzt ginn a funktionéiert wéi Magnéitfeld gezielt an Heizung Quell vun TSMCL Next,. Vibrating Sample besteet (VSM) Miessung hat uginn, datt magnéitesch Flesseggassystem géréiert 3O 4 haten superparamagnetic ginn, also TSMCL hätt gutt Magnéitfeld geziilte Effekter. Mëttlerweil no der Zäit-ofhängeg Heizung Bou gewisen, datt béid Magnéitfeld Flesseggassystem géréiert 3O 4 an TSMCL konnt aus 25 ° C bis 42 ° C an 20 min gehëtzt gin. Mat der Hëllef vun Magnéitescht Flesseggassystem géréiert 3O 4, souwuel Magnéitfeld gezielt an Temperatur ausgeléist Drogenofhängeger release vun TSMCL realiséiert ginn hätt. Endlech, souwuel TSCL an TSMCL haten typesch liposomal morphologies a gutt distributions ënner Tem Schatzkummer. Baséierend op de Succès Bau vun TSMCL, zu dëser Etude iwwerlaascht mir DOX an SATB1 shRNA Vecteure an TSMCL zu TSMCL-DOX-shSATB1 a bewäert der anti-entholl Effekter géint gastric Kriibs Zellen kënschtlech an VIVO maachen. VerfÜgung DOX ass eng allgemeng benotzt Alkohol- an Chimiotherapie mat héije Effizienz entholl Zell Prolifératioun ze inhibit an entholl Zell apoptosis induce, mä seng therapeutesch Effekter sinn limitéiert wéinst schwéieren cardiotoxicity an myelosuppression wann systemesch installéiert [28]. Obwuel DOX liposomes deelweis d'Situatioun verbessert hunn, limites de Mangel vun geziilte Liwwerung nach hir beluecht [29]. SATB1 ass eng global chromatin Organisateur datt den Ausdrock vun ERRB2, MMP2, ABL1 an E-cadherin ze handelen, wéi e Schlëssel regulator vun Kriibs Entwécklung direkt reguléieren [30]. [13] - Overexpression vun SATB1 zu verschiddenen erhéijen huet mat malignant biologescher Verhaalen wéi Invasioun, Prolifératioun an Metastasen [10] assoziéiert gouf. Silencing SATB1 Ausdrock duerch kleng interfering RNS (siRNA) oder plasmid kuerz harpin RNS (shRNA) Zeechesaatz konnt inhibit, d'Prolifératioun, Iwwerfall a Metastasen, an apoptosis vun verschiddenen entholl Zellen induce [16], [17]. Dofir, gëtt SATB1 e Potential Zil fir Kriibs Therapie [30]. Allerdéngs sinn adäquat Liwwerung vectors fir siRNA oder shRNA wichteg fir SATB1 Kriibs Gentherapie cibléiert. VerfÜgung An dëser Etude, mat TSMCL-DOX-shSATB1 System, souwuel DOX an SATB1 shRNA Vecteure kéint zu entholl Site ënnert Magnéitfeld opgewäert ginn respektiv Orientatioun, an DOX gouf zu engem hyperthermia ausgeléist Manéier lassgelooss. Hyperthermia ausgeléist Fräiloossung ass ofhängeg op thermosensitive liposomes déi virun allem vun Dipalmitoyphosphocholine komponéiert sinn (DPPC) deen engem gelies ze flësseg Kristallen Phase Transitioun (TM) awer, datt zu klenge Waasser-soluble Molekülle bei 41 ° C héich leaky gëtt [31]. Liposomes komponéiert vu verschiddene DPPC an Fetten hunn z'ënnerscheedde TM an thermosensitivity [32]. DSC Analyse gewisen, datt d'TM vun eiser Liwwerung System gouf 40,8 ° C, an DOX release assay uginn, dass et bei 37 ° C a lues huet iwwerdeems DOX Hit war wann d'Temperature bis 42 ° C opgewuess.
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
Detailléiert Kaart vum mënschlechen Zongmikrobiom
Mouthwash beaflosst d'Auswierkunge vun der Übung
Fuerschung kuckt op Aerobiome,
Mathematesche Modell weist de Risiko vun der SARS-CoV-2 Infektioun no fecaler Mikrobiota Transplantatioun op
Oral Hygiène a Gravitéit vum COVID-19-d'Verbindung
Probiotika kënnen hëllefen Ënnerernährung an den nächsten zwee Joerzéngten ze bekämpfen,
Wëssenschaftler entwéckelen eng Approche fir géint Darmentzündung ze vaccinéieren
Inflammatoresch Darmkrankheet (IBD) ass e Regenschirmbegrëff dee vill Stéierunge beschreift déi chronesch Entzündung vum Verdauungstrakt involvéieren, dorënner ulzerativ Kolitis a Crohns Krankheet. Dë
Darmmikrobiom an IBD - d'Verbindung vläicht an der Diät seet Studie
Eng nei Studie huet schlussendlech Beweiser gewisen datt entzündlech Darmkrankheet oder IBD intim mat dem Darmmikrobielle Ëmfeld verbonnen ass, wat mat der verschriwwener Ernärung geännert ka ginn. De
Grouss Studie fënnt datt d'SARS-CoV-2 viral Last déi niddregst bei Kanner ass
Eng geduecht provozéierend nei Studie vu Fuerscher an Holland bestätegt dHypothese datt fir schwéier akut Atmungssyndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) Infektioun, méi héije Alter ass mat verstäerkte vira