Stomach Health > Mo. Gesondheet >  > Gastric Cancer > Gastric Cancer

PLOS NËMMEN: Calpain /SHP-1 Zesummespill vun Honokiol Dampening Peritoneal Weiderleede vun Gastric Cancer am Nu /Nu Mice

Wat VerfÜgung

Background VerfÜgung

Honokiol, eng kleng-molekulare Gewiicht natierlech Produit, huet virdrun erwähnt ginn apoptosis ze aktivéieren an gastric tumorigenesis inhibit. Ob honokiol der angiogenesis an Metastasen vun gastric Kriibs Zellen bremst bleift onbekannt. VerfÜgung

Methodik /Principal effektiv VerfÜgung

Mir getest d'Auswierkunge vun honokiol op angiogenic Aktivitéit an peritoneal Publikatioun mat zu VIVO, ex VIVO VerfÜgung a kënschtlech VerfÜgung assay Systemer. Der sécher Äntwerte vun mënschlech gastric Kriibs Zellen, Mënsch umbilical wiere endothelial Zellen (HUVECs), an isoléiert erhéijen goufen erwëscht an analyséiert. An engem xenograft Modell gastric entholl Maus, inhibited honokiol bedeitend der peritoneal Weiderleede vun PET /CT Technik fonnt. Honokiol attenuated och effektiv déi vun Chick chorioallantoic Membran assay fonnt angiogenesis, Maus matrigel Plug assay, Grenzwäerter aortic Ring endothelial Zell sprouting assay, an endothelial Zell Rouer Opstellung assay. Ausserdeem, honokiol effektiv gestäerkt Signal Better gëtt reduzéiert a activator vun Transkriptiouns (mat Hëllef-3) dephosphorylation an inhibited Hëllef-3 DNA bindend Aktivitéit zu Mënsch gastric Kriibs Zellen an HUVECs, déi mat der up-Regulatioun vun der Aktivitéit an FAQ Ausdrock vun Src homology soll war 2 (SH2) -containing tyrosine phosphatase-1 (SHP-1). Calpain-II inhibitor an siRNA transfection réckgängeg bedeitend der honokiol-entschlof SHP-1 Aktivitéit. D'ofgeholl Hëllef-3 phosphorylation a fräi SHP-1 Ausdrock sech och an isoléiert peritoneal metastatic erhéijen gewisen. Honokiol war och kapabel VEGF Generatioun inhibiting, déi vun SHP-1 siRNA transfection réckgängeg gemaach ginn hätt. VerfÜgung

Konklusiounen /Grousses VerfÜgung

Honokiol Erhéijunge Ausdrock an Aktivitéit vun SPH-1, dass weider STAT3 Passerelle deactivates. Dës Conclusiounen proposéieren och, datt honokiol ass eng Verfilmung a mächtegst inhibitor vun angiogenesis an peritoneal Weiderleede vun gastric Kriibs Zellen, eng Ënnerstëtzung fir d'Applikatioun Potential vun honokiol zu gastric Kriibs Therapie VerfÜgung

Fro:. Liu néirens, Wang KB, Lan KH, Lee WJ, Pan HC, Wu SM, et al. (2012) Calpain /SHP-1 Zesummespill vun Honokiol Dampening Peritoneal Weiderleede vun Gastric Cancer an Nu /Nu VerfÜgung Mais. PLoS NËMMEN 7 (8): e43711. Doi: 10.1371 /journal.pone.0043711 VerfÜgung

Redakter: Henrik Einwaechter, Klinikum rechts der Isar der tu München, Däitschland VerfÜgung

Arnaque: 17. Januar 2012; Akzeptéiert: 24 Juli, 2012; Publizéiert: 24. August 2012 zu

Copyright: © Liu et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung

Funding:. Dës Aarbecht war déi vun der Recherche Stipendien aus Taichung Veterans Generalsekretär Klinik, Taiwan (TCVGH-997314C, TCVGH-1007313C) an der National Science Conseil vun Taiwan (NSC99-2320-B-005-003-MY3) ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung

Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

D'Majoritéit vun de Patienten (~60%) mat gastric Kriibs si mat spéiden Etapp Krankheet diagnostizéiert. Gastric Kriibs ass déi zweet Équipe gemeinsam Ursaach vun global Kriibs veruerteelt an entwéckelte Länner an metastatic Krankheet op der Zäit vun Diagnos geet [1]. Befënnt a Kombinatioun Chimioen fir gastric Kriibs goufen no Terrain [2], [3] dës Distanz ze nëmmen modest Iwwerliewe Virdeeler vun fortgeschratt Fäll eegens, a bal 50% vun de Patienten nach stierwen. E grousse Form vum Terrain ass peritoneal anzebezéien. Cancer Wuesstem an peritoneal Metastasen sinn angiogenesis ofhängeg, e Prozess, deen e puer angiogenic Faktoren dorënner wiere endothelial Wuesstem Faktor (VEGF), epidermal Wuesstem Faktor (EGF) ligand bënnt, elementar fibroblast Wuesstem Faktor, prostaglandin E2, interleukin-8, chemokine (CXC Motif) 1, an der Matrixentgasung metalloproteinase Famill [4] - [6]. Puer molekulare Signaler, wéi Signal Better gëtt reduzéiert a activator vun Transkriptiouns-3 (mat Hëllef-3), nuklear Faktor-EB, Akt, mitogen-ageschalt FAQ kinases, cyclooxygenase-2, lipoxygenase, inducible nitric-It synthase, Faktor entholl necrosis an anerer , hunn och zu entholl Werdegang an angiogenesis Équipe gin [7] gewise goufen - [9]. Allerdéngs, déi bewosst a molekulare Mechanisme vun der Entwécklung, Werdegang, an Metastasen vun gastric Kriibs bleiwen nach Keess ze ginn. VerfÜgung

Den Janus-ageschalt kinase (Jak) /aktuelle Wäert sécher Passerelle spillt eng wichteg Roll an der Regelung vun Zell Wuesstem, angiogenesis, dat, Migratioun, an Metastasen [10]. Konstitutive Aktivatioun vun aktuelle Wäert Weeër, besonnesch Hëllef-3, ass mat enger grousser Villfalt vu mënschlechen malignancies assoziéiert. Bestänneg Hëllef-3 phosphorylation gouf zu verschiddenen Mënsch Cancers, wéi staark erhéijen vun de Mo, Colon, Liewer, Aarbecht, Broscht, haett, an de Kapp an den Hals wéi och Blutt malignancies [8], [10] observéiert. Virdrun Etude huet gewisen, datt phosphorylation vun Hëllef-3 an VEGF FAQ Ausdrock vun mënschlecher gastric Kriibs Otemschwieregkeeten fräi sinn, déi am Tour de angiogenic phenotype elevate an droen zu gastric Kriibs Entwécklung an Werdegang [11]. Op der aner Hand, sinn verschidden phosphatases bekannt entholl suppressors ze ginn an eventuell eng wichteg Roll an der inhibition oder Kontroll vum Kriibs Wuesstem [12] Leeschtung - [15]. Protein tyrosine phosphatases (PTPs), dorënner SH2 Domain-haltege tyrosine phosphatase (SHP) -1 an SHP-2, si kënnen ze negatif aktuelle Wäert sécher vun der tyrosine dephosphorylation vun e puer Deeler am Zesummenhang sécher Weeër [13] regléieren - [15] . De weideren Aktivatioun vun Hëllef-3 am erhéijen kéinten op d'mannst zu engem Deel vum Verloscht vun Funktioun vun dëse phosphatases vereinfacht ginn. Calpain II ass eng Roll an endoplasmic reticulum (ËH) Stress-reegelen tumorigenesis zu Leeschtung gewisen, déi an de Mechanismus vun honokiol-inhibited gastric tumorigenesis Équipe ass [16]. Ausserdeem huet virdrun Étude uginn och dass SHP-1 ass eng endogenous Realitéiten fir calpain folgenden A23187-entschlof platelet Aktivéierung [17]. Dofir, eng calpain /SHP-1-reegelen Hëllef-3 an VEGF Passerelle kann an der angiogenesis, Wuesstem, an peritoneal Weiderleede vun gastric Kriibs Zellen Équipe ginn. VerfÜgung

Honokiol, eng kleng-molekulare Gewiicht natierlech Produit, ass eng grouss aktiv biphenolic Massa vun Magnolia officinalis VerfÜgung, dee bekannt ass microbial Wonn, inflammation an gastrointestinal Entwécklungsstéierungen an traditionnell asiatësch Medikamenter Systemer [18] zu gewinnt. Eis virdrun Etude bewisen, dass honokiol gastric tumorigenesis zur Aktivatioun vun 15-lipoxygenase-1 a konsequent inhibition vun peroxisome proliferator-ageschalt receptor-A a COX-2-ofhängeg Signaler [19] bremst. Honokiol gouf dës Distanz zu ËH Stress induce an Iwwerleeung calpain-II-mediated Zocker-reegelen FAQ-94 Rëss an apoptosis zu Mënsch gastric Kriibs Zellen [16]. Et ass bewisen, dass VEGF Ausdrock ze Nährwert Entzuch Konditiounen responsiven ginn hätt, déi ËH Stress Ursaach [20], [21]. Ausserdem, huet de ËH Stress activator tunicamycin fonnt goufen zu Ofstand microvasculature Entwécklung verhënneren, proposéiert, datt dës ËH Stress inducer e Potential Roll an Broscht entholl behandelt hu vläicht [21]. D'Auswierkunge vun honokiol op ËH Stress-soll angiogenesis an gastric entholl Metastasen sinn nach onkloer. Hei, Hypothes mir dass honokiol der angiogenesis an peritoneal Weiderleede vun gastric Kriibs Zellen duerch eng calpain /SHP-1-reegelen Hëllef-3 an VEGF Passerelle bremst. D'Resultater weisen, datt honokiol Ofstand inhibited angiogenesis an peritoneal Weiderleede vun gastric Kriibs Zellen via engem calpain /SHP-1 Interaktioun-ageschalt Hëllef-3 dephosphorylation an VEGF verwandelt-Regulatioun Passerelle. VerfÜgung

Resultater VerfÜgung

Honokiol blockéiert Peritoneal Metastasen vun Gastric Cancer zu VIVO

Cancer dacks duerch d'fräi Notzong vun charakteriséiert ass [ 18F] -fluoro-2-deoxy-d-Zocker (FDG), an [ 18F] -FDG /PET kann als GPA Mesure vun therapeutesch Efficacitéit déngen. Déi funktionell Méiglechkeet vu klenge Déier Imaging engem Medeziner PET /CT Scanner mat FDG war mat bewäert. Véier Gruppe vu Mais fir peritoneal Metastasen Experiment propagéieren. Eng Ausso /Bild vun der Metastasen Situatioun war an Dorënner 1. Mir dës geheescht [ 18F] -FDG-PET /CT peritoneal Investitiounen am Mais mat mënschlechen gastric Kriibs Zellen (MKN45 oder SCM-1) mat oder ouni inoculated z'entdecken honokiol Behandlung. Als zu Dorënner 2 gewisen, war de Maximum Intensitéit Projektioun vum typesch Vertrieder Mais entsteet. D'peritoneal Metastasen war an der Kontroll Mais (lénks Rot) markéiert, an et war vun der honokiol Behandlung (riets Rot) wierksam réckgängeg. Dës Biller weisen kloer dass noninvasive [ 18F] -FDG uptakes zu peritoneal metastatic erhéijen vun Kontroll Mais sech vill méi héich wéi déi vun der honokiol-behandelt Mais. D'quantification vun Intensitéit ass zu Dorënner 3A gewisen. Intraperitoneal Sprëtz vun honokiol (5 mg /kg, zweemol /Wochemaart) reduzéiert bedeitend de geschate Radioaktivitéit zielt a speziell Notzong Wäerter (kontinuéierlech verbessert huet) sech duerch FDG-PET /CT zu Mais mat gastric Kriibs Zellen inoculated (Figebam. 3). Desweideren, vill metastatic Véi ukomm waren an der peritoneal Discours (mesentery) vun der Kontroll Mais inoculated mat MKN45 an SCM-1 (Figebam. 2) Zellen fonnt. Am Géigesaz, mat honokiol peritoneal entholl Véi ukomm waren Bierg behandelt zu Mais observéiert. Quantification vun Tountafele noverfollegt pro Terrain ass an Dorënner 3B gewisen. VerfÜgung

Honokiol Inhibited Angiogenesis zu VIVO VerfÜgung, ex VIVO VerfÜgung, an kënschtlech

Endothelial Zelle kritescher fir d'angiogenic Prozess, dee fir entholl Wuesstem an Metastasen néideg ass. Mir propagéieren nächst der angiogenic Effet vun honokiol d'Schüler chorioallantoic Membran assay benotzt ( CAM VerfÜgung assay), matrigel Plug assay, aortic Ring sprouting assay, an endothelial Zell Rouer Équipe. Als zu Dorënner 4A gewisen, inhibited honokiol effektiv Tendenz-wiere Équipe an der CAM VerfÜgung assay ouni siichtbar Effekt op d'Pré-bestehend Blutt kritt. Chemeschen Analyse Teamchef honokiol enger 2,5-fantastesch Ofsenkung vun der Zuel vun den nei forméierte Blutt kritt ëmmer esou mat, datt vun mëttelfristeg Kontroll Verglach. VerfÜgung

An der matrigel Plug assay, matrigel wouvun VEGF (100 Dummeldéng /ml gelies) mat oder ouni honokiol (10 μg /ml) war subcutaneously an Sauna Mais implanted. No 21 Deeg vun ofgestouss, sech aleng matrigel Stroum excised an fotografeschen. Stroum mat VEGF sech eleng Ofstand streaky, wiere a rout a Faarf. Stroum mat VEGF an honokiol sech pallid, déi besot keng oder manner Blutt pompelen Opstellung (Figebam. 4B-e). Mir iwwerpréift och d'Zuchstreck Dicht a pompelen Wirklechkeet an d'Plug Rubriken vun H & E staining an immunohistochemical staining mat enger antibody géint CD31, eng endothelial Zell verbruecht. D'vascularization am honokiol + VEGF Grupp war den Verglach mat der VEGF eleng Grupp bedeitend reduzéiert (Figebam. 4B-b). Quantification vun der vascularization vun der CSV an de Mädler endothelial Zellen Zielen verroden, datt d'wiere Dicht vun der honokiol-behandelt Grupp bedeitend war ofgeholl (ausstinn. 4B-c an 4B-d). VerfÜgung

Next, goufen endothelial Zellen entschlof vun der isoléiert Grenzwäerter aortic Réng an der Präsenz vun matrigel an ECGM (endothelial Zell Wuesstem mëttelfristeg) wouvun angiogenic cytokines, wéi VEGF an elementar fibroblast Wuesstem Faktor Spross. Extensiv endothelial Zell outgrowth aus Ring explants Grenzwäerter aorta war an der Kontroll Grupp (Figebam. 5A) observéiert. Honokiol Behandlung e wesentleche (~five-fantastesch) Reduktioun vun endothelial outgrowth an sprouting aus aortic Réng (ausstinn. 5A an 5C). Doriwwer eraus, war d'morphological dat vun endothelial Zell Rouer Opstellung propagéieren eng zwee-Dimensiounen matrigel Method benotzt. Als zu Dorënner 5B gewisen, ugefouert Morden vun HUVECs zu matrigel ze wiere Rouer-wëll Struktur Équipe. Honokiol effektiv d'endothelial Zell Rouer Opstellung inhibited vun de Rouer-wëll Struktur vun Längt reduzéieren a Breed (ausstinn. 5B a 5D). VerfÜgung

Honokiol ofgeschaf Hëllef-3 sécher an Human Gastric Cancer BTS, HUVECs, a Saachen

virdrun Studien hunn eng staark Korrelatioun tëschent ageschalt Hëllef-3 an angiogenic phenotype [11] gewisen. Mir opgekläert weider den Effet vun honokiol op der phosphorylation vun Hëllef-3 an mënschlechen gastric Kriibs Zellen (MKN45 an AGS) an HUVECs. Als zu Dorënner 6 gewisen, reduzéiert honokiol der tyrosine (Tyr705) phosphorylation vun Hëllef-3 an enger Zäit-ofhängeg Manéier mat ronn eng zwee-Weeër erofgoen op 1-2 h an AGS Zellen (Figebam. 6A) an engem 3 bis 10- fantastesch erofgoen um 0.5-24 h an MKN45 Zellen (Figebam. 6B). Verwonnerlech, honokiol Hëllef-3 dephosphorylation vun Tyr705 entschlof, mä net Ser727, Reschter vun dëse Mënsch gastric Kriibs Zellen. Allerdéngs, inhibited honokiol gläichzäiteg souwuel Tyr705 an Ser727 phosphorylation vun Hëllef-3 an HUVECs (Figebam. 6C). Chemeschen Analyse vun FAQ Bands an der Western blot benotzt Image-Pro Plus Software ass zu Dorënner 7. D'Resultater vun Analyse mat confocal microscope och zougedréckt gewisen, datt honokiol der tyrosine (Tyr705) phosphorylation vun Hëllef-3 an AGS Zellen an HUVECs (Lalumi ofgeschaf . 8A). VerfÜgung

Mir iwwerpréift weider der Hëllef-3 phosphorylation zu peritoneal aus Sauna Mais mat MKN45 Zellen inoculated isoléiert metastatic erhéijen mat oder ouni honokiol (5 mg /kg) Behandlung. Immunohistochemical Analyse gewisen, datt p-Hëllef-3 overexpression an Heefung an der entholl Regioun, dorënner Kären an Zytoplasma, war vill vun honokiol Behandlung réckgängeg (Figebam. 8B). An Western blotting Analyse, ofgeholl honokiol Ofstand der Heefung vun p-STAT3 zu erhéijen wéi mam Auto Kontroll Verglach (Figebam. 9A). Den Ausdrock vun konstitutiven STAT3 war net betraff. Ausserdeem, war d'DNA bindend Aktivitéit vun Hëllef-3 weider benotzt EMSA confirméiert. Als zu Dorënner 9B gewisen, inhibited honokiol Ofstand déi fräi DNA bindend Aktivitéit vun Hëllef-3 an mënschlechen gastric Kriibs Zellen. Honokiol inhibited och de VEGF-fräi Hëllef-3 DNA bindend Aktivitéit zu HUVECs (Figebam. 9B). VerfÜgung

Honokiol entschlof SHP-1-reegelen Hëllef-3 Dephosphorylation zu Gastric Cancer BTS, Endothelial BTS, a Saachen

SHP-1 ass eng non-transmembrane PTP [12]. Mir iwwerpréift nächst ob honokiol den Ausdrock an Aktivitéit vun SHP-1 regléieren kann. Als zu Dorënner 10A gewisen, verstäerkte honokiol d'FAQ Ausdrock vun SHP-1, mee net SHP-2, an HUVECs an AGS Zellen zu enger Zäit-ofhängeg täteg. Pharmacological PTP inhibitor an SHP-1 siRNA transfection effektiv ofgeschaf der honokiol-entschlof Hëllef-3 dephosphorylation zu HUVECs an AGS Zellen (Figebam. 10B-e). Ähnlech Resultater am SCM-1 Zellen an SV-40 och Maus microvascular endothelial Zellen (SVECs) mat honokiol behandelt sinn an Dorënner 10B-b gewisen. Mir iwwerpréift nächst ob endogenous SHP-1 vun honokiol modulated ass. Honokiol war kapabel Skateshop der SHP-1 Aktivitéit zu gastric Kriibs Zellen, HUVECs an SVECs zu enger Zäit-ofhängeg Manéier (Figebam. 11A). Honokiol verstäerkte och de SHP-1 FAQ Ausdrock vun peritoneal metastatic erhéijen vom MKN45-inoculated Mais wéi vun immunohistochemical Analyse verroden (Figebam. 11B). Mir propagéieren weider der Interaktioun tëscht SHP-1 an aktuelle Wäert-3 der Methode vum Co-immunoprecipitation a Western blotting benotzt. Als zu Dorënner 11C gewisen, SHP-1 gouf speziell mat Hëllef-3 an AGS Zellen an HUVECs an der Präsenz vun honokiol verbonne als Verglach mat IgG Kontroll. VerfÜgung

Honokiol verännert ËH grousse Ganzen entschlof Calpain-II-reegelen SHP -1-entschlof Hëllef-3 Dephosphorylation, an ofgeholl VEGF Generation VerfÜgung

virdrun Studien hu proposéiert, datt ËH Stress spillt eng wichteg Roll an angiogenesis [20], [21]. Mir iwwerpréift nächst den Effet vun honokiol op ËH microstructure vun Transmissioun Elektronen microscopy. Als zu Dorënner 12A gewisen, ËH dilation a véiermol sou goufen am honokiol-behandelt SCM-1 gastric Kriibs Zellen an HUVECs Schatzkummer. VerfÜgung

Mir wollten och fir festzestellen, ob calpain-II Aktivéierung fir SHP-1 Aktivitéit zu honokiol néideg ass -treated Zellen. Pharmacological calpain inhibitor an calpain-II siRNA transfection effektiv honokiol-verstäerkte SHP-1 Aktivitéit zu AGS Zellen an HUVECs (Figebam. 12B) reduzéiert. Zellen mat recombinant calpain-II behandelt, wéi eng positiv Kontroll, weisen eng 4 bis 5-fantastesch Erhéijung vun SHP-1 Aktivitéit (Figebam. 12B). VEGF ass bekannt der Hëllef-3 Promoteur bindend Site ze enthalen. Mir iwwerpréift nächst ob honokiol VEGF Ausdrock regléieren kann. Honokiol reduzéiert bedeitend der VEGF Generatioun zu AGS Zellen an HUVECs, an dësem Effet war vun SHP-1 siRNA transfection réckgängeg (Figebam. 12C). Zousätzlech, transfection vun Mann--Hëllef-3 plasmid an Zellen inhibited och de VEGF Generatioun. D'Kombinatioun vun honokiol mat Mann--Hëllef-3 plasmid transfection vun Zellen reduzéiert synergistically der VEGF Produktioun am Verglach mat entweder Behandlung eleng (Figebam. 12C). Fir weider der Interaktioun tëscht calpain-II confirméieren an SHP-1, Co-immunoprecipitation a Western blotting sech zu gastric Kriibs Zellen gesuergt. Als zu Dorënner 12D gewisen, calpain-II gouf speziell mat SHP-1 zu AGS Zellen an der Präsenz vun honokiol (20 μM) assoziéiert als Verglach mat IgG Kontroll. Den Zerfall, war d'honokiol-entschlof calpain /SHP-1 Interaktioun och zu HUVECs (Donnéeën net gewisen). VerfÜgung

Diskussioun VerfÜgung

Honokiol ass e wichtegen Volet vun Magnolia officinalis VerfÜgung fonnt deen, ass eng provisoresch Medikament an Asien [18]. Honokiol leie anti-oxidative an Anti-demagogesch Effekter kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung [22] - [25]. Honokiol gouf dës mächtegst anti-proliferative Aktivitéit ze weise géint endothelial Zellen kënschtlech VerfÜgung an Anti-entholl Effekter géint angiosarcoma an Sauna Mais [26]. An dëser Etude, hien huet mir fir d'éischte Kéier, datt honokiol engem mächtegst inhibitor vun angiogenesis an peritoneal Metastasen vun gastric Kriibs ass. Eis Fuerschung huet op d'Effekter a méiglech Mechanisme vun honokiol op peritoneal Metastasen an angiogenesis benotzt PET /CT do, CAM VerfÜgung assay, matrigel Plug assay, aortic Ring endothelial Zell sprouting assay, endothelial Zell Rouer Opstellung assay, an kënschtlech VerfÜgung Zell Experimenter. D'Resultater weisen, datt honokiol angiogenesis an peritoneal Verbreedung duerch eng calpain-II-ageschalt SHP-1 Aktivéierung sécher CASCADE oofgesinn kann. Aktivatioun vun phosphatase SHP-1 vun honokiol gefouert weider un der verwandelt-Regulatioun vun Hëllef-3 Aktivéierung an VEGF Produktioun, déi zu der inhibition vun angiogenesis an peritoneal Metastasen. Allerdéngs kann d'inhibition vun angiogenesis an inhibition vun metastatic Potential vun Kriibs Zellen vun honokiol der separater Aspekter ginn, een en Effekt vun honokiol op angiogenesis direkt an aneren Effet vun honokiol op Kriibs Zellen gëtt. VerfÜgung

An de leschte puer Joer, hunn eng Rei vu Studien, datt konstitutiven Aktivatioun vun den aktuelle Wäert Famill uginn, besonnesch Hëllef-3, mat Zell Prolifératioun, angiogenesis an Metastasen [10], [11], [27] verbonnen ass - [30]. Geklomm Aktivatioun vun Hëllef-3 Ausdrock gouf zu verschiddenen entholl-ofgeleet Zellen an Echantillon vun der Mënschheet Kriibs Stoffer fonnt. Dereguléierte Hëllef-3 Aktivéierung gouf virgeschlo eng wichteg Roll an overexpression vun VEGF ze spillen a fräi angiogenic phenotypes zu gastric Kriibs, deen zu gastric Kriibs Entwécklung an Werdegang bäidroen kënnen [11]. Am Moment studéieren, hunn mir dass honokiol effektiv d'phosphorylation vun Hëllef-3 an HUVECs (souwuel Tyr705 an Serine727 Siten) gastric Kriibs Zellen (Tyr705 Site), an peritoneal metastatic erhéijen (Tyr705 Site) inhibit kann, Mënscherechter. Wéi de oncogenic Aktivatioun vun tyrosine kinases eng gemeinsam Fonktioun vun Cancers ass, do hu mer op der Roll vun Tyr705 phosphorylation vun Hëllef-3. VerfÜgung

SHP-1 enger Funktioun Potential entholl suppressor hiérarchique an ass eng negativ regulator vun der Jak /Hëllef sécher Passerelle [15]. Et gouf och gewisen, datt SHP-1 phosphatase zu der phosphorylated Y1173 Domain festleeën kann, dee bis EGFR dephosphorylation féiert [31]. Y429 an der cytoplasmic Domän vun der erythropoietin receptor huet fir FAQ tyrosine phosphatase néirens-PTP1 der bindend Site ze gin, déi eng grouss Roll spille kënnen an alle proliferative Signaler [32] ugeholl gouf. SHP-1 och en neien vum Wuesstem-Faktor gin sécher an epithelial an hematopoietic Zellen [15] gewise. SHP-1 war besonnesch als potentiell gestallt neien vun VEGFR sécher [33] ervirgehuewen. An endothelial Zellen, SHP-1 ass kierperlech mat VEGFR2 verbonnen an och fir béid TNFα-mediated an Otemschwieregkeeten-inhibitor vun metalloproteinases (TIMP) -mediated inhibition vun angiogenesis [31] néideg ass. Soumat kënnen SHP-1 Aktivéierung wichtege Konsequenze fir d'Regulatioun vun Prolifératioun an angiogenesis hunn. An dëser Etude, fonnt mir dass honokiol speziell den Ausdrock vun SHP-1 coopération, mä net SHP-2, an gastric Kriibs Zellen, endothelial Zellen, an peritoneal metastatic erhéijen. Dës Conclusiounen hindeit datt honokiol endothelial Zell inhibit kann angiogenesis a Kriibs Zell Metastasen, déi duerch e SHP-1-entschlof Hëllef-3 verwandelt-Regulatioun Passerelle kann. VerfÜgung

virdrun Studien hunn eng wichteg Roll fir ËH Stress proposéiert an de molekulare Mechanismus vun angiogenesis a Kriibs Zell Wuesstem [16], [20], [21]. Koyama a Kollegen hu proposéiert och, datt ËH Stress-entschlof Kalzium Stéierungen kann an der Aféierungs- vun amyloid β Heefung an angiogenic Faktor Ausdrock vun der retinal pigment epithelium [34] Équipe ginn. Eng rezent Etude huet dass ËH Stress-reegelen ofsoen-1α kloer gewisen eng essentiel Funktioun vun placental Entwécklung an embryonal Nuetsvolen leie, ervirhiewt d'Relatioun vun ËH Stress, an angiogenesis an der placenta während Schwangerschaft [35]. Kim a Kollegen hu gewisen, datt béid SHP-1 an SHP-2 sinn endogenous heescht de Législateur, fir calpain, déi am Kontext vun Équipe ass Entamoeba histolytica VerfÜgung -induced Provider Zell Doud [36]. Gëlt, ginn calpains aktiv wann der intracellular Kalzium ([Ca 2+] i) Konzentratioun nik ass; m-calpain (calpain II) verlaangt [Ca 2+] i op engem millimolar Rei, mä micromolar Konzentratioune vun [Ca 2+] i si genuch fir den Aktivéierungscode vu μ-calpain (calpain sin) [37 ], [38]. Et gouf gewisen, datt en héije Niveau vun [Ca 2+] i FAQ tyrosine kinase Aktivitéit als Resultat vun calpain Aktivéierung während Stimulatioun vun ionophore zu Plaquetten [39] behënneren. Honokiol war kapabel Pinguin [Ca 2+] i Mobiliséierung vun neuronal Zellen [40]. Kuerzem, tunicamycin gouf angiogenesis zu VIVO VerfÜgung zu inhibit gemellt. Eis virdrun Etude huet gewisen, datt honokiol apoptosis Mënsch gastric Kriibs Zell induces an bremst tumorigenesis duerch eng calpain-mediated Zocker-reegelen FAQ-94 Rëss [16]. Am Moment studéieren, mir bewisen straightforwardly datt d'ËH dilated waren an fragmentaresch zu gastric Kriibs Zellen an HUVECs honokiol-behandelt. Desweideren, pharmacological inhibitor vun calpain an calpain-II siRNA transfection effektiv honokiol-verstäerkte SHP-1 Aktivitéit zu gastric Kriibs Zellen an HUVECs reduzéiert. Gëlt, eis Resultater fir déi éischt Kéier bewisen, dass calpain /SHP-1 Interaktioun direkt vun honokiol inhibition vun Hëllef-3 phosphorylation zu gastric Kriibs Zellen ausgeléist gëtt. Dës Resultater weisen, datt honokiol ËH Stress induce kann an ausgeléist calpain-II-ageschalt SHP-1 Aktivitéit zu gastric Kriibs Zellen an endothelial Zellen. VerfÜgung

An Conclusioun, d'Resultater vun dëser Etude déi zu VIVO , ex VIVO VerfÜgung a kënschtlech VerfÜgung Beweiser fir inhibition vun angiogenesis an peritoneal Weiderleede vun gastric Kriibs Zellen vun honokiol an enger molekulare Basis fir hir Auswierkungen. Dës Donnéeë Highlight der Bedeelegung vun ËH calpain an FAQ tyrosine phosphatase SHP-1 sécher an honokiol-inhibited Hëllef-3 Aktivéierung an VEGF Produktioun vun gastric Kriibs Zellen an endothelial Zellen (Figebam. 13). Dës Conclusiounen proposéieren och, datt d'verwandelt-Regulatioun vun Hëllef-3 an VEGF vun calpain entschlof sécher /SHP-1 kann ee villverspriechenden therapeutesch Strategie fir gastric Kriibs behandelt ginn. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

BTS a Kultur VerfÜgung

Mënscherechter gastric Kriibs Zell Linnen dorënner eng Caucasian Zell Linn (AGS, mëttelméisseg /schlecht (gemëscht) ënnerscheet adenocarcinoma Zellen) an asiatesch Zell Linnen (MKN45 an SCM-1, Strenz adenocarcinoma Zellen) goufen aus der kritt Zell Bank vun Taipei Veterans Generalsekretär Klinik (Taiwan). Zellen sech am RPMI1640 mëttelfristeg wouvun 10% FCS an streptomycin /penicillin zu engem humidified 5% CO 2 Atmosphär haten. VerfÜgung

HUVECs aus umbilical Golddrot z'eliminéieren vun collagenase Behandlung kritt huet wéi virdru beschriwwen [41]. Dës Etude entsprécht den Prinzipien fir Asaz vu Mënsch an der Deklaratioun vun Helsinki duergestallt get. D'Etude Protokoll war vun der Ethik Kritik Verwaltungsrot vun Taichung Veterans Generalsekretär Klinik, Taichung, Taiwan (virausgesat Dokument TCVGH-C0062-1) abruecht. HUVECs um drëtten Trip benotzt goufen. D'Effizienz vun transfection (> 80%) vun Lipofectin reagent (Invitrogen) war um drëtten Trip bestëmmt. An e puer Experimenter, SV-40 Maus microvascular endothelial Zellen (SVECs) cultured zu Dulbecco d'geännert Eagle d'mëttel- och (DMEM) mat 10% An et Bovine serum nà (FBS) an 1% penicillin /streptomycin. SVEC Zell Linn war vun Dr. KH Lan (Cancer Center, Taipei Veterans Generalsekretär Klinik, Taiwan) Audit héichbegaabte. VerfÜgung

Honokiol war vun Wako chemesche Company (Rekorder, Japan) kritt, an et war alles op d'mannst ze ginn 99% reng vun HPLC. Verschidde Konzentratioune vun honokiol sech an dëser Etude jee op der Drogenofhängeger Empfindlechkeet agestallt IC50 Wäerter (20 μM zu AGS, 40 μM zu MKN45 an SCM-1) benotzt. MKN45 an SCM-1 Zellen, mä net AGS Zellen, goufen dës efficacer erhéijen an engem xenograft entholl Maus Modell induce. VerfÜgung

Déieren VerfÜgung

All Déier Pfleeg an experimentell Prozedure goufen ugeholl an Leedung vum Komitee fir Déieren Experimenter, National Chung Hsing University, Taichung, Taiwan (virausgesat Dokument NCHU-100-26). Four- zu sechs-Woch-alen Mann BALB /c Sauna Mais sech aus NLAC (Taipei, Taiwan) kaaft. De Mais goufen ënner bestëmmten pathogen-gratis Konditiounen flegelhaft an haten, mat goen Iessen a Waasser gëtt ad libitum VerfÜgung an 12 h Liicht /donkel Zyklus Haffbibliothéik zu enger Barrière Gebei mat engem. VerfÜgung

Xenograft entholl Mouse Model VerfÜgung

fir d'peritoneal Metastasen, cultured Mënsch gastric Kriibs Zellen diskutéieren (4~5 × 10 6 Zellen) waren an der peritoneal Discours vun BALB inoculated /c Sauna Mais [42]. Peritoneal erhéijen an Sauna Mais sech fir 7 Deeg no der Sprëtz vun gastric Kriibs Zellen gegrënnt, an deem d'erhéijen vun PET /CT Iwwerwaachung konsultéiert goufen. Dunn, goufen Mais fir 28 Deeg intraperitoneally mat honokiol (5 mg /kg /zweemol pro Woch) heijen. Den Effet vun honokiol op peritoneal Publikatioun war vun PET /CT bewäert. Eng Ausso /Bild vun der Metastasen Situatioun 1. Dunn zu Dorënner beschriwwe gouf, waren d'Mais ënner Anästhesie (pentobarbital) geaffert a macroscopically fir d'Präsenz vun peritoneal Metastasen iwwerpréift. D'erhéijen sech excised, Géigewier an spären, zu 10% formalin fix, an zu flëssegem Stéckstoff an paraffin spären oder virgezunnen-gefruer Ënnerbewosstsinn. VerfÜgung

Positron Emissiounshöchstgrenzen Tomography /berechnen Tomography (PET /CT) Scannen VerfÜgung

No mannst 6 h vu fasting, huet de Mais entscheet 7.4 MBq (0,2 mCi) Portioun 18F-FDG mëndlech ier mat 1 ml vu Waasser Douche. De Mais sech mat enger isoflurane vaporizer virun all Scanner Nodeel. Experiment fir klengt Déier Imaging sech mat engem kombinéiert PET /CT Scanner (; GE MEDICAL SYSTEMS Discovery ST) gesuergt. A multidetector hannertenee helical CT Scanner benotzt gouf. Technesch Parameter benotzt an der CT Deel vun PET /CT sech wéi follegt zesummen: CT Scanner Typ mat enger 0,5-zweet voll helical Scanner, eng heescht hannertenee Konfiguratioun vun 16 × 1,25 mm, en nolauschterer Plaz vun 2.75 mm, Taarten deck vun 1,25 mm , e Schwaachpunkt vun 1.75:1 (héich Qualitéit Modus), eng Vitesse vun 17,5 mm pro Rotatioun, enger grousser Wiss-vun-Vue (FOV), Volt 120 freekstars an aktuellen vun 200 MA. Technesch Parameteren fir de PET Deel vun PET /CT benotzt sech wéi follegt zesummen: 10.0 min op all Bett, de FOV fir Imaging Neesopbau ugefaangen huet 20 cm an der PET Resolutioun war ongeféier 4,5 mm voll Breet um Halschent maximal (FWHM). D'reconstructive Parameteren sech Typ 3D Impressioun wéi 21 subsets an 2 Ben. Fir d'quantification Fähegkeet vun der PET /CT Scanner an kleng Déieren Imaging, enger Regioun vun interesséieren (ROI) deeër sech op kleng FOV transaxial PET Biller Asien misst de Beräicher vun FDG Notzong vun der observéiert Stoffer ëmginn iwwerdeems Emgéigend Stoffer bestinn. D'menge vun all war bannent all ROI Aktivitéit Wäert d'pixel opgeholl an ausdrécke wéi Bq /ml. VerfÜgung

Chick Chorioallantoic Membran Assay ( CAM VerfÜgung Assay) VerfÜgung

der zu VIVO VerfÜgung angiogenic Aktivitéit, engem geännert Schüler ganzt Déier CAM VerfÜgung assay war virdrun ëmschriwwen duerchgefouert [43]. Befrucht Schüler Eeër waren op 37 ° C an enger kontinuéierlech humidified Ee Ziichter incubated. Op 3 Deeg vun incubation, goufen Schüler embryonal zu enger Kultur Plat transferéiert. Zwanzeg μL vun am Typ bis honokiol ech Mëschung collagen war op zerwéiert hunn applizéiert an polymerized vun Äerderwäermung. Déi hunn sech op den CAM VerfÜgung vun 6-Dag-al embryonal iwwerlaascht. No 24-h incubation, war d'Gebitt ronderëm d'iwwerlaascht Scheif mat enger Nikon digital Kamera fotografeschen, an d'Zuel vun den nei forméierte Offshore war vun zwee Observateuren an enger duebel-blann Manéier gezielt. Assays fir all Test Prouf goufen higeriicht mat 10-13 Eeër. VerfÜgung

Matrigel Gedenkzeremonie Assay VerfÜgung

gewaltege Sträit Mais oder C57BL /6 Mais sech subcutaneously mat 0.6 ml vun matrigel wouvun der uginn Montant vun capsaicin heijen , 100 NG vun VEGF, an 10 Unitéiten vun heparin. D'heijen matrigel geformt séier eng eenzeg, staark gelies Plug. No 7-21 Deeg, war d'Haut vun der Maus liicht kum zréck der matrigel Plug ze filmen, deen nach emmer intakt. Glycosilée war mat der Drabkin Method an enger Drabkin reagent Kit 525 (Fläch, St Louis, MO) fir d'quantification vun Blutt pompelen Opstellung gemooss. D'Konzentratioun vun glycosilée war vun engem bekannte Montant vun glycosilée zu parallel assayed berechent. Déi Biller waren mat enger Nikon digital Kamera fotografeschen, an d'Zuel vun den nei forméierte Mikro-Offshore war gezielt. VerfÜgung

Ex VIVO VerfÜgung Aortic Ring Assay VerfÜgung

Aortas aus 6 isoléiert sech -week-al Sprague-Dawley deër. Plaque (48-gutt) sech mat 120 μL vun matrigel bedeckt. Aortas aus Mais isoléiert sech vun periadventitial Fett an connective Stoffer gebotzt, an Géigewier an ~1-mm-laang bis 1,5-mm-laang Réng. No rinsed fënnef Mol mat endothelial Zell-baséiert mëttelgrouss, huet de aortas op der matrigel-Daach Wells gesat a mat aneren 100 μL vun matrigel iwwerzunn. Honokiol oder Gefier war zu enger definitiver Volume vun 250 μL vun mëttel- bis de Wells notéiert.

Other Languages