Background a wëllt VerfÜgung
EGFR Aktivéierung an PKM2 Ausdrock sinn vun tumorigenesis instrumental. EGFR Aktivéierung reguléieren PKM2 Funktiounen vun engem subcellular unzekräizen-ofhängeg Art a promovéiert Gentherapie Transkriptiouns an entholl Wuesstem. Ausserdeem, ass PKM2 zu EGFR-entschlof Weeër an glioma malignancies upregulated. Allerdéngs fonnt mir dass PKM2 och d'Aktivitéit vun der EGF /EGFR sécher Passerelle an gastric Kriibs Zellen regléieren konnt. Mir anzeschätzen der biologescher Mechanismen fir PKM2 zu Regulatioun der Zell motility an Invasioun ze definéieren. VerfÜgung
Method VerfÜgung
Mir stabil transfection mat kuerzen hairpin RNS Employé de Ausdrock vun PKM2 an der BGC823 zu stably Hammers, SGC7901 an AGS gastric Kriibs Zell Linnen. D'Auswierkunge vun PKM2 kënschtlech sech duerch Fliessband Zell Wanderung an Invasioun alles. Immunohistochemical Analyse gouf benotzt der Relatioun tëscht PKM2 an aner Proteinen ze entdecken. VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Eis Resultater weisen, datt d'knockdown vun PKM2 der Aktivitéit vun E-cadherin ofgeholl an verstäerkte der EGF /EGFR sécher Passerelle an der gastric Zell Linnen BGC823 an SGC7901 datt fir E-cadherin Ausdrock positiv waren. Allerdéngs, AGS an der Strenz gastric carcinoma Zell Linn, déi E-cadherin Ausdrock Éloquence, gefördert PKM2 Zell Wanderung an Invasioun. Immunohistochemical Analysë weisen, datt de Niveau vun E-cadherin Ausdrock, ERK1 /2 phosphorylation, an cytoplasmic PKM2 Ausdrock mat all anere soll sech VerfÜgung
Conclusioun:. VerfÜgung
PKM2 an anescht ënnerscheet gastric verschiddene Rollen Leeschtung vläicht Kriibs Zell Typen, an dat fannen géif mat der viregter Fuerschung konsequent ginn. D'Resultater vun eiser Etude léist e wichtege Lien tëscht PKM2 an E-cadherin während EGFR-stimuléiert gastric Kriibs Zell motility an Invasioun VerfÜgung
Fro:. Wang LY, Liu YP, Chen LG, Chen YL, Tan L, Liu JJ, et al. (2013) Pyruvate Kinase M2 Spillt eng Dual Roll op Reglement vun der EGF /EGFR sécher via E-Cadherin-ofhängeg Fassong Gastric Cancer BTS. PLoS NËMMEN 8 (6): e67542. Doi: 10.1371 /journal.pone.0067542 VerfÜgung
Redakter: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japan VerfÜgung
Arnaque: 7 Februar 2013; Akzeptéiert: 20 Mee, 2013; Publizéiert: 28. Juni 2013 VerfÜgung
Copyright: © 2013 Wang et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung
Funding:. Dës Aarbecht war déi National Natural Science Foundation of China (Nr 30971362, 81072013 & 91229201) ënnerstëtzt Grondrechter Research Suen fir de Central Universitéiten, a China (Nr 2010111082) a Gesondheetsministère Foundation fir Staat Key Séminairen Pompjeeën. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung
Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung
pyruvate kinase (PK) mediates der Finale Quote-limitéieren Schrëtt vun glycolysis vun der dephosphorylation vun phosphoenolpyruvate (PEP) catalyzing zu pyruvate ee Protein vum ATP, nozeginn. Mammalian Zellen hunn véier pyruvate kinase isoenzymes (M1, M2, L, an R), déi an verschidden Zorte vun Zellen an Stoffer selektiv ausgedréckt sinn [1]. An Mamendéieren, ass de M1 isoform (PKM1) am meeschten Erwuessenen Stoffer ausgedréckt. D'M2 isoform (PKM2), eng alternativ spliced Variant vun M1, ass während embryonal Entwécklung ausgedréckt [2]. Etuden hu fonnt, datt Kriibs Zellen exklusiv PKM2 auszedrécken [3], [4]. PKM2 gouf fir aerobic glycolysis zu erhéijen (Warburg Effet) essentiel gin gewisen. Laf vun de Joren hunn, däitlech Fortschrëtter an Versteesdemech der Funktioun a Regulatioun vun PKM2 als pyruvate kinase an FAQ kinase zu Kriibs Zellen gemaach ginn [5]. Eng rezent Etude confirméiert, datt d'PKM2 vun epidermal Wuesstem Faktor entschlof (EGF) an den helle Gehirtumoren Zellen translocates, openee mat β-catenin a féiert zu cyclinD1 Ausdrock, déi Zell Prolifératioun an tumorigenesis ënnerstëtzt [6]. Dës Conclusiounen definitiven engem Roman Roll fir PKM2 als transcriptional coactivator. Mä et sinn e puer controversies iwwert d'Spezifizitéit a Potential vun PKM2 als eng anti-Kriibs Zil- zu Kriibs Therapie. Eng rezent Opklärung Teamchef PKM2 Ausdrock staark mat gastric Kriibs dat soll ass. Ënnerscheet Zorte vun Cancers auszedrécken méi PKM2 FAQ wéi d'Strenz mannste maachen. PKM2 war en Apdikter prognostic Faktor signet Ring Zell gastric Kriibs [7]. Der biologescher Roll vun PKM2 zu verschiddene dat Phasen an der Entwécklung vun gastric Kriibs brauch méi opgekläert ginn. VerfÜgung
virdrun Studien PKM2 iwwert hunn op entholl ukuerbelt an entholl Wuesstem do. Do hunn nëmmen e puer Reportagen op entholl Metastasen ginn. E-Cadherin spillt enger kritescher Roll epithelial Integritéit an ënnerhalen, an de Verloscht vun der E-cadherin schellt de Kondom Repertoire vun enger Zell [8]. Virdrun Studien [9] kënschtlech hu gewisen, datt de Verloscht vun der E-cadherin zu Mënsch carcinoma Zell Linnen mat aarm dat an engem fibroblastoid Wirklechkeet verbonnen ass. D'EGF-ofhängeg Aktivatioun vun der EGFR huet gemellt ginn an eng E-cadherin Haftung-ofhängeg Manéier inhibited ze ginn, déi d'ligand-ofhängeg Aktivéierungscode vu verschiddenste receptor tyrosine kinases [10] bremst. Eis Fuerschung bewisen, dass d'knockdown vun PKM2 der Aktivitéit vun E-cadherin ofgeholl an verstäerkte der EGF /EGFR sécher Passerelle an der Zell Linnen BGC823 an SGC7901 datt fir E-cadherin Ausdrock positiv waren. Allerdéngs, AGS an der Strenz gastric carcinoma Zell Linn, déi E-cadherin Ausdrock Éloquence, gefördert PKM2 Zell Wanderung an Invasioun. D'Zil vun dëser Etude huet d'Funktioun an Mechanismus vun PKM2 zuer Zell motility an anescht ënnerscheet Zell Zeilen ze entschlësselen. VerfÜgung
Zell Kultur, Konditiounen a Transfection VerfÜgung
de Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen BGC823 (schlecht ënnerscheet huet, laut dem Provider) an SGC7901 (mëttelméisseg ënnerscheet) waren cultured zu RPMI 1640 mëttelfristeg (HyClone, Logan, féier, USA). D'AGS Zell Linn (Strenz) war cultured zu F12K mëttelfristeg. All Zellen sech cultured an mëttelgrouss mat 10% An et Bovine serum (FBS) (Gibco, Detroit, MI, USA) an 100 IU /ML penicillin-streptomycin bei 37 ° C an engem 5% CO 2 humidified Atmosphär. De Mënsch gastric Kriibs Zell Linn AGS war vun der American Type Kultur Collection (ATCC, USA) bestallt, an de Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen SGC7901 an BGC823 sech aus China Centre fir Type Kultur Collection (Shanghai, China) kritt. SGC7901, BGC823 an AGS Zellen sech mat der siPKM2 (pcPUR + U6-siPKM2) oder déi PU6 transfected (pcPUR + U6-siRenilla) plasmid benotzt FuGENE HD (Roche, Indianapolis, IN). Puromycin (0,1 μg /ml) gouf benotzt fir stably transfected clones zu Ecran. Den Ausdrock vun der PKM2 FAQ war mat Western blot Analyse mat enger antibody géint PKM2 iwwerpréift d'Fähegkeet vum gesond ze validéieren der Zil- Gentherapie Ausdrock ze inhibit; dës Experiment dräi Mol widderholl. Zell Kulturen sech quiescent vun hinnen wuessen ze Niewebaach, an déi mëttelfristeg gouf ersaat duerch frësch mëttelfristeg mat 0,5% serum fir 1 Dag. EGF mat 100 Dummeldéng /ml Finale Konzentratioun war fir Zell Stimulatioun benotzt. EGF war vun Zell sécher Technology kritt. VerfÜgung gëllt Knockdown vun PKM2 an dene-Ausdrock vun PKM2 VerfÜgung A plasmid eng RNS Amëschen Haaptrei wouvun datt d'PKM2 Gentherapie zu BGC823 cibléiert, SGC7901 an AGS Zellen war gebaut. De Sënn oligo fir d'siPKM2 Haaptrei war 5'-CACCGCGGCAAGATTTATGTGGAACGTGTGCTGTCCGTTCCACGTAGATCTTGCTGCTTTTT-3 ", an der antisense oligo war 5'-GCATAAAAAGCAGCAAGATCTACGTGGAACGGACAGCACACGTTCCACATAAATCTTGCCGC-3". D'BGC-823, SGC-7901 an AGS Zellen sech mat pcPUR + U6-siPKM2 oder pcPUR + U6-siRenilla (Kontroll) transfected an als puromycin-resistent clones ausgewielt. Western blot Analyse war standing der PKM2 Ennerdréckung ze confirméieren. A plasmid PKM2 cDNA Haaptrei wouvun war vun Invitrogen kritt. D'BGC-823, SGC-7901 an AGS Zellen sech mat pcDNA6.0-PKM2 oder pcDNA6.0-mierkt (Kontroll) transfected an als blasticidin-resistent clones ausgewielt. Western blot Analyse war standing der PKM2 Ausdrock ze confirméieren. VerfÜgung Protein erauszéien a Western Blot Analys VerfÜgung BTS goufen du-Spär vun lysis Prellbock e protease inhibitor Cocktail mat, an der Quecksëlwer Proteinen sech getrennt benotzt 8-10% SDS-PAGE gels. β-Tubulin war als Luede Kontroll benotzt. Antibodies géint E-cadherin a p-E-cadherin sech aus Epitomics kritt. D'phospho-EGFR (Tyr1068), phospho-PLCγ1 (Tyr783), phospho-AKT (Ser473), phospho-Gab1 (Tyr627), phospho-c-cbl (Tyr700), an phospho-ERK1 /2 (Thr202 /Tyr204) antibodies sech aus Zell sécher Technology kritt. VerfÜgung RNS erauszéien, Réckproduktioun Transkriptioun an Real-Zäit Hinnen alleguer VerfÜgung Total RNS ofgebaut gouf de TRIzol reagent (Invitrogen, CA, USA) benotzt. D'Echantillon sech dann mat DNase fir 15 min bei Raumtemperatur behandelt, an den RNS war weider sidd mat enger RNS Donatiounen Kit (QIAGEN, CA, USA). De Géigendeel Transkriptiouns (RT) Reaktioun fir d'éischte-staarkt cDNA Synthes war mat 2 μg vun insgesamt RNS benotzt ëmgedréint transcriptase (Bio-Rad) gesuergt. Chemeschen RT-Hinnen alleguer Analyse gouf mat der Abi 7500 (Obwuel Biosystems) gesuergt, an der Gentherapie Ausdrock Niveauen fir all eenzelne Prouf ware bis GAPDH normalized. Déi heeschen relativ Gentherapie Ausdrock war huet sech an Differenzen berechent mat der 2 Zell prolifération Assay VerfÜgung Zell Prolifératioun war d'Zell Counting Kit-8 (Dojindo gemooss benotzt, Kamimashiki -gun, Kumamoto, Japan) no der Taktik vum Produzent. Kuerz, goufen d'Zellen op enger Dicht vun 2 × 10 Transwell Missiounen an Meter Chrëschtdagszäite Assays VerfÜgung D'transwell Invasioun assays mat 8.0-μm-pore Text zu engem 24-Meter transwell zappen gesuergt huet. De Keller Membran war mat 500 μL vun serum-gratis RPMI 1640 oder F12K mëttelfristeg 30 min virdrun benotzen denken. Fir d'Invasioun assay, goufen d'gastric Kriibs Zell Linnen zu den ieweschte ëmkomm vun engem transwell dobäi mat 0,5 mg /ML collagen Typ l (BD Bioscience, San Jose, CA) -coated Filter. RPMI 1640 oder F12K mëttelfristeg mat 10% An et Bovine serum an 1% vun all Antibiotike war bis den ënneschten Chambre notéiert. D'BGC an 7901 Zellen sech fir 36 Stonnen incubated. D'AGS Zellen sech fir 24 Stonnen incubated. D'hypothetesch Zellen sech no Gentian mauve staining laachen. All Experimenter war zu triplicate gesuergt, an d'Donnéeë sech als mengen Wäerter ausgedréckt. De Meter-verkënnegt assay gouf zu 6-gutt Placke gesuergt. Entholl Zellen zu mëttelfristeg 10% FBS mat sech rakommen an 6-gutt Placke (Corning, CA). Zell Kulturen sech quiescent vun hinnen wuessen ze Niewebaach, an déi mëttelfristeg gouf ersaat duerch frësch mëttelfristeg mat 0,5% serum fir 1 Dag. Wonnen an der monolayer sech mat steril Pipette Tipps feieren. Dunn EGF mat 100 Dummeldéng /ml Finale Konzentratioun war fir Zell Stimulatioun benotzt. D'Zellen sech dann mat PBS gewäsch an erfrëscht mat mëttelfristeg 10% FBS mat. Fotoen ware vun 0 bis 24 h geholl. All Experiment an triplicate standing VerfÜgung IFLA- breakpoint VerfÜgung Dës Etude vun der Ethik Comité (nee: 20081012) abruecht huet. Um Zhongshan Hospital laizistesch Xiamen University, Xiamen, Fujian Province, China, a mir kritt schrëftlech Erlaabnes Aussoen aus all an dëser Etude Équipe Participanten. VerfÜgung Virbereedunge Otemschwieregkeeten Echantillon VerfÜgung entholl Otemschwieregkeeten uplanzen sech aus 15 verschiddene gastric Kriibs Patienten gesammelt déi curative resection um Zhongshan Spidol mécht, Xiamen University, Xiamen, China. Eng onofhängeg Serie vun bascht noncancerous Stoffer aus 15 vun de selwechte Patienten entspriechend war gläichzäiteg gesammelt. All Otemschwieregkeeten uplanzen sech gesammelt an ass an zwee Deeler direkt no entholl resection ënnerdeelt. Een Deel war an flëssegem Stéckstoff gesammelt a gespäichert bei -80 ° C bis RNS an FAQ erauszéien. Den aneren Deel ass fir histological Analyse (Hematoxylin eosin an IHC staining) zu 4% formaldehyde an Ënnerbewosstsinn paraffin fest. All uplanzen sech duerch agebousst Diagnos bestätegt (de histopathological Diagnos ass op DÉI Critèrë baséieren). All experimentell Fäll waren exiléiert-géiert zu der International Union Géint Cancer entholl-Node-Metastasen (TNM) Stadium System (vun 2002 iwwerschafft) gruppéiert. VerfÜgung Immunohistochemistry VerfÜgung Véier-Micron-décke paraffin Sektiounen oder analyséiert fir PKM2, p-ERK1 /2 an E-cadherin Ausdrock vun immunohistochemistry; waren entweder mat hematoxylin an eosin (E H &) geschriwwen. Immunohistochemistry war no de Prozeduren gesuergt dass vun den Hiersteller recommandéiert goufen. D'Reaktioune waren benotzt diaminobenzidine als chromogenic Realitéiten visualized. D'Sektiounen sech counterstained hematoxylin benotzt an dann laanscht an Descher. Der mëttlerer Dicht (IOD /Gebitt) war an ënnerschiddleche positiven Beräicher vun de 15 mënschleche gastric Kriibs uplanzen benotzt Image-pro Plus Software fonnt. VerfÜgung statistique Analysen VerfÜgung statistique analyséiert goufen benotzt SPSS v13 gesuergt. 0 (SPSS Galaxy) Software. D'Onofhängeg-Echantillon T Test an Korrelatioun Analyse waren benotzt den Daten ze vergläichen. All Wäerter sinn wéi déi heescht ± Fils ausgedréckt. D'Ënnerscheeder waren statistesch relevant Betruecht P VerfÜgung &Si besteet;. 0,05 VerfÜgung Ausschöpfung vun PKM2 Opstig Zell Migratioun a Missiounen an BGC823 an SGC7901 BTS mat EGF Stimulatioun VerfÜgung den Ausdrock vun der PKM2 FAQ am gastric Kriibs Zell Linnen BGC823, SGC7901 an AGS war mat Western blot Analyse bewäert. Dës Zell Linnen zougedréckt engem héije Niveau vun PKM2 Ausdrock. Dunn, stabil gastric Kriibs Zell Linnen mat enger verännert PKM2 Ausdrock benotzt RNS Amëschen (PKM2 knockdown) an der BGC823 etabléiert, SGC7901 an AGS Zellen. Als zu Lalumi gewisen. 1A, déi BGC823, SGC7901 an AGS Zell Linnen mat PKM2 knockdown sech etabléiert. Mir gesinn, dass d'Verbreedung vun der BGC823 an AGS Zellen rofgaang war no PKM2 do war (Figebam. 1B). Des Resultater sinn am Accord mat virdrun Studien. VerfÜgung Fir d'Wierkung vun PKM2 op Zell Wanderung an Invasioun iwwerpréifen, mir geschafft gutt etabléiert Meter-Heelung a transwell assays der Zell motility Äntwert vun der BGC823 an SGC7901 Zellen ze Markenzeeche . A Spuenien wär futti vun Zellen war éischt Iwwernuechtung an mëttelgrouss, eng Null Meter agefouert incubated, mëttelfristeg déi gëeegent Portioun EGF (100 Dummeldéng /ml) wouvun ugebaut Migratioun ze stimuléieren, an de Prozentsaz vun Meter wier war no 24 h observéiert ( Figur S1). D'hypothetesch Zellen sech 36 h laachen no EGF (100 Dummeldéng /ml) war un der ënneschter Chambre notéiert. D'Resultater weisen, dass den Traitement vun BGC823-sipk an SGC7901-sipk Zellen mat EGF folgenden eng Null Meter an am transwell vill Quote vun Meter verkënnegt fräi (Figebam. 1 C, D) a Invasioun (Figebam. 1 E, F) Verglach mat deem vun der Kontroll Zellen. VerfÜgung Ausschöpfung vun PKM2 ofgeholl E-cadherin Expression an d'Aktivitéiten vun der EGF /EGFR afgerappt sécher Weeër GmbH-γ1 Geographie a ERK1 /2 VerfÜgung d'fir ermëttelen Mechanismus vun Ännerungen an Zell Wanderung an Invasioun no der knockdown vun PKM2, mir den Ausdrock vun de Membere vun der Ca analyséiert Den Niveau vun E-cadherin mRNA an der phosphorylation vun E-cadherin alles sech am BGC823 an SGC7901 Zellen mat PKM2 Ausschöpfung ze evaluéieren, ob de observéiert Ënnerscheed zu E-cadherin Ausdrock wiesselen, oder post-translationally opgetrueden. Mir observéiert der verwandelt-Regulatioun vun E-cadherin mRNA a fräi phosphorylation, déi de endocytosis vun E-cadherin, an PKM2-do ass Zellen (Figebam. 2A, B) induces. Mir hunn och, datt de Wëllen Niveau vun der N-cadherin FAQ an der Zell Linnen BGC823 an SGC7901 fräi war, wann PKM2 do war (Figebam. 2A). VerfÜgung Zell Wanderung an Invasioun sinn duerch EGFR Aktivitéit haaptsächlech reegelen. Ze analyséieren ob d'EGFR vun der Migratioun an Invasioun vun BGC823 Équipe ass an SGC7901 Zellen, goufen dës Zellen mat EGF behandelt, déi zu der EGFR Photo'en a activéiert der afgerappt sécher Weeër. D'EGF Behandlung schéinen am phosphorylation vun der EGFR an der nächster Aktivatioun vun der PLCγ1, AKT an ERK1 /2 Weeër (Figebam. 2C). Mir hu fonnt, datt GmbH γ1 engem héichen Niveau vun der Aktivitéit an PKM2-do ass Zellen hu wéi am UNO-do ass Zellen der entweder eng kuerz oder laang (24 h) incubation mat EGF. Allerdéngs war et kee Kennzeechen Ënnerscheed zu AKT Aktivitéit tëscht der PKM2-do ass Zellen an UNO-do ass Zellen. PLCγ ass e Schlëssel regulator vun Zell Migratioun afgerappt vun RTK sécher [11]. Phosphorylation op tyrosine Ermächtegung 783 vun PLCγ1 ass kritesch ze seng Aktivéierung [12]. PLCγ1 Aktivéierung Zell motility gestäerkt, an dësem Effet war an der Wonn Null an transwell assays observéiert, wéi zu Lalumi observéiert. 1c. VerfÜgung Mir propagéieren nächst den Effet vun enger EGFR ligand op den Ausdrock vun MMPs RT-Hinnen alleguer zu BGC823-sipk an SGC7901-sipk Zellen am Verglach mat hirer jeeweileger Kontroll Zellen benotzt. Behandlung mat der EGFR ligand, EGF, verstäerkt d'Expressioun vun MMPs um Niveau vun Transkriptiouns zu BGC823 an SGC7901 Zellen. Mä, do an der Ausdrock Niveau vun MMP2 an MMP9 tëscht PKM2-do ass Zellen an hir Kontroll Zellen (Donnéeën net gewisen) keng kloer Ënnerscheeder waren. MMP7 Ausdrock war bis-reglementéiert PKM2-do ass Zellen mat EGF Behandlung (Figebam. 2D). D'Erk /MAPK Weeër Leeschtung kritescher Rollen an EGFR ligand-entschlof MMP7 Ausdrock. Doriwwer eraus, war no 0 h an 24 h vu Behandlung mat EGF zu PKM2-do ass Zellen eng kloer Zounam vun ERK1 /2 Aktivitéit observéiert. VerfÜgung Ausschöpfung vun PKM2 Attenuated der Motility vun AGS BTS an de Fonctionnement Neierung der PKM2 wëll zu Gastric Cancer Zell zesummeféieren VerfÜgung den Ausdrock vun der FAQ E-cadherin an der gastric Kriibs Zell Linnen BGC823, SGC7901 an AGS war mat Western blot Analyse bewäert. D'BGC823 an SGC7901 Zell Linnen auszedrécken E-cadherin. Am Géigesaz, opgepasst AGS Zellen E-cadherin Ausdrock (Figebam. 3A). VerfÜgung Fir d'Wierkung vun PKM2 knockdown op Zell Wanderung an Invasioun an AGS Zellen iwwerpréifen, Employé mir gutt etabléiert Meter-Heelung a transwell assays ze der Zell motility Markenzeeche. A Spuenien wär futti vun Zellen war éischt Iwwernuechtung an mëttelgrouss, e gudde Meter Null incubated agefouert gouf, mëttelgrouss mat EGF (100 Dummeldéng /ml) war Migratioun ze stimuléieren derbäi, an de Prozentsaz vun Meter wier war no 24 h observéiert. D'hypothetesch Zellen am transwell assay goufen 24 h laachen no EGF (100 Dummeldéng /ml) war un der ënneschter Chambre notéiert. Fir eis iwwerraschen, fonnt mir dass den Traitement vun AGS-sipk Zellen mat EGF folgenden d'Wonn Null an an der transwell bedeitend d'Quote vun Meter wier an Invasioun erofgaangen am Verglach mat deem vun der Kontroll Zellen (Figebam. 3B, C). Et waren opfällegen Differenzen tëscht der BGC823 /SGC7901 an AGS Zellen. VerfÜgung weider Fir d'Roll vun PKM2 zu Zell motility Ganzt, hu mer de PKM2 Hijiri Experimenter. Mir taked Method stably transfected andems iwwer-Ausdrock plasmid Vecteure pcDNA6.0-mierkt an pcDNA6.0-PKM2 mat BGC823 an AGS Zellen ze këmmeren, déi stabil knockdown PKM2. Den Ausdrock vun p-EGFR, E-cadherin waren am PKM2 Hijiri Experimenter (Figebam. 3D) gewisen. Mir gesinn, dass wann d'PKM2 Ausdrock erholl, déi phosphorylation vun EGFR huet an BGC823 Zellen bedeitend reduzéiert a AGS Zellen fräi. Ausserdeem, war Zell motility vun BGC823 Zellen ofgeholl an AGS Zellen sech Fro no PKM2 Hijiri (Figebam. 3). Fir de Mechanismus vun dësen Differenze klären, analyséiert mir dann d'Aktivitéit vun der EGF /EGFR sécher Passerelle. VerfÜgung PKM2 Geographie d'Aktivitéiten vun der EGF /EGFR afgerappt sécher Weeër an AGS BTS an huet soll mat Erk Aktivitéit zu Gastric Cancer uplanzen VerfÜgung fir analyséieren ob d'EGFR kann an der Migratioun an Invasioun vun AGS Zellen Équipe ginn, waren dës Zellen mat EGF behandelt, déi zu der EGFR Photo'en a activéiert der afgerappt sécher Weeër. EGF Behandlung schéinen der phosphorylation vun der EGFR an der nächster Aktivatioun vun der afgerappt EGFR Weeër, dorënner de PLCγ1 an ERK1 /2 Weeër (Figebam. 4A). Mir hunn erausfonnt, datt d'Aktivitéite vun PLCγ1 an ERK1 /2 an Zellen grouss waren wou PKM2 net méi do war, wéi an de PKM2-do ass Zellen der entweder eng kuerz oder laang (24 h) incubation mat EGF. Dëst Resultat ass de Géigendeel vun deem wat mat der BGC823 an SGC7901 Zellen observéiert gouf; zu AGS Zellen, huet PKM2 an Leeschtung als Impulser a gefördert Zell Wanderung an Invasioun. Mir propagéieren nächst MMP7 Ausdrock benotzt RT-Hinnen alleguer zu AGS-sipk Zellen an der Kontroll Zellen. Behandlung mat EGF verstäerkte MMP7 Ausdrock um Niveau vun Transkriptiouns zu AGS-pu6 Zellen awer net zu AGS-sipk Zellen (Figebam. 4B). Der Aktivitéit vun ERK1 /2 war selbstverständlech méi héich an AGS-pu6 Zellen am Verglach mat AGS-sipk Zellen no 0 h an 24 h Behandlung mat EGF (Figebam. 4A). VerfÜgung Mir standing nächst immunohistochemical (IHC) Analysë fir E-cadherin Ausdrock, PKM2 Lokalisatioun an ERK1 /2 phosphorylation zu Serien Rubriken vun 15 Mënsch gastric Kriibs uplanzen antibodies mat validéiert Charakteristika wäerd benotzen. Figur 4C weist, datt de Niveau vun E-cadherin Ausdrock, ERK1 /2 phosphorylation, an cytoplasmic PKM2 Ausdrock mat all anere soll sech. Zousätzlech, observéiert mir engem héije Niveau vun ERK1 /2 phosphorylation am helle Kriibs Zellen ouni E-cadherin Ausdrock. An Beräicher vun ERK1 /2 phosphorylation, mir hunn och méi héich Niveauen vun PKM2 Ausdrock. Allerdéngs hu mir net d'phosphorylation vun ERK1 /2 an Beräicher positiv fir E-cadherin Ausdrock (Figebam. 4C) fannen. A Korrelatioun Analyse ënnert PKM2, E-cadherin a P-ERK1 /2 war mat Image-pro Plus Software gesuergt (Figebam. 4D). Der mëttlerer Dicht (IOD /Gebitt) war an ënnerschiddleche positiven Beräicher vun 15 Mënsch gastric Kriibs uplanzen opgeholl. Mir hunn e bedeitend Korrelatioun tëscht PKM2 an E-cadherin zu E-cadherin-positiv Beräicher. Ausserdem, huet et e wesentlechen Korrelatioun tëscht PKM2 a p-ERK1 /2 an E-cadherin-negativ Beräicher. VerfÜgung D'invasiv an metastatic Etapp vun Kriibs Werdegang mat aarmséileg Medeziner hätt deemolegt Weltbild a stellt déi formidabele Barrière fir erfollegräich Behandlung. Zell motility an invasiveness sinn der Definitioun Charakteristiken vun malignant erhéijen, déi entholl Zellen aktivéiert an bascht Stoffer zu opgeholl oder duerch Schläimhait an extracellular matrices Keller lagert. Zell motility ass fir d'Fro gestallt Prozesser vun enger Reparatur a organogenesis a fir d'agebousst Prozess vun entholl Invasioun néideg [13]. Invasiv entholl Zelle vun dysregulated Zell motility an Äntwert ze extracellular Signaler vum Wuesstem Facteuren an cytokines charakteriséiert. Mënsch erhéijen auszedrécken héich Niveaue vu Wuesstem Facteuren an hir kenne, a vill Zorte vun malignant Zellen schéngen autocrine- oder paracrine-stimuléiert Wuesstem zu Collectioun. Ënnert de räichste-studéiert Wuesstem Faktor receptor Systemer ass den EGF receptor Famill [14]. Signaler vun der extracellular MILIEU Alimentatioun Zell motility. Vill Wuesstem Faktoren, dorënner de ligands datt duerch d'epidermal Wuesstem Faktor receptor (EGFR) Akt, Zell motility revaloriséiert [15]. Op d'mannst zwou verschidde intracellular sécher Weeër gi fir EGFR-mediated Zell motility néideg: de Curriculum schreiwen GmbH γ an de MAP kinase Passerelle. GmbH γ Aktivitéit gouf proposéiert Zell motility duerch d'Mobiliséierung vun actin-verbidden Proteinen aus enger Aarbechtslosegkeet Membran-verbonne Lokalisatioun an eng aktiv sub-Membran cytoskeletal locale ze verbesseren [16]. D'Erk MAP kinases Reih Signaler un den helle souwéi Signaler dass Zell-Matrixentgasung Verbindungen regléieren. VerfÜgung Cadherins besteet aus enger grousser Famill vun Zell-Zell Haftung Molekülle déi klassesch, desmosomal, an atypical cadherins gehéiert. E-cadherin, déi virun allem zu epithelial Zellen ausgedréckt ass, ass eng Haftung FAQ datt duerch d'CDH1 Gentherapie a Fonctioun vun der Pluralitéit Prozesser, dorënner Entwécklung, Otemschwieregkeeten Integritéit, Zell Migratioun, Wirklechkeet, an Polaritéit [17], [18] encoded ass, [19]. E-cadherin ass och eng entholl suppressor deem Ausdrock gëtt dacks reduzéiert oder entsat, a seng nei-Ausdrock kann morphologic puer induce [20], [21]. D'EGF-ofhängeg Aktivatioun vun der EGFR huet gemellt ginn an eng E-cadherin Haftung-ofhängeg Manéier inhibited ze ginn, déi d'ligand-ofhängeg Aktivéierungscode vu verschiddenste receptor tyrosine kinases bremst. N-cadherin, wéi eng Invasioun Promoteur, ass dacks upregulated. Den Ausdrock vun der N-cadherin zu epithelial Zellen induces Ännerungen an Wirklechkeet op engem fibroblastic phenotype, d'Zellen méi motile an invasiv Stëmmung. Rezent Studien weisen, datt Kriibs Zellen hunn an-reegelen N-cadherin zousätzlech zu de Verloscht vun E-cadherin. Dës Ännerung am cadherin Ausdrock ass de "cadherin Knäppche" genannt. VerfÜgung Mir observéiert engem Ugrëff-Regulatioun vun E-cadherin mRNA a fräi phosphorylation, déi de endocytosis vun E-cadherin induces, an PKM2-do ass Zellen. Mir hunn och, datt der N-cadherin FAQ Ausdrock Niveau vun der BGC823 Zell Zeil fräi war, wann PKM2 méi do war. D'knockdown vun PKM2 gefördert Zell Wanderung an Invasioun an BGC823 an SGC7901 Zellen mat EGF Stimulatioun. Eng verstäerkten Aktivitéit vun der EGFR ass de kriteschen Faktor an der Zell motility an invasiveness vun BGC823 an SGC7901 Zellen bestëmmend. Mir Hypothes, datt den Ugrëff-Regulatioun vun E-cadherin Ausdrock der phosphorylation vun der EGFR gestäerkt a ageschalt der afgerappt sécher Weeër, déi PLCγ1 an ERK1 /2 gehéieren. GmbH γ Aktivéierung verbessert Zell motility, an ERK1 /2 Aktivitéit spillt enger kritescher Roll an MMP7 Ausdrock. VerfÜgung MATRIX metalloproteinases (MMPs) hunn zu Kriibs Invasioun an Metastasen wéinst hirer extracellular Matrixentgasung (ECM) -proteolytic Aktivitéit agebonne ginn [22]. MMP-7 ass gemellt ginn duerch gastric carcinoma Zellen produzéiert gin an ass vill mat der aggressiv agebousst phenotypes vun gastric Kriibs [23] assoziéiert. MMP-7 kann pro-MMP-1 aktivéieren, huet staark stromelysin-wëll Aktivitéit an degrades insoluble elastin, Typ IV collagen, laminin-1, fibronectin, proteoglycan an gelatins [24]. D'Erk /MAPK Weeër Leeschtung kritescher Rollen an EGF-entschlof MMP7 Ausdrock [25]. VerfÜgung E-cadherin ass eng Zell-Haftung glycoprotein fir d'éischte Kéier an mënschlechen Zell Verse Shimoyama et al charakteriséiert [26]. Hir Roll an der Entwécklung gastric Kriibs éischte vun Guilford et al [27] definéiert. Et ass e wesentleche Korrelatioun tëschent den Ofschloss vum E-cadherin Ausdrock an der Schouljoer vun entholl dat, wéi och d'histological Typ no dem Lauren an der DÉI Klassifikatiounen duerchzeféieren. Patienten mat E-cadherin-positiv erhéijen hunn vill besser 3- a 5-Joer Iwwerliewe Tariffer wéi Patienten mat E-cadherin-negativ erhéijen [28]. Ierfgroussherzog diffusen gastric Kriibs (HDGC) ass eng rar autosomal dominant Syndrom datt däitlech zum Deel bis germline kennen an geläscht an der CDH1 Gentherapie ass mat eng fréi agesat assoziéiert, histologically diffusen, signet-Ring Zell Typ gastric Kriibs [29], [30]. VerfÜgung Lim JY et al gemellt dass PKM2 Ausdrock staark mat gastric Kriibs dat soll war. Ënnerscheet Zorte vun Cancers auszedrécken méi PKM2 FAQ wéi d'Strenz Zorte; am Géigesaz, ass méi héich PKM2 Ausdrock mat kuerz globale Iwwerliewe onofhängeg vun Etapp zu signet-Ring Zell Cancers soll. PKM2 Ausdrock kéint en Apdikter prognostic Faktor fir signet-Ring Zell carcinomas ginn, déi E-cadherin Manktem [7]. Des Resultater sinn am Aklang mat eisem Fuerschung zu gastric Kriibs Zellen. D'BGC-823, SGC-7901 an AGS Zell Leitungen anescht ënnerscheet Typen. E-cadherin Ausdrock existéiert an der SGC-7901 an BGC-823 Zell Linnen; am Géigesaz, huet de AGS Zellen aus malignant gastric adenocarcinoma Otemschwieregkeeten an Mangel E-cadherin-mediated Zell Haftung [31] ofgeleet. Mir gesinn, datt den knockdown vun PKM2 der Migratioun an Invasioun vun der SGC-7901 an BGC-823 Zell Linnen gefördert mä dës Eegeschafte vun der AGS Zell Linn opgeléist. Anere Grupp huet matgedeelt, dass pyruvate kinase Typ M2 zu colorectal Kriibs upregulated ass, an der knockdown vun PKM2 Trupen dem Prolifératioun a Migratioun vun Colon Kriibs RKO Zellen [32]. Mir wëssen, datt RKO Zellen feelen dem Wëllen vun E-cadherin [33]. Immunohistochemical (IHC) Analys weist, datt de Niveau vun E-cadherin Ausdrock, ERK1 /2 phosphorylation, an cytoplasmic PKM2 Ausdrock mat all anere soll sech. Mir hunn en héijen Niveau vun ERK1 /2 phosphorylation am helle Kriibs Zellen ouni E-cadherin Ausdrock mä mat engem héijen Niveau vun PKM2 Ausdrock. VerfÜgung Mir hypothesize datt PKM2 Zell motility an Invasioun attenuates wou E-cadherin ass presentéieren. Dëse Roman Funktioun vun PKM2 vläicht eng Roll an der Reversibelen inhibition vun Zell motility an Invasioun an de Grondsteen vun gastric Kriibs Leeschtung wann Zellen fir Ausdrock E-cadherin positiv sinn. Während de Werdegang vun der entholl, e Mangel u oder Héich Ausdrock vu E-cadherin induces eng aggressiv Funktioun vun PKM2 an der entholl. Der biologescher Roll vun PKM2 an der Entwécklung vun dëse erhéijen muss weider opgekläert ginn. VerfÜgung Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
Ennerstëtzung Informatiounen VerfÜgung Dorënner S1. VerfÜgung Den Ausdrock vun der EGFR FAQ am gastric Kriibs Zell Linnen BGC823, SGC7901 an AGS war mat Western blot Analyse bewäert. AGS Zellen duerch eng héich Niveau vun EGFR Ausdrock wéi déi aner zwee Zell Linnen. Et ass keen groussen Ënnerscheed tëscht BGC823 an SGC7901 Zellen (Dorënner S1A). BGC-pu6 Zellen an BGC-sipk Zellen sech mat verschidde Schrëtt vun EGF behandelt. No 40 Minutte konnt nogewise mir den Niveau vun phosphorylation fir EGFR. Mir hunn déi héchsten Niveau vun phosphorylation am Portioun 100ng /ml (Dorënner S1B). Dofir kucke mer d'Portioun 100ng /ml wéi déi gëeegent Kandidat. D'transwell Experimenter weisen och déi méi staark Géigner de martrigel zu BGC823 Zellen (Dorënner S1C) VerfÜgung Doi zu Lëtzebuerg ageréckt:. 10,1371 /journal.pone.0067542.s001 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung
Neie Modell fir vaginale Mikrobiomtransplantatioun
Heartburn verstoen
Bluttest fir mikrobiell DNA kéint vu Kriibs warnen
Mathematesche Modell weist de Risiko vun der SARS-CoV-2 Infektioun no fecaler Mikrobiota Transplantatioun op
Wéi stäerkt Dir Ären Immunsystem fir de Coronavirus ze bekämpfen
Esophageal Kriibs Risiko ka reduzéiert ginn duerch Esomeprazol an enger gerénger Dosis Aspirin
Wéi hëllefen Hostfaktoren wéi de Lungemikrobiom bei der SARS -CoV -2 Infektioun?
Schwéier akut respiratorescht Syndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) ass en RNA Virus deen zu der Coronaviridae Gatt an der Betacoronavirus Subgenus gehéiert. Et ass de Roman an héich ustiechende Pathogen
Neigebuerene Mausmodell ergëtt Hiweiser fir d'Ursaach vun enger zerstéierender Darmkrankheet an anemesche Preemien
Dokteren hunn laang de Verdacht datt rout Bluttzelltransfusiounen, déi virzäiteg Puppelcher mat Anämie ginn, se a Gefor bréngen fir nekrotiséierend Enterocolitis zentwéckelen, oder NEC, eng potenziell
Staark Mikrobiom am fréie Liewen verbonne mat manner Atmungsinfektiounen
Et gi Kolonien vu mikroskopesche Bakterien a verschiddenen Deeler vum mënschleche Kierper inklusiv der Nues, Mond, Darm, a Longen. Zesummen, dës Bakterien si bekannt als de Mikrobiota vum Kierper. S