Stomach Health > skrandžio sveikatos >  > Gastric Cancer > skrandžio vėžys

PLoS ONE: Exosomal miRNAs iš pilvaplėvės plovimas Skysčių kaip potencialūs prognostiniai biologinių žymenų peritoninės metastazių skrandžio Cancer

Anotacija

peritoninė metastazės yra dažniausia tipo pasikartojimo pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu (GC) ir yra susijęs su prasta prognozė. Pilvaplėvės plovimas citologija, naudojamas įvertinti peritoninės metastazių riziką, turi mažą jautrumą. Čia mes įvertino diagnostikos galimybes exosomal Mirna profilių pilvaplėvės skystyje už pilvaplėvės sklaidos GC prognozavimas. Iš viso RNR buvo išskirta iš exosomes išskirtų iš šešių skrandžio piktybinių ascitu (MA) mėginių, 24 pilvaplėvės plovimas skystis (PIF) mėginius ir kultūros nuopile (cm) dviejų žmogaus skrandžio karcinoma ląstelių linijų, kurios skiriasi savo potencialą peritoninės metastazių. Išraiška exosomal miRNAs buvo įvertintas "Agilent Žmogaus Mirna mikrogardelių IR KIEKYBINĖ atvirkštinės transkripcijos polimerazės grandininė reakcija (KRL-PGR). Mikrogardeliq analizė parodė mažą kintamumą numerį ir signalo intensyvumo aptiktų tarp mėginių miRNAs. Per šešis MA skysčiai, PPN-21 parodė didžiausią signalo intensyvumą. Mes nustatė penkis miRNAs (MIR-1225-5p, PPN-320C, PPN-1202, PPN-1207-5p ir Pasaulis-4270) su aukštos raiškos MA mėginių, iš serosa invazinės GC PIF, ir sukurti CM labai metastazavusiu GC ląstelių linija; pasirodo šios kandidatės Mirna rūšys gali būti susijusi su pilvaplėvės sklaidos. Skirtumas išraiška miR-21, PPN-320C ir miR-1225-5p buvo patvirtintas atsižvelgiant į serosa invazinės ir neinvazinės GC PIF atliekant KRL-PGR ir miR-21 ir buvo miR-1225-5p patvirtino būti susijęs su serosal invazijos GC. PIF gali būti naudojamas profilis su exosomal miRNAs išraiška. Mūsų rezultatai rodo, kad Pasaulis-21 ir Pasaulis-1225-5p gali tarnauti kaip biologinių žymenų peritoninės pasikartos po radikalių GC rezekcija, tokiu būdu suteikiant novatorišką požiūrį į ankstyvos diagnostikos peritoninės sklaidos GC

nurodomoji dalis:. Tokuhisa M Ichikawa Y Kosaka N Ochiya T Yashiro, M, Hirakawa K et al., (2015) Exosomal miRNAs iš pilvaplėvės plovimas Skysčių kaip potencialūs prognostiniai biologinių žymenų peritoninės metastazių skrandžio vėžio. PLoS ONE 10 (7): e0130472. Doi: 10,1371 /journal.pone.0130472

redaktorius: Soheil S. Dadras universiteto Konektikuto sveikatos centras, JAV

Įstojo: Vasario 1, 2015; Priėmė: Gegužės 20, 2015 m Paskelbta 24 Liepos 2015

Visos teisės saugomos: © 2015 Tokuhisa et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų Prieinamumas: Visi susiję duomenys yra per popieriaus

finansavimas:.. autoriai neturi paramą ar finansavimą pranešti

konkuruojančių interesų. autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

mikro RNR (miRNAs) yra mažas (19-23 nukleotidai) ne kodavimo RNR, kurios veikia kaip po transkripcijos reguliatoriai genų ekspresiją ir vaidina svarbų vaidmenį daugelio biologinių procesų, įskaitant ląstelių diferenciacijos, dauginimosi kontrolės ir apoptozę [1]. MiRNAs buvo įrodyta, kad onkogeninio arba naviko slopina aktyvumą, ir nereguliuojama išraiška daugelio Mirna rūšių buvo aptikta keletą vėžio, tai rodo galimą taikymą miRNAs kaip biologinių žymenų vėžio progresavimo ir metastazių [2-5].

miRNAs suvynioti sekrecijos microvesicles (pvz exosomes, apoptozinių Institucijos ir barsto microvesicles), kuris skydas miRNAs nuo blogėjimo RNaze ir tarnauja kaip transporto priemonių Mirna sekrecijos į ekstraląsteliniuose erdvės ir kūno skysčiuose. Exosomes yra maži membraninis pūslelės, kad buvo susijęs ląstelinį imuninį atsaką; Tačiau pastaruoju metu tapo akivaizdu, kad exosomes yra dideles sumas RNR ir gali būti įtraukti į imuninių nepriklausomas reguliavimo mechanizmus. Tai dabar jau nustatyta, kad exosomes gali atlikti tarpląstelinį perdavimo miRNAs, todėl dalyvauja Mirna pagrindu signalinių mechanizmų [6]. Aukštesnio lygio mirna, kurių sudėtyje yra exosomes taip pat buvo aptikta vėžiu sergantiems pacientams plazmos nei tuo, kad sveikų asmenų [7], o tai rodo, kad Egzosoma pagrindu mirna sekrecijos dalyvauja vėžio išsivystymo. Analizė nukrypusiu nuo normos Mirna raiškos serume, seilių, išmatų ir šlapimo dirbo už ankstyvam B ląstelių limfoma, ir žodžiu, žarnyno ir šlapimo pūslės vėžio [8-11].

Skrandžio vėžys (GC) yra antra labiausiai paplitusi priežastis, dėl vėžio susijusių mirties visame pasaulyje [12]. Pilvaplėvės yra dažniausias svetainė metastazių ir pasikartojimo GC ir piktybinių ascitu (MA), kurią sukelia peritoninės sklaidos vėžinių ląstelių, kurie yra susiję su blogos prognozės. Šiuo metu nėra patikimų prognozuoti, dėl piktybinių pilvaplėvės ascitas plėtros GC pacientams. Mirna turinčių exosomes atstovauti romaną mechanizmą tarpląstelinės signalizacijos ir gali duoti įžvalgas į aplinką, kuri leidžia vėžio sklaidą pilvaplėvės [13].

Šiame tyrime exosomes buvo izoliuotas nuo MA ir operacijos metu pilvaplėvės lavažo skysčio (PIF) bandiniai, pagaminti iš GC, pacientai ir mitybinės terpės (cm) labai invazinių pilvaplėvės ląstelių linijų ir miRNAs tada buvo paimti iš šių pavyzdžių. buvo patikrinta išskirtus exosomal miRNAs kokybė ir Mirna išraiškos būdus nuoseklumas. Mirna ekspresijos profilius MA, PIF ir CM mėginių buvo palyginti ir buvo nustatyti kandidačių miRNAs susiję su pilvaplėvės sklaidos GC.

Medžiagos ir metodai

Pacientai

Visi pacientai, arba jų globėjai, jeigu raštišką sutikimą. Tyrimas patvirtino Etikos komiteto Jokohamos miesto universitetinė ligoninė (patvirtinimo Nr A110127001).

MA ir Intraoperacinių PIF mėginiai buvo imami iš GC pacientams, sergantiems pateikta 1 lentelė klinikos ypatybes Visi pacientai anksčiau buvo diagnozuota GC iki histopatologiniams analizės biopsijos mėginių, paimtų iš pirminių pažeidimų, ir šešių MA pacientams buvo diagnozuotas dėl ascito akivaizdoje pilvo kompiuterinė tomografija (CT) nuskaitymas. Ascitas taip pat buvo analizuojami Citologija ir visi buvo patvirtintas teigiamas piktybinių navikų pagal patologai; likusios MA mėginiai buvo naudojamas Mirna atskirai. PIF buvo intraoperatively surinkti iš 24 GC pacientų (1 lentelė). Po to, kai laparotomija, 100 ml izotoninio natrio chlorido tirpalo buvo pilamas į Douglas maišelis ir pilvaplėvės plovimas vandens buvo surinkta iki pašalinus chirurgine rezekcija, naviko. PIF buvo analizuojami citologija ir naudojama Mirna atskirai. Tarp 24 PIF pavyzdžių, šeši buvo tiriami naudojant Mirna mikrogardeliq ir 18 buvo analizuojami qPCR.

Mobilusis kultūra

OCUM-2M ląstelių linija buvo įkurta nuo pirminio auglio Tarpikliai skrandžio karcinoma, OCUM-2MD3 ląstelių linija buvo kilęs iš OCUM-2M ląstelių su dideliu potencialu peritoninės sklaidos nuogas pelių [14]. Ląstelės buvo auginamos Dulbecco modifikuota Eagle terpėje (DMEM; Life "technologijas, Grand Island, NY), papildytoje su 10% šilumos-inaktyvuota vaisiaus galvijų serumo (FBS) ir antibiotiko-priešgrybelinis 37 ° C temperatūroje, 5% CO 2 inkubatorius. Gauti ląstelių CM, OCUM-2M ir OCUM-2MD3 ląstelės buvo tris kartus plaunamos DMEM serumo neturinčioje, papildytoje antibiotikas-priešgrybelinį preparatą ir inkubuojami toje pačioje laikmenoje už 48 h.

išskyrimas exosomes

Mėginiai Egzosoma poliuretanu, paruoštą kaip aprašyta anksčiau [15]. Norėdami pašalinti didelių ląstelių dalelės ir ląstelių nuolaužų, MA, PIF ir CM buvo centrifuguojamas 2000 × G
15 min, esant 4 ° C ir filtruojamas per 0,22-mikronų filtru (Millipore, BILLERICA, MA). Supernatantas buvo laikomi -80 ° C temperatūroje, kol reikalingas mirna ekstrahuojant.

Jei nusodinti exosomes, mėginiai buvo centrifuguojamas 110,000 × "g
70 min, esant 4 ° C temperatūroje. Egzosoma granulių plautas 11 ml fosfatinio buferio druskų tirpalo (PBS) ir vėl centrifuguojamas, kaip aprašyta. Granulių buvo naudojamas RNR gavyba.

Iš viso RNR gavyba ir analizė

Viso RNR buvo išskirta iš exosomes, naudojant miRNeasy mini rinkinys (Qiagen, Hilden, Vokietija) pagal gamintojo nurodymus ir buvo tada saugomi -80 ° C iki reikiamo tolesnei analizei.

kokybės, koncentracija, ir dydis visų exosomal RNR buvo vertinami naudojant "Agilent Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies Foster City ĮA). Prieš analizę, RNR buvo parengta naudojant "Agilent RNR 6000 Pico rinkinį (Agilent Technologies) pagal gamintojo protokolą.

Mirna Mikrogardelė

miRNAs išgauti iš šešių MA, šešių PIF, ir du CM mėginiai buvo analizuojami naudojant AGILENT žmogaus Mirna mikrogardelių (Agilent Technologies), kurių sudėtyje yra 1226 žmonių miRNAs ir 146 žmonių virusinėmis miRNAs. Dėl Mirna aptikimo, 100 ng RNR buvo paženklintas ir hibridizuotas naudojant žmogaus Mirna mikrogardeliq rinkinį (Rel 16,0; Agilent Technologies) pagal gamintojo protokolu (Mirna Pilnas ženklinimas ir mišr rinkinys Mirna mikrogardeliq sistema). Hibridizacijos signalai buvo aptikti su DNR mikrogardeliq Skeneriai G2505C (Agilent Technologies) ir atvaizdų buvo analizuojami naudojant AGILENT požymių išskyrimas Programinė įranga (10.7.3.1 eil.). Duomenų analizė atlikta naudojant "Agilent GeneSpring GX programinės įrangos v. 11.0.2. (Log 2 transformacija). Pradinė transformacija nebuvo atlikta.

iš Mirna gavybos kokybė buvo analizuojami pagal atsižvelgiant į microarray aptikta Mirna rūšių skaičius kintamumo, signalo intensyvumą, o Mirna išraiškos koreliacija tarp mėginių pagal vidurkis ± SD, variacijos koeficientas (CV) ir koreliacijos koeficientas (CK).

atrankos peritoninės metastazės konkrečių miRNAs

ekspresijos profilius exosomal miRNAs buvo analizuojami pasirinkti miRNAs, kurie yra būdingi GC pilvaplėvės sklaida naudojant šią laipsniškas. 1 žingsnis: Mirna profiliai į labai metastazavusiu pilvaplėvės OCUM-2MD3 ląstelių CM buvo lyginamas su tėvų nemetastazavusį OCUM-2M ląstelių, ir skirtingai išreikšti miRNAs (vidutinis kartų kaitos, > 2) buvo atrinkti <. Br>

"2 žingsnis: šeši PIF mėginiai buvo suskirstyti į dvi grupes: T4 (n = 4), T1-T3 (n = 2), pagal vėžio stadijos pagal naviko dydis ir pratęsimo (UICC-AJCC, 7 -asis leidimas). Etapas T4 GC būdinga tai, kad aukščiausios dažnių peritoninės metastazių, lyginant su kitais etapais [16]. Į Mirna ekspresijos profilius T4 grupės buvo lyginamos su T1-T3 grupės ir diferencijuotai išreikštų miRNAs (vidutinis kartų kaitos, > 2) buvo atrinkti

3 žingsnis:. Atrinktos miRNAs, kad buvo bendra abu žingsniai ir kad buvo išreikšta MA buvo toliau filtruojamas pagal signalo intensyvumo. Tie, kurie intensyvumo verčių daugiau nei žurnale 2 10 MA ir PIF buvo pasirinktas kaip kandidačių miRNAs susijusių su pilvaplėvės metastazių; Pasaulis-21 parodė didžiausią vidutinį signalo intensyvumą tarp MA pavyzdžius. Diferencialas išraiška Mirna rūšių 3 žingsnyje pasirinkote buvo patvirtintas likusių 18 PIF mėginių KRL-PGR.

kiekybinė analizė peritoninės metastazių konkrečių Mirna išraiškos KRL-PGR pervežimas

TaqMan MicroRNA tyrimai (Life technologies ") buvo naudojami kiekybiškai santykinius raiškos lygį PPN-21 (bandymo ID. 000397), PPN-320c (tyrimas 241053_mat ID.), PPN-1225-5p (tyrimas ID. 002.764), o Pasaulis-16 (000.391 tyrimas ID.). Atvirkštinės transkripcijos atlikta naudojant TaqMan Mirna RT rinkinį (Life Technologies) tokiomis sąlygomis: 30 min esant 16 ° C, 30 min 42 ° C, o 5 min 85 ° C temperatūroje. PGR buvo atliekama 96-duobučių lėkštelėse, naudojant 7500 realaus laiko PGR sistema (Life Technologies); visi reakcijos buvo pakartotas tris kartus. Ekspresijos lygis tikslinių miRNAs buvo standartizuoti, kad miR-16, kuris buvo naudojamas kaip stabiliai išreikštą kontrolės [17]. Analizuojant mūsų microarray duomenis exosomal Mirna į Piktybinis ascitas pavyzdžių, PPN-16 pristatė mažiausią variacijos koeficientą (CV = 4%) tarp kandidačių vidaus standartus, įskaitant miR-638 (CV = 8%), tegul-7a (CV = 8%), o 142-3p (CV = 23%).

Statistinė analizė

Nuolatiniai kintamieji buvo palyginti naudojant Stjudento , T
-test. Jei reikia, T
-test buvo pakeista palyginti nevienodas skirtingos. Skirtumas tarp kategorinių kintamųjų buvo įvertintas naudojant Fisher'io testą. Koreliacija tarp dviejų kintamųjų buvo įvertintas naudojant Pearson koreliacijos koeficientą. Skirtumai buvo laikomi statistiškai reikšmingi, kai p < 0,05. Statistinė duomenų analizė atlikta naudojant SPSS 21.0 programinę įrangą "Windows" (IBM, Armonk, NY).

Rezultatai

kiekybinė analizė išgauti exosomal RNR

Viso RNR buvo išskirta iš exosomes izoliuotų nuo MA, operacijos metu PIF ir ląstelių CM. Vidutinė koncentracija išgautų exosomal RNR buvo 4,4 ng /mikrol (svyruoja nuo 1,2 iki 6,1 ng /pl) už MA ir 6,4 ng /mikrol (nuo 1,7 iki 16,4 ng /pl) už PIF. Electropherograms atskleidė didelę dabartinių visose cm ir klinikinių mėginių mažų RNR rūšių, o ne arba labai mažai tarša 18S ir 28S ribosomų RNR (NO skirtingų viršūnių atitinkamu molekulinės masės) buvo pastebėtas (1 pav).

atlikimas Mirna mikrogardelių

išbandyti exosomal Mirna mikrogardelių išraišką kiekvienoje mėginių grupės, mes išnagrinėjo aptiktų miRNAs numerį, procentinė dalis signalo intensyvumą, dažniausiai užfiksuoti miRNAs skaičių, o koreliacija Mirna išraiška tarp grupių. Aptiktų kiekvienam pagal microarray grupės Mirna rūšių numeriai yra parodyta pav 2. šešių MA ir šešių PIF pavyzdžių, tai reiškia, numeriai buvo 490,1 (SN = 42,3; CV = 8,6%) ir 367,5 (SN = 13,4; CV = 3,6%), atitinkamai. Kiekvienoje grupėje, į aptiktų miRNAs tarp mėginių skaičiaus kitimas buvo mažas

signalo intensyvumo pasiskirstymas kiekvienai grupei yra pateikta 3 pav.; Tai rodo, kad perdirbtų signalus standartizuoti 25, 50, 75, ir 90 -asis procentilis kiekvienoje grupėje. Be 50 -asis procentilis, žurnalo 2 santykiniai signalo intensyvumas MA (Figos 3-1) ir PIF (pav 3 ir 2) pavyzdžių ir tarp trijų grupių (MA, PIF ir CM, figos 3 ir 4) buvo 5,53 ± 0,19 (PI = 3.49%), 6,14 ± 0,24 (PI = 3.87%), ir 4,97 ± SD (CV = 5.24%), atitinkamai. Signalinių intensyvumo tarp kiekvienos grupės mėginių, taip pat tarp grupių kintamumas buvo mažas.

apie miRNAs numeriai bendri tarp ma, PIF ir CM grupių mėginių buvo 327, 263, ir 354 , atitinkamai, kadangi tai buvo 194 už tris grupes (4 pav).

2 lentelė rodo Mirna raiškos sąsajas kas du pavyzdžius. Didžiausias ir mažiausias CC vertės buvo 0,94 ir 0,68, atitinkamai; vidutinė CC visų mėginių buvo 0,79 (PI = 8.86%). Ma, PIF ir CM grupių, vidutinis CC vertės buvo 0,85, 0.88 ir 0,90, atitinkamai, ir kintami ekspresijos profilius kiekvienos grupės buvo mažos.

atrinkimas miRNAs susijusių su pilvaplėvės sklaidos

iki šiol jokių duomenų buvo galima dėl išraiškos profilių exosomal miRNAs, susijusių su pilvaplėvės sklaidos, nes normaliomis ascitic skysčių prieš kurį palyginti MA raiškos profilius nebuvimu. Mes pasirinkome miRNAs susijusius su pilvaplėvės sklaidos naudojant laipsniškas. Iš miRNAs dažniausiai fiksuojami šešių MA mėginių skaičius buvo 327. 1 ir 2 veiksmus, 140 ir 118 metastazės konkrečių miRNAs atrinkti CM ir PIF grupes, atitinkamai. Iš šių 327, 140 ir 118 miRNAs penki miRNAs buvo atrinkti kandidatais, susijusių su pilvaplėvės sklaidos taisykles (5 pav). Du iš jų (MIR-1225-5p ir Pasaulis-320c) ir Pasaulis-21 su aukščiausios signalo intensyvumo tarp MA-specifinis miRNAs buvo pripažįstamos kaip yra skirtingai išreikšta 18 PIF mėginių, naudojant qPCR (3 lentelė).

įteisinimas kandidatės Mirna išraiškos qPCR

Aštuoniolika PIF mėginiai buvo suskirstyti į dvi grupes pagal metastazavusiu etape, T4 (perforuota serosa n = 9), T1-T3 (subserosa ar mažiau, n = 9), ir miR-21, miR-320C, ir miR-1225-5p išraiška buvo analizuojamos atliekant KRL-PGR. 5 pav rodo, kad PPN-21 ir miR-1225-5p lygiai T4 stadijos GC pacientų buvo gerokai padidėjo, palyginti su tų, T1-T3 pacientai (MIR-21, p = 0,027, o Pasaulis-1225-5p, p = 0,008; 5 pav). Į Pasaulis-320C išraiška skirtumas tarp dviejų pacientų grupių nebuvo reikšmingas (p = 0,928, pav 6).

Be to, tarp Mirna lygius ir klinikinės fone GC pacientų koreliacija buvo ištirta (4 lentelė). MIR-21 ir Pasaulis-1225-5p išraiška buvo žymiai didesnis pacientams, T4 stadijos vėžiu nei ta, T1-T3 stadijos pacientų (p = 0,015). Nėra reikšminga koreliacija buvo nustatyta tarp Mirna saviraiškos ir kitų klinikinių parametrų.

Diskusijos

Šiame tyrime mes ištirti, už pirmą kartą, Mirna turinys exosomes išskirtų iš MA ir PIF GC pacientai. Mūsų tyrimas rodo, kad exosomal miRNAs gali būti nuosekliai išgaunamas iš MA ir PIF ir kad Mirna ekspresijos profilius galite nurodyti pilvaplėvės GC pacientų būklę.

GC prognozė su serosal invazijos išlieka prasta net po R0 rezekcijos, nes iš dideliu greičiu pasikartojimo, ypač pilvaplėvės metastazių (MM) [18]. PM GC yra labiausiai sudėtingas tipas pasikartojimo, nes ji yra sunku prognozuoti, taip pat diagnozuoti. Nors ascitas yra labiausiai paplitusi PM simptomas, daugelis GC pacientams, sergantiems PM neišauga ascitas. Tarp vaizdo pagrįstos diagnostikos metodų, didelės spartos spiralės KT yra plačiai naudojami Priešoperacinės sustojimo GC ir po terapinio tolesnių vertinimo; Tačiau, atsižvelgiant į PM jeigu jo diagnostikos tikslumas nepakankamas, daugiausia dėl mažo jautrumo [19]. Naudojant PET-CT PM diagnozę GC yra prieštaringas, nes buvo pranešta, kad FDG-PET, turi prasta jautrumą aptikti val GC [20]. PIF tapo Kitas tikslas diagnozuoti ir prognozuoti PM GC. Citologinis tyrimas iš intraoperatively surinkta PIF naudojamas peritoninės pasikartojimo [21] prognozavimas ir yra naudojamas GC pastatymų Japonija [22]. Tačiau, kai kurie tyrėjai pranešė, kad PIF citologija nėra eksponuoti jautrumą, reikalingą prognozavimo ir aptikimo PM [21], ir pasiūlė molekulinių diagnostikos metodais, pavyzdžiui, RT-PGR galima naudoti, mikro-metastazių aptikti PIF. Be Multicentriniame perspektyvų studiją, iRNR raiška genų, koduojančių karcinoembrioninius antigeno (CEA) ir citokeratino 20 (CK-20) įvertintą RT-PCR, įrodė, kad yra naudinga bendro išgyvenamumo ir PM prognozavimas GC [23] , Tačiau, nustatant mRNR pagrindu diagnostinių metodų trūkumas yra tai, aukštos suirimas mRNR chirurginių procedūrų metu.

Priešingai, miRNAs, esantys tarp exosomes likti stabili, ir gali judėti kūno skysčiuose, pavyzdžiui, serumo, plazmos , seilių, šlapimo, motinos pienas, ir ašaros, ir ilgą laiką [24, 25]; exosomes taip pat buvo išskirtas iš MA kiaušidžių vėžio [26].

Kiek mums žinoma, nebuvo ataskaita apie exosomal miRNAs izoliuotas nuo GC pacientų PIF. Levänen ir kt. surinkti exosomes iš bronchoalveolinio lavažo skysčio ir analizuojami exosomal Mirna išraišką aptikti alergijos susijusios Mirna rūšių [27]. Liu ir kt. Pranešama, kad exosomes išskirti iš cervicovaginal lavažo skysčio esančius aukšto lygio PPN-21, kurie gali būti naudojami kaip gimdos kaklelio vėžio [28] biologinis žymuo. Čia mes išanalizavo raiškos profilius exosomal miRNAs į GC pacientais Mirna mikrogardeliq technologijos PIF siekiant nustatyti kandidates diagnostikos Mirna biologinius žymenis dėl metastazių GC prognozavimas.

Mūsų tyrimo, pirmasis iššūkis pasauliečiai kiekybine izoliacijos exosomal Mirna nuo PIF. Weber ir kt. įvertintas Mirna išraišką 12 kūno skysčiuose ir pranešė, kad bendras RNR koncentracija pilvaplėvės skystyje buvo 775 g /l [25], kuris buvo mažiau nei kad mes gauti iš MA ir PIF-4400 ir 6400 g /L, atitinkamai dėl to, skirtumas gali būti naudojama metodika visiško RNR atskirai, nes Weber ir kt. tiesiogiai išgauti RNR iš pilvaplėvės skystyje, o mes pirmą kartą išskirtas exosomes ir tada naudoti juos RNR gavyba. Analizė RNR izoliuotas nuo PIF kokybės pademonstravo mažų gausa (< 200 NT) RNR rūšių cm ir MA. Nebuvo atskirų 18S ir 28S ribosomų RNR viršūnės rengti, nurodant užteršimo ląstelėje RNR nebuvimą.

Antroji problema susidūrė šioje Tyrime dalyvavo nuoseklumo atsižvelgiant į exosomal miRNAs kokybės izoliuota. Mūsų tyrimo duomenimis, mes nustatėme, mažas kintamumas aptiktus Mirna Mirna rūšių ir signalo intensyvumo skaičių, aukšto koreliaciją Mirna išraiškos tarp kiekvienos grupės mėginių. Vidutiniai skaičiai aptikti miRNAs MA ir PIF buvo 490 ir 367, kuris buvo susitarusi su miRNAs skaičius (397), prieš aptikta pilvaplėvės skystyje [25].

PIF ir MA mėginiai parodė mažą kintamumą signalo intensyvumas (CV = 3.87% už 50 -asis procentilis). Be to, mirna ekspresijos modelius buvo labai koreliuoja tarp mėginių perdavimą per kiekvienos grupės (CC > 0.850), taip pat tarp grupių (0,8 > CC > 0,7). Šie rezultatai parodė, kad PIF gali būti didelio pelningumo šaltinis geros kokybės miRNAs, kurie rodo nuoseklius raiškos modelius į mikrogardeliq tyrimu.

Mirna ekspresijos profilius buvo analizuojami pasirinkti konkrečius peritoninės metastazių miRNAs. MIR-21 parodė didesnę raišką pacientams, sergantiems T4 stadijos karcinoma, nei tie, T1-T3 grupės. Fabbri ir kt. Pranešama, kad Pasaulis-21 ir Pasaulis-29a vėžiu išleido exosomes įtakos naviko augimą ir plitimą, prisijungdamas prie ir aktyvinti TLRs aplinkiniuose imuninių ląstelių ir sukelia prometastatic uždegiminį atsaką [29]; Tai patvirtino mintį, kad naviko kilmės exosomes prisidėti prie premetastatic mikroaplinkos [30, 31]. Tai gali reikšti, kad T4 karcinomos gautas exosomes sukurtumėte premetastatic nišą pilvaplėvės, kuri tada palaiko peritoninė invazija po radikalių rezekcijos GC.

Naudojant laipsniškas, mes išrinkome penkis exosomal miRNAs (MIR-320c , PPN-1202, PPN-1225-5p, PPN-1207-5p ir Pasaulis-7270) ir patvirtinti Pasaulis-320 ir miR1225-5p raiška 18 CG pacientų PIF atliekant KRL-PGR. Pasaulis-1225-5p parodė didesnę raišką T4 nei T1-T3 stadijos CG pacientams, patvirtinantį, gautus microarray rezultatus, kadangi nebuvo skirtumo Pasaulis-320 lygių tarp pacientų grupių. Pasaulis-1225 nukreipta į policistinių inkstų liga genas PKD1
, kuris dažnai mutavo į autosominiu dominuojančia policistinių inkstų liga; tokiu būdu, miR1225 gali turėti įtakos šios ligos [31] progresavimą. Tačiau tarp miR-1225 ir vėžio santykiai lieka neaiškus. MIR-21 ir Pasaulis-1225-5p gali parengti premetastatic nišą, sklaidos ir atsiskaitymo metastazavusio vėžio ląstelių pilvaplėvės ir taip gali parodyti, pilvaplėvės pasikartos po radikalių GC rezekcijos polinkį.

PIF duoda informacijos apie pilvaplėvės statusą, pavyzdžiui, pokyčių imuninių ląstelių ir sekrecijos augimo faktoriais ir citokinais [32, 33] gyventojų. Citologija ir molekulinės diagnostikos tyrimai yra grindžiami vėžinių ląstelių aptikimą, o profiliavimas miRNAs į PIF gali būti naudojama per pilvaplėvės premetastatic fenotipas GC prognozavimas, užtikrinant veiksmingas prevencines ir gydomąsias priemones.

Other Languages