Stomach Health > skrandžio sveikatos >  > Gastric Cancer > skrandžio vėžys

PLoS ONE: ląstelę autofagija susijusių Genų-5 (ATG-5) yra susijęs su Atsparumas cheminėms žmogiškųjų Skrandžio Cancer

Anotacija

autofagija susijusių genų-5 (ATG-5) yra vienas iš pagrindinių reguliatoriai autophagic ląstelių žūtį. Jis buvo plačiai laikomas apsauginiu molekulinės mechanizmo vėžinių ląstelių per chemoterapijos žinoma. Šioje studijoje, mes ištirti išraiška modelio ATG-5 ir naviko atsparumą daugeliui vaistų sukelto baltymo-1 (MRP-1) 135 skrandžio vėžio (GC) pacientams, kurie buvo gydomi epirubicino, cisplatinos ir 5-FU palaikomąja chemoterapija (ĮKF ) po chirurginės rezekcija ir ištirti galimą jų klinikinė reikšmė. Mes nustatėme, kad tiek ATG-5 (77,78%) ir MRP-1 (79,26%) buvo labai išreikštas GC pacientams. ATG-5 išraiška buvo reikšmingai susijęs su gylio sienos invazijos, TNM etapais ir tolimoje metastazių GC (P < 0,05), o MRP-1 išraiška buvo žymiai susijęs su naviko dydžiu, gyliu sienos invazijos, limfmazgių metastazių, TNM etapais ir diferenciacija statusas (P <0.05). ATG-5 išraiška buvo teigiamai koreliuoja su MRP-1 (rp = 0.616, P < 0,01). Padidėjęs išraiška ATG-5 ir MPR-1 reikšmingai koreliavo su prasta Bendras išgyvenamumas (OS; P <0,01), o liga išgyvenamumas (DFS; P <0,01) mūsų GC kohortos. Be to, mes parodė, kad ATG-5 buvo įtrauktas į vaistų atsparių GC ląstelių, kurios buvo daugiausia per reguliavimo autofagija. Mūsų duomenys rodo, kad aktyvinama išraiška ATG-5, svarbaus molekulinės funkcija apsauginės autofagija, yra susijęs su Atsparumas cheminėms GC. Išraiška ATG-5 ir MRP-1 gali būti nepriklausomi prognostiniai žymenys GC gydymo

nurodomoji dalis:. Nu J Chen Z Huang J Chen J juanis W Dan Z et al., (2014) ląstelę autofagija susijusių Gene-5 (ATG-5) yra susijęs su Atsparumas cheminėms žmogiškųjų skrandžio vėžio. PLoS ONE 9 (10): e110293. Doi: 10,1371 /journal.pone.0110293

redaktorius: Pankaj K. Singh Nebraskos universitetas medicinos centras, Jungtinių Amerikos Valstijų

Įstojo: rugpjūčio 5, 2014; Priimta rugsėjo 18, 2014 m Paskelbta: Vasaris 17, 2014

Visos teisės saugomos: © 2014 Nu et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų prieinamumas:. autoriai patvirtina, kad visi duomenys, kuriais grindžiamos išvados visiškai prieinama be apribojimų. Visi atitinkami duomenys yra per popieriaus

Finansavimas:. Šis darbas buvo remiamas Nacionalinis gamtos mokslo fondo Hunan provincijoje, Kinija (Nr 2012FJ6088). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Nors labai sumažėjo jo paplitimo lygis daugelyje išsivysčiusių šalių, skrandžio vėžys (GC) lieka ketvirtas dažniausiai diagnozuojama piktybinis navikas ir antroji pagrindinė priežastis, dėl vėžio mirčių visame pasaulyje [1]. Per pastaruosius dešimtmečius, standartinių multimodalinių gydymo strategijas kartu su kitomis rekomenduojamomis variantų (pvz D2 skrodimo ir palaikomoji chemoterapija) nepavyko išgydyti didžioji dalis pacientų, kuriems su GC, ypač tiems, su pažangiomis ir metastazavusiu ligų, su blogesnėmis išgyvenimo to nemato tikriausiai dėl to, kad Atsparumas cheminėms buvimo apdorojimo metu [2]. Taigi, nustatyti naujų molekulinių įvykių pagrindinių šio piktybinių navikų ir jos prastos prognozės plėtrą, taip pat suprasti GC Atsparumas cheminėms mechanizmus skubiai reikalingi efektyviau klinikinės intervencijos ir geriau valdyti pacientų.

Pagal fiziologinėmis sąlygomis, autofagija yra Lizosomos-priklausomų savarankiškai virinant sistema pirmiausia atsakinga už pašalinimo ir perdirbimo ilgaamžių baltymų ir sugadinta /pasenusių intracellularorganelles siekiant išlaikyti ląstelių homeostazę [3]. Į skirtos sunaikinti baltymai ir organoidus yra sugeriama per "dukart membranos" vakuolėmis (autophagosomes), po sintezės su lizosomas statyti kompleksus žinomas kaip autophagosomes, kur turinys sunaikinto lizosomų hidrolazių [4]. Jis buvo dokumentuota, kad autofagija gali būti sukeltas atsakas į daugelį nepalankių sąlygų, įskaitant maistinių medžiagų nepriteklius, oksidacinio streso ar DNR žalą ir tarnauja kaip prisitaikanti ląstelių mechanizmo, galiausiai leidžiant ląstelės išgyventi ir daugintis, o didelių ar nuolatinių autofagija rezultatai ląstelių mirtis [ ,,,0],5]. Sutrikimai fiziologine aktyvacijos, surinkimo ir funkcijos autophagic keliu buvo labiau pastebėtas įvairiausiose žmogaus vėžio, nors tiksli vaidmuo, kurį autofagija grojo vėžio genezę ir progresavimo yra vis dar nesutarimų. Kai kurie duomenys pirmenybę idėją, kad autofagija slopina tumorigenezei, o kiti įrodymai rodo, kad autofagija gali sukelti naviko inicijavimui ir apsaugo auglio ląsteles nuo išgyvena apoptozę [6]. Įdomu tai, kad slopinimas autofagija neseniai buvo nustatyta, kad padidinti antinavikinį poveikį kelių citotoksinių agentų. Li ir jo kolegos pranešė, kad autofagija buvo aktyvuota kaip apsauginis mechanizmas su korinio poveikio 5-FU gydymo ir slopinimo autofagija 3-methyladenine papildyta 5-FU sukeltas apoptozę gaubtinės žarnos vėžio ląstelėse [7], [8]. Kita vertus, buvo įrodyta, kai priešvėžiniai vaistai (pvz cetuksimabo ir Dasatinibas) sukelti autophagic ląstelių žūtį per skirtingais mechanizmais, kai kurių vėžio ląstelių [9] - [13]. Molekulinė mašinos, kuriuo autofagija reguliuoja išlikimą ar mirties navikinių ląstelių lieka iš esmės neaiškus iki šiol. Autofagija kelias yra labai moduliacijos dinamiškas procesas daugiausia vykdo autofagija susijusių (ATG) šeimos genai, kurios veiklą reglamentuoja kelių pagrindinių kinazės įskaitant mTOR, PI3K /Akt, AMPK ir MAPK [14], [15]. ATG-5 yra pagrindinis reguliatorius būtina autofagija kalbant apie jo dalyvavimą autophagosome pailgėjimas [16]. Vykdomas išraiška ATG-5 jautriems vėžinių ląstelių nuo vėžio gydymą nuo narkotikų ir in vitro parsisiųsti ir vivo
; Priešingai siRNA slopinamos ATG-5 lėmė dalinį atsparumą chemoterapijai [17]

Pooperacinis palaikomoji chemoterapija šiuo metu yra pagrindinis gydymo GC.; Tačiau bendras veiksmingumas chemoterapijos išlieka prasta, galbūt kaip atsparumo daugeliui vaistų (MDR) fenotipo buvimo pasekmė. Skirtingai nuo kitų vėžinių subjektų, išraiška klasikinių MDR-tarpininkes molekulių, tokių kaip glutationo S-transferazės ir naviko atsparumą daugeliui geno 1 nėra labai paplitę GC audinių, rodančių, kad gali egzistuoti sudėtingą mechanizmą MDR plėtros šioje piktybinės ligos [ ,,,0],18]. Kaip vienas iš klasikinių vaistams atsparių mechanizmų, naviko atsparumą daugeliui susijęs baltymas 1 (MRP1 /ABCC1) buvo nustatyta, kad stipriai išreikštas GC ir taip gali daryti centriniai vaidmenis tarpininkauti MDR GC [19], [20]. Tačiau, jis lieka žinoma, ar MRP-1 išraiška yra susijęs su ATG-5 išraiška. Ir taip pat, ar autofagija dalyvauja chemoresistence GC pacientams yra neaiški.

Šiame tyrime mes pirmą kartą dirbo imunohistocheminis ištirti išraiška profilį ATG-5 ir MRP1 į 135 GC pacientams, kurie vartojo ĮKF suma (epirubicino, cisplatina ir 5-FU) palaikomoji chemoterapija po chirurginės rezekcijos. Taip pat buvo vertinama tarp ATG-5 ir MRP-1 išraiškos koreliacija taip pat jų raiška su įvairiais klinikos ypatybių GC ir klinikinių rezultatų.

Medžiagos ir metodai

Pacientai ir audinių mėginių

135 GC pacientų sudaro 91 vyrų ir 44 moterų, kuriems buvo atlikta operacija ne iš virškinimo trakto chirurgijos skyrius, Xiangya ligoninė, Centrinis Pietų universiteto (CSU), Kinija, nuo 2007 sausio 1 dieną ir gruodžio 31 2008 buvo įtraukti iš viso šis tyrimas. Vidutinis amžius kohortos buvo 53.62 ± 9.73 metų, su 26 72. Theprimary GC naviko tissuesand suderinta ne vėžiniai (NC) audinių, esančių bent 5 cm nuo naviko branduolys buvo gauti po chirurginės rezekcijos ir iškart apdorojami intervalą ir saugomi, kol tolesniam naudojimui. Nė vienas iš tyrime dalyvavusių pacientų turėjo chemoterapija arba radioterapija iki chirurginės operacijos. Histopatologinė diagnozė buvo atliktas prieš operaciją ir patvirtina operacijos. Visi dalyviai stadijos IB IV navikų gavo ĮKF chemoterapija po operacijos (dozė: Epirubicin 50 mg /m 2 on 1 dieną, cisplatina 60 mg /m 2 on 1 dieną ir nuolatine intravenine infuzija 5-FU 500 mg /m 2 /d 4 dienas, kartojamas kas 3 savaites iki 24 savaitės). Klinikiniai charakteristikos šių pacientų buvo išvardytos 1 lentelėje

Visi atvejai šiame tyrime buvo peržiūrėtas ir visi egzemplioriai buvo histopathologically naujo išnagrinėjo spalio 2012 Wall invazijos, regioninės limfmazgių metastazių gylio ir histologinis laipsnio patvirtino tos pačios grupės du patyrę vyresnieji patologai. Pacientai buvo suskirstyti remiantis diferenciacijos statuso vėžinių ląstelių į tris histologinių rūšių: gerai, vidutinio ir skurdžių. Remiantis sritinių naviko kartu ir metastazių buvimas, visi atvejai buvo pastatytas pagal TNM klasifikaciją piktybinis Navikai (TNM) etapo grupėje [21]. Dėl išlikimo analizės metu operacijos data buvo naudojamas atstovauti pradžios tašką tolesnių apsilankymo. Pacientai, kurie mirė nuo kitų ligų, o ne GC ar kitų netikėtų įvykių buvo pašalintas iš teismo kolekciją. Mirties įdarbintas šio tyrimo priežastis buvo paūmėjimas GC. Bendras išgyvenamumas (BI) buvo apskaičiuota kaip laikotarpį nuo pradinio chirurgija mirties dienos arba nuo paskutinio tolesnių kaip galutinis dienos. Liga išgyvenamumas (DFS) buvo apibrėžiama kaip laiko intervalas nuo operacijos iki vietos atkryčio arba pirmosios tolimoje organų metastazių dienos. Informuotas sutikimas raštu buvo gauta iš kiekvieno paciento prieš operaciją ir šis tyrimas buvo patvirtintas mokslinių tyrimų etikos komiteto Centrinės Pietų universitete, Kinija. Visi egzemplioriai buvo tvarkomi ir kad taptų anoniminiais, atsižvelgiant į etines ir teisines gaires.

imunohistocheminis

švieži mėginiai buvo nustatytas 10% neutralus buferiniame formalino ir vėliau įmontuota parafino. Parafino įterptųjų audiniai buvo sumažinti ne 4 pm ir tada deparaffinized su ksileno ir rehidrataciją toliau H & E arba peroksidazės imunohistocheminis dažymas naudojant DaKo įsivaizduoti sistemą. Trumpai tariant, po proteolitus virškinimą ir blokuoja su endogeninio peroksidazės, audinio skaidres buvo inkubuojami su pirminių antikūnų (ATG5: ab54033; MRP1: ab32574; Abcam Inc., Kembridžas, Jungtinė Karalystė) prieš atitinkamų tikslinių baltymų esant 1:500 praskiedimo naktį 4 ° C. Po plovimo su PBS, peroksidazės paženklinti polimeras ir substratas-Chromogenas tada buvo įdarbintas siekiant vizualizuoti immnohistochemical dažymo. Galiausiai, skyriai buvo counterstained hematoksilinu, dangtis-paslydo su montavimo terpę, ir išnagrinėjo šviesos mikroskopu. Visos procedūros buvo atliekamos ne patologijos katedros Xiangya ligoninė, C.S.U. Skaidrės buvo aiškinama nepriklausomai du patyrę patologai, kurie buvo aklas pacientų informacijos. Mes kiekybiškai dažymo intensyvumą ir procentinę dalį, dažytos ląstelių naudojant anksčiau aprašytą metodą [22], [23]: iš teigiamai tamsintas ląstelių (0% -100%) procentas buvo padaugintas iš dominuojančios intensyvumo modelio dažymo, atsižvelgiant į 1 kaip neigiamas arba atsekti, 2, kaip silpna, 3, kaip saikingai ir 4 kaip stiprus. Todėl bendras rezultatas svyravo nuo 0 iki 400. Pacientai vėliau buvo suskirstyti į keturias skirtingas pogrupius: rezultatas 0-99, rezultatas 100-199, rezultatas 200-299 nesunkiai 300-400

Vakarų dėmė analizė <. Br>

nepažeistų ląstelių ekstraktai paruošti naudojant 0,14 M NaCl, 0,2 m trietanolamino, 0,2% natrio deoksicholatas, 0,5% Nonidet p-40 ir papildytas proteazės inhibitorių (visi produktai buvo iš Sigma, Sent Luisas, Misūris , JAV). Tada, baltymų Pavyzdžio buvo paleisti per 12% natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforezės (SDS-PAGE) gelio ir perkelti į membraną. Perkeltus membranos vėliau buvo inkubuojami per naktį 4 ° C temperatūroje, turintis pirminiais antikūnais. Po plovimo, membrana buvo inkubuojamos su krienų peroksidazės (HRP) -susijęs vidurinį antikūną 1 valandą, o esant kambario temperatūrai. Pirminiai antikūnai buvo anti-ATG-5 (Santa Cruz, CA, JAV), anti-LC3A /b (abcam, Kembridžas, Jungtinė Karalystė) ir anti-β-Actin (Santa Krusas, Kalifornija, JAV). Visi pateikti rezultatai yra vidutiniai rodikliai iš trijų skirtingų nepriklausomų eksperimentų.

ląstelių proliferacija tyrimas

Ląstelės buvo pasėjamos į 96 duobučių lėkštelėse (10000 ląstelių /duobutėje) 24 val prieš gydymą. MTT tyrimai buvo naudojami įvertinti ląstelių proliferaciją skirtingu laiko momentu po apdorojimo. MTT analizė buvo atliekama taip: MTT buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį ir plokštelės buvo inkubuojami 37 ° C temperatūroje iki 4 h. tada MTT vidutinės mišinys buvo pašalintas ir 150 pL dimetilsulfoksido (DMSO) buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį. Absorbcija buvo matuojamas esant 570 nm, naudojant daugiasluoksniai spektrofotometru

RNR interferencija

siRNA dupleksus skirtos ATG-5 susintetinti taip: siRNR-ATG5-486:. GACGUUG GUAACUGACAAATT; siRNR-ATG5-695: GUCCAUCUAAGGAUGCAAUTT ir siRNR-ATG5-938: GACCUUUCAUUCAGAAGCUTT. siRNA dupleksus, kurių sudėtyje yra nespecifinės sekas buvo naudojamas kaip neigiamos kontrolės (NC): UUCUCCGAACGUGUCACGUTT. Įvairūs siRNAs buvo pernešta atskirai į ląsteles naudojant Lipofectamine 2000 reagentą, ir vidutinės buvo pakeistas 6 val po transfekciją.

Realaus laiko PGR

Viso RNR iš ląstelių linijos ir audiniai buvo išgauti naudojant Trizol reagentą (Invitrogen, Karlovi Varai, JAV), pagal gamintojo instrukcijas. RNR koncentracija buvo matuojamas naudojant spektrofotometrą. KDNR baseinas buvo susintetintas naudojant 1 mikrogramų visos RNR ir TaqMan atvirkštinės transkripcijos REAGENTAI (Applied Biosystems Foster City, Jungtinės Valstijos), kaip aprašyta gamintojo. Iš taikinio geno ekspresija buvo įvertintas naudojant santykinį kiekybinio požiūrio (2 -ΔΔCt metodas) su beta-aktino kaip vidinio etalono.

Imunofluorescentinis tyrimas

Ląstelės buvo laidžiomis su 0,3 % Triton X-100 10 min, po to fiksavimo su 2-4% metanalį 15 min, ir užblokuotas su 3% avies kraujo serume kambario temperatūroje 60 min. Tada, zonduotos su pirminių antikūnų anti-LC3B (Santa Cruz, CA, USA) per naktį kambario temperatūroje, ir ląstelės buvo tris kartus plaunamos PBS. Nudažomi Alexa Fluor 488 konjuguota 488 triušio anti-ožkos IgG 1 val kambario temperatūroje, ir tada ląstelės buvo tris kartus plaunamos PBS. Branduoliai buvo regimos dažant DAPI (Sigma, JAV) 2 min. Tamsintas ląstelės buvo pastebėta su apverstu fluorescencijos mikroskopu.

Statistinė analizė

Visi statistinės analizės buvo atlikta su SPSS programinio paketo 15,0 for Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, JAV). Kiekybiniai duomenys buvo pateikiami kaip vidurkis ± SD. Pearsono χ 2 bandymas buvo naudojamas palyginti skirtumą tarp reitingą duomenys, o vienas būdas-ANOVA testas buvo atliktas palyginti skirtumą tarp kiekybinių duomenų. Išgyvenimo analizė buvo atlikta naudojant Kaplan-Meier metodą ir lyginant pagal žurnalą rango testą. Cox-regresijos modelis buvo atliekama siekiant įvertinti nepriklausomą rizikos santykis kiekvieno kintamojo į Dispersinės analizės. Tarp ATG5 ir MRP1 išraiškos koreliacija buvo tiriama naudojant bivariate koreliacija (Pearson) testą. Skirtumai buvo laikomi statistiškai reikšmingi, kai P
vertės buvo mažesnis nei 0,05.

Rezultatai

išraiška ATG-5 ir MRP-1 GC

Sąvoka modelis ir vieta ATG-5 ir MRP-1 mūsų GC pacientų, kurie buvo gydomi epirubicino, cisplatinos ir 5-FU palaikomąja chemoterapija (ECF) po chirurginių rezekcija, buvo tiriama naudojant imunohistocheminės analizę. Tarp 135 GC egzempliorių, 105 (77,78%) buvo teigiami ATG-5 reaktyvumas ir 107 (79,26%) buvo MRP-1 teigiamas. Kaip pavaizduota 1 paveiksle, mes nustatėme, kad ATG5 buvo daugiausia išreikštas citoplazmoje. Be to, per išraiška ATG-5 buvo teigiamai koreliuoja su ta MRP-1 GC. (R = 0,616, P
< 0,001), kaip matyti iš bivariate Koreliacijos bandymas. Teigiamas išraiška gretimų nevėžinės audiniuose buvo 113 (83,70%) už ATG-5 ir 89 (65.93%) už MRP-1. Duomenys parodė, kad tiek ATG-5 ir MRP-1 buvo teigiamai išreikštas vėžio ir nevėžinės audinių, kurie rodo, kad ATG-5 ir MRP-1 gali būti sukeltas dėl chemoterapijos abiem naviko ir ne-navikų audiniuose. Kadangi visi mūsų pacientų mėginiai buvo gydomi ECF chemoterapijos, ir mes nustatėme, kad tiek ATG-5 ir MRP-1 buvo labai išreiškė ir teigiamai koreliuoja tose mėginių. Tuo tarpu Ankstesnis tyrimas rodo, kad MRP-1 gal susijęs su atsparumu įvairiems vaistams GC. Kartu su ankstesnės išvados, mūsų rezultatai rodo, kad ATG-5 ir MRP-1 gali būti įtraukti į Atsparumas cheminėms GC pacientams.

Asociacijos tarp išraiškos ATG-5 ar MRP-1 ir klinikos ypatybių GC

apie ATG-5 ir MRP1 išraiškos su įvairiomis klinikos parametrų GC asociacijos parodyta 1 lentelėje ir 2 lentelėje, atitinkamai. Išraiška ATG-5 buvo reikšmingai susijęs su gylio sienos invazijos, tolimos metastazės ir TNM etapais GC ( P
< 0,001 P
= 0,018 P pervežimas < 0,001 atitinkamai). MRP-1 išraiška buvo reikšmingai susijęs su padidėjusiu naviko dydis, gylis sienos invazija, sritiniuose limfmazgiuose metastazių, TNM etapus ( P
= 0,032 P
< 0,001, p = 0,016, "P < 0,001 atitinkamai) ir diferenciacija statusas ( P
= 0,005). Toliau nustatyti dalyvavimą o F ATG-5 ir MRP-1 GC plėtrą, mes atliekame išgyvenamumo analizė per mūsų pacientų mėginių. Mūsų išlikimo analizės parodė, kad jeigu bendras išgyvenamumas (BI) lygis mūsų GC kohortos buvo 43,70%, o vidutinis išlikimo 39.849 mėnesių (95% PI 35.636-44.061 mėnesių); o ligos reiškinių išgyventas laikotarpis (DFS) rodiklis buvo 34.07% su vidutiniškai išlikimo 35.802 mėnesių (95% PI 31.618-39.986 mėnesių). Mes šalia suskirstyti pacientus į keturis skirtingus pogrupius pagal imunohistocheminis dažymo rezultatus. Kaplan-Meier išgyvenamumo analizė parodė didesnę ATG-5 išraiška buvo reikšmingai susijęs su prastesne OS ( P
< 0,001) ir DFS ( P
= 0,003). Porinis palyginimas parodė, kad pacientai, atliekant aukščiausios ATG-5 išraišką (balai 300-400) buvo skurdžiausi išgyvenimo, lyginant su kitų pogrupių (2a pav ir 2b). Nuosekliai, buvo nustatyta aktyvinama MRP-1 išraiška turi būti reikšmingai susijęs su prasta OS ( P
= 0,001) ir DFS ( P
= 0,018) mūsų GC pacientams. Pogrupio aukščiausius MRP1 raiškos balai (0-99), atrodo, blogiausia prognozė (2c ir 2d pav), palyginti su kitų pogrupių. Mūsų duomenys taip pat parodė, kad ten buvo reikšminga koreliacija tarp TNM etapus ir išlikimo GC pacientams. Pacientai, sergantys III ir IV stadijos navikai rodomas prastesnę prognozę, palyginti su tais, slepianti etapo IB ir II navikai ( P < 0,01
) (2E ir 2F pav.) Dar įdomiau, kad Cox daugiamatis pavojaus regresijos modelis parodė, kad ATG-5 ir MRP-1 ekspresijos lygį ir TNM etapai buvo nepriklausomi ir reikšmingų prognozinius rodiklius prognozuoti OS ( P
= 0,037 p
= 0,005 P
< 0,001 atitinkamai) ir DFS ( P
= 0,004 P
= 0,008 P
< 0,001 atitinkamai) GC (3 lentelė). Mūsų duomenys rodo, ATG-5 ir MRP-1 buvo glaudžiai susijęs su GC vystymosi ir gali tarnauti kaip blogos prognozės žymenų GC gydymą.

ATG-5 buvo žymiai aktyvinama į chemoterapijai atsparia ląstelių

Siekiant dar labiau ištirti ATG-5 vaidmenį Tumorigenesis ir atsparus narkotikų. Mes nustatėme, baltymų ekspresiją keliose skrandžio vėžio ląstelių linijų (AGS, BGC-832, SGC7901, SGC7901 /DPP ir MKN45) ir į įamžino žmogaus skrandžio epitelio gleivinės ląstelių linijos (GES). Įdomu tai, mes nustatėme, kad ATG-5 buvo dramatiškai ekspresija į DPP atsparios ląstelių linija, SGC7901 /DPP ląstelių, lyginant su visais kitais ląstelių linijų, kurios apima DPP jautrus SGC7901 ląsteles (3a pav.) Mes taip pat patvirtino, kad SGC7901 /DPP ląstelės yra atsparios DPP gydymą. IC 25, IC50 IC75 ir buvo 15,4 m, 38,7 m ir 93,53 mkm SGC7901 ląsteles. Priešingai, IC 25, IC50 IC75 ir buvo 120.03 mkm, 271.9 m ir 423.7 mkm SGC7901 /DPP (3b pav.) Ji yra apie 5 iki 9 kartų didesnis nei, kad ne-vaistams atsparių ląstelių. Mūsų ieškant primygtinai siūlo, kad ATG-5 prisideda prie vaistų atsparių GC ląsteles.

slopinimas ATG-5 jautriems chemoterapijai atsparia ląstelės narkotikų gydymo

Jei dar įrodyti, kad ATG-5 prisideda prie narkotikų atsparus GC ląstelių, mes panaudojome mažų trukdančių RNR (siRNAs), kad triuškinantis, kad ATG-5 išraiška. Trys siRNAs buvo sukurta. Mūsų realaus laiko PGR ir Vakarų dėmė rezultatai parodė, kad visi trys siRNAs slopino ATG-5 išraišką tiek mRNR ir baltymų lygio (4A pav ir 4B). Mes pasirinkome vieną, siRNA-ATG5-695, su aukščiausiu triuškinantis efektyvumo atlikti šių eksperimentą. Mes triuškinantis ATG-5 išraišką ir tada elgiamasi ląsteles su DPP. Ląstelių proliferacija gebėjimas buvo tiriama, esant 0, 48 ir 72 valandas po gydymo. Mūsų rezultatas parodė, kad knockdowning ATG-5 nepaveikė ląstelių proliferaciją in SGC7901 /DPP ląstelių, lyginant su kontrolinės siRNA (siRNR NC). DPP gydymas vien tik šiek tiek slopino ląstelių proliferaciją. Įdomu tai, kad, kai mes triuškinantis, kad ATG-5 išraiška ir apdorojimo ląsteles su DPP tuo pačiu metu, ląstelių proliferacija gebėjimas buvo toliau SUPPRESSED palyginti su ląstelėmis, gydytų DPP vien tik 48 ir 72 valandų po apdorojimo (4 pav C). Mūsų duomenys toliau remti, kad ATG-5 prisideda prie vaistų atsparių GC ląsteles.

autofagija buvo įtrauktas į vaistų atsparių DC ląstelės

Kaip ATG-5 yra pagrindinis reguliatorius autofagija, mes spėliojo, kad autofagija gali būti įtraukti į vaistų atsparių GC ląsteles. Todėl mes naudojamas 3MA, kuris yra autofagija inhibitorius, gydyti Atsparumas vaistams ląsteles. Kaip ir tikėtasi, mes nustatėme, kad 3MA kartu su DPP gydymo poveikis buvo panašus su ATG-5 kncokdown kartu su DPP gydymo (4c ir 4d pav.) Duomenys rodo, kad autofagija prisideda prie vaistų atsparių. Tada mes išnagrinėti, ar autofagija buvo pakeista gydymo metu. Mes naudojamas IMUNOFLUORESCENCIJOS tyrimu, aptikti LC3B ekspresijos lygį, kuris yra autofagija gaudantis ląstelėse. Mūsų duomenys rodo, kad autofagija buvo nuslopintas po slopinimo ATG-5 arba gydant ląstelių 3MA (5a pav.) Ir Vakarų dėmė rezultatas dar kartą patvirtino, kad LC3A /b baltymo ekspresija buvo paveikta tik ląstelių gydomiems siRNA-ATG5 ar 3MA. Taigi, ląstelių proliferacija buvo labiau slopino tik tada, kai autofagija buvo slopinamas (4 pav ir 5 pav.) Todėl, mūsų duomenys atskleidė, kad ATG-5 buvo įtrauktas į vaistų atsparių DC ląstelių, kuri buvo daugiausia per paveikti vėžio ląstelių autofagija.

Diskusijos

GC išlieka viena iš labiausiai dažnai piktybiniai navikai pasauliniu mastu, nepaisant jos mažėjantis sergamumas ir viso prognozuojama, kad nuolat lipti kaip gyventojų skaičiaus augimas. Vyrų, GC gretas mirtingumo norma sekundę; moterų, tai yra mirtingumo [24], [25] ketvirtoji. Žalios mirtingumas GC Kinijoje buvo 25,2 100 000 [26]. Mūsų tyrime mes išnagrinėjo ATG-5 ir MRP-1 ekspresiją GC paciento kohortos po chemoterapijos. Tada mes parodė, kad ATG-5 buvo aktyvinama į cisplatina (DDP) atsparus ląstelių linijos. Be to, po to, kai ATG-5 išraiška arba aotophogy buvo slopinamas, vėžinės ląstelės buvo jautrūs DPP gydymui. Mūsų rezultatai suteikia naują supratimą į chemoterapijai atsparia GC progresavimo mechanizmas.

įvertino exression profilį ATG-5 ir MRP-1 135 Kinijos GC pacientams. Be su ankstesnėje ataskaitoje [22] Susitarimas, mūsų rezultatai parodė, kad didelis procentas GC audinių išreiškė ATG-5, ir ATG-5 išraiška buvo statistiškai susijęs su gylio sienos invazijos, tolimos metastazės ir TNM etapuose GC. Šie duomenys paremti mintį, kad aukštos išraiška lygis ATG5 gali prisidėti prie tam tikru mastu, labiau agresyviai ir piktybinės fenotipas GC. Šis požiūris yra labiau palaikė mūsų išvados tarp aukštojo ATG5 raiškos GC ir prastesne prognozės pacientų asociacijos (daugiau diskusiją žemiau). Dar svarbiau, kad mes nustatė teigiamą koreliaciją tarp ATG-5 ir MRP1 išraiškos mūsų GC kohortos. Atsižvelgiant į tai, kad MRP1 lankosi ABC transmembraninis transportinių baltymų gerai žinomas skatinti MDR fenotipas GC, tai yra protinga siūlyti, kad ATG-5 taip pat gali būti susijęs suteikiantis GC Atsparumas cheminėms per tam tikrus nežinomų molekulinius mechanizmus.

jis yra plačiai pripažįstama, kad pasikartotų ir metastazės yra dvi pagrindinės problemos, mūsų pastangas gerinti mažą OS ir DFS išgyvenamumas GC. Atsparumas cheminėms išlieka viena iš svarbiausių priežasčių, dėl kurių navikas bandų atkūrimo /pasikartoti po gydymo. Tinkamas variantas individualiam režimui bus neabejotinai naudingas, siekiant pagerinti klinikinei baigčiai; Vis dėlto, dabartinis gydymas sprendimas daugiausia priklauso nuo TNM etapais [27], [28]. Mūsų išlikimo analizes 135 GC pacientams, sergantiems IB stadija IV navikai parodė, kad tiek ATG-5 ir MRP-1 išraiška galėjo savarankiškai prognozuoti OS ir DFS po gydymo adjuvantinis ECF chemoterapijos, o tai rodo, kad stebint jų raiškos lygį derinys įprastiniai prognostiniai žymenys gali pateikti mums papildomos vertingos informacijos dėl geresnio įvertinimo chemoterapijos poveikį GC pacientams. Įdomu tai, mes nustatėme, ATG-5 buvo ekspresija narkotikų atsparus GC ląstelių linijų. Ir slopinimo ATG-5 gali vėl įjautrintos narkotikų atsparias ląsteles chemoterapijos. Mūsų duomenys rodo, kad ATG-5 gali būti taikiniu chemoterapijai atsparia paitents.

Daugėja įrodymų, buvo pasiūlyta, kad autofagija gali sukelti tiek ląstelių išgyvenimą ir ląstelių mirtį pagal skirtinguose kontekstuose. Liu ir kt "pranešė, kad slopindami PI3K /Akt /mTOR būdas, β-elemene gali sukelti apsauginį autofagija padėti GC ląsteles geriau prisitaikyti prie streso sąlygomis ir apsaugoti juos nuo vyksta apoptozės mirtį [29]. Be to, naujausi tyrimai parodė, kad PI3K /Akt /mTOR signalizacijos kelią dažnai įsijungia žmogaus virškinimo trakto piktybinių navikų [30]. PI3K /Akt signalizacijos taip pat moduliuoja MDR GC ląstelės per p-glikoproteino, Bcl2 ir Bax [31] Reglamentas. Be to, kai kurie priešvėžiniai agentai buvo pranešta slopina mTOR signalizacijos ir sukelti autofagija į vėžinių ląstelių žeminantis daugelį pagrindinių komponentų mTOR ašies [14], [32]. Apskritai, šie duomenys rodo, kad autofagija gali būti sukeltas chemoterapijos metu ir slopinimas autophagic kelius naudojant autofagija inhibitorius turi potencialo pagerinti chemoterapinį veiksmingumą GC pacientams su ATG-5 aukšto išraiška. Grįsdama, mes nustatėme, kad kai autofagija buvo slopinamas, narkotikų atsparios ląstelės taip pat buvo supažindinti su narkotikų gydymo vėl slopinimo ATG-5 išraiška. Taigi, mūsų rezultatas parama, kad autofagija prisideda prie chemoterapijai atsparia į paciento.

Apibendrinant, per išraiška ATG-5, pagrindinis molekulinės žaidėjas autophagic keliu, yra susijęs su Atsparumas cheminėms GC. Išraiška ATG-5 ir MRP-1 gali būti laikomi nepriklausomais prognostinių žymenų prognozuoti remiantis šiuo metu gautus duomenis OS ir DFS GC pacientams. Dėl TNM etapais pagrindu, aptikimo jų raiškos lygmenyse gali būti kliniškai reikšmingas geriau prognozuoti chemoterapiniais gydymo rezultatų pacientams, kenčiantiems nuo šio piktybinių ligų. Ateities tyrimuose, kuriuose dalyvavo vertinimą didesnį atvejų, geriausia iš skirtingų etninių grupių, yra tikrai pateisinamas patvirtinti mūsų išvadas šiame tyrime.

Other Languages