PLoS ONE: Plazminis mikro RNR, PPN-223, PPN-21 ir Pasaulis-218, kaip nauji potencialių biologinių žymenų skrandžio vėžio nustatymo

Anotacija

Fonas

mikro RNR (miRNAs), endogeninių mažų ne kodavimo RNR, kurios stabiliai aptikta žmogaus plazmos. Anksti diagnozuoti skrandžio vėžį (GC) yra labai svarbu gerinti terapijos poveikį ir prailginti pacientų išgyvenimą. Siekėme nustatyti, ar keturi miRNAs (MIR-223, Mir-21, PPN-218 ir mir-25), glaudžiai susijusios su Tumorigenesis ar metastazių GC gali tarnauti kaip naujų potencialių biologinių žymeklių GC aptikti.

Metodika

pirminio pripažinimo plazmoje keturių miRNAs 10 GC pacientų ir 10 sveikų kontrolinės grupės tiriamųjų kiekybiniais atvirkštinės transkripcijos polimerazės grandininės reakcijos (KRL-PGR), o tada palyginti plazmoje Mirna rezultatus su vėžiu audinių išraiškos iš aštuonių GC pacientams. Galiausiai, miR-223, PPN-21 ir miR-218 buvimas kraujo plazmoje buvo patvirtintas 60 GC pacientų ir 60 sveikų kontrolinės grupės tiriamųjų, ir buvo analizuojami pagal ROC kreivė (ROC) kreives šių miRNAs srityse.

rezultatai

Mes nustatėme, kad plazmoje PPN-223 ( p
< 0,001) Pasaulis-21 ( p
< 0,001) buvo reikšmingai didesnis GC pacientų nei sveikų, o Pasaulis-218 ( P
< 0,001) buvo žymiai mažesnis. ROC analizės davė AUC reikšmes 0.9089 Mir-223, 0.7944 Mir-21 ir 0.7432 Mir-218, ir kartu ROC analizė parodė aukščiausią AUC vertė 0.9531 ir diskriminuoti GC pacientus nuo sveikų. Be to, kraujo plazmoje PPN-223 ( P
< 0,001) Pasaulis-21 ( P
= 0,003) buvo reikšmingai didesnis GC pacientams, sergantiems I etapo negu sveikų. Be to, kraujo plazmoje PPN-223 buvo žymiai didesnis GC pacientams su Helicobacter pylori
(HP) infekcijos, nei tiems, kurie neturi ( P
= 0,014), ir žymiai didesnių sveikų kontrolinės grupės tiriamųjų HP infekcija nei be ( p
= 0,016).

išvados

Plazminiai Pasaulis-223, PPN-21 ir Pasaulis-218 yra naujų potencialių biologiniai žymenys GC aptikimo .

nurodomoji dalis: Li BS, Zhao Yl Guo G Li W Zhu Edas, Lo X et al., (2012) Plazminiai mikro RNR, PPN-223, PPN-21 ir Pasaulis-218, kaip nauji potencialių biologinių žymenų skrandžio vėžio nustatymo. PLoS vieną iš 7 (7): e41629. Doi: 10,1371 /journal.pone.0041629

redaktorius: Ajay Goel, Baylor universiteto medicinos centras, Jungtinės Amerikos Valstijos

Gauta 21. Gruodis, 2011 m Priėmė: Gegužės 27, 2012 m Paskelbta 30 Liepos 2012

Visos teisės saugomos: © Li et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė dotaciją iš gamtos mokslo fondo Kinijos (NSFC, Nr 81.071.412). Į finansuotojai turėjo vaidmenį duomenų rinkimo ir analizės, bet ne vaidmenį studijų dizainas, sprendimas skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai paskelbė, kad konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys yra ketvirtoji dažniausia piktybinių navikų pasaulyje ir antra pagrindinė priežastis, dėl vėžio mirties abiejų lyčių visame pasaulyje. Didžiausias mirtingumas yra apskaičiuota, Rytų Azijoje [1]. 5 metų išgyvenamumas skrandžio vėžiu yra mažesnė nei 20% -25%, o JAV, Europa ir Kinija [2]. Šiuo metu baigtas chirurginės rezekcija yra efektyviausias gydymas, siūlo puikų (90%) tikimybė išgydyti pacientams su ankstyvos skrandžio vėžiu [3]. Už išplitusio skrandžio vėžio, nepaisant chirurginio gydymo rezultatai, apie 80% pacientų miršta per trumpą laiką iš locoregional pasikartojimo (87%) ir /ar nuotolinė metastazių (30%) [4]. Todėl pagerėjo ankstyvos diagnostikos gali padidinti išgydyti šansas pradžioje GC pacientų arba prailginti pacientų išgyvenimą su ankstyvos stadijos GC. Tačiau dauguma jaunesniųjų GCS yra sunku aptikti [5]. Įprasti serumo žymenys GC, pavyzdžiui, angliavandenių antigeno 19-9 (CA19-9) ir karcinoembrioninius antigeno (CEA), neturintys pakankamai jautrumo ir specifiškumo, siekiant palengvinti ankstyvą diagnozavimą.

mikro RNR (miRNAs) yra mažos, ne -coding RNR kad posttranscriptionally reguliuoti genų ekspresiją. Nukrypęs nuo normos, išraiška miRNAs buvo koreliuoja su keliais ligų, įskaitant vėžio [6]. Ankstesni tyrimai parodė, kad audinio Mirna ekspresijos profilius gali būti laikoma diagnostikos biologinių žymenų vėžiu [7] - [9]. Tačiau, tai Diagnostikos būdas yra ribota jo efektyvumo kaip audinio pavyzdžiai yra nėra patogu pasiekti ir yra invazinė gauti. Daugėja dokumentus praneša, kad cirkuliuojančių miRNAs yra stabiliai aptikta įvairių kūno skysčių, įskaitant serume ir plazmoje [10], [11]. Cirkuliacinis miRNAs kaip nauji stabilių biologinius žymenis būtų viena iš perspektyviausių priemonių diagnostikai, nes plazmos ir serumo yra lengvai prieinama ir neinvazinis gauti. Neseniai keletas perspektyvių serumo arba plazmos Mirna biologiniai žymenys GC aptikti buvo nustatyta [12], [13].

Jei tyrinėti tą romaną plazma Mirna parašai gali atskirti pacientus GC (ypač ankstyvojo etapo GC) iš sveikų kontrolės, mes išrinkome keturis miRNAs (MIR-223, PPN-218, Mir-25 ir MIR-21), kuris buvo pranešta, kad dažnai dysregulated GC audinio ir glaudžiai koreliuoja su tumorigenesis ar metastazių GC [14] - [21] , Mes Spėjama, kad plazmoje trijų miRNAs (MIR-223, PPN-218 ir mir-25) buvo netipinė GC pacientams, taip pat tiems, miR-21, kurie leidžia manyti, kad šis parašas gali tarnauti kaip GC aptikimo biologinis žymuo [12]. Tačiau nebuvo nustatyta plazmoje PPN-21 GC pacientams skirtingų TNM etapais. Šiame tyrime mes palyginti plazmoje keturių miRNAs GC pacientų į sveikų, ir vertinami keturių miRNAs kaip naujus neinvazinių biologinių žymenų galimybes GC aptikti.

Medžiagos ir metodai

Pacientai ir mėginiai

Visi mėginiai buvo imami iš sutinkančių individų pagal protokolų etikos aspektų vertinimo valdybos patvirtintus trečiosioms karo medicinos universitete. Iš viso 70 pacientai, sergantys GC prieš bet kokį gydymą ir 70 sveikų kontrolinės grupės tiriamųjų iš Pietvakarių ligoninės (Čongčingas, Kinija) buvo įtraukta į mūsų tyrime tarp 2010 ir 2011 už 70 GC pacientams, mes išanalizavo GC audinių Histologija, įskaitant 56 adenokarcinoma, 13 mucinous adenokarcinoma ir 1 Signet žiedas ląstelių karcinoma ir nustatė, auglio vietos, įskaitant 34 skrandžio kūno, 24 skrandžio antralinėje dalyje, 8 skrandžio Cardia ir 4 kiti (viršutinė skrandžio, skrandžio kampas, skrandžio kelmas). GC pacientai buvo suskirstyti pagal klinikinius TNM etapuose, įskaitant 12 I etapo (amžiaus mediana, 53 metų [diapazonas, 36-70 metų]; 8 vyrai, 4 moterys), 11 II etapas (amžiaus mediana, 61 metų [diapazonas, 36-77 metų]; 7 vyrai, 4 moterys), 36 etapas III (amžiaus mediana, 55 metų [diapazonas, 30-71 metų]; 26 Vyras, 10 moterų) ir 11 IV etapas (amžiaus mediana, 53 metų [diapazonas , 46-66 metų]; 9 vyrai, 2 moterys) .Iš Hp infekcijos statusas, buvo tikrinamos naudojant anti-HP Antikūnai ELISA diagnostiniai rinkiniai (S20010005), (Pekinas Beier Bioinžinerija CO), rodo 43 GC pacientus su HP infekcija. ir 27 be. Dėl 70 sveikų kontrolinės grupės tiriamųjų, buvo įtraukti 44 vyrų ir 26 moterų, o vidutinis amžius buvo 51 metai [klasės, 26-75 metų]. Į Hp infekcijos tyrimo rezultatai parodė 31 sveikų kontrolinės grupės tiriamųjų su HP infekcija ir 39 be. (1 lentelė).

Mobilusis be plazmos buvo izoliuotas nuo visų kraujo mėginiai per 2 val rinkimo, naudojant dviejų pakopų protokolą (1500 rpm 10 min, 12.000 rpm 2 min), kad būtų išvengta užteršimo korinio nukleino rūgštys. Plazminiai buvo perkeltas į naują mėgintuvėlį, paliekant fiksuotą aukštį 0,5 cm plazminiai nuopilo virš nuosėdų į nesutrikdyti nuosėdų [11]. Jis buvo saugomas iki -80 ° C 450 pL mėginius. Aštuoni poros audinių mėginiai buvo imami iš aštuonių GC pacientams su aukštesnio lygio plazmoje Pasaulis-223 ir mir-21 ir žemesnių lygių plazmos Pasaulis-218, nei po chirurginės rezekcijos sveikų ir maždaug supjaustyti 1 mm aikštėse ir iš karto įšaldytos skystas azotas.

RNR gavyba

iš viso RNR buvo išgauti iš 400 įxL plazmos naudojant mirVana PARIS rinkinį (Ambion) pagal gamintojo protokolą ir išplauti 105 įxL įkaitintu ( 95 ° C) Eliucija tirpalas. Kad būtų galima iš imties-to-imties variacijos RNR išskyrimo žingsnio, 10 įxL 0,05 mkm sintetinės C normalizuoti. elegans
Pasaulis-39 (sintetinė RNR oligo-nukleotidai susintetinti kurį GenePharma) buvo įtraukta į kiekvieną denatūruoto mėginio po plazmos mėginio derinant su Denatūruojant Sprendimas [11]. Dėl užšaldytų audinių, bendra RNR išskirta naudojant TRIzol reagento (Invitrogen) pagal gamintojo protokolu, ir, galiausiai, sumaišymo per 60 įxL įkaitintu (95 ° C) nukleaziniu be vandens.

Kiekybiniai atvirkštinio transkriptazės polimerazės grandininė reakcija (KRL-PGR)

atvirkštinės transkripcijos reakcija buvo atliktas naudojant TaqMan MicroRNA atvirkštinės transkripcijos rinkinį (Applied BIOSYSTEMS). kDNR buvo susintetintas 5 iL apimčių, kuriuose yra 1.67 įxL RNR ekstraktas, 0.5μl 10 × atvirkštinės transkripcijos buferis, 0.05 įxL 100 mm dNTP, 0.063 įxL RNaze inhibitorių (20 V iL ^{-1), 0,33 įxL Mutiscribe atvirkštinės transkriptazės (50 V mikrol -1), 0,5 mikrol genų būdingų gruntu ir 1.887 įxL nukleaziniu be vandens. Reakcijos buvo inkubuojami 16 ° C temperatūroje 30 min, po to 42 ° C temperatūroje 30 min, po to 85 ° C temperatūroje 5 min prieš vyksta, esant 4 ° C temperatūroje. Susintetintas kDNR buvo skiedžiamas 2 kartus branduolinio be vandens. Kiekybine PGR reakcijos buvo atliekami naudojant 2 įxL kDNR tirpalu, 5 įxL TaqMan 2 × Puikiai pagrindinį mišinį (Takara) 0,25 įxL genų-specifinius pradmenis /zondas (TaqMan® MicroRNA tyrimų, taikomosios Biosystems. Lentelė S1) ir 2,75 mikrol iš nukleaziniu be vandens galutinio tūrio 10 ml, ir paleisti Bio-Rad IQ5 (Bio-Rad Laboratories, Inc) termocikleryje. Reakcijos mišinys buvo inkubuojamas 95 ° C temperatūroje 2 min, o po to 40 ciklų 95 ° C temperatūroje 15 s ir 60 ° C temperatūroje 30 s. Ciklas riba (, C
_{t) vertės apskaičiuotos su Bio-Rad iQ5 2.1 Standard Edition optinės sistemos programinės įrangos 2.1.94.0617.}}

plazmoje Mirna koncentracijos buvo apskaičiuotos naudojant standartą kreivė pastatytas naudojant sintetinius miRNAs [22]. Etaloninis miRNAs buvo papildyta kiekvieno reakcija. Tačiau miRNAs iš audinių mėginių išraiška normalizavosi naudojant 2 ^{-ΔΔ , C
_{T metodas iš , C
t reikšmės interesų miRNAs palyginti su RNU6B.}}

Standartizacija eksperimentinės KRL-PGR duomenų iš plazmos naudojant sintetinį C. elegans Pasaulis-39

, C temperatūroje. elegans
Pasaulis-39, kuris neturi sekos homologiją žmogaus miRNAs, buvo pasirinktas normalizuoti eksperimentinius KRL-PGR duomenis. Žinomos kiekiai sintetinių C. elegans
Pasaulis-39 buvo atskiestas gaminti , C
_{t vertės per , C
T vertė asortimentas Mirna standartinių kreives. Mes empiriškai pridėta 10 įxL 0,05 mkm sintetinės C. elegans
MIR-39 400 įxL plazmoje po plazmos mėginio derinant su Denatūruojant Solution. , C. elegans
Pasaulis-39 buvo papildytas taip pat kitų miRNAs. Ši formulė buvo naudojama reguliuojant C
t vertės iš miRNAs (MIR-223, Mir-21, PPN-218 ir mir-25), visų kraujo plazmos pavyzdžių: Normalized_ C
T vertė Mirna atrankoje = Raw_ , C
T vertė - [(SpikeIn_ Average_ , C
T vertė konkrečiame mėginyje) - (Median_ SpikeIn_ , C
t)] [11]. Normalized_ , C
T vertė tada buvo naudojamas apskaičiuoti kiekvieno Mirna koncentraciją.}

Statistinė analizė

Mann-Whitney testas buvo naudojamas palyginti skirtumus plazmoje Mirna koncentracijomis ir Mirna santykis tarp vėžio grupės ir sveikų grupėje. Dvipusis χ ^{2 bandymas buvo naudojamas palyginti į lyties, amžiaus ar Hp infekcijos statusą tarp GC pacientų ir sveikų skirtumus. Dispersinė bandymas buvo naudojamas analizuoti tarp miR-223, miR-21, miR-218 ir TNM etapai lygmenų. Imtuvas-veikianti savybę (ROC) kreives ir plotą po ROC kreive (AUC) buvo naudojami siekiant įvertinti naudojant plazmoje miRNAs kaip diagnostikos įrankius aptikti GC galimybes. Youdeno indeksas naudojamas pasirinkti optimalias Ribinės vertės. buvo laikomas statistiškai reikšmingas P
vertė mažesnė negu 0,05. Visi statistinės analizės buvo atlikta naudojant SPSS 13.0 programą ir grafikai buvo sukurta naudojant GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Programinė įranga Inc, Caligornia).}

Rezultatai

apibūdina disciplinų

Vienas šimtas keturiasdešimt dalykai, įskaitant 70 GC pacientų ir 70 sveikų kontrolinės grupės tiriamųjų, buvo verbuojami į šiame tyrime. Jokių reikšmingų skirtumų lyties ar amžiaus buvo rasta tarp GC pacientų ir sveikų ( P
= 0,371 P pervežimas = 0.398, χ ^{2 bandymų, atitinkamai). HP infekcija statusas reikšmingai skyrėsi tarp GC pacientų ir sveikų ( P
= 0,042) (1 lentelė).}

Įvertinimas Kiekybiniai RT-PCR matavimo miRNAs plazmoje

Jei norite nustatyti dinaminį diapazoną ir jautrumą Mirna kiekybinio realaus laiko PGR, sintetiniai vieno kryptis miRNAs buvo serijiniu praskiedžiamas 10 kartų iš koncentracijos nuo 0,1 iki 0.000001 fmol mir-223, PPN-218, miR- 25, ir Pasaulis-21 apie GenePharma Mirna Skelbimo ekspertų grupės rekomendaciją. Kiekybinės RT-PCR tiesiškumas tarp logaritminis verčių įvesties miRNAs ir , C
_{t vertės buvo patvirtinta kiekvienos sintetinės Mirna, PPN-223, PPN-218, PPN-25 ir miR -21 (r ^{2 = 0,997, r 2 = 0,998, r 2 = 0,993 ir r 2 = 0,999, atitinkamai) (1 pav.)}}

Pirminė analizė Plazminių miRNAs kuri gali stebėti GC

Keturi miRNAs, PPN-223, PPN-218, PPN-25 ir Pasaulis-21, buvo nenormaliai išreikštas GC audiniuose. Ištirti, ar iš keturių miRNAs šiuo disreguliacija plazmoje pacientams, sergantiems GC lygiai, mes iš pradžių matuojama plazmoje keturių miRNAs 10 GC pacientų ir 10 sveikų. Kaip ir tikėtasi, koncentracija kraujo plazmoje PPN-223 ir miR-21 buvo reikšmingai didesnis GC pacientų nei sveikų ( P
< 0,001), tuo tarpu PPN-218 buvo žymiai mažesnis (, p
< 0,001). Tačiau plazmoje PPN-25 buvo reikšmingai nesiskyrė tarp GC pacientų ir sveikų ( P
= 0,970) (2 pav (A-D)). , Buvo pastebėta, kad miR-21 lygiai taip, esantys GC plazmoje gali atspindi tas, pirminėje GC audinio [12]. Ištirti, ar trijų miRNAs (MIR-223, PPN-218 ir mir-21) GC koncentracija plazmoje gali atspindėti tie pirminėje GC audinio, mes išbandėme trijų miRNAs lygį aštuonių porų GC audinių ir gretimuose normaliuose audiniuose mėginiai iš 8 GC pacientams, kurių plazmoje PPN-223, PPN-21 buvo žymiai didesnis, o Pasaulis-218 buvo žymiai mažesnis. Kaip parodyta 2e paveiksle, ekspresijos lygis PPN-223 buvo didesnis pirminės GC audinių negu kontrolinės septyniose iš aštuonių pacientų analizuojami (87,5%) ir Pasaulis-21 aštuoniose pacientų (100%), tuo tarpu PPN-218 buvo mažesnis septynių pacientų (87,5%), o tai rodo, kad šių trijų miRNAs GC koncentracija plazmoje atsispindi tie pirminėje GC audinio.

plazmoje PPN-223, PPN-21, PPN-218 ir miR -25 buvo patvirtintas didelio masto

Jei įvertinti plazmoje minėtų keturių miRNAs kaip diagnostikos žymekliai GC aptikimo, dar 60 GC pacientų ir 60 sveikų kontrolinės grupės tiriamųjų buvo įtraukta į šią patvirtinimo tyrimu. Kaip parodyta 3 paveiksle, PPN-223 ir miR-21 koncentracija buvo reikšmingai didesnis GC plazmoje nei kontrolės ( P
< 0,001), o Pasaulis-218 buvo žymiai mažesnis ( P
< 0,001). Tačiau plazmoje PPN-25 buvo reikšmingai nesiskyrė tarp GC pacientų ir sveikų ( P
= 0.082) (S1 paveiksle). Koncentracijos vertės keturių miRNAs matuojamas tiriamųjų plazmos buvo parodyta S2 lentelėje. ROC kreivė analizė buvo atliekama siekiant įvertinti diagnostinę vertę trims plazmos miRNAs ir atskleidė, kad trys plazminiai miRNAs buvo vertingų biologinių žymeklių atskirti GC nuo įprastos kontrolės su AUC (ploto, kuriame auginamos ROC kreive) 0,9089 (95% PI: 0,8598 iki 0.9580 ) mir-223, 0.7944 (95% PI: 0,7211 iki 0,8677) mir-21 ir 0.7432 (95% PI: 0,6628 iki 0,8236) mir-218. Tuo optimalaus ribinei vertei 0.7286 su jautrumu + specifiškumo-1 vertė laikoma didžiausia Mir-223, jautrumas ir specifiškumas buvo 84,29% ir 88,57%; tuo ribinei vertei 0.5000 Mir-21, jautrumas ir specifiškumas buvo 74.29% ir 75.71%, o ne iš 0.3858 nukirpimas Mir-218, jautrumas ir specifiškumas buvo 94,29% ir 44,29%. Norėdami pakelti diagnostikos vertę, derinys ROC kreivė analizė buvo atliekama (MIR-223, padauginta iš miR-21), padalytas iš miR-218. Iš santykis (MIR-223 × Pasaulis-21) /Pasaulis-218 davė aukščiausią AUC vertė 0,9531 (95% PI: 0.9222 iki 0.9839) ir optimalų ribinė vertė 0.7715, jautrumas ir specifiškumas buvo 84,29% ir 92,86% , kuris nurodė, kad derinys parašas turi didelį potencialą diagnostikos vertę GC aptikti.

plazmoje PPN-223, PPN-218 ir miR-21 GC pacientams, sergantiems įvairaus klinikinę būklę

išanalizuoti plazmoje šių trijų miRNAs į GC pacientų įvairiais TNM etapais (12 I, 11 II, 36 su III ar 11 IV) siekiant nustatyti, ar trys plazminiai miRNAs gali aptikti ankstyvos stadijos GC. Kaip parodyta 4A paveiksle, koncentracija plazmoje trijų miRNAs reikšmingai nesiskyrė tarp keturių etapų (MIR-223 P
= 0,244; Pasaulis-218, P
= 0.664; miR -21 P
= 0,596), tačiau kiekvienoje iš keturių etapų, įskaitant I etapas pacientams buvo reikšmingai padidėjusi plazmos Pasaulis-223 ir Pasaulis-21, palyginti su sveikų (p < 0,01), o miR -218 buvo gerokai sumažėjo II etape, III ir IV ( P
< 0,01), tuo tarpu PPN-218 buvo reikšmingai nesiskyrė tarp I etapo pacientų ir sveikų ( P pervežimas = 0,071). Be to, mes palyginti visų trijų miRNAs plazmoje iš GC pacientams, sergantiems metastazių tiems, kurie neturi lygių. Kaip nurodyta 4B paveiksle, koncentracija kraujo plazmoje trijų miRNAs neturėjo reikšmingų skirtumų tarp GC pacientams su metastazėmis ir tiems, kurie neturi (MIR-223 P
= 0.320; miR-218, , p
= 0,979;. Pasaulis-21 P
= 0,310)

Ryšys tarp koncentracijos plazmoje PPN-223, PPN-21, PPN-218 ir HP infekcija statusas dalykai

Be to, mes patikrinome Hp infekcijos būklės 140 dalykų, kaip aprašyta aukščiau, ir analizavo plazmoje trijų miRNAs 70-GC pacientų (43 HP infekcija ir 27 be) ir 70 sveikos kontrolinės grupės tiriamųjų (31 HP infekcija ir 39 be) įvertinti tarp plazmoje trijų miRNAs ir HP infekcija statuso subjektų santykius. Kaip parodyta 5 paveiksle, koncentracija kraujo plazmoje PPN-21 ( P
= 0,875 P
= 0,527) ir Pasaulis-218 ( P
= 0,097, P
= 0,539) reikšmingai nesiskyrė tarp GC pacientams, sergantiems Hp infekcijos ir tiems, kurie neturi, ir tarp sveikų HP infekcija ir tiems, kurie neturi, atitinkamai. Tačiau, PPN-223 buvo reikšmingai didesnis GC pacientams, sergantiems Hp infekcijos nei be ( P
= 0,014), ir gerokai didesnė sveikų HP infekcija nei be ( p
= 0,016). Plazmoje PPN-223 ( P
< 0,001) Pasaulis-21 ( P
< 0,001) reikšmingai padidėjusi GC pacientams, sergantiems Hp infekcijos arba kurių be lyginant su sveikų HP infekcija arba kurių be, tuo tarpu PPN-218 buvo žymiai mažesnis ( P
< 0,05). Šie duomenys pateikti tvirtus įrodymus, kad trys Mirna parašai gali atskirti GC pacientus su arba be Hp infekcijos sveikų.

Diskusijos

Šiame tyrime keturių miRNAs (MIR-223 lygiai, išanalizuoti Pasaulis-218, PPN-21 ir Pasaulis-25) plazmoje nuo 70 GC pacientų ir 70 sveikų. Suderinamas su ankstesniais tyrimais pagal Tsujiura et al [12], mūsų tyrimas taip pat parodė, kad žymiai didesnės koncentracijos plazmoje PPN-21 GC pacientams. Mes nustatėme, kad PPN-223 koncentracija buvo reikšmingai didesnis GC plazmoje nei kontroliuoti, tuo tarpu PPN-218 buvo žymiai mažesnis. Bendras ROC analizė parodė aukščiausią AUC 0.9531 su 84,29% jautrumu ir 92,86% specifiškumo (MIR-223 × Pasaulis-21) /miR-218 santykis diskriminuoti GC iš kontrolės. Mes taip pat analizavo plazmoje PPN-223, PPN-21, PPN-218 GC pacientų skirtingu klinikinę būklę (TNM stadija arba metastazių) ir tarp plazmoje trijų miRNAs ir HP infekcija statuso subjektų santykius.

Nors Pasaulis-223 buvo pranešta, kad beveik išreiškė tik kaulų čiulpuose [23], jo raiška buvo pastebėta daugelio rūšių vėžio, pavyzdžiui, stemplės vėžiu [16], kepenų ląstelių karcinoma [24], ir GC [14], [15]. Neseniai Xiaohua ličio pranešė, kad Pasaulis-223 buvo ekspresija tik skrandžio vėžiui ląstelių ir skatino ne skrandžio vėžiui ląstelių migraciją ir invazija [25]. Kodėl plazmoje PPN-223 buvo žymiai didesnis pacientams su ankstyvos stadijos GC? Į GC mikroaplinkos, daugelis vėžinių susijusių ląstelės, pavyzdžiui, makrofagų, kaulų čiulpais ląstelių, dendritų ir T ląstelių, turėti galimybę išleisti exosomes, kurie Shuttle tiek iRNR ir MicroRNA kitų ląstelių ar apyvartą [26]. Dėl ankstyvos stadijos GC, PPN-223 gali būti iki reguliuojama kai naviko susijusių ląstelių ir pristatytas į periferinį kraują per exosmes. Naujausi duomenys rodo, kad Pasaulis-223 išleista makrofagų buvo nuskraidinti į krūties vėžio ląsteles ir reguliuoja krūties vėžio ląstelių [27] invazinis. Buvo įrodyta, kad miR-218 restauravimas slopina Robo1 išraišką ir slopina skrandžio vėžio ląstelių invaziją ir metastazes in vitro parsisiųsti ir vivo
[17]. Padidėjusi miR-218 lėmė žymiai ląstelių augimą veiklą ir ląstelių invaziją AGS ląstelių sumažėjo palyginti su kontrolės [20]. Gao C et al [21] pranešė, kad ekspresijos lygis miR-218 buvo žymiai sumažėjo GC audinių, H. pylori infekuotų skrandžio gleivinės, ir H. pylori infekuotų AgS ląsteles. Mūsų tyrimo duomenimis, koncentracija kraujo plazmoje PPN-218 buvo reikšmingai nesiskyrė GC pacientams, sergantiems Hp infekcijos ir tiems, kurie neturi arba tarp sveikų kontrolinės grupės tiriamųjų su HP infekcija ir tiems, kurie neturi. Į miRNAs lygiai gali būti skirtingi GC plazmos ir skrandžio gleivinę. MIR-21 ekspresija įvairių vėžio, įskaitant krūties vėžio [28], plaučių vėžį [29], storosios žarnos vėžio [30], ir GC [18], [19]. Nors Tsujiura ir kt [12] pranešė, kad plazmoje PPN-21 buvo žymiai padidėjusi GC pacientų nebuvo nustatyta jo koncentracija kraujo plazmoje iš GC pacientams skirtingų TNM Stags.

didinimas biuletenių skaičius pranešė apyvartoje esančių miRNAs gali tarnauti kaip neinvazinių biologinių žymenų GC aptikti. Neseniai Hanshao Liu pranešė, kad serumo Pasaulis-378 buvo gerokai padidėjusi GC pacientams, sergantiems I TNM stadija, o tai rodo, kad ši Mirna parašas gali tarnauti kaip naują neinvazinę biologinis žymuo ankstyvam GC [31]. Tačiau HP infekcija statusas GC pacientų ir sveikų nebuvo paminėti. Ji yra gerai žinoma, kad HP infekcija yra viena iš pagrindinių priežasčių GC, įskaitant skrandžio adenokarcinomos, skrandžio MALT limfomos. Jei plazma /serume konkrečių cirkuliuojančių miRNAs buvo dysregulated tik GC pacientams, sergantiems Hp infekcijos, bet ne tiems, kurie neturi, kad miRNAs gali tarnauti kaip biologinių žymenų, skirtų ligoniams su HP infekcijos vietoj pacientų aptikti su GC aptikti.

šiame tyrime, nors mes išanalizavo plazmoje PPN-223, PPN-21 ir miR-218 GC pacientams skirtingų TNM etapais jaunesniųjų GC mėginių skaičius buvo nedidelis. Tiriamų mokymo komplekto plazmos miRNAs skaičius buvo ribotas. Ateityje tyrimo, mes galime prieiti prie daugiau skaičių jaunesniųjų GC mėginių įvertinti plazmos Pasaulis-223, PPN-21 vaidmenį, MIR-218 arba susiję su GC anksti aptikti GC kitus plazmoje miRNAs.

dėl ieškoti veiksmingų kraujo pagrindu biologinius žymenis GC aptikimo pratęsti pacientams su ankstyvos GC išlikimą tikslu daugelis tyrinėtojų dėmesio buvo skirta cirkuliuojančių miRNAs, kuris neseniai buvo pranešta, kad galėtų būti veiksmingai ir neinvaziniai biologinis žymuo aptikti įvairios vėžio ar kitų ligų [32] - [35]. Nors jautrumas ir specifiškumas cirkuliuojančių Mirna biologinius žymenis GC aptikti yra daug didesnė nei serume biologinių žymenų (CA19-9 ir CEA) šiuo metu naudojamų, tai ilgas kelias, kol cirkuliuoja miRNAs kaip klinikinė diagnozė yra naudojamas aptikti GC , dėl to, kad cirkuliacinės mirna lygiai gali būti žymiai didesnis arba mažesnis įvairių ligų. Ateities studijos cirkuliuojančių Mirna biologinius žymenis gali sutelkti dėmesį derinant saviraiškos profilius cirkuliuojančių miRNAs iš visų paplitusių ligų gauti konkrečius biologinių žymeklių unikalių ligos aptikimo. Nors Jianning Lyrinės [36] rekomenduojama MIR 16 ir MIR-93 tinkamais pagalbos genų serume Mirna analizės GC pacientų ir sveikų, imties dydis yra nedidelis. reikėtų suvienodinti normalizavimo metodai nustatyti cirkuliuojančių miRNAs lygį.

Taigi, mes nustatė, kad trys plazminiai miRNAs (MIR-223, Mir-21 ir MIR-218) potencialiai gali tarnauti kaip naujų neinvazinių biologinius žymenis GC aptikti. Nesvarbu Pasaulis-223 ir Pasaulis-21 turi galimybę aptikti ankstyvos stadijos GC bus nustatomos būsimoms studijoms.

Pagalbinė informacija
S1 paveiksle.
patvirtinimas plazmoje PPN-25 GC pacientų ir sveikų. Dėžutė sklypai jų koncentracijos miR-25, plazmoje ir GC pacientams (GC, n = 70) ir sveikų žmonių (NC, n = 70). Viduje dėžės linijos žymi vidurkiai. Min Max: iš dėžutės sklypų ūsai. Reikšmingo skirtumo nepastebėta tarp GC pacientų ir sveikų kontrolinės grupės tiriamųjų
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0041629.s001
(TIF)
S1 lentelėje.
brandus mikro RNR ir jų atitiko gruntas /zondas AB Bandymo ID.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0041629.s002
(docx)
S2 lentelėje.
koncentracijos verčių keturių miRNAs matuojamas tiriamųjų kraujo plazmoje.
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0041629.s003
(XLSX)

Padėka

Mes dėkojame Yun Zhao techninės paramos

• PLoS ONE: meta-analizė interleukino-10 -592 Rėmėjas polimorfizmas susijęs su skrandžio vėžiu Risk
• PLoS ONE: β, β-Dimethylacrylshikonin Skatina Mitochondrijos Priklausoma Apoptozę per ERK eigos Žmogaus skrandžio vėžio SGC-7901 Cells