Aanhoudende H. pylori kolonisatie in de vroege overname leeftijd van muizen in verband met hogere maag gesialyleerde Lewis X, IL-10, maar lager interferon-γ expressions

Persistent H. pylori
kolonisatie in de vroege overname leeftijd van muizen in verband met hogere maag gesialyleerde Lewis x , IL-10, maar lager interferon-γ uitdrukkingen
Abstracte achtergrond
H. pylori
-infectie is minder vaak in de kindertijd. Deze studie gevalideerd of de tarieven van de H. pylori
kolonisatie is afhankelijk van verschillende acquisitie leeftijden, en correleren met de verschillende maag Lewis antigenen of cytokine uitdrukkingen na H. pylori
overname.
Methods
We pasten een jonge (7 dagen oud) C57BL /6 muizen (n = 50) en volwassen (6 weken oud) C57BL /6 muizen (n = 50). In iedere groep werden 30 muizen geprikkeld met H. pylori Kopen en 20 muizen dienden als naïef controle. Het succes van de H. pylori
kolonisatie werd beoordeeld op de 2 nd week en 8 e week, respectievelijk. De intensiteit van de Lewis x, gesialyleerde Lewis x (sialyl-Le x) en cytokine, inclusief van TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-10 en IL-1β waren immunochemisch gekleurd en ingedeeld.
Resultaten
Op de 2 nd week na H. pylori
uitdaging, de kolonisatie tarieven van de H. pylori
waren vergelijkbaar tussen de jonge muizen en de groep volwassen muizen (89 % vs. 100%, P Restaurant > 0,05). Echter, op de 8 e week, de H. pylori
kolonisatie bedroeg in de jonge muizen groep significant lager dan in de groep volwassen muizen (53% vs. 95%, p = 0,003
). Op 8 e week, de jonge muizen met een persistentie van H. pylori
kolonisatie hadden hogere sialyl-Le x, hogere IL-10 en IFN-γ lager dan die van de muizen die verloren kolonisatie tijdens de 2 nd om de 8 e week (P Restaurant < 0,05).
Conclusie
het voortbestaan ​​van H. pylori
kolonisatie zou kunnen zijn van een overname-leeftijd determinant werkwijze. Na H. pylori
blootstelling op jonge leeftijd overname, de gastheer respons met een hogere sialyl-Le x en IL-10, maar minder IFN-γ correleert met de consequente persistentie van H. pylori
kolonisatie.
Introductie
Helicobacter pylori
infectie kan chronisch gastritis en zelfs maagzweren veroorzaken bij zowel kinderen als volwassenen [1, 2]. Epidemiologisch onderzoek, de seropositiviteit van H. pylori
is aangetoond dat minder bij kinderen dan bij volwassenen [3, 4]. Een follow-up cohort studie toonde aan dat de hoogste incidentie van seroconversie optreedt in de vroege kindertijd en geleidelijk afneemt met de leeftijd [3]. Verschillende studies hebben gesuggereerd dat een vroegtijdige verwerving van H. pylori
infectie in de kindertijd mogelijk kan leiden tot een latere verlies van de kolonisatie [3-6]. Echter, de exacte regelgeving binnen kinderen om ofwel verlies of persistentie van H. pylori
kolonisatie na de vroege overname vast blijft niet bekend.
Een bloedgroep bindend adhesine (BabA) van H. pylori
selectief bindt de gefucosyleerde Lewis antigen (Le b) van de maag cellen bemiddelen een zware bacteriële kolonisatie [7-9]. De overige siaalzuurbindende adhesine (SabA) van H. pylori
bindt aan de maag gesialyleerde Lewis x antigen (sialyl-Le x) subsidiair helpen de aanhoudende kolonisatie na chronische ontsteking [10], en in het bijzonder belangrijk wordt wanneer de Le b antigeen van de gastheer is afwezig of zwak is [11]. Onze recente studie onthulde dat H. pylori
geïnfecteerde kinderen hadden een significante toename van de sialyl-Le x, maar niet Le b expressie [12]. Het is dus interessant na te gaan of het voortduren van de vroegtijdige verwerving van H. pylori
bij kinderen kan worden gerelateerd aan de variabele gastheerreacties van maagontsteking of epitheliale sialylering de SabA van H. pylori
passen.
Met volwassen C57BL /6 muizen die ouder zijn dan zes weken oud zijn, de klinische H. pylori
stammen met succes kan het grootste deel van de muizen te koloniseren voor meer dan zes maanden [13, 14]. De chronische H. pylori
infectie leidt tot diverse Th1 soort overheersende maag ontstekingen met een variabele pro-inflammatoire en Th1-dominante soort cytokine responsen tussen verschillende hosts [15-18]. Dienovereenkomstig is de huidige omvang ter eerst te controleren of de persistentie van H. pylori
kolonisatie verkrijging leeftijdsgebonden determinant proces kan zijn. Daarnaast is deze studie trachtte te beantwoorden of de variabele sialyl-Le x en inflammatoire cytokine uitdrukkingen na H. pylori
uitdaging de aanhoudende kolonisatie van H. pylori-infectie
zou kunnen bepalen, vooral bij muizen die de uitdaging van de vroege overname.
Materialen en methoden
muizen groepen en H. pylori
isoleert voor challenge experiment Inloggen Deze studie gebruikte 100 C57BL /6 muizen (50 zeven dagen oude jonge muizen en 50 zes -week oude volwassen mannelijke muizen), waaronder 60 in de experimentele groep geprovoceerd met een type 1, SabA-positieve H. pylori
klinisch isolaat (HP 625) en in 40 naïeve controles. Vermeerderingen van de H. pylori
isolaten werden toegepast op dezelfde wijze als de vorige muizen modelstudie tot een dichtheid van 0,8 x 10 8 CFU /ml te bereiken. [19]. Voor de experimentele groep werd een 0,1 ml bacteriesuspensie voor jonge muizen en 0,5 ml van de volwassen muizen oraal geïnoculeerd gedurende drie opeenvolgende dagen, respectievelijk. Tien elk van de jonge en volwassen muizen van de controlegroep waren bij de 2 e en de 8 e week opgeofferd. In de experimentele muizen, tien elk van de jonge en volwassen muizen op de 2 nd week en 20 elk van de jonge en volwassen muizen op de 8 e week na inenting werden opgeofferd door intra-peritoneale injectie van pentobarbital ( 150-200 mg /kg). De geïsoleerde magen werden ingesneden langs de grotere en kleinere krommingen in twee helften. De ene helft werd formaline ingebed voor histologie en Lewis antigen examens. De andere helft werd onmiddellijk geplaatst in buffer, bevroren op droogijs en bewaard bij -80 ° C gedurende cytokine behandeling. H. pylori
infectie werd aangetoond door een snelle ureum-test en histologisch onderzoek.
Gastric histologie van muizen
Twee onderzoekers, waaronder een patholoog, zich niet bewust van de demografische gegevens en kolonisatie resultaten, analyseerde de maag histologie. Het toepassen van de methode van onze eerdere muizenmodel [19], de histologische parameters, waaronder H. pylori
dichtheid (range 0-4), acute inflammatoire score (AIS, range 0-3), chronische ontsteking score (CIS, bereik 0-3), atrofische veranderingen (AT, range 0-1), en intestinale metaplasie (IM, range 0-3) werden topografisch geëvalueerd over de antrum, corpus en cardia, respectievelijk. De indeling systeem van H. pylori
dichtheid gebruikt was als volgt: 0, geen bacteriën aangetroffen; 1, een milde niveau van kolonisatie en bacteriën niet in alle maag crypte ontdekt; 2, een lichte mate van kolonisatie met bacteriën gedetecteerd in de meeste crypten aanwezig; 3, matige tot zware kolonisatie in alle crypten; en 4, ernstige kolonisatie met alle crypten dicht op elkaar gepakte met bacteriën. De gepresenteerde resultaten zijn de gemiddelde waarde van kolonisatie voor elke groep. De totale H. pylori
dichtheid (THPD) werd gedefinieerd als de som van de bekomen uit het antrum, corpus en cardia en aldus variëren van 0 tot 12. De totale acute (TAIS) en chronische (TCis) inflammatoire scores waren ook een som van de score van drie locaties (bereik 0-9).
bacteriële infectie van H. pylori
werd gedefinieerd als de aanwezigheid van bacteriën in de maag secties, terwijl muizen werden beschouwd als niet geënt wanneer geen bacteriën werden bij histologie en negatief voor de CLO-test.
Immunohistochemische kleuring en scores voor gastrische expressie Lewis
Immunokleuring maag- specimens Lewis antigenen werd uitgevoerd met het avidine-biotine-peroxidase techniek een VECTOR Ms.OM Immunodetectie Kit. Het primaire monoklonale antilichaam (anti-Le x, Signet Laboratories, Inc., Dedham, MA) werd geselecteerd om de maag Le x antigenen [11, 12] te detecteren. Naast Le x antigen kleuring, het monoklonale antilichaam tegen sialyl-Le x (muis IgM MAB2096, Chemicon International, Inc., Temecula, CA) werd gebruikt [12]. Niet-specifieke bindingsplaatsen werden verzadigd met 2-2,5% runderserumalbumine. Voor elke locatie maag, de intensiteit van Le x (bereik 0-5) en sialyl-Le x (bereik 0-4) werd gescoord volgens de topografie van de kleuring (figuur 1). Totaal maag Lewis antigen intensiteit Le x en sialyl-Le x is de som van het antrum, corpus en cardia (bereik 0-15 in Le x en 0-12 in sialyl-Le x). Figuur 1 De immunohistochemische (IHC) kleuring en nivelleren van Lewis x (Le x), en sialyl-Lewis x (sialyl- Le x) antigenen worden getoond voor de maag biopten van muizen (200 ×). De IHC kleuring bleek negatief voor twee Lewis antigenen en is bedoeld als score 0. Voor Lex, score 1 (A): weinig kleuring (< 5% in de pariëtale cellen van de diepe klieren; score 2 (B): diepe klieren 5 -50% kleuring en zwak, score 3 (C): diepe klieren > 50% kleuring en sterk; scoren 4 (D): hele laag van diepe klieren met oppervlakkige epitheel kleuring, geen slijm meningsuiting; score 5 (E): hele . laag met slijm uitdrukking voor sialyl- Lex, score 1 (F): alleen aan de oppervlakte slijm positieve; score 2 (G): slijm en de bovenste epitheel, score 3 (H): bovenste epitheel en diepe klieren (chief cellen < 50% .), score 4 (I): bovenste epitheel en klieren diep (chief cellen ≥ 50%)
Immunohistochemische kleuring en scores voor cytokinen expressie
vriescoupes (4 pm) werden gedroogd bij kamertemperatuur gedurende 2 uur, en gefixeerd met 3,7% formaldehyde gedurende 1 min. Na wassen met PBS tweemaal, de monsters werden gefixeerd met koude aceton en vervolgens gewassen met PBS. De muis Ig Blocking Reagent (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) werd gebruikt voor het blokkeren van niet-specifieke bindingsplaatsen. De rat anti-muis monoklonale antilichamen (TNF-α, IL-6, IL-10, IL-1β en IFN-γ) en het konijnen anti-muizen polyklonaal antilichaam (IL-1β) werden gebruikt als het primaire antilichaam. De HRP Polymeerconjugaat breed spectrum (Zymed Laboratories Inc. South San Francisco, CA, U.S.A.) werd gebruikt als de 2 nd antilichaam. AEC kit werd gebruikt om de vlek te illustreren. De intensiteit van elke cytokine werd gescoord volgens de verdeling van positieve kleuring cellen op het epitheel (bereik 0-3) en de lamina propria componenten, zoals de matrix, polymorfonucleaire cellen, lymfocyten en fibrocytes (tabel 1) .table 1 scoren van cytokine uitdrukkingen op de maag epitheel en lamina propria.

Score

0
1 kopen van 2
3
Epithelium
Negatief
Minder dan 33%
33% -67%
meer dan 67%
Lamina propria
Matrix
Absence
Presence
lymfocyt
Absence
Presence
fibrocyt
Afwezigheid
Aanwezigheid
neutrofielen
afwezigheid
Aanwezigheid
kwantitatieve scoring van elk cytokine aan het epitheel was als volgt: score 1: positieve kleuring in het cytoplasma van epitheelcellen alleen de bovenste 1/3 deel van het epitheel; score 2: de bovenste en middelste deel van het epitheel (1 /3-2 /3); score 3: over de hele laag van het epitheel (> 2/3). De positieve kleuring van elk cytokine op de lamina propria (lymfocyten, fibrocyten, en neutrofielen) betekent dat er meer dan vijf positieve cellen in een high power gezichtsveld in het microscopisch onderzoek.
Statistische analyse
χ De Pearson's 2 test werd gebruikt om het verschil in kolonisatie weer tussen de experimentele en controle muizen te testen. De histologische parameters, Lewis antigenen, en het cytokine uitdrukkingen werden vergeleken met exact test van de Fisher's voor de verschillende subgroepen. De Friedman-test werd gebruikt om het verschil in H. pylori
dichtheid tussen het antrum, corpus en cardia van de maag in elke muis getest. Alle proeven werden beoordeeld tweezijdige en een p
waarde < 0,05 werd beschouwd als significant.
Resultaten Ondernemingen De tarieven van de succesvolle H. pylori
kolonisatie in muizen met verschillende leeftijden overname
Op de 2 nd week na H. pylori
uitdaging, H. pylori
kolonisatie was succesvol in 89% (8/9) van de jonge muizen groep en 100% (10/10) van de groep volwassen muizen. Daarentegen op 8 e week na H. pylori
uitdaging kolonisatie was significant lager in de jonge muizen dan in de volwassen muizen (53% vs. 95%, p = 0,003
). Voor die muizen met succesvolle kolonisatie, hetzij op de 2 nd of 8 e week, de dichtheden van H. pylori
werden gelijkmatig verdeeld over de antrum, corpus en cardia in zowel jonge als volwassen muizen ( P Restaurant > 0,05)
Age-specifieke maag Lewis antigen en cytokines uitdrukkingen in de naïeve muizen
in de naïeve muizen van zowel jonge als volwassen groepen, de uitingen van Le x en sialyl-. Le x waren zwak op de maag antrum. Echter, een geleidelijke verhoging van de totale intensiteit van Le x en sialyl-Le x uitdrukkingen werd beschreven in de leeftijd stappen (Figuur 2A & 2B). Een dergelijke verhoging bereikte een plateau van de chronologische leeftijd van bijna 5 weken oud. Op de 2 nd week en 8 e week na H. pylori
uitdaging, de Le x uitingen waren niet verschillend tussen de gekoloniseerde en de controle muizen in zowel jonge als volwassen groepen. Figuur 2 de intensiteit van de maag Lewis antigenen in naïeve muizen op verschillende leeftijden van leven (A) Lewis x (B) sialyl Lewis-x. Ondernemingen De intensiteit van gastrische cytokine expressie varieerde tussen de verschillende leeftijden van muizen en locatie. De pro-inflammatoire cytokines, waren er geen positieve kleuringen van TNF-α en IL-6 op oppervlakkige epitheel één der naïeve muizen. De positieve kleuringen van TNF-α en IL-6 op de lymfocyten, fibrocyten en neutrofielen via lamina propria waren significant hoger bij muizen ouder ≥ 5 weken ouder dan < 5 weken (P Restaurant < 0,01; figuur 3A & 3B). De positieve kleuring van IL-1β werd vooral gevonden op het epitheel en de vroege uitgedrukt in muizen ouder < 5 weken. Het percentage positieve kleuring van IL-1β op neutrofielen was hoger bij muizen de leeftijd van ≥ 5 weken dan die leeftijd < 5 weken (P Restaurant < 0,05; figuur 3C). Figuur 3 Gastric cytokine uitdrukkingen op het epitheel en lamina propria tussen naïeve muizen ≥ 5 weken jaar en < 5 weken. (A) Tumor necrose factor alfa (TNF-α), (B) interleukine 6 (IL-6), (C) interleukine 1 bèta (IL-1β), (D) interferon gamma (IFN-γ) en (E ) interleukine 10 (IL-10).
in het vroege leven van de muizen, de positieve IFN-γ kleuring was in de meeste op de epitheel en de matrix, de intensiteit van de positieve IFN-γ kleuring daalden na de leeftijd ≥ 5 weken (P Restaurant < 0,01, Figuur 3D). Echter, een aanzienlijk hoger percentage positieve IFN-γ vlekken op lymfocyten en fibrocytes werd onthuld in de muizen in de leeftijd ≥ 5 weken dan die leeftijd < 5 weken (P
< 0,01).
Anders dan de zware IFN-γ vlekken op het epitheel in het vroege leven van muizen IL-10 was meestal negatief op het epitheel. De positieve kleuring van IL-10 was hoger op lymfocyten en fibrocyten in de muizen ≥ 5 weken ouder dan in de leeftijdsgroep van < 5 weken (P Restaurant < 0,05; figuur 3E).
Muizen histologie en Lewis antigen expressie na H. pylori-infectie

Op de 2 nd week na H. pylori
uitdaging, de H. pylori
-colonized jonge muizen leek een iets hoger percentage van hoge TCis hebben (score ≥ 4) dan de controle muizen (88% vs. 50%, P
= 0,15), maar dergelijke een marginale betekenis is niet bekendgemaakt in het volwassen muizen (30% vs. 30%, P
= 1,00). Bovendien, in de jonge muizen groep muizen met aanhoudende kolonisatie op 8 e week hadden een duidelijk hogere hoge TCis dan de muizen die kolonisatie verloren (40% vs. 11%, p = 0,30
) . Op de 2 nd week na H. pylori
uitdaging het percentage gekoloniseerde jonge muizen met een hoge intensiteit van sialyl-Le x expressie (score ≥ 7) was gedaald vergeleken met de controlemuizen (25% vs. 60%, P
= 0,19). Een dergelijke daling was niet duidelijk op 8 e week (100% vs. 90%, P
> 0,05) en volwassen muizen op de 2 nd week (90% vs. 100 %, P Restaurant > 0,05) en de 8 e week (58% vs. 60%, P Restaurant >. 0,05) na H. pylori
uitdagingen
Gastric cytokinen expressie na H. pylori
infectie
op de 2 nd week na H. pylori
uitdaging, de jonge muizen met succesvolle kolonisatie hadden een significant hogere intensiteit van IL-6 op fibrocytes (75% vs. 0 %, P
= 0,002) en de matrix (75% vs. 20%, P
= 0,05), maar lager IFN-γ (0% vs. 100%, P Restaurant < 0,001) op de matrix dan naïeve controles (tabel 2). Ook in de volwassen muizen, muizen met succesvolle kolonisatie zijn bekendgemaakt aan een lagere IFN-γ uitdrukking op fibrocyten dan de controle muizen (30% vs. 90%, p = 0,02
) .table 2 De maag cytokine uitdrukkingen op de 2e week van jonge en volwassen muizen met persisterende H. pylori
kolonisatie en naïeve controle-muizen.


jonge muizen
volwassen muizen
Parameter (%)
Colonized
(n = 8)

Controle
(n = 10)
P
waarde
Colonized
(n = 10)
Controle
( n = 10)
P
Waarde
IL-6 *
Matrix
75
20
0.05
70
30
NS
lymfocyt
50
10 | NS
60
70
NS
fibrocyt
75
0
0.002
80
50
NS
neutrofielen
37,5
20
NS
20
70
0.07
TNF-α *
Matrix
87,5
70
NS
80
90
NS
lymfocyt
62,5
40
NS
90
90
NS
fibrocyt
87,5
40
0.07
100
90
NS
neutrofielen
12.5
10 | NS
30
40
NS
IL-1β
Epithelium ≥ 2
100
70
NS
100
90
NS
Matrix
a25
0
NS
100
80
NS
lymfocyt
25 | 20
NS
30
0
NS
fibrocyt
a25
60
NS
100
100
NS
IFN-γ
Epithelium ≥ 2
0
30
NS
10 | 0
NS
Matrix
0
100 Restaurant < 0.001
40
20
NS
lymfocyt
0
0
NS
10 | 30
NS
fibrocyt
12.5
10
NS
30
90
0,02
Neutrophil
0
0
NS
10
20
NS
IL-10*
Matrix
a25
60
NS
100
80
NS
Lymfocyt
25 | 20
NS
60
60
NS
fibrocyt
a37.5
50
NS
100
80
NS
neutrofielen
12.5
0
NS
10 | 20
NS
CIS: chronische inflammatoire score; AIS: acute inflammatoire score. *: Gekoloniseerde middel muizen geïnfecteerd met H. pylori hotels met succesvolle kolonisatie (positieve ureum-test en histologie) op offer. a: P
waarde < 0,01; b: P
waarde ≤ 0,05 tussen de jonge en volwassen muizen gekoloniseerd. NS: geen betekenis. * Aangegeven op deze parameter, het epitheel is nogal zwak voor dergelijke cytokine op immunohistochemie kleuring.
Op 8 e week na H. pylori
uitdaging, de tarieven van de hoge TNF-α (100% vs. 20%, P = 0,02
) de matrix en hoge IL-1β (100% vs. 20%, p = 0,02
) op fibrocytes waren hoger in de jonge muizen met aanhoudende kolonisatie dan de controlemuizen ( tabel 3). Voor de volwassen muizen met succesvolle kolonisatie, de tarieven van de hoge IFN-γ (30% vs. 100%, P
= 0,003), IL-10 (20% vs. 100%, P
= 0,001) en IL-6 (50% versus 100%, P = 0,03
) op fibrocytes waren ook significant lager dan die van de controle naïeve muizen. Niettemin was meer voor in de gekoloniseerde volwassen muizen dan controle muizen een hogere IFN-γ (80% vs. 40%), IL-10 (80% vs. 40%) heeft, en IL-6 (80% vs. 30%) op de matrix.Table 3 de cytokine uitdrukkingen op de 8ste week van jonge en volwassen muizen met aanhoudende en verloor H. pylori
kolonisatie en naïeve controle-muizen.


jonge muizen
volwassen muizen
variabelen (% )
Persistent kolonisatie
(n = 5)
Lost kolonisatie
(n = 4)
Controle
(n = 10)

P
† waarde
Persistent kolonisatie
(n = 10)
Controle
(n = 10)
P
waarde
IL-6 *
Matrix
100
80
50
NS
80
30
NS
lymfocyt
25 | 60
50
NS
70
70
NS
fibrocyt
100
80
70
NS
50
100
0.03
neutrofielen
0
20
50
NS
20
70
NS
TNF-α *
matrix
100
100
20
NS
100
60
NS
lymfocyt
100
80
60
NS
90
90
NS
fibrocyt
100
100
70
NS
100
80
NS
neutrofielen
25 | 20
60
NS
10 | 40
NS
IL-1β
Epithelium ≥ 2
100
80
70
NS
100
80
NS
Matrix
75
40
30
NS
100
80
NS
lymfocyt
50
60
0
NS
50
60
NS
fibrocyt
100
60
20
NS
100
100
NS
neutrofielen
0
0
20
NS
0
10 | NS
IFN-γ
Epithelium ≥ 2
0
80
20
0,048
30
0
NS
Matrix
75
100
40
NS
80
40
NS
lymfocyt
75
60
40
NS
30
50
NS
fibrocyt
75
100
50
NS
30
100
0.003
Neutrophil
0
0
40
NS
20
0
NS
IL-10*
Matrix
100
20
70
0.048
80
40
NS
Lymfocyt
100
20
70
0,048
40
50
NS
fibrocyt
100
60
70
NS
20
100
NS
neutrofielen
50
0
10 | NS
0
10 | NS
†: de betekenis was vergeleken tussen jonge muizen met persistente en verloor kolonisatie. * Aangegeven op deze parameter, het epitheel is nogal zwak voor dergelijke cytokine op immunohistochemie kleuring.
Higher sialyl-Lex samengaat met een hogere IL-10, maar lager INF-γ voor H. pylori
kolonisatie
Op de 2 nd week wordt de gekoloniseerde jonge muizen hadden geen significant verschil in de intensiteit van sialyl-Le x expressie dan de controlemuizen (P
> 0,05). Echter, op de 8 e week na H. pylori
uitdaging, de jonge muizen met aanhoudende kolonisatie had een hoger percentage van evident sialyl-Le x expressie (score ≥ 7) dan die van de muizen die verloren kolonisatie (100% vs. 56%, P
= 0,03). Naast het tonen van een hoger percentage van sialyl-Le x expressie (score ≥ 7), alle van de aanhoudend H. pylori
-colonized jonge muizen aanzienlijk naast elkaar bestaan ​​met een lagere IFN-γ en hogere IL-10 uitdrukkingen dan die muizen die persistent kolonisatie op de 8 had verloren ste week (Tabel 4, 100% vs. 0%, P
= 0,008) .table 4 Een lage maag IFN-γ (score ≤ 1) uitdrukking op de coëxistentie epitheel hoge sialyl-Lex (score ≥ 7) en IL-10 (zowel matrix en lymfocyten) was gecorreleerd aanhoudende bacteriële kolonisatie in de vroegtijdige verwerving leeftijd muizen.
Cytokine expressie (%)
Kolonisatie van jonge muizen
OR (95% CI)
P
waarde *

Persistent (n = 4)
Lost (n = 5)


Low IFN-γ
100
20
0,2 (0,1-1,2)
0,048
hoge IL-10 | 100
0
- 0,008
Low IFN-γ en high sialyl Lex
100
0
- 0,008
Low IFN-γ en hoge IL-10 | 100
0
- 0,008
OR : odds ratio; BI: betrouwbaarheidsinterval; *: Fisher's exact test
Tabel 5 toont het scoren van IFN-γ op het epitheel en IL-10 op de matrix en lymfocyten tussen muizen met aanhoudende en verloor kolonisatie op 8 e week na H. pylori
uitdaging. Geen van de jonge muizen met aanhoudende bacteriële kolonisatie had IFN-γ uitdrukking op het epitheel maar had duidelijk IL-10 expressie van de matrix en lymfocyten in vergelijking met de muizen zonder colonization.Table 5 De score IFN-γ op het epitheel en IL -10 op de matrix en lymfocyten in de 8e week na H. pylori
uitdaging in de jonge muizen met en zonder aanhoudende kolonisatie.



Score van IL-10
Muizen No.
Colonization
Score van IFN-γ op epitheel

matrix
op lymphocyte

1
Yes
0
1
1
2
Yes
0
1
1
3
Yes
0
1
1
4
Yes
0
1
1
5
No
1
0
0
6
No
2
1
0
7
No
2
0
0
8
No
2
0
0
9
No
2
0
1
Discussie
Overname van H. pylori
komt vooral voor in de kindertijd en spontane eliminatie van de infectie komt meestal voor bij jonge kinderen [3-6, 20]. In deze studie, de C57BL /6 volwassen muizen een gunstig H. pylori
kolonisatiesnelheid isolaten varieert meer dan 80%, die compatibel is met eerdere rapporten [13, 14]. Deze hoge kolonisatiesnelheid in volwassen muizen is ook compatibel met het feit dat late overname van H. pylori
bij volwassen menselijke patiënten leidt gewoonlijk tot chronische kolonisatie [20] ondersteunen. Bovendien, in vergelijking met de 2 nd week van jonge muizen na H. pylori
acquisitie, de kolonisatiesnelheid in 8 e week was 53%, met ondersteuning spontane eliminatie van H. pylori
werkelijk optreedt tijdens de vroege verwerving leeftijd muizen. Dus de huidige studie moet zeer origineel zijn om een ​​muismodel ontwikkeld te introduceren om te bevestigen dat er een verlies van H. pylori
kolonisatie zou moeten zijn na een eerdere overname van H. pylori
, die nauw bootst de klinische bevindingen bij jonge kinderen.
Onze eerdere studie is gebleken dat de intensiteit van gastrische Le x positief samenhangt met de toename van de leeftijd bij de mens [12]. Voor degenen zonder H. pylori-infectie
de expressie van sialyl-Le x op gastrische epitheel zwak of weinig dyspeptische kinderen en volwassenen [12]. Compatibel met de mens, de intensiteit van maag sialyl-Le x muizen eveneens positief gecorreleerd aan de toename van de leeftijd (figuur 2B). Een dergelijke vaststelling in muizen is ook compatibel met een rat studie, die een leeftijdsgebonden toename van glycosylering in de lever weefsels [21] bekendgemaakt. Verhoging van de maag sialyl-Le x expressie na H. pylori
besmetting is gemeld bij mensen en resusapen [9-12]. In onze studie muizen een verminderde intensiteit van maag sialyl-Le xwas beschreven in de H. pylori geïnfecteerde
jonge muizen, maar niet in volwassen muizen op de 2 nd week, in vergelijking met de controlemuizen. Meer opvallend, op de 8 e week na H. pylori
overname, zoals een daling van sialyl-Le x verdwenen in zowel de gekoloniseerde jonge en volwassen muizen, die een volledig gesialyleerde maagslijmvlies gehad. Deze bevinding suggereert dat H. pylori
uitdaging moeten worden betrokken bij de leeftijd gerelateerde rijping curve van sialylering verstoren in de jonge muizen. Bovendien is het indirect suggereert dat de veranderingen van sialyl-Lewis antigen bij jonge muizen in hoge mate moeten worden gecorreleerd aan het voortbestaan ​​of het verlies van H. pylori
kolonisatie.
In dit diermodel, vroeg H. pylori
overname veroorzaakte een hogere CIS dan in controles op de 2 nd week (87,5% vs. 50%, p
= 0,15), maar niet op de 8 e week (40% vs. 30%, P
= 0,36) na H. pylori
uitdaging. Aangenomen dat dichte ontsteking veroorzaakt ernstiger klinische symptomen, kan dit histologische veranderingen worden gecorreleerd met onze eerdere bevindingen dat H. pylori-infectie kunnen veroorzaken
kortdurende epigastrische pijn bij kinderen, maar doorgaans opgelost bij follow-up [22]. Met betrekking tot zowel de klinische observatie en in vivo muizen model data, H. pylori
overname bij kinderen meestal presenteert als een self-beperkte vervolg in een ontsteking.
Na H. pylori
infectie, de andere host reacties van de maag cytokines zou kunnen worden gerelateerd aan verschillende klinische resultaten [14, 18, 23, 24]. In deze studie werden de naïeve muizen bleek normale IL-1β en IFN-γ uitdrukkingen (Figuur 3C & 3D) hebben voor de gastrische epitheel, wat overeenkomt met een eerder verslag bij mensen [15]. Onze studie vertoonden muizen een leeftijd-specifieke cytokine expressie op de gastrische epitheel (IFN-γ) en lamina propria (IL-6, TNF-α, IFN-γ en IL-10). Vanwege de leeftijd-specifieke reactie van de cytokinen, onze studie ondersteunt die moeten er verschillende naïeve immuunresponsen tussen kinderen en volwassenen.
Basis van de immunohistochemische studie Deze studie bevestigt dat de pro-inflammatoire cytokine uitdrukkingen op de gastrische lamina propria zou kunnen veranderen op zowel de 2 e en de 8 e week na H. pylori
uitdaging [25, 26]. Zowel bij muizen en bij de mens, de maag cytokineresponsen van H. pylori infectie
aangetoond dat Th1-dominant omdat het niveau van IFN-γ is verhoogd bij H. pylori
geïnfecteerde patiënten vergeleken met controles [15, 18, 23, 27]. Een hoge INF-γ niveau is toegekend als kenmerk van H. pylori
gerelateerde gastritis, vooral tijdens chronische ontstekingen en mogelijk toegeschreven als een beschermende rol tegen H. pylori
kolonisatie [16-18, 28]. Zoals getoond in tabel 3, hebben beschreven dat jonge muizen met een verlies van kolonisatie een hogere IFN-γ uitdrukking op het epitheel dan de muizen met aanhoudende kolonisatie (P
= 0,048). Deze bevinding is compatibel met een humane studie bij kinderen waaruit bleek dat kinderen met H. pylori infectie
een lagere concentratie van IFN-γ dan bij niet-geïnfecteerde controles [29]. Deze gegevens bij muizen suggereert dat er mogelijk een significante correlatie kolonisatie verlies zodra er een hoge expressie van IFN-γ. Daarom moet het betrokken verschillende gastheerrespons van IFN-γ die kan worden gerelateerd aan verschillende H. pylori infectie
uitkomsten bij kinderen steekproef.
IL-10 is een Th2 cytokine, en kan worden geactiveerd door compenserende regulering na een Th1 verschuiving van de H. pylori
uitdaging aan het maagslijmvlies [13, 15, 23, 27] te beschermen. Daarom is het niet zo opvallend significante toename van IL-10 expressie in de jonge muizen met persistente kolonisatie (tabel 3) tonen. Zoals getoond in tabel 4, de jonge muizen met lage IFN-γ het epitheel een persistentie van H. pylori
kolonisatie had 100% coëxistentie met een hoge IL-10 expressie van de matrix en lymfocyten.

• Gastritis cystica profunda recidief na chirurgische resectie: 2 jaar follow-up
• Lauren indeling gecombineerd met HER2-status is een betere prognostische factor in het Chinees maagkanker patiënten