PLoS ONE: Ned Expression of AZGP1 er assosiert med dårlig prognose i Primær Gastric Cancer

Abstract

Bakgrunn

2-Sink-glykoprotein 1 (AZGP1) er et tverrfaglig protein som deltar i mange viktige funksjoner i kroppen, deriblant befruktning, immunregulering og lipid mobilisering. Nylig har det blitt vist at AZGP1 er også involvert i kreftutvikling og tumor differensiering. I denne studien undersøkte vi uttrykket nivåer og prognostisk verdi av AZGP1 i grunnskolen mage kreft.

Metoder og resultater

Vi har undersøkt uttrykk for AZGP1 i 35 paret kreft og matchet tilstøtende noncancerous mageslimhinnen vev ved real-time kvantitativ RT-PCR (QRT-PCR) og western blotting. Videre analyserte vi AZGP1 uttrykk i 248 pasienter som gjennomgikk reseksjon prosedyrer mellom 2005 og 2007 ved hjelp av immunhistokjemi. Sammenhengene mellom AZGP1 uttrykk nivåer ble clinicopathological faktorer, og pasientens overlevelse undersøkt. AZGP1 uttrykk ble betydelig redusert både på mRNA ( P
= 0,023) og proteinnivå ( P
= 0,019) i tumor vevsprøver, sammenlignet med uttrykk i matchet tilstøtende ikke-tumor vevsprøver . De immunhistokjemiske fargings data viste at AZGP1 uttrykk ble betydelig redusert i 52,8% (131/248) av pasienter med adenokarsinom tilfeller. Clinicopathological analyse viste at redusert uttrykk for AZGP1 var signifikant korrelert med tumor plassering ( P
= 0,011), histologisk grad ( P
= 0.005) og T scenen ( P
= 0,008). Kaplan-Meier overlevelseskurver viste at redusert uttrykk for AZGP1 var assosiert med dårlig prognose i adenokarsinom i ventrikkelen ( P
= 0,009). Multivariat Cox analyse identifisert AZGP1 uttrykk var en uavhengig prognostisk faktor for total overlevelse av adenokarsinom i ventrikkelen (HR = 1,681, 95% KI = 1,134 til 2,494, P
= 0,011).

Konklusjoner

Vår studie tyder på at AZGP1 kan tjene som en kandidat tumor suppressor og en potensiell prognostisk biomarkør i magekreft

Citation. Huang Cy, Zhao Jj, Lv L, Chen Yb, Li YF, Jiang ss, et al. (2013) Redusert uttrykk for AZGP1 er assosiert med dårlig prognose i Primær Gastric Cancer. PLoS ONE 8 (7): e69155. doi: 10,1371 /journal.pone.0069155

Redaktør: Alfons Navarro, Universitetet i Barcelona, ​​Spania

mottatt: 5 mars 2013; Godkjent: 05.06.2013; Publisert: 23.07.2013

Copyright: © 2013 Huang et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres

Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av doktorgrads Fund of Ministry of Education of China (20100171110084). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer

Innledning

Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP er den nest vanligste årsaken til kreftrelatert dødelighet på verdensbasis, med 988,000 nye tilfeller og 736,000 dødsfall per år [1] - [2]. I Kina ble magekreft spådd å være den tredje vanligste kreftformen i 2005 med 0,4 millioner nye tilfeller og 0,3 millioner dødsfall [3]. Behandlingen av magekreft inkluderer en kombinasjon av kirurgi, kjemoterapi og strålebehandling. Men nesten 60% av berørte pasientene bukke under for magekreft etter en kurativ reseksjon alene eller etter en kurativ reseksjon med påfølgende adjuvant behandling [4]. Magekreft er en heterogen sykdom hos både histologi og genetikk; dermed er tålmodig utfallet vanskelig å forutsi ved hjelp av klassiske histologiske klassifikasjoner. Gastric kreftutvikling er en multifaktoriell og flertrinnsprosess som involverer aktivering onkogener og inaktive tumorsuppressorgener i ulike stadier av magekreft progresjon. Nylig har flere nye onkogener og tumorsuppressorgener forbundet med magekreft blitt identifisert. Derfor er det viktig å finne klinisk effektive nye mål for tidlig diagnose og effektiv behandling av magekreft.

AZGP1 (2-sink-glykoprotein 1, Zn-a-2-glykoprotein) er et 41 kDa-protein løselig med et hovedhistokompatibilitetskompleks-1 (MHC-1) -lignende fold i sin struktur, og det ble først identifisert og renset i humant serum i 1961 [5]. Genet for AZGP1, overdratt til kromosom 7q22.1 gjennom fluorescerende hybridisering karyotyping, består av fire eksoner og tre introner [6], [7]. Ved hjelp av immunhistokjemiske studier har det blitt funnet at AZGP1 uttrykkes hovedsakelig i epitel-celler i bryst, prostata, lever og forskjellige andre gastrointestinale organer [8]. I takt med produksjonen av sekretoriske epitelceller, er AZGP1 funnet i en rekke kroppsvæsker [9], [10], [11].

AZGP1 er et tverrfaglig protein som deltar i mange viktige funksjoner i menneskekropp, inkludert befruktning [11], immunregulering [12] og lipid mobilisering [13], [14], [15]. AZGP1 er også assosiert med cancer cachexia. AZGP1 har et høyt nivå av amino-syre-sekvens homologi med tumor-avledede lipid-mobilisering faktor [14], og i en musemodell av AZGP1-produserende svulster, AZGP1 stimulert lipolyse i adipocytter som fører til kakeksi [16]. Nylig har det blitt vist at AZGP1 er også involvert i kreftutvikling og tumor differensiering. Protein og mRNA uttrykk analyser har vist en sammenheng mellom AZGP1 nivåer og histologisk grad av brystkreftsvulster [17], [18]. Videre har mange studier tyder på at AZGP1 er en potensiell serum markør for prostatakreft [9], [19]. I tillegg er det blitt vist at AZGP1 virker som en ny tumor suppressor i bukspyttkjertelkreft [20]. Imidlertid har hittil ekspresjonen status av AZGP1 og prognostisk verdi av dette proteinet i primær gastriske cancere ikke blitt rapportert.

I denne studien vi analyserte AZGP1 ekspresjonsnivået i magekreftformer ved å benytte sanntids kvantitativ RT -PCR (QRT-PCR), western blotting og immunhistokjemi. Videre identifiserte vi forholdet mellom AZGP1 uttrykk og clinicopathological funksjonene til magekreft, og vi evaluert den prognostiske verdien av AZGP1 uttrykk for den post-reseksjon overlevelse av mage kreftpasienter.

Resultater

AZGP1 mRNA Expression analysert med QRT-PCR

transkripsjonsnivåer AZGP1 ble bestemt med QRT-PCR-analyser ved hjelp av 35 par resected prøver (prøver svulst vev og matchet vevsprøver tilstøtende ikke-tumor) fra mage kreftpasienter. De AZGP1 mRNA nivåer ble betydelig redusert hos 28 (80%) svulst vevsprøver sammenlignet med matchede tilstøtende ikke-tumor vevsprøver ( P
= 0,023, figur 1).

AZGP1 Expression Analyserte ved Western blotting

AZGP1 protein nivåer i resected magekreft prøvene ble bestemt ved western blotting. Resultatene viste et bånd for AZGP1 ved 41 kDa, og mengden av protein som er tilstede AZGP1 ble målt ved densitometri og høyde. I samsvar med QRT-PCR-resultater, ble en reduksjon i AZGP1 ekspresjon observert i 25 (71,4%) av den gastriske tumorvev sammenlignet med de tilpassede tilstøtende ikke-tumorvev ( P
= 0,019, figur 2A). Åtte par representative mage tumorvev og matchet tilstøtende ikke-tumorvev ble vist i figur 2B.

Immunhistokjemisk analyse av AZGP1 Expression i magekreft vevsprøver og sitt forhold til Clinicopathological funksjoner

for å bekrefte de molekylærbiologiske funn og undersøke clinicopathological prognostiske roller AZGP1 uttrykk, utførte vi immunhistokjemisk analyse i 248 parafininnstøpte magekreft seksjoner. Den positive ekspresjon av AZGP1 ble lokalisert til cytoplasma (fig S1). Blant de 248 magekreft prøver, 117 (47,2%) viste høy AZGP1 uttrykk (AZGP1 ++ eller AZGP1 +++), mens de resterende 131 tilfellene (52,8%) som vises lav AZGP1 uttrykk (AZGP1- eller AZGP1 +) (figur 3, tabell 1). Normale mage vev viste den sterkeste AZGP1 positiv farging (figur 3A).

Basert på de kategoriene som vi definert i den tidligere nevnte metoder, viste dataene at den lave uttrykk for AZGP1 var signifikant korrelert med tumor plassering ( P
= 0,011), histologisk grad ( P
= 0.005) og T scenen ( P
= 0,008), men ikke med alder, kjønn, tumorstørrelse, radikal reseksjon , lymfeknutestatus (N scenen) eller metastasestatus (M scenen). De mikrografer er vist i figur 3.

Sammenheng mellom AZGP1 Expression Basert på Immunohistochemistry og pasient Survival

Median overlevelse av de 248 mage kreftpasienter var 45 måneder (variasjon 2-89 måneder) . Den generelle overlevelse og 5-års overlevelse ble betydelig forbedret i høy AZGP1 uttrykk gruppe enn den lave uttrykk gruppen [64,2% vs. 49,5% (total overlevelse rate) og 65,1% vs. 50,4% (5-års overlevelse), henholdsvis P
= 0,009, Figur 4].

Univariate og multivariate analyser

Univariat og multivariat analyse ble utført for å sammenligne effekten av AZGP1 uttrykk og andre clinicopathological parametrene på prognose. Basert på en univariat analyse som inkluderte alle 248 pasienter ble 8 faktorer funnet å ha statistisk signifikante assosiasjoner med total overlevelse. Denne analysen tok følgende faktorer i betraktning: tumor beliggenhet, svulst størrelse, histologisk grad, AZGP1 uttrykk nivåer, TNM stadium (7th edition TNM klassifikasjon) og hvorvidt en radikal reseksjon ble utført (tabell 2). Alle 8 faktorer ble inkludert i en multivariat Cox modellen for å justere for effekten av kovariatene. Basert på denne modell, svulsten plassering, AZGP1 ekspresjonsnivåer, T scene og N stadium av tumor ble bekreftet som selvstendige prognostiske faktorer (tabell 2).

diskusjon

Magekreft er fortsatt en av de mest dødelige menneskelige kreftformer. Selv med fremskritt innen diagnostikk og terapi, er prognosen for magekreft fortsatt dystert [1], [21]. Den kliniske resultatet av magekreft, avhenger av en rekke tumoregenskaper, så som tumorvekst, differensiering, invasjon og fjernmetastaser, som er regulert av en rekke beslektede gener. Derfor er det generelt ansett at genetiske endringer som fører til aktivering av onkogener og inaktivering av tumor-suppressorer er de underliggende årsakene til kreft patogenese. Den sekvensielle gevinst på onkogener og tap av tumor suppressors gi det nødvendige grunnlaget for trinnvis progresjon av solide svulster fra initiering til transformasjon og tumorprogresjon [22], [23], [24]. Tidligere AZGP1 er blitt rapportert å ha tumorundertrykkende egenskaper i brystkreft, prostatakreft, kreft i bukspyttkjertelen og noen andre ondartede svulster [17], [20], [25]; imidlertid rollen til AZGP1 i primær magekreft har ennå ikke blitt vurdert. Vår studie viste at AZGP1 uttrykk ble betydelig redusert både på mRNA og protein nivå i tumor vevsprøver, sammenlignet med uttrykk i matchet tilstøtende ikke-tumor vevsprøver. I samsvar med vår studie, Brysk MM et al. demonstrerte også at AZGP1 nivåene er høyere i normale orale vev enn i orale tumorer [26]. Gagnon S et al. også vist seg at AZGP1 var til stede i benigne hyperplastiske kjertler i 91,1% av tilfellene, men i bare 40,7% (dårlig differensiert komponent) til 48,5% (godt differensiert komponent) av prostata adenocarcinomer og bare 8% av metastaser [27]. Resultatene fra denne undersøkelsen støtter hypotesen om at AZGP1 kan tjene som en tumor suppressor i visse typer kreft.

For å validere denne reduksjonen av AZGP1 uttrykk i primærmagekreft videre, vi utført immunhistokjemisk analyse med en kanin anti-hAZGP1 antistoff. Vi observerte lavere uttrykk for AZGP1 farging i proksimale eller total magekreft sammenlignet med fjerne magekreft vev. Noen studier har vist at proksimale magekreftpasienter har et dårligere overlevelse enn fjerne magekreftpasienter [28]. Disse data antydet at den lave ekspresjon av AZGP1 i magekreft er assosiert med flere ondartede fenotyper. I tillegg oppdaget vi at redusert uttrykk for AZGP1 var assosiert med dårlig differensierte adenokarsinomer (G3 vs G1 /G2), noe som indikerer at AZGP1 kan indusere differensiering av magekreft. Disse resultatene er i samsvar med funnene i Diez et al. [17], [18], som beskrevet en sammenheng mellom høyt AZGP1 ekspresjon og høye nivåer av differensiering i brystkreft. Lignende funn er også rapportert for prostatakreft [19], brystkreft og kreft i bukspyttkjertelen [26]. Videre har vi oppdaget at den lave uttrykk for AZGP1 var assosiert med avansert T stadium. Disse resultatene underforstått at den lave ekspresjon av AZGP1 kan fremme tumorvekst. I samsvar med vår studie, Irmak S et al. foreslo at AZGP1 er relatert til utviklingen av overfladisk blærekreft og dens transformasjon til en invasiv fenotype [29]. Disse funnene kollektivt indikerer en viktig rolle for AZGP1 i differensiering og vekst av magekreft.

Bruk av Kaplan-Meier overlevelsesanalyse, pasienter i vår studie med lav AZGP1 uttrykk hatt en betydelig kortere total overlevelse enn de med høy uttrykk nivåer. Univariate analyser viste at redusert uttrykk for AZGP1 i mage kreft vev ble signifikant assosiert med den generelle overlevelse og 5-års overlevelse. Multivariat analyse viste at AZGP1 uttrykk, sammen med noen tradisjonelle prognostiske faktorer som svulst plassering, T scenen og N scenen, var uavhengige risikofaktorer i prognosen for mage kreftpasienter. Disse resultatene antydet at AZGP1 kan tjene som en ny prediktor for prognosen i mage kreftpasienter etter kirurgisk reseksjon.

De molekylære mekanismene for AZGP1 tumor undertrykkende egenskaper er fortsatt uklart. AZGP1 tilhører makroglobulin familien, en gammel og evolusjonært konservative kobling av immunsystemet. Zorin NA et al. foreslo at kapasiteten til makroglobuliner for bindehydrolaser gjør inhibering av enzymet-mediert tumorinvasjon mulig [30]. På samme tid, kan et overskudd av makroglobulin /hydrolaseinhibitorer komplekser aktivere apoptose [31]. Han N et al. rapporterte at AZGP1 også nedregulerer cyklin-avhengig kinase, som er ansvarlig for regulering av G2-M overgang, et hastighetsbegrensende trinn i cellesyklusen. Dette tyder på at AZGP1 spiller indirekte en rolle i å hindre tumorprogresjon [32]. AZGP1 ble foreslått som en tumor suppressor i bukspyttkjertelkreft ved Kong B. et al. Deres studie antydet at AZGP1 genet induserer mesenchymale-til-epitelial transdifferensiering ved å inhibere TGF-b-mediert signalisering ERK [20]. Den funksjonelle rollen og mekanismer av AZGP1 i magekreft trenger videre etterforskning.

I konklusjonen, vi først undersøkt uttrykket nivåer og prognostisk verdi av AZGP1 i grunnskolen mage kreft i denne studien. Våre studere resultatene antydet at AZGP1 kan tjene som en kandidat tumor suppressor og prognostisk biomarkør i grunnskolen mage kreft og være et potensielt mål for terapeutisk intervensjon; Men de molekylære mekanismene som er involvert i reguleringen av AZGP1 i magekreft garanterer videre etterforskning.

Materialer og metoder

Etikk erklæringen

Denne forskningen ble godkjent av etikkomiteen av Sun Yat-sen-universitetet Cancer Center og skriftlig informert samtykke ble innhentet fra hver pasient involvert i studien.

Menneske vevsprøve s

det er totalt 35 paret kreft og matchet tilstøtende noncancerous mageslimhinnen vev ble samlet inn fra mage kreftpasienter som gjennomgår gastrektomi ved Sun Yat-sen-universitetet Cancer Center fra 2010 til 2011. Etter kirurgisk fjerning, ble de friske vevet umiddelbart oppslukt i RNAlater (Ambion, Inc., USA) for å unngå RNA-degradering, lagret ved 4 ° C over natten for å tillate grundig gjennomtrengning av RNAlater inn i vevet og deretter frosset ved -80 ° C inntil RNA og protein ekstraksjon ble utført. En annen 248 parafininnstøpte primære magekarsinom prøvene som hadde blitt samlet inn mellom 2005 og 2007 ble hentet fra Sun Yat-sen-universitetet Cancer Center. Ingen av disse pasientene hadde fått strålebehandling eller kjemoterapi før operasjonen. Den histopatologiske type og stadium av magekreft ble bestemt i henhold til kriteriene i Verdens helseorganisasjon klassifisering og TNM scenen satt ut av Unionen for International Cancer Control.

Utvinning av Total RNA og Real-time kvantitativ RT-PCR

Total RNA ble ekstrahert ved hjelp TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, California, USA) i henhold til produsentens protokoll. Den totale RNA-konsentrasjonen ble bestemt ved å måle absorbansen ved 260 nm ved anvendelse av en NANO DROP spektrofotometer (ND-1000, Thermo Scientific, USA). Revers transkripsjon (RT) for å syntetisere den første streng av cDNA ble utført ved bruk av 2 pg av total RNA behandlet med M-MLV revers transkriptase (Promega, USA) i henhold til produsentens anbefalinger. Det resulterende cDNA ble deretter utsatt for sanntids kvantitativ RT-PCR for vurdering av de relative mRNA-nivåer av AZGP1 og GAPDH (glyceraldehyd-3-fosfat dehydrogenase, som en intern kontroll) med de følgende primere: AZGP1 frem: 5'-GGAAGCAGGACAGCCAACTT -3 ', og omvendt: 5'-TTATTCTCGATCTCACAACCAAAC-3'; GAPDH fremover: 5'-CTCCTCCTGTTCGACAGTCAGC-3 ', og omvendt: 5'-CCCAATACGACCAAATCCGTT-3'. Gene-spesifikk amplifikasjon ble utført ved hjelp av en ABI 7900HT real-time PCR system (Life Technologies, Carlsbad, California, USA) med en 15-ul PCR miks som inneholder 0,5 mL av cDNA, 7,5 mL av 2 × SYBR Grønn mester mix (Invitrogen, Carlsbad, California, USA), og 200 nM av passende oligonukleotidprimere. Blandingen ble forvarmet ved 95 ° C (10 min) og så forsterket ved 95 ° C (30 sek) og 60 ° C (1 min) i 45 sykluser. Oppløsningen kurve ble målt ved 95 ° C i 15 sek, 60 ° C i 15 sekunder og 95 ° C i 15 sek. Den Ct (terskelsyklus) verdien av hver prøve ble beregnet fra terskel sykluser med instrumentets programvare (SDS 2,3), og den relative ekspresjon av mRNA AZGP1 ble normalisert til GAPDH-verdi. Dataene ble analysert ved hjelp av sammenlignende terskelsyklusen (2 ^{-ΔCt) Fremgangsmåte den følgende formel: Relativ ekspresjonsnivået = 2 -ΔCt = 2 -Ct (GAPDH) - 2 -Ct (AZGP1), der Ct (GAPDH) betyr Ct verdien av GAPDH og Ct (AZGP1) betyr Ct verdien av AZGP1.}

Western blotting-analyse

de homogenismagekreft prøver, inkludert svulst og nontumor vev, ble lysert i RIPA lysebuffer, og lysatene ble høstet ved sentrifugering (12.000 rpm) ved 4 ° C i 30 minutter. Omtrent 20 ug proteinprøver ble deretter separert ved elektroforese i en 12% natrium-dodecylsulfat-polyakrylamidgel og overført til en polyvinyliden fluorid-membraner. Etter blokkering av ikke-spesifikke bindingsseter i 60 min med 5% ikke-fettholdig melk, ble membranene inkubert over natten ved 4 ° C med et kanin monoklonalt antistoff mot AZGP1 (PTG Company, USA, ved en 1:200 fortynning). Membranene ble deretter vasket tre ganger med TBST (tris-bufret saltvann med Tween-20) i 10 minutter og probet med pepperrot peroksidase (HRP) -konjugert geite-anti-kanin-IgG-antistoff (Immunology Consultants Laboratory, USA, ved en 1: 2000 fortynning) ved 37 ° C i 1 time. Etter tre vasker ble membranene utviklet av en forbedret chemiluminescence system (Cell Signaling Technology, Danvers, Massachusetts, USA). Bandet intensitet ble målt ved densitometri bruke Kvantum One-programvaren (Bio-Rad Laboratories, Inc. Hercules, CA, USA). Protein nivåer ble normalisert til at av GAPDH oppdages ved hjelp av en mus anti-human GAPDH monoklonalt antistoff (Shanghai Kangchen, Kina, på en 1:10000 fortynning).

Immunohistochemistry Analyse

De vevsdelene ble deparaffinized med dimetylbenzen og rehydrert ved 100%, 95%, 90%, 80% og 70% etanol. Etter tre vaskinger i PBS (fosfatbufret saltløsning), ble objektglassene kokt i antigen gjenfinning buffer inneholdende 0,01 M natrium-citrat-saltsyre (pH = 6,0) i 15 minutter i en mikrobølgeovn. Etter skylling med PBS, ble vevssnittene inkubert med det primære antistoff, og objektglassene ble deretter skylt i 3% peroksidase bråkjøling oppløsning (Invitrogen) for å blokkere endogen peroksidase. Snittene ble deretter inkubert med et kanin monoklonalt antistoff mot AZGP1 (PTG Company, USA, ved en 1:200 fortynning) ved 4 ° C over natten og deretter inkubert med pepperrot peroksidase (HRP) (ChemMateTM DAKO EnVisionTM Detection Kit) ved romtemperatur i 30 min. Etter vasking i PBS, ble visualiseringen signal utviklet med 3, 3'-diaminobenzidin (DAB) løsning, og alle av objektglassene ble motfarget med hematoksylin. Som negative kontroller ble det tilstøtende seksjoner bearbeidet som beskrevet ovenfor, bortsett fra at de ble inkubert over natten ved 4 ° C i blokkeringsløsning uten det primære antistoff.

Prøvene ble analysert ved hjelp av tre observatører (Chunyu Huang, Lin Lv, og Jingjing Zhao) som var blindet for pasientens kliniske resultater. Avvik mellom observatørene ble funnet i mindre enn 10% av de undersøkte lysbilder, og en enighet ble nådd etter ytterligere gjennomgang. Den totale poengsum AZGP1 immunfarging ble beregnet som summen av prosent positivitet (prosentandelen av de positivt fargede tumorceller) og fargeintensitet. Den prosentvise positivitet ble scoret som "0" (< 5%, negativ), "1" (5-25%, sporadisk), "2" (25-50%, brennvidde), eller "3" (> 50 %, diffuse). Den fargeintensitet ble scoret som "0" (ingen flekker), "1" (svakt farget), "2" (moderat farget), eller "3" (sterkt farget). Den totale AZGP1 farging poengsum varierte fra 0 til 9. Vi definerte AZGP1 uttrykk nivåer som følger: "-" for en score på 0-1, "+" for en score på 2-3, som ble definert som lav uttrykk; "++" For en score på 4-6, og "+++" for en poengsum >. 6, som ble definert som høy uttrykk

Oppfølging

Den postoperative oppfølging -up ble utført ved vår poliklinikk og inkludert klinisk og laboratorieundersøkelser hver 3. måned for de første 2 årene, hver 6. måned i løpet av tredje til femte år, og årlig i ytterligere 5 år eller inntil pasienten død, avhengig av hva som skjedde først. Total overlevelse, som ble definert som tiden fra driften til pasientens død eller den siste oppfølging, ble anvendt som et mål for prognose. Det var omtrent 4% av pasientene mistet oppfølging.

Statistical Analysis

En sammenkoblede-samples t-test ble brukt for å sammenligne AZGP1 mRNA nivåer i tumor vevsprøver og tilstøtende ikke- svulst vevsprøver. χ
^{2 test for proporsjoner og Pearsons korrelasjonskoeffisienter ble brukt til å analysere forholdet mellom AZGP1 uttrykk og ulike clinicopathological egenskaper. Totalt overlevelseskurver ble beregnet med Kaplan-Meier metoden og ble analysert med log-rank test. Cox proporsjonal-hazard analyse ble brukt for univariat og multivariat analyse for å utforske effekten av clinicopathological variabler og AZGP1 uttrykk på overlevelse. En tosidig P
-verdi < 0,05 ble ansett for å være statistisk signifikant. Alle statistiske analyser ble utført med SPSS (versjon 17.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA).}

Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
Immunhistokjemisk påvisning av AZGP1 protein uttrykk i magekreft vev. Den positive uttrykk for AZGP1 ble lokalisert til cytoplasma
doi:. 10,1371 /journal.pone.0069155.s001 plakater (TIF)

• PLoS ONE: Nedgang på MIR-202-3p Expression, en Novel Tumor lyddemper, i Gastric Cancer
• PLoS ONE: En ny underklassifikasjon av pt4 Gastric Kreft i henhold til bredden av serøse Invasion