PLoS ONE: Hypoksi Stimulerer EMT av magekreft celler gjennom Autocrine TGFB Signaling

Abstract

epithelial mesenchymale overgang (EMT) regnes for å være korrelert med malignitet av kreftceller og ansvarlig for kreft invasjon og metastasering. Vi har tidligere rapportert at fjernmetastaser var assosiert med hypoksi i magekreft. Vi undersøkte derfor effekten av hypoksisk tilstand på EMT av magekreftceller. Gastriske kreftceller ble dyrket i normoxia (21% O _{2) eller hypoksi (1% O 2) i 24 timer. EMT ble evaluert som prosentandelen av spindel-formede celler i totale celler. Effekt av transformerende vekstfaktor-β1 (TGFβ1) eller tyrosinkinaseinhibitorer på EMT ble evaluert. Uttrykket nivået av TGFβ1 Hotell og TGFβR
ble evaluert av real time RT-PCR. Den TGFβ1 produksjon fra kreftceller ble målt ved hjelp av ELISA. Hypoksi stimulert EMT av OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, men ikke som OCUM-2M celler. Ekspresjonsnivået av TGFβ1
mRNA under hypoxi var signifikant høyere enn at under normoxia i alle tre cellelinjer. Ekspresjonsnivået av TGFβR
mRNA var signifikant økt ved hypoksi i OCUM-2MD3 celler, men ikke i OCUM-2M-celler. TGFβR inhibitor, SB431542 eller Ki26894, undertrykte betydelig EMT av OCUM-2MD3 og OCUM-12. TGFβ1 produksjon fra OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler ble betydelig økt etter hypoksi sammenlignet med at under normoxia. Disse funnene kan tyde på at hypoksi stimulerer EMT av mage kreftceller via autokrint TGFB /TGFβR signale}

Citation. Matsuoka J, Yashiro M, Doi Y, Fuyuhiro Y, Kato Y, Shinto O et al. (2013) Hypoksi Stimulerer EMT av magekreft celler gjennom Autocrine TGFB signalering. PLoS ONE 8 (5): e62310. doi: 10,1371 /journal.pone.0062310

Redaktør: Claudio M. Costa-Neto, Universitetet i São Paulo, Brasil

mottatt: 19 oktober 2012; Godkjent: 19 mars 2013; Publisert: 17 mai 2013

Copyright: © 2013 Matsuoka et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres

Finansiering:. Denne studien ble støttet delvis av National Cancer Center Research and Development Fund (23-A-9), og ved Grants-in Aid for Scientific Research (KAKENHI, nr. 20591573, 22390262, og 23390329) fra departementet for utdanning, vitenskap, sport, kultur og teknologi i Japan. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet

Konkurrerende interesser:. Forfatterne har følgende interesser. KS, TS, og AM er ansatte i Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Ki26894, som ble brukt i denne studien, er et produkt av Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Det er ingen ytterligere patenter, produkter under utvikling eller markedsført produkter å erklære . Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer, som beskrevet på nettet i veiledningen for forfatterne.

Innledning

epithelial mesenchymale overgang (EMT) er karakterisert ved forandringer i cellemorfologi i løpet av hvilken epitelceller skaffe mesenchymale egenskaper samtidig miste celle-celle interaksjoner og apicobasal polaritet [1], [2]. I epiteliale kreftformer, er EMT anerkjent som en av de mekanismene som er ansvarlig for å initiere invasiv og metastatiske atferd [3] - [5]

Det finnes et hypoksisk miljø i enkelte regioner i solide kreftformer som viser rask vekst fordi angiogenese. i karsinomer er heterogen [6]. Hypoksi er ansett for å være assosiert med aggressive tumor fenotyper av gastriske karsinomer [7], [8], inkludert metastatisk evne av kreftceller [6], [9]. Kliniske og eksperimentelle data gir også holdepunkter for en sammenheng mellom hypoksisk miljø og dårlig prognose [10], [11]. Det er derfor viktig for den fremtidige utviklingen av kreft behandlinger for å avklare mekanismen av metastase indusert av hypoksi.

Det har blitt rapportert at ulike løselige faktorer, inkludert transvekstfaktor-β1 (TGFβ1) [12], [ ,,,0],13], epidermal vekstfaktor (EGF) [14], insulin-lignende vekstfaktor-1 (IGF1) [15], fibroblast vekstfaktor (FGF) [16], hepatocytt-vekstfaktor (HGF) [17] ble korrelert med EMT . TGFp signaler har en viktig rolle i forskjellige aspekter ved metastatisk spredning av kreftceller, slik som migrasjon, invasjon, og EMT [12], [13]. De TGFp-ligander bindes til TGFp-reseptor type II (TGFβRII), som deretter danner et kompleks med enten TGFβR type I eller II. TGFβR type I (TGFβRI) overfører signaler i cellen via andre messenger-Smad proteiner [13], [18]. Nedstrøms signaloverføring gjennom TGFβRI, som fosforylerer reseptor-regulert Smad proteiner [19], [20]

Flere studier har rapportert at en hypoksisk tilstand kan indusere EMT av kreftceller [21] -. [24], men den molekylære mekanismen ansvarlig for EMT under en hypoksisk tilstand er fortsatt uklart. Vi undersøkte derfor effekten av hypoksi på morfologiske egenskapene til mage kreftceller til å avklare mekanismene som er ansvarlig for hypoksi-indusert EMT.

Materialer og Metoder

cellekultur og cellelinjer

Syv magecancercellelinjer ble anvendt. OCUM-2MD3 [25], OCUM-12 [26], OCUM-2M [27], ble KATO-III [28], og MKN-45 [29] er avledet fra diffus-type gastrisk karsinom. MKN-74 [29] og MKN-7 [29] var avledet fra intestinal-type. OCUM-2M, OCUM-2MD3 og OCUM-12 ble etablert i vårt laboratorium, som tidligere rapportert [25] - [27]. Kort, OCUM-12was avledet fra ascites forbundet med diffuse-type magekreft, og OCUM-2MD3 celler, en datter cellelinje med høyt potensial for peritoneal metastaser, ble etablert fra OCUM-2M celler ved hjelp orthotopic tumormodell, en foreldrecellelinje ascites assosiert med diffuse-type magekreft. De andre cellelinjer ble oppnådd fra JCRB cellebank (Osaka, Japan) eller American Type Culture Collection (Rockville, MD). Celler ble dyrket ved 37 ° C i 21% O _{2 (normoxia) eller 1% O 2 (hypoksi). Hypoksiske betingelser ble opprettholdt ved hjelp av et modulbasert inkubator kammer (Hirasawa, Tokyo, Japan) med 5% CO 2 og 1% O 2 balansert med N 2 gass. Dyrkningsmediet besto av Dulbeccos modifiserte Eagle-medium (DMEM;. Nikken Bio, Osaka, Japan) med 10% føtalt bovint serum (. Nichirei Bio), 100 IU /ml penicillin (ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA), 100 ug /ml streptomycin (ICN Biomedicals), og 0,5 mM natriumpyruvat (Cambrex, Walkersville, MD).}

morfologiske endringer

Kreftceller celler~~POS=HEADCOMP ble dyrket under normoksiske og hypoksiske betingelser i 24 timer, og cellemorfologi ble observert mikroskopisk. EMT ble bestemt når det mangekantede eller spindel form ble funnet i kreftceller ved fasekontrastmikroskop. Frekvensen av EMT ble bedømt ved graden av polygonale eller spindelformede celler i alle kreftceller; EMT rate = antall polygonale eller spindel form celler /totalt antall celler x 100 (%).

Effekter av ulike løselige faktorer på morfologiske endringer

Vi undersøkte effekten av ulike løselige faktorer , inkludert EGF (Pepro Tec, Rocky Hill, New Jersey), IGF1 (Pepro Tec), vaskulær endotelial cellevekstfaktor (VEGF, R &D-systemer, Minneapolis, MN), grunnleggende-FGF (Sigma, St. Louis, MO), plate avledede vekstfaktor BB homodimer (PDGF-BB; Pepro Tech), HGF (Pepro Tech), TGFβ1 (King Brewing, Kakogawa, Japan), på morfologi av kreftceller. Celler ble dyrket i DMEM inneholdende en av ovennevnte faktorer ved ønsket konsentrasjon ved 37 ° C i normoxia. Cellemorfologi ble undersøkt etter 24 timer. Forsøk ble utført for hver faktor i duplikat.

Effekter av nøytraliserende antistoffer på morfologiske endringer

Vi brukte nøytraliserende antistoffer, slik som anti-HGF antistoff (Genzyme techne, MPLS, MN, USA), anti-TGFB antistoff (R &D Systems), anti-PDGF-BB (Genzyme), anti-FGF7 (R &D Systems), anti-VEGFR3 (R &D-systemer). Celler ble dyrket i DMEM inneholdende en av ovennevnte antistoffer på 100 ug /ml ved 37 ° C i hypoksi. Cell morfologi ble undersøkt etter 24 timer.

Effekt av ulike phospholylation hemmere på morfologiske endringer

Etter celler nådd semi samløpet, celler ble tilsatt TGFB eller hver hemmer og inkuberes i henhold hypoksisk tilstand eller normoxia i 24 timer. Deretter ble morfologiske funn undersøkt i sammenligning med kontrollen. Fem små-syntetiske phospholylation hemmere, Ki26894 (TGFβRI inhibitor, 10 mm, Kirin Pharma, Mishima, Japan), SB431542 (TGFβRI inhibitor, 10 mm, Sigma, St. Louis, MO), Sunitinib (SU11248, 20 nM, en tyrosinkinasehemmer mot VEGFR, PDGFR, c-KIT, FGFR2 og FLT3, LKT Laboratories, St. Pail, MN), PD173074 (FGF /VEGF reseptortyrosinkinasehemmer, 5 nM, Santa Cruz, CA), Lapatinib (GW572016, 10 nM, en tyrosinkinasehemmer mot EGFR og ErbB2, Toronto Research Chemicals), og PHA665752 (c-MET-hemmer, 2 mikrometer;. Pfizer, San Diego, CA, USA) ble brukt

Kvantitativ sanntid revers transkriptase-polymerase kjedereaksjon (RT-PCR)

Kvantitativ RT-PCR ble utført for å undersøke TGFβ1
, TGFβRI, TGFβRII, Kjøpe og vimentin
mRNA uttrykk. Kreftceller ble inkubert i henhold til normoksisk betingelser og under hypoksiske betingelser i 24 timer. Etter inkubasjonen ble det totale cellulære RNA ekstrahert ved anvendelse Trizol reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA) ifølge produsentens instruksjoner. Etter fjerning av genomisk DNA ved hjelp av DNase, ble cDNA fremstilt fra 2 pg RNA med Maloney museleukemivirus revers transkriptase (Invitrogen) ved anvendelse av vilkårlige primere (Invitrogen). For å bestemme fold endringer i hvert gen, ble real-time RT-PCR utføres på ABI Prism 7000 (Applied Biosystems, Foster City, CA), ved bruk av kommersielt tilgjengelige genekspresjon analyser for TGFβ1 plakater (Hs00998130,), TGFβRI plakater (Hs00610319), TGFβRII plakater (Hs00559661), vimentin plakater (Hs00958116), Twist plakater (Hs01675818), Zeb1
(Hs 00232783), Snail1 plakater (Hs00195591), VEGFA plakater (Hs00900055). PCR ble utført ved 95 ° C i 15 s og 60 ° C i 60 sek for 40 sykluser. Glyseraldehyd-3-fosfat dehydrogenase (GAPDH) ble anvendt som en intern standard for å normalisere mRNA-nivåer for forskjeller i prøvekonsentrasjon og lasting. Brett endringer i ekspresjon av hvert mål-mRNA i forhold til GAPDH ble beregnet på grunnlag av terskelen syklus (Ct) som 2 ^{-Δ (ΔCt), hvor ΔCt = Ct Ct target- GAPDH og Δ (ΔCt) = ΔCt _{hypoksi-ΔCt normoxia. Kvantitativ PCR-reaksjoner ble utført in triplo.}}

Western blot-analyse

For å undersøke virkningen av hypoksi på Smad2 fosforylering, kreftceller ble inkubert i henhold til normoksisk eller hypoksiske betingelser i 24 timer, henholdsvis. Cellene ble lysert i en lyseringsbuffer, og alikvoter inneholdende 50 ug totalt protein, ble underkastet natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgel-elektroforese; proteinbåndene ble overført til en polyvinylidendifluorid-membran (Millipore, Billerica, Massachusetts). Membranen ble inkubert i TBS-T (10 mM TBS, og 0,05% Tween 20) supplert med 5% fettfri melk eller 5% bovint serumalbumin (Sigma) ved romtemperatur i 1 time. Deretter ble membranen plassert i en TBS-T-oppløsning inneholdende det primære antistoff p-Smad2 (Ser ^{465/467, 1: 1000, Cell Signaling Technology) eller Smad2 /3 (1: 1000; Cell Signaling Technology), vimentin (1: 1000; Cell Signaling Technology), anti-βactin (1: 1000; Sigma) og tillatt å reagere ved 4 ° C over natten. Deretter ble hvert antistoff vasket tre ganger med TBS-T i 10 minutter, og et peroksidase-merket sekundært antistoff (GE Healthcare, Buckinghamsire, UK) reagerer med det primære antistoff ble tilsatt. Båndene ble oppdaget ved hjelp av en forbedret chemiluminescence system (Wako, Osaka, Japan).}

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

TGFβ1 produksjon fra kreftceller ble målt ved en kvantitativ smørbrød enzym immunologisk måleteknikk ved anvendelse av en Quantikine human TGFβ1 ELISA-sett, i henhold til produsenten `instruksjon (R &D systemer). Kreftceller ble inkubert i henhold til hypoksi eller normoxia i 24 timer, og deretter ble mediet skiftet til 3 ml serumfritt DMEM. Celler ble inkubert i henhold til hypoksi eller normoxia, i ytterligere 24 timer. Betinget medium (CM) ble samlet inn fra hver tallerken og sentrifugert ved 1000 g
i 5 min. TGFβ1 nivå av serumfritt CM ble målt ved anvendelse av ELISA sett. ELISA oppdaget både den aktive og latente TGFB.

Statistisk analyse

Sammenligninger mellom datasettene ble gjort med Student t
-test eller Kruskal-Wallis enveis ANOVA av rekkene etterfulgt av Dunn multiple sammenligningstest. Forskjeller ble ansett for å være statistisk signifikant når P-verdi var. ≪ 0,05

Resultater

Effekter av hypoksi på kreftcellen morfologi

En hypoksisk tilstand betydelig økt antall av polygonale eller spindelformede celler som gjennomgår EMT blant OCUM-2MD3 eller OCUM-12-celler, men ikke blant OCUM-2M, MKN-7, MKN-45, MKN-74, eller KATO-III celler (fig. 1A og fig. S1). Cellen morfologi OCUM-2MD3 og OCUM-12 begynte å endre etter 4 timer i hypoksisk kultur. Etter 12 timer med kultur, ble en økt forekomst av EMT sett i begge cellelinjene. EMT frekvensen av OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler var høyest ved 24 timer hypoksisk kultur (Fig. 1B). Siden morfologiske endringene var tydelig ved 24 timer med kultur i henhold hypoksi, ble de molekylære mekanismene for EMT analysert på 24 timer med kultur i henhold hypoksiske forhold ved hjelp OCUM-2MD3, OCUM-12, og OCUM-2M celler.

virkninger av forskjellige vekstfaktorer for kreft cellemorfologi

løselige faktorer ble benyttet i konsentrasjoner på 10 eller 100 ng /ml. OCUM-2MD3 og OCUM-12-celler ble spindel-formet etter tilsetning av TGFβ1 eller HGF, men ikke etter tilsetning av EGF, FGF2, FGF7, IGF1, VEGF eller PDGF-BB etter 24 timer under normoxia (tabell 1). I kontrast, OCUM-2M celler viste ingen morfologiske forandringen etter tillegg av eventuelle faktorer (fig. 2).

Effekter av nøytraliserende antistoffer på kreftcelle morfologi etter hypoksi

EMT indusert av hypoksi ble delvis hemmet av anti-TGF-β1 antistoff på 100 mikrogram /ml, men ikke av anti-HGF antistoff (tabell 2).

Effekter av hypoksi på TGFβ1
, TGFβRI
og TGFβRII
mRNA uttrykk av magekreftceller

uttrykket nivået av TGFB
var signifikant (p < 0,001) økte under en hypoksisk tilstand i alle OCUM -2MD3, OCUM-12, og OCUM-2M-celler, sammenlignet med nivået i henhold normoxia (fig. 3A). Uttrykket nivåer av TGFβRI Hotell og TGFβRII
ble betydelig økt under en hypoksisk tilstand OCUM-2MD3 celler. I motsetning til nivåene av TGFβR1 Hotell og TGFβR2
uttrykk ble betydelig redusert under en hypoksisk tilstand OCUM-2M celler (fig. 3B).

Effekt av hypoksi på TGFβ1 produksjon løslatt fra mage kreftceller

TGFβ1 produksjon fra OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler var signifikant (p < 0,001) økte etter hypoksi sammenlignet med normoxia, men ikke at fra OCUM-2M celler (fig 3C. ).

Effekter av hypoksi på Smad2 fosforylering av magekreft cellelinjer

i OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, Smad2 fosforylering ble økt under en hypoksisk tilstand, i forhold til at under en normoksiske betingelse. I motsetning til dette ble Smad2 fosforylering ikke øket under en hypoksisk tilstand OCUM-2M-celler (fig. 4).

Effekter av fosforylering kinaseinhibitorer for EMT og vimentin uttrykk i hypoksi

Hver av de TGFβR fosforylering hemmere, Ki26894 og SB431542, hemmet de morfologiske endringer OCUM-2MD3 og OCUM-12 cellene under et hypoksisk tilstand, men tre andre hemmere, Lapatinib, Sunitinib og PHA665752, ikke (figur 5A, 5B). På den annen side, er ingen av inhibitorene hadde noen effekt på morfologien til OCUM-2MD3 og OCUM-12-celler i henhold til normoxia (data ikke vist). Ekspresjonsnivået av vimentin
, som ble anvendt som en EMT markør, ble signifikant øket ved hypoksi, og ble redusert ved hver av de TGFβR inhibitorer Ki26894 og SB431542 (figur 5C). Vimentin proteinnivået var også økt etter hypoksi, og ble redusert med ett av TGFβR hemmere Ki26894 og SB431542 (figur 5D).

Effekter av hypoksisk tilstand på faktorer assosiert med EMT.

hypoksisk tilstand betydelig økt VEGF-A
mRNA nivå i OCUM-2M, OCUM-2MD3, og OCUM-12 celler. Uttrykket nivået av Twist
eller Zeb1
var signifikant økt med hypoksi i OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, men ble redusert i OCUM-2M celler. Den økte uttrykk for Twist
eller Zeb1
ble redusert med en av de TGFβR hemmere Ki26894 og SB431542 i OCUM-12 celler. Hypoksisk tilstand ikke påvirket på uttrykket nivået av Snail1 plakater (figur 6).

Diskusjoner

Nylig har flere studier har rapportert at en hypoksisk mikromiljøet rundt solide tumorceller kanskje bidra til progresjon av kreft [30] - [34]. Men de molekylære mekanismene som er ansvarlig for kreft progresjon i hypoksi fortsatt uklare. Det har blitt rapportert at hypoksi er en av utløserne for EMT [35]. I denne studien, en hypoksisk tilstand indusert EMT i diffuse-type mage kreft cellelinjer OCUM-2MD3 og OCUM-12, men ikke i intestinal-type celler. Diffuse-type magekreft er preget av høyere malignitet enn intestinal-type magekreft [36]. EMT potensialet av kreftceller under hypoxi kan være en av årsakene til den høye malignitetspotensiale av diffust-type magekreft.

Mange studier har rapportert at flere molekyler kan påvirke EMT av kreftceller, inkludert TGFp [23 ], [37], EGF [38], og PDGF [39]. I denne studien, TGFfi stimulert EMT av OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, men EGF og PDGF ikke. I tillegg ble EMT induksjon under en hypoksisk tilstand vesentlig redusert med anti-TGFB nøytraliserende antistoff eller TGFβR fosforylering hemmere både OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler. Tatt sammen indikerer disse resultatene at produksjonsnivået av TGFp i kreftceller var signifikant økt etter hypoksi, og uttrykket nivåer av TGFβR og Smad2 fosforylering ble økt med hypoksi. Vimentin er en karakteristisk bestanddel av mesenchymale celler og er ikke vanligvis uttrykt i epitelceller. Fordi uttrykk for vimentin
i epitelceller spiller en avgjørende rolle i EMT gjennom interaksjon med aktin og andre mellomfilamenter [40], vimentin ble brukt som en EMT markør i denne studien. Uttrykket nivået av vimentin
ble betydelig økt ved hypoksi, og ble redusert med de TGFβR fosforylering hemmere Ki26894 og SB431542. Disse resultatene antydet at EMT under en hypoksisk tilstand er forbundet med den autokrine TGFp /TGFβR signalering i diffust-type magekreft. Flere studier rapporterte sammenhengene mellom EMT og TGFB signal i hypoksi. [2], [21], [23], [32], [37] I magekreft, har det blitt rapportert at EMT er korrelert med malignitet av kreftceller og er ansvarlig for kreftinvasjon og metastase. Men de mekanismene som er ansvarlig for EMT av magekreftceller forblir uklart. Dette papiret avklart at EMT av magekreftceller ble indusert via TGFB signaliserer etter hypoksi. TGFβR inhibitorer kan således være lovende midler for behandling av mage cancer metastase.

Hypoksi stimulert EMT av OCUM-2MD3 celler, men ikke den av OCUM-2M-celler. EMT har vært innblandet i å fremme kreft invasjon og metastasering. Mens OCUM-2MD3 er en "datter" cellelinje av OCUM-2M [25], [34], OCUM-2MD3 celler har større potensial for spredning til bukhinnen i hårløse mus enn OCUM-2M celler [25], [34] . Kreftceller frie til å migrere inn i bukhulen blir utsatt for hypoksi på grunn av mangel på en proksimal matebeholder [41]. Ekspresjonsnivået av TGFβ1
mRNA under hypoxi var signifikant høyere enn at under normoxia i alle tre cellelinjene. I motsetning til uttrykket nivået av TGFβRI Hotell og TGFβRII
mRNA ble betydelig økt med hypoksi i OCUM-2MD3 celler, men ikke i OCUM-2M celler. De ulike svarene av TGFβR
uttrykk mellom normoxia og hypoksi kan være en av de viktigste årsakene til hypoksi-indusert EMT. Vi har tidligere rapportert at magekreftceller under hypoxi viste EMT og høye trekkende og invasive aktiviteter i forhold til kreftceller i normoxia [34]. Den oppregulering av EMT av hypoksiske kreftceller kan være en av årsakene til den høyere potensial for metastaser til peritoneum i OCUM-2MD3 celler i forhold til OCUM-2M celler.

hypoksisk tilstand betydelig økt uttrykk nivå av Twist Hotell og Zeb1
i OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, men ikke som i OCUM-2M celler. Den hypoksi økende aktivitet av Twist Hotell og Zeb1
uttrykk ble redusert med TGFβR hemmere (Ki26894 og SB431542) i OCUM-12 celler. EMT i hypoksi kan bli delvis regulert av transkripsjonsfaktorer, Twist Hotell og Zeb1.

Selv HGF påvirket kreftcelle morfologi i OCUM-2MD3 og OCUM-12 celler, hypoksi-indusert EMT ble ikke hemmet av anti-HGF nøytraliserende antistoff eller c-Met inhibitor i enten OCUM-2MD3 eller OCUM-12 celler. HGF produksjon ble ikke påvist i OCUM-2MD3 eller OCUM-12 celler under enten hypoksi og normoxia (data ikke vist). De fleste av HGF er avledet fra stromale celler i magekreft [42]. Mens HGF ikke kan spille en viktig rolle for hypoksi-indusert EMT, kan HGF stimulere EMT av kreftceller via kreft-stromal interaksjon.

hypoksi-indusert EMT av OCUM-2MD3 celler ble delvis hemmet av TGFβR hemmere , men forskjellige andre inhibitorer, deriblant c-Met-inhibitor, PDGF-inhibitoren, EGFR-inhibitor, og VEGFR-inhibitor, hadde ingen effekt på den hypoksi-indusert EMT i denne studien. Disse funnene tyder på at andre faktoren (e) kan være assosiert med hypoksi-indusert EMT i enkelte kreftceller. I fremtidige studier, vil det være nødvendig å undersøke andre nye faktorer som kan endre kreft morfologi.

I konklusjonen, autokrint TGFfi /TGFβR signaliserer etter hypoksi kan være en av faktorene knyttet til aggressiv fenotype av EMT i gastric carcinoma celler. TGFB /TGFβR signal hemmere synes å være terapeutisk lovende i magekreft.

Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
morfologiske endringer av mage cellene under et hypoksisk tilstand. I MKN-7, MKN-45, MKN-74, og KATO-III, ble morfologiske endringene ikke finnes under hypoksi
doi:. 10,1371 /journal.pone.0062310.s001 plakater (TIF)

• PLoS ONE: Janus Kinase 2 Polymorfisme er forbundet med risiko for pasienter med magekreft i en kinesisk Befolkning
• PLoS ONE: Multiple-til-flere relasjoner mellom microRNAs og målgener i Gastric Cancer