Stomach Health > magen Helse >  > Gastric Cancer > magekreft

PLoS ONE: stanse av claudin-11 er assosiert med økt Invasivitet av magekreft Cells

Abstract

Bakgrunn

Claudins er membran proteiner som spiller avgjørende roller i tett veikryss (TJ) dannelse og funksjon. Medlemmer av claudin genet familien har vist seg å være abnormt regulert, og til å delta i patogenesen av ulike kreft hos mennesker. I denne studien rapporterer vi at claudin-11 ( CLDN11
) er brakt til taushet i magekreft via
hypermethylation av sin promoter regionen.

metodikk /hovedfunnene

Nivåer av CLDN11
metylering og mRNA uttrykk ble målt i primær mage kreft vev, noncancerous mage slimhinner, og cellelinjer av mage opprinnelse ved hjelp av kvantitativ metylering spesifikke PCR (qMSP) og kvantitativ revers transkriptase-PCR (QRT-PCR), respektivt. Analyser av sammenkoblede mage kreft og tilstøtende normale mage vev avslørte hypermethylation av CLDN11
promoter-regionen i mage kreft, og dette hypermethylation var signifikant korrelert med nedregulering av CLDN11
uttrykk vs.
normalt vev. CLDN11
promoter-regionen ble også hypermethylated i alle magekreftcellelinjer testet i forhold til udødelig normale mage epitelceller. Videre CLDN11
mRNA uttrykk ble omvendt korrelert med sin metylering nivå. Behandling av CLDN11
-nonexpressing magekreftceller med 5-aza-2'-deoxycytidine restaurert CLDN11
uttrykk. Videre siRNA-mediert knockdown av CLDN11
uttrykk i normale mage epitelceller økt bevegelighet og invasivitet.

Konklusjon /Betydning

Disse dataene tyder på at hypermethylation av CLDN11
, som fører til downregulated uttrykk, bidrar til magekreftutvikling ved å øke celle motilitet og invasivitet. En videre forståelse av mekanismene bak rollen claudin proteiner i magekreftutvikling vil trolig bidra til identifisering av nye tilnærminger for diagnostisering og behandling av magekreft

Citation. Agarwal R, Mori Y, Cheng Y, Jin Z, Olaru AV, Hamilton JP, et al. (2009) stanse av claudin-11 er assosiert med økt Invasivitet av Gastric kreftceller. PLoS ONE 4 (11): e8002. doi: 10,1371 /journal.pone.0008002

Redaktør: Fatah Kashanchi, George Washington University School of Medicine, USA

mottatt: 03.08.2009; Godkjent: 23 oktober 2009; Publisert: 24.11.2009

Copyright: © 2009 Agarwal et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres

Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av USA National Institutes of Health gir CA085069, CA138677 og CA146799 til SJ Meltzer. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer

Innledning

Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP (GC) er fortsatt den nest mest vanlige årsaken til kreft dødsfall globalt. Det er en av de mest dødelige kreftformer og en ledende årsak til kreft dødsfall i utviklingsland, med samlede 5-års overlevelse under 20% [1], [2].

Studier av GCer og deres preneoplastiske forløper lesjonene har identifisert flere genetiske og epigenetiske endringer, inkludert mikro ustabilitet, punktmutasjoner, og tap av heterozygositet (LOH) som påvirker tumorsuppressorgener (TSGs) [3] - [6]. Likevel er den molekylære patogenesen av GC fremdeles ufullstendig forstått.

epigenetiske forandringer er ekstremt viktig i kreftutvikling og progresjon [7]. Transcriptional inaktivering av tumorsuppressorgener via avvik arrangøren hypermethylation av CpG øyer, forårsaker permanent genet stanse, er en stor epigenetisk mekanisme TSG inaktivering.

Tidligere studier har blitt publisert på arrangøren hypermethylation i GCer og deres premaligne forløpere [ ,,,0],8] - [10]. p16INK4a og p15INK4B var blant de første gener vise hypermethylation i GCer [11]. Vår gruppe og andre senere oppdaget hypermethylation av hMLH1 DNA misparringssystemet i GCer stille hyppige mikro ustabilitet (MSI-H) [12] - [14]. Vi viste også at hypermethylation av E-cadherin (CDH1) genet forekommer hyppig i GCer [15].

En pilot microarray-baserte genom-wide søk utført av vår gruppe, utført for å oppdage nye epigenetiske forstummet gener i magekreftutvikling, identifisert claudin-11 ( CLDN11
), en tight junction (TJ) protein, som et potensielt mål for epigenetisk inaktivering i mage kreft (upubliserte data).

claudin-11 tilhører til familien av claudin proteiner, som inneholder mer enn 23 medlemmer. Medlemmer av familien claudinet blir uttrykt i et høyt vev-spesifikk måte i en rekke normale og neoplastiske vev [16]. Claudins er transmembrane proteiner som spiller viktige roller i TJ dannelse og funksjon. TJS er intercellulære overganger kritiske i paracellulær transport av oppløste stoffer, så vel som å opprettholde celle polaritet. Tumorceller som vanligvis utviser strukturelle og funksjonelle mangler i deres TJS [17].

I de senere årene har en rekke studier har vist avvikende ekspresjon av claudin-proteiner i forskjellige krefttyper [18], [16]. Flere av disse studiene fant feilregulering av claudin protein uttrykk via
promoter hypermethylation. Hypermethylation-indusert stanse av claudin-7 uttrykk ble tidligere rapportert i bryst [19] og tykktarms [20] karsinomer. Claudin-6 er også epigenetiske forstummet i brystkreft [21], mens Claudins -3 og -4 er epigenetiske regulert i eggstokkreft celler [22], [23].

Den aktuelle studien identifiserer og rapporter til vår kunnskap for første gang, at CLDN11
promoter regionen er hypermethylated i GC vev og cellelinjer. Videre, mens CLDN11
mRNA ble uttrykt i alle primære noncancerous gastrisk slimhinnevevet, samt i en immortalisert normal gastrisk epitel cellelinje, ble det brakt til taushet i alle GC vev og cellelinjer undersøkt. Interessant, siRNA-mediert nedregulering av CLDN11
i CLDN11
-expressing mage celler ble også assosiert med kreft-relaterte fenotypiske endringer, spesielt økt cellemotilitet og invasivitet.

Materialer og metoder

celle~~POS=TRUNC linjer~~POS=HEADCOMP og klinisk vevsprøver

udødeliggjort menneskelige normale mage epitelceller (HFE145) ble hentet fra Dr. Duane T. Smoot (Howard University) og GC cellelinjer AGS, SIIA, MKN28, KATOIII, og SNU-1 ble erholdt fra ATCC. Alle cellelinjer ble dyrket og opprettholdt i RPMI 1640-medium supplert med 10% føtalt bovint serum og 1% antibiotisk-antimykotisk oppløsning (Invitrogen).

koblede primær- gastriske normale og tumorvev ble oppsamlet ved Johns Hopkins Hospital ( JHH). Prøvene var snap-frosset umiddelbart etter reseksjon.

Etikk erklæringen

Johns Hopkins University (JHU) Institutional Review Board (IRB) godkjennelse ble innhentet for alle sakene som inngår i studien. Tilfeller ble hentet fra JHU kirurgisk patologi henhold JHU IRB-godkjent fritak 02-07-19-05e under regel 45 CFR 46,101 (b), som gir avkall på kravene for å få pasienten samtykke.

Rensing og behandling av Genomisk DNA og Total RNA

Genomisk DNA ble ekstrahert fra snap-frosne vevsprøver eller cellelinjer ved hjelp av en DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen, Valencia, CA) i henhold til produsentens protokoll. Total RNA ble ekstrahert med Trizol reagens (Invitrogen). Hentet DNA og RNA ble kvantifisert ved hjelp av en Nanodrop ND-1000 spektrofotometer (Nanodrop, Wilmington, DE).

Kvantitativ Metylering Spesifikke PCR (qMSP) for claudin-11

Genomisk DNA hentet fra 36 pasientprøver som omfatter 18 GC og 18 passet noncancerous mageslimhinne (NS) vev, så vel som fra forskjellige gastriske cellelinjer, ble utsatt for qMSP. qMSP ble utført som beskrevet tidligere, med mindre modifikasjoner [24]. I korte trekk, ble bisulfitt behandling av genomisk DNA utføres ved hjelp av en EpiTect Bisulfite Behandling Kit (Qiagen, Valencia, CA). En MSP amplicon og TaqMan probe for å oppdage helt metylert DNA ble utformet for å inkludere flere CpG steder i 5'-UTR regionen CLDN11
genet. CLDN11
-spesifikke primere og probe sekvenser brukt var: forover primer 5 'CGCGATTGGTCGGCGCGTTTC 3'; revers primer 5'-GACGAAAACAACAACGCTACT 3 '; TaqMan probe 5'TCGGAGTCGCGGGGTTTAAAGAG 3 '. CpGenome Universal denaturert DNA (Chemicon International, Temecula, CA) tjente som en positiv kontroll, og serielle fortynninger av den ble brukt til å plotte en standardkurve. qMSP med TaqMan probe ble utført på en iQ5 termosykler (BioRad, Hercules, CA) ved hjelp av iQ Supermix ( ibid.
). Femti sykluser med PCR-amplifikasjon som starter med 50 ng av bisulfitt-behandlede genomisk DNA ble utført in triplo, i henhold til produsentens protokoll. Duplex PCR med β-aktin (ACTB) primer og probe sekvenser som inneholder ingen CPGs ble utført for normalisering. De primer og probe sekvenser som ble brukt var som publisert tidligere [24]. Normalisert metylering verdi (NMV) ble definert som følger: NMV = ( CLDN11-S Twitter / CLDN11-FM
) /( ACTB-S Twitter / ACTB -FM
) * 100, der CLDN11-S Hotell og CLDN11-FM
representere CLDN11
metylering nivåer i utvalget og fullt denaturert DNA, henholdsvis, mens ACTB-S Hotell og ACTB-FM
tilsvarer β-aktin
i prøven og fullt denaturert DNA, henholdsvis. Hel-genomet forsterket DNA (WGA) ble brukt som en unmethylated negativ kontroll.

Kvantitativ Reverse Transcription-PCR analyse

CLDN11
RT-PCR fragment ble designet for å overlappe et intron-ekson grense for å utelukke genomisk DNA ( g
DNA) forsterkning. Primer sekvenser ble så publisert tidligere [18]. Ett-trinns QRT-PCR ble utført som beskrevet tidligere [24], ved bruk av en Quantitect SYBRA RT-PCR kit (Qiagen, Valencia, CA) ifølge produsentens protokoll. CLDN11
uttrykk var normalisert til β
aktin uttrykk. Total RNA fra HFE145 celler ble benyttet for standardkurven. ( CLDN11-S Twitter / CLDN11-C
) /( ACTB-S Twitter / ACTB-C
), der CLDN11- S Hotell og CLDN11-C
representere CLDN11
mRNA uttrykk nivåer i prøven og kontroll mRNA, henholdsvis, mens ACTB-S Kjøpe og ACTB -C
tilsvarer p-aktin
uttrykk nivåer i prøven og kontroll mRNA, henholdsvis.

5-Aza-2'-Deoxycytidine (5-Aza-dC) Behandling

AGS er en GC cellelinje manifestere hypermethylation av CLDN11
arrangøren i forbindelse med fraværende CLDN11
mRNA uttrykk. 5-aza-2'-deoxycitidine (5-aza-dC) behandling av cellene ble utført som beskrevet tidligere [24]. I korte trekk, ble GC-cellelinjen AGS (ATCC katalognummer CRL-1739) sådd ut ved en tetthet på 2 x 10 5 celler /ml i T-75-kolbe. Tjuefire timer senere ble cellene behandlet med 1 pM 5-aza-dC i 72 timer. Media som inneholder 5-aza-DC ble erstattet med nylagde media hver 24. time. Cellene ble deretter høstet for total RNA ekstraksjon. Totalt RNA fra AGS celler før og etter fem-aza-dC behandling ble utsatt for kvantitativ real-time RT-PCR-analyse.

Små interfering RNA Knockdown Eksperimenter

CLDN11
-spesifikke siRNA oligonukleotider ble kjøpt fra Ambion, Inc. (Austin, TX). Den HFE145 cellelinje, som er CLDN11
positiv, ble valgt for å studere effekten av claudin-11 knockdown på migrering og invasjon egenskaper av gastriske celler. Forsøk ble utført som beskrevet tidligere (Agarwal et al.
, 2005). Celler dyrket i 6-brønners plater ble transfektert med siRNA tomannsboliger ved hjelp LipofectAMINE 2000 (Invitrogen), etter produsentens anvisninger. Mock-transfections og uspesifikke siRNA tomannsboliger ble brukt som negative kontroller. Cellene ble behandlet i 48 til 72 timer for å tillate maksimal knockdown, hvoretter de ble høstet enten for Western blot-analyse eller brukes for migrering og invasjon analyser.

Western blot-analyse av claudin-11 i Gastric Cellelinjer

Sammenflytende cellekulturer ble vasket med HBSS (Invitrogen) og helcellelysater ble gjort ved hjelp av lyseringsbuffer: 62,5 mmol /L Tris-HCl (pH 6,8), 10% glycerol, og 2% SDS. Proteinkonsentrasjonen ble bestemt ved anvendelse av en bicinchoninic syre (BCA) assay kit (Pierce, Rockford, IL). Tyve mikrogram av totalt protein ble separert ved 10% til 20% SDS-PAGE på Tris-glysingeler (Invitrogen) og overført til polyvinylidendifluorid-membraner (Millipore Corp., Bedford, MA). Membranene ble blokkert med 5% fettfri tørrmelk, vasket i TBST-buffer, og probet med et anti-claudin-11-antistoff (Zymed, San Francisco, CA). Blottene ble deretter vasket og inkubert i pepperrot-peroksidase-konjugert sekundært antistoff (anti-kanin-IgG: 1:10,000; Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). For deteksjon, ble chemiluminescence utført ved hjelp av en forbedret kjemiluminescens (Amersham Pharmacia Biotech).

Cell Invasion og migrasjon analysen

Invasivitet av siRNA-transfekterte celler ble bestemt ved hjelp av Matrigel-belagte invasjon kammerinnsatser (24-brønns-format med 8-um porer, BD Biosciences) ved bruk av et modifisert Boyden kammer analyse [25]. Celler ble dyrket til tilnærmet 80% konfluens, og serum-sultet over natten. På dagen for analysen ble cellene trypsinert og levedyktige celletelling tatt. Ca. 50.000 celler ble sådd ut på toppen av hver av hvert filter i serumfritt medium. Et like stort volum av det samme medium inneholdende 20% FCS ble plassert i det nedre kammer ( d.v.s..
, I brønnen under filter) for å virke som et kjemotiltrekkende. Analyseplatene ble inkubert ved 37 ° C i opp til 48 timer. Celler som ikke vandrer eller invadere gjennom porene i Transwell inserts ble manuelt fjernes med en bomullspinne. Celler tilstede på bunnen av membranen ble fiksert i kald metanol i 10 minutter og deretter farget med 0,01% krystallfiolett i 20% etanol. Etter 10 minutters inkubasjon ble filtrene vasket grundig i vann og suspendert i 200 ul av 5% eddiksyre og 5% metanol. Kolorimetriske målinger ble tatt på OD 595. Forsøkene ble gjentatt minst tre ganger, med tre paralleller i hvert eksperiment. For å vurdere cellemigrasjon, ble analysene utføres hovedsakelig som ovenfor, bortsett fra at cellene ble sådd ut på toppen av ubestrøket (Matrigel fritt) innsatser.

Statistical Analysis

statistiske analysene ble utført ved hjelp av Student t -test (SPSS, versjon 16), med p
. < 0,05 anses statistisk signifikant

Resultater og diskusjon

Vi testet først vår hypotese at CLDN11
promoter er hypermethylated og at dette hypermethylation korrelerer inverst med CLDN11
mRNA uttrykk i grunnskolen GC vev. Sammenkoblede primære mage normale og tumorvev ble samlet ved Johns Hopkins Hospital (JHH). Prøvene ble tatt umiddelbart etter reseksjon og snap-frosset inntil bruk. Kun saker som oppnås med informert samtykke som er godkjent av Institutional Review Board (IRB) ble inkludert i dette prosjektet. Genomisk DNA ble erholdt fra de 36 kliniske prøver, omfattende 18 GC og 18 passet noncancerous gastrisk slimhinne (NS) vev. CLDN11
arrangøren metylering nivåer i disse prøvene ble analysert ved hjelp av kvantitativ real-time metylering spesifikke PCR (qMSP). Figur 1A viser den normaliserte verdi metyleringen (NMV), d.v.s..
, Forholdet mellom metylert verdien av CLDN11
promoter region i hver prøve til en fullt metylert kontroll DNA. CLDN11
NM Vs
var signifikant høyere i GC eksemplarer enn i sine matchende NS vev ( P
< 0,001). For å vurdere om CLDN11
promoter hypermethylation i GCer var forbundet med å stanse all CLDN11
uttrykk, CLDN11
mRNA nivåer ble målt ved hjelp av kvantitativ real-time (QRT-PCR) i RNA hentet fra de 36 prøvene som brukes for metylering analyse. Som vist i figur 1B, normaliserte uttrykk verdier (Nevs) på CLDN11
i GC-prøver var betydelig lavere enn i sammenkoblet NS prøver ( P
< 0,001). Denne informasjonen fastslår at CLDN11
arrangøren hypermethylation korrelerer med redusert eller taushet CLDN11
mRNA uttrykk i grunnskolen GCer.

Neste, vi evaluert CLDN11
promoter metylering og ekspresjon i gastriske cellelinjer. Udødeliggjort menneskelige normale mage epitelceller (HFE145) og GC cellelinjer AGS, SIIA, MKN28, KATOIII, og SNU-en ble studert. Alle GC cellelinjer som ble testet (AGS, SIIA, MKN28, KATOIII, og SNU-1) viste promoter hypermethylation, mens ingen metylering ble observert i udødeliggjort normale HFE145 celler (Figur 2A). CLDN11
mRNA-nivåer ble vurdert ved hjelp av QRT-PCR på RNA renset fra cellelinjene, mens claudin-11-protein-ekspresjon ble analysert ved Western blotting. Som vist i figur 2B, alle 5 kreft linjer viste ingen påvisbare uttrykk for CLDN11
mRNA eller protein, mens HFE145 celler manifestert høye CLDN11
uttrykk nivåer. Dette funnet fastslår at CLDN11
er coordinately hypermethylated og nedregulert i GC cellelinjer i forhold til normale mage epitelceller (NGECs).

For ytterligere å validere stanse av CLDN11
uttrykk ved hypermethylation, vi behandlet GC-cellelinjen AGS med demethylating middel, 5-aza-2-deoksycytidin (5-aza-dC, 1 uM), for varierende tidsintervaller. Totalt RNA hentet før vs.
Etter behandling ble utsatt for QRT-PCR for CLDN11
. Som det kan ses på figur 3, ved hvert tidspunkt, CLDN11
mRNA ble re-uttrykkes ved behandling med 5-aza-dC, som bekrefter at CLDN11
er slått av ved promoter hypermethylation i AGS . GC-celler

medlemmer av claudin proteinfamilie har vært implisert i regulering av celle-adhesjon, invasjon og migrering av kreftceller [25] - [27]. Derfor vi neste undersøkt om CLDN11
påvirkninger cellemotilitet eller invasivitet. HFE145 celler som uttrykker rikelig CLDN11
, ble valgt for å studere effekter av CLDN11
knockdown på invasive og trekkende egenskaper av mage epitelceller. Forbigående siRNA transfections ble utført ved hjelp av CLDN11-
spesifikke siRNA tomannsboliger. Transfeksjon med CLDN11
-spesifikke siRNA tomannsboliger effektivt undertrykt claudin-11 protein nivåer av > 90%, mens uttrykk forble uendret i mock- eller kontrollere siRNA-behandlede celler (figur 4A). Celle motilitet og invasjons analyser ble utført på siRNA-transfekterte celler ved anvendelse av et modifisert Boyden-kammer assay system [25]. Interessant, som vist i figurene 4B og 4C, inhibering av CLDN11
ekspresjon i HFE145 celler økt betydelig trekk og invasive potensialer til disse cellene, respektivt.

Den aktuelle studium bekrefter derfor hypotesen om at CLDN11
, en tight junction protein, er brakt til taushet i GC via promoter hypermethylation, og disse dataene støtter involvering av CLDN11
i kontrollen av GC celle invasjon og migrasjon.

Arrangøren hypermethylation er kjent for å være assosiert med transcriptional stanse av visse gener. DNA metylering kan påvirke binding av transkripsjonsfaktorer som bindende områder inneholder CpG dinukleotider. Bruke TFSEARCH program, skannet vi CLDN11
sekvens funnet å være hypermethylated i mage kreft vev og cellelinjer, dvs.
., Den qMSP amplicon (-104 til fire baser i forhold til transkripsjonsstartsetet for CLDN11
). Denne skanningen identifisert mulige bindingssteder for SP1 og GATA-en og GATA-2. Tidligere studier har vist at hypermethylation av promoter DNA bidrar til å stanse all CLDN3 Hotell og CLDN4
i eggstokkene cellelinjer, delvis via
metylering-indusert forstyrrelse av binding av SP1 til dens kognat bindingssete (22, 23). I tillegg er medlemmer av familien Gata vist seg å være positive regulatorer av CLDN11
transkripsjon [28]. Videre studier er nå garantert å vurdere om hypermethylation av disse områdene forstyrrer bindingen av transkripsjonsfaktorer, og hvordan slike forstyrrelser kan påvirke CLDN11
gentranskripsjon.

Kreftceller vanligvis utviser strukturelle og funksjonelle mangler i deres TJS [17]. Disse manglene er knyttet til et tap av polaritet og differensiering. En annen viktig bindeledd mellom TJs og kreft er et tap av TJ integritet, med påfølgende lekkasje eller transport av pro-tumorigene stoffer (for eksempel vekstfaktorer eller næringsstoffer) i å utvikle svulst celle primordia, fremme tumorvekst [29]. I tillegg kan tap av polaritet, differensiering og klebende egenskaper assosiert med nedsatt TJ funksjon i kreft være kritisk i å skaffe en metastatisk fenotype [30]. Studier har antydet at uregelmessigheter i TJ-assosierte proteiner kan representere epitel-mesenchymale overgang (EMT), og dermed endre invasivitet og motilitet av kreftceller.

modulasjoner i uttrykket av TJ-assosierte proteiner, spesielt claudin proteiner, har blitt vist i en rekke kreftformer. Nyere studier av oss og andre har vist endringer i claudin protein regulering i ulike epiteliale kreft [18]. Medlemmer av familien claudin-genet blir uttrykt i et høyt vev-spesifikk, så vel som en meget utviklingsstadiet spesifikk, måte. I tillegg, avhengig av krefttype, kan ekspresjon av claudin proteiner enten være oppregulert eller nedregulert i kreftceller. For eksempel er flere claudin proteiner oppregulert i tykktarm, eggstokkene, bukspyttkjertelen og prostatakreft, mens noen er nedregulert i brystkreft og hode og nakke kreft [16], [18]

Studier har tidligere rapportert endringer i uttrykk profiler av medlemmer av familien claudin å være forbundet med GC. Serie analyse av genuttrykk (SAGE) identifisert CLDN18
genet som nedregulert i GCer innehar en intestinal fenotype [31]. CLDN23
genet er også nedregulert i intestinal-type GCer [32]. Omvendt, Cunningham et al.
Rapportert CLDN4
uttrykk økes i intestinal metaplasi og mage epitelial dysplasi, identifisere dette genet som en markør for GC forstadier [33]. I denne studien har vi funnet CLDN11
uttrykk som skal nedregulert eller brakt til taushet i GC via
hypermethylation av sin promoter regionen. Videre fant vi at i motsetning til CLDN18 Hotell og CLDN23
, CLDN11
uttrykk ble nedregulert i GC pasientprøver samt i cellelinjer, uavhengig av diffuse vs .
intestinal subtype.

claudin-11, også kjent som oligodendrocytt-spesifikt protein, ble først identifisert til å være spesielt uttrykt i trange forbindelses tråder av oligodendrocytter i hjernen og i Sertoli-celler fra rotter og mus [ ,,,0],34], [35]. Tap av claudin-11-ekspresjon, noe som fører til avbrudd av den TJ barrieren, er assosiert med nevrologiske og reproduktive underskudd [36]. En fersk studie rapporterte overekspresjon og mislocalization av CLDN11
fra blod-testikkelbarrieren i Sertolicellene å bli assosiert med testikkelkreft intraepitelial neoplasi hos menn [37]. Data i studien slår fast at CLDN11
er uttrykt i normale mage vev og udødelig NGECs. Men dens komplette funksjoner i normal mage samt i magekreft fortsatt uklare.

I et forsøk på å utforske mulige involvering av CLDN11
i GC, studerte vi fenotypiske endringer knyttet til å stanse all CLDN11
uttrykk i CLDN11-
uttrykker mage epitelceller (HFE145). Veldig interessant, siRNA-mediert knockdown av CLDN11
resulterte i økt cellemotilitet og invasjon.

Tidligere studier har rapportert kreftspesifikke fenotypiske endringer skal forbundet med modulasjoner i claudin uttrykk i ulike krefttyper . Overekspresjon av claudin-3 og claudin-4 proteiner i eggstokkreft cellelinjer resultater i økt invasjon av disse cellene [25]. I tykktarmskreft, økt ekspresjon av claudin-1 er blitt rapportert, og endringer i claudin-1-ekspresjonen utøve signifikante effekter på veksten av xenopodet tumorer og metastaser i atymiske nakne mus [27]. På den annen side har claudin-7 nedregulering ved brystkreft er assosiert med økt cellulær discohesion og evnen av brystkreftceller for å spre [19]. I tillegg eksperimenter i bukspyttkjertelen cellelinjer viste at uttrykket av claudin-4 fører til redusert invasivitet, tumorigenitet, og metastatisk potensial av disse cellene [38]. Årsakene til disse avvikene i effekt er for tiden uklart, men kan være relatert til vevs-spesifikke forskjeller i claudin funksjon eller til og med til variasjoner i responsen av forskjellige cellelinjer. Åpenbart er medlemmer av claudin familien er kjent for å være uttrykt i en vev-spesifikk måte, og kan utøve avvikende effekter.

Selv i de senere årene har det blitt klart at TJs og TJ-assosierte proteiner har omfattende og mangfoldig funksjonell og fysiologiske aktiviteter i normale og kreft forholdene, molekylære mekanismene bak disse aktivitetene fortsatt uklare. TJs er avanserte inter apparater i stand til å rekruttere signaliserer proteiner, og dermed regulerer ulike cellulære prosesser inkludert cellevekst, differensiering og tumorigenesis [39], [40]. Claudin proteiner direkte forbinder med diskrete signaloverføringsreaksjonsveier ved å kommunisere med signalmolekyler, som for eksempel atypisk proteinkinase C og Rho-proteiner, så vel som med andre PDZ domene-inneholdende proteiner. I eggstokkreft, Claudins endre tumorinvasjon ved å regulere MMP aktivitet [25].

I sammendraget, data fra denne studien identifisere CLDN11
som et mål av epigenetisk modifikasjon, samt en lovende biomarkør for magekreft tidlig deteksjon, diagnose og behandling. Disse funnene tyder også involvering av CLDN11
downregulation i kreftutvikling via
fremme celle invasjon og bevegelighet. Mekanismene for dette fenomenet er gjenstand for videre etterforskning.

Takk

Vi takker Dr. Duane T Smoot for sin generøse gave HFE145 celler.

Other Languages