PLoS ONE: Caveolin-1 Expression nivå i Kreft Tilknyttede Fibroblaster Spår Outcome i Gastric Cancer

Abstract

Mål

Endret uttrykk for epitel eller stromal caveolin-en (Cav-1) er observert i ulike typer kreft hos mennesker. Det gjenstår imidlertid den kliniske betydningen av Cav-1 uttrykk i magekreft (GC) i stor grad ukjent. Denne studien tar sikte på å utforske clinicopathological betydning og prognostisk verdi av både kreftceller og kreft assosiert fibroblaster (kafeer) Cav-en i GC.

Metoder og resultater

kvanteprikker immunfluorescens histokjemi ble utført å undersøke uttrykk for Cav-1 i 20 tilfeller av gastritt uten intestinal metaplasi (IM), 20 tilfeller av gastritt med IM og 286 tilfeller av GC. Positive priser av epitel Cav-en i gastritt uten IM, gastritt med IM og GC viste en nedadgående trend ( P
= 0,012). Lav uttrykk for Cav-en i kafeer, men ikke i tumorceller var en uavhengig prediktor for dårlig prognose i GC pasienter ( P
= 0,034 og 0,005 i henholdsvis sykdomsfri overlevelse og total overlevelse). Cav-1 nivå i tumorceller og kafeer viste ingen signifikant korrelasjon med klassiske clinicopathological funksjoner.

Konklusjoner

Tap av epitel Cav-en kan fremme ondartet progresjon og lave kafeer Cav-1 nivå herald verre utfallet av GC pasient, noe som tyder på kafeer Cav-en kan være en kandidat terapeutisk mål og en nyttig prognostisk markør for GC

Citation. Zhao X, han Y, Gao J, Fan L, Li Z, Yang G, et al. (2013) Caveolin-1 Expression nivå i Cancer Associated Fibroblaster Spår Outcome i magekreft. PLoS ONE 8 (3): e59102. doi: 10,1371 /journal.pone.0059102

Redaktør: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, USA

mottatt: 6. desember 2012; Godkjent: 11 februar 2013; Publisert: 19 mars 2013

Copyright: © 2013 Zhao et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres

Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av National Graduate Innovasjonsprosjekt prosjekt~~POS=HEADCOMP of China (NO. 111 048 670) og Foundation National Natural Sciences of China (NO. 30900652). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet "

Konkurrerende interesser:. Guilin Fanpu Bioteknologi Co Ltd ga teknologisk støtte for TMA bygging. Det finnes ingen patenter, produkter under utvikling eller markedsført produkter å erklære. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer.

Innledning

Som normalt vev, er svulster består av to atskilte men interaktive avdelinger, parenchyma og stroma. I tumorer, tumorcellene selv er parenchyma, mens stroma omfatter en blanding av ekstracellulær matriks (ECM) elementer og ikke-maligne celler, slik som kreft forbundet fibroblaster (kafeer), vaskulære endoteliale celler og immunsystemet og inflammatoriske celler [1], [2], [3]. I de senere årene har dyptgripende påvirkninger av tumor stroma på vekst og metastasering i ulike typer svulster blitt mye belyst [2], [3]. Tumorceller kan føre til avsetning av en reaktiv stroma som inneholder aktiverte kafeer, immun og inflammatoriske celler, ECM-elementer som kan favoriserer invasjon og metastase av cancer [2], [3]. Dessuten, selv om bestemte roller proteiner i molekylær krysstale mellom svulsten og stromal celle fortsatt uklare, endret uttrykk av stromale proteiner har blitt manifestert som nye biomarkører i ulike typer kreft hos mennesker, inkludert bryst [4], [5], [6] [7], prostata [8], nasopharynx [9] og basalcellekreft [10]

caveolin genet familien har tre medlemmer. CAV1
, CAV2
, og CAV3
, som koder for proteinene caveolin-1 (CAV-1), caveolin-2 og caveolin-3, henholdsvis [11]. CAV1
er lokalisert på kromosom 7 (locus 7q31.1) og inneholder tre eksoner (35, 165 og 324 bp) og to introner (1,5 og 32 kb) [11]. CAV-1 utgjør den viktigste strukturelle komponenten i caveolae, som er kolbeformet vesikulær invaginations av plasmamembranen [12], [13]. Ulike reseptorer og signalmolekyler er lokalisert i caveolae og er negativt regulert av Cav-en gjennom sin stillas domene. Dessuten, Cav-1 vekselvirker direkte med bilaget av kolesterol og sfingolipider i caveolin derfor påvirker lipid homeostase og transport [12], [13]. I kreft, er det stadig klarere at Cav-en er innblandet i regulering av flere kreftrelatert prosesser, alt fra mobilnettet transformasjon, tumorvekst, invasjon og metastasering, til multiresistens og angiogenese [14]. CAV-1 viser en kupé-avhengige rolle på tumorer. I det epiteliale rom, Cav-1 påvirker både positivt og negativt på tumorutvikling. I tumor stroma, spesielt kafeer, lav ekspresjon av Cav-1-proteinet forutsier negativt resultat i bryst- og prostatakreft [4], [5], [6], [8], [12], [15]. Ikke desto mindre, kliniske verdier av Cav-1 i GC forbli ikke helt klart. Basert på tidligere undersøkelser, hypotese vi at rollene til Cav-en i epitel og stroma kan være forskjellige, roller epitel Cav-en er usikker, men lav uttrykk for Cav-en i kafeer kan fremmer GC progresjon og korrelerer med negative utfallet av GC pasienter .

for å klargjøre forholdet mellom Cav-en og GC progresjon eller undertrykkelse, har vi analysert spesifikt både stromal og epitelial celle uttrykk for Cav-en i vev seksjoner, via avanserte kvanteprikker (QDS) -basert immunfluorescens histokjemi (QDS-IHC) som hadde blitt utviklet i våre tidligere studier, og som har vært mye akkreditert og brukt i laboratorier [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22 ]. Fluorescerende halvledernanocrystal QDS er en ny klasse av flerfunksjonelle uorganiske fluoroforer som har mange som drar fordel egenskaper, slik som smale emisjonsbånd topper, bølgelengde av deres fluorescens er sterkt avhengig av sine størrelser og forskjellige QD farger kan samtidig eksiteres av en enkelt lyskilde med minimal spektral overlapp [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22]. Disse egenskapene gjør QDS svært nyttig for multiplexed molekylær immunfluorescens bildebehandling [21], [23]. Den avanserte flere mål merking teknologi av QDS-IHC aktivert en presis analyse av Cav-1-ekspresjon i kafeer, ved samtidig påvisning av a-glattmuskel aktin (α-SMA), som er en markør for kafeer og Cav-1-proteinet.

Materialer og metoder

pasienter og Oppfølgings

Fordi tiden var begrenset og noen pasienter var ute av sykehuset, så det er vanskelig å innhente skriftlig samtykke. Vi ringte til hver pasient, forklarte vår studie ble brukt for faglig utveksling bare, og var ikke skadelig for deres helse, og ikke inneholdt deres private informasjon. Når vi kalt, en notarius publicus var til stede, og vi fikk mobiltelefonen kort melding som vi krevde pasienter som samtykker studien å sende til oss. Dersom pasienten har døde, fikk vi samtykke fra hans eller hennes juridiske representant. Til slutt fikk vi muntlig samtykke fra alle de 300 pasientene. Totalt 340 formalinfikserte, parafininnstøpte vev ble oppnådd fra pasienter diagnostisert i perioden fra juli 2005 til februar 2012, inkludert 300 GCer, 20 gastritt uten intestinal metaplasi (IM) vev og 20 gastritt med IM vev. Den gastritt uten IM og med IM prøver ble hentet fra adenokarsinom paracancerous vev. Serial seksjon bekreftes ingen tumorvevet ble funnet i disse prøver. Prøvene ble samlet inn fra arkivene til Avdeling for patologi, Zhongnan Hospital of Wuhan University (Hubei, P.R. Kina). Histologisk diagnose og grader av differensiering ble bestemt i henhold til Verdens helseorganisasjon (WHO) kriterier for GC. Alle GC prøvene ble klassifisert basert på den UICC TNM klassifisering (2009). To bord-sertifisert patologer (Yang GF og Fan LF) bekreftet de histopatologiske trekk ved disse prøvene. 326 prøver ble vellykket bevart for videre analyse; i mellomtiden, 14 GC prøver ble tapt fra raset i farging. Clinicopathological faktorer av GC-pasienter ble oppført i tabell 1. For 247 GC-pasienter var det tilstrekkelig vev for analyse av tumorceller og kreft assosiert fibroblastisk Cav-1-immunfarging. Alle disse 300 pasienter ble behandlet med radikal reseksjon eller cytoreduserende kirurgi av GC, før administrering av cellegift eller strålebehandling. Denne studien ble godkjent av Institute forsknings Medical Ethics Committee of School of Basic Medical Science, Wuhan University.

Oppfølging begynte på dato for operasjonen, og ble avsluttet i august 2012. Blant de resterende 286 GC vev fra pasienter , 257 registrert i vår oppfølging kohort og 116 pasienter som klarer nådd en fem års oppfølging eller døde på grunn av GC ble inkludert i overlevelsesanalyse. Pasienter som ikke nådde fem års oppfølging og døde av andre sykdommer eller på grunn av uforutsette hendelser, ble ekskludert fra overlevelse studien. Median oppfølging av de 116 pasientene var 62 (område: 1-85) måneder. Total overlevelse ble definert som intervallet fra dato for operasjonen til døden. Sykdomsfri overlevelse ble definert som intervallet fra dato for operasjonen til gjentakelse. Diagnostisering av tilbakefall var basert på følgende kriterier: lokalt tilbakefall funnet av endoskopisk biopsi eller med relaparotomy; metastase på radiologisk ultralyd eller cytologisk undersøkelse.

Tissue microarray Construction

To sett med microarray (TMA) ble konstruert. Hvert sett inneholdt 5 TMA som ble montert med 340 eksemplarer. De mest representative tumorområder ble definert på hematoxylin- og eosin-farget seksjoner og merket på lysbildet. Måten vi konstruerte TMA og microarray system instrument var det samme med vår tidligere studie [24], [25]. Som tidligere studier rapporterte ikke intratumoral heterogeniteten til Cav-1-ekspresjon i GC, og vår gjennomførbarhet forsøk indikerte at en kjerne pr svulst på TMA og store seksjoner viste en god konsistens [26], [27], [28], derfor, i testing eksperiment, en kjerne ble tatt prøver i hvert tilfelle. I korthet, en kjerne med en diameter på 1,5 mm ble tatt fra hver prøve og satt inn i tomme "mottaker" parafinblokker; Disse blokkene ble kuttet i seksjoner (4 um tykke) og anvendt for QDS-IHC analyse.

QDS basert Immunofluorescence histokjemi

Cav-en immunoreaktivitet ble funnet i ett sett av TMA. Antistoffene, QDS konjugert streptavidin prober (QDS-SA) med 605 nm emisjon bølgelengde og tilhørende reagenser for Cav-en oppdagelse var de samme som før [16] med følgende hovedtiltak: deparaffinizing → antigen gjenfinning → blokkerer → primær antistoff for Cav -1 (Cell Signaling Technology, Beverly, MA) → vask og blokkering → biotinylert IgG → vask og blokkering → 605 nm-QDS-SA → vask → montering og observasjon. Den hentet fra merke cellene signal ble oppdaget via hjelp Olympus BX51 fluorescens mikroskopi (CCD DP72). Den QDS signalet var målet bestemt, rød og fotostabile. Autofluorescence av vev-bakgrunnen var grønn. Siden CAV-1 normalt lokaliseres i endotelceller i blodkar [27], [29] som ble undersøkt i hvert TMA, kan den serveres som intern positiv og kvalitetskontroll i QDS-IHC. TBS i stedet for Cav-en primær antistoff tjente som negativ kontroll.

QDS baserte Double Immunofluorescent Merking

Vi brukte ett sett med TMA for Cav-1 /α-SMA colocalization, oppdaget av QDS -basert dobbel immunofluorescent merking teknologi i henhold til produsentens instruksjoner (Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.). Alle fortynningstrinn (antistoffer og QDS) ble utført i TBS inneholdende 2% bovint serumalbumin (BSA, Sigma, St. Louis, MO, USA). Antigen gjenfinning ble utført i sitronsyre (10 mM, pH 6,0) ved 95 ° C i 10 minutter, etterfulgt av avkjøling i 30 minutter. TMA ble først inkubert i 2% BSA-buffer ved 37 ° C i 30 minutter, og deretter ved 4 ° C over natten i kanin anti-CAV-1 polyklonalt antistoff og anti-mus α-SMA-monoklonalt antistoff (1:300 fortynning, Abcam, Cambridge, MA) for å antistoff bindinger. Deretter TMA ble vasket tre ganger med TBS-T (0,5% Tween i TBS) i 5 minutter hver gang, og inkubert i biotinylert geit-anti-mus IgG (1:400 fortynning, Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) ved 37 ° C i 30 minutter. For QDS konjugering til antistoff-bindings TMA ble inkubert i 2% BSA-buffer ved 37 ° C i 10 minutter, inkubert i QDS (525 nm) konjugert til streptavidin (1:200, Wuhan Jiayuan Quantum prikker Co., Ltd.) og QDS (605 nm) konjugert til geite-anti-kanin-IgG (1:100, Wuhan Jiayuan Quantum prikker Co., Ltd.) i 50 minutter, skylles tre ganger med TBS-T i 5 minutter hver. Til slutt, TMA ble forseglet med 90% glycerol (Sigma). Den immunofluorescent signalet ble observert av Caliper er multispektrale mikrosbildesystemer (Caliper Life Sciences). Fordi immunofluorescent signal om enkelt merking og dobbel merking ble knipset av CCD DP72 og multispektrale mikrosbildesystemer henholdsvis kalibrert vi resultatene av de to virkemidler for å sikre sammenlignbarhet av disse eksperimentene. Positivt signal fra α-SMA var grønn, og Cav-1 var rød. CAV-1-ekspresjon i endotelceller i blodkar [27], [29], α-SMA-ekspresjon i blodkar og kjente positive vev blir ansett som positive kontroller. TBS i stedet for to primære antistoffer tjente som negative kontroller, bare viser autofluorescence signal.

Scoring av Immunofluorescent Resultater

Resultatene ble evaluert av to patologer (Yang GF og Fan LF) samtidig i samme displayer , som er uavhengige og blindet for de kliniske funksjonene i studien. Resultatet av de to patologer ble sammenlignet og eventuelle avvik skår ble revurdert ved revurdering av de fargede vevsprøve av de to patologer for å oppnå en konsensus poengsum. Metodikken for å utføre Cav-en farging av tumorceller og kafeer var de samme. Skår ble bestemt ved å kombinere andelen av positivt fargede celler og intensiteten av fargingen. Seksjonene ble først skannet på lav effekt. Deretter celler fra fem representative felt av hver prøve ved høy forstørrelse (200 ×) ble regnet for Cav-en-fargede tumorceller eller kafeer. Arealet av positive (AP) er gradert cellene på følgende måte: 0 (ingen positiv område eller positivt område mindre enn 5%), en (positiv område 5-25%), 2 (positiv området 26-50%), 3 ( positiv område 51-75%) og 4 (positiv område > 75%). Cav-en intensitet av farging (IS) ved den numeriske verdi er ført score: 0 (negativ: nei positivt signal), 1 (svak: lys eller mørk rødt signal) og 2 (sterk: lyse rødt signal). Expression nivåer av Cav-en ble beregnet på grunnlag av den totale poengsummen som følgende ligning:. Intensitet fordeling (ID) = AP × ER

Verdien cutoff for høy og lav ble bestemt på mottakeren opererer karakteristikk ( ROC) kurve analyse med hensyn på total overlevelse. I henhold til den optimale sensitivitet og spesifisitet av ROC-kurven ved total overlevelse status, 1.5 ble definert som den optimale cutoff for Cav-en immunofluorescerende stillingen i kafeer (en ID-stillingen ≥1.5 definert høy ekspresjon og ID resultatet < 1,5 indikerte lav ekspresjon) , 3.5 ble definert som den optimale cutoff for Cav-en immunfluorescens poengsum i tumorceller (en ID poengsum ≥3.5 definert høy uttrykk og ID poengsum < 3,5 indikert lav uttrykk).

Statistical Analysis

Vi brukte SPSS 17,0 programvare (Chicago, IL, USA) for å utføre alle statistiske analyser. Friedman-testen ble brukt til å analysere forskjellen i Cav-1 originale score mellom forskjellige gastriske lesjoner. ROC kurven analyse ble utført for å bestemme cutoff poeng av høy eller lav Cav-1 nivå og evaluere prediktiv verdi av Cav-1 uttrykk for total overlevelse. Den χ2 test eller Fishers eksakte test ble brukt til å analysere sammenhengen mellom clinicopathological parametere og Cav-1 uttrykk. Spearmans rank korrelasjon test ble utført for å analysere sammenhengen mellom Cav-1 uttrykk i tumorceller og kafeer. Den total overlevelse og sykdomsfri overlevelse ble beregnet ved hjelp av Kaplan-Meier metoden og sammenlignet med lang-rank test. Multivariat analyse ved hjelp av Cox proporsjonale hazard regresjonsmodell ble brukt til å teste uavhengige prognoseverdier. To tailed P
-verdier. ≪ 0,05 ble ansett som statistisk signifikant

Resultater

uttrykk for Cav-en i forskjellige helsefare

lokalisering og uttrykk for Cav-en i gastritt uten IM, gastritt med IM og GC ble vurdert av QDS-IHC ved bruk av Cav-en polyklonale antistoff. Den sterke intensitet smultringformede positive signal fra CAV-1 i tumoren stroma var den interne kontrollen av endotel ekspresjon (Fig. 1A). I gastritt uten IM vev, negativ Cav-1 signal hovedsakelig i overflate mukøse celler (Fig. 1A) og positivt signal hovedsakelig i bunnen og halsen av fundus-kjertel-celler (fig. 1C). I gastritt med IM vev, enkelte tilfeller viste ingen Cav-en fordeling (fig. 1E), og noen viste positiv Cav-en farging i den absorberende celle og slimcelle av metaplastiske kjertler (fig. 1G). Ekspresjon av Cav-en immunoreaktivitet ble hovedsakelig observert i cellemembranen (fig. 1) og cytoplasma. Standarden på signal scoring ble vist i figur. 1I-K og representative eksempler på Cav-1 uttrykk i GC var viste i figur. 2. colocalization av Cav-1 og α-SMA-proteiner ble påvist ved QDS-baserte dobbel immunofluorescerende merking i GC, og analysert ved hjelp av multispektrale avbildningssystemer, for å identifisere nøyaktig Cav-1-ekspresjon i kafeer (fig. 3). Fordelingen av signalet fra CAV-1 i fibroblaster er vilkårlig og har ingen sammenheng med den Cav-en status i tumorceller.

Tabell 2 sammenfattet de opprinnelige score til Cav-1-ekspresjon i gastritt uten IM, gastritt med IM og GC. I epitel rommet, 30% (6/20) av gastritt uten IM, 55% (11/20) av gastritt med IM, 75% (15/20) av GC ble scoret 0, viser Cav-1 protein uttrykket nivå avtagende gradvis . Friedman test viste at forskjellen på Cav-en farging poengsum mellom gastritt uten IM, gastritt med IM og GC var statistisk signifikant ( P
= 0,012).

Sammenheng Uttrykk for Cav-en mellom tumorceller og kafeer

Sammenheng mellom tumorceller og kafeer i Cav-1 uttrykk ble også analysert. Slik det ble vist i tabell 3, mellom 226 tilfeller med lav Cav-1expression i tumorceller, 121 (53,5%) tilfellene viste lav ekspresjon av Cav-1 i kafeer (fig. 2A), og blant 21 tilfeller med høy Cav-1-ekspresjonen i tumorceller, 9 (42,9%) tilfeller vist høy Cav-1 uttrykk i kafeer (fig. 2C). De andre 117cases viste tydelig ekspresjon status i tumorcelle og kafeer (fig. 2E og G). Ingen signifikant sammenheng ble grunnlagt mellom tumorceller og kafeer Cav-1 uttrykk (r = -0,20, P
= 0,751).

kliniske betydningen av Cav-1 Expression i tumorceller og kafeer av GC

Alle 286 GC prøvene var tilgjengelig for analyse av Cav-en farging i tumorceller og 247 (86,4%) tilfeller hadde tilstrekkelig vev for analyse av Cav-en farging i kafeer. Tabell 3 sammenfattet korrelasjonen mellom tumorceller eller kafeer i Cav-1-ekspresjonen og den klassiske clinicopathological parametrene av GC, slik som alder, kjønn, T scene og lymfeknute status i univariat analyse. Men ingen signifikant sammenheng ble funnet.

Videre har vi undersøkt den prognostiske verdien av Cav-1 uttrykk i tumorceller og kafeer. Kaplan-Meier analyse og log-rank test viste at lav uttrykk for Cav-en i kafeer snarere enn i tumorceller spådd dårlig overlevelse. Median total overlevelse av lave kafeer Cav-1 uttrykk gruppen var 73,0 måneder (95% KI, 55,589 til 90,411), mens i oppfølgingen intervall, høy kafeer Cav-1 uttrykk gruppen hadde en beregnet overlevelsesrate på ca 0,8 (Fig . 4A). Som vist i fig. 4B, lav uttrykk for Cav-en i kafeer også spådd tidlig tilbakefall av GC pasienter. Figur 4C og D viste at kreftceller Cav-en status hadde ingen signifikant sammenheng med total overlevelse og sykdomsfri overlevelse ( P
= 0,178 og 0,104, henholdsvis). Videre den kumulative fem års overlevelse for pasienter med tumorer viste høye kafeer Cav-1 uttrykk var 75,5% (95% CI, 0,642 til 0,868), mens det var bare 57,4% (95% KI, 0,456 til 0,692) i lave kafeer Cav-en gruppe ( P
= 0,053).

i univariat analyse, TNM stadium, T scenen, lymfeknute status og kafeer Cav-1 nivå ble funnet å være signifikant assosiert med sykdommen overlevelse av GC pasienter ( P
= 0,001, 0,003, 0,010 og 0,029, henholdsvis tabell 4). TNM stadium, T scenen og kafeer Cav-1 nivå var signifikant korrelert med total overlevelse ( P
= 0,012, 0,006 og 0,013, henholdsvis tabell 4). For å avgjøre om kafeer Cav-1 uttrykk var en uavhengig prediktor for GC pasientenes tilbakefall og overlevelse, ble en multivariat analyse utført ved hjelp av COX proporsjonal hazard regresjonsmodell, sammen med alder, T klassifisering, TNM stadium og andre tumor funksjoner. Igjen, Cav-1 nivå i kafeer ble selvstendig og signifikant assosiert med GC pasientenes tilbakefall og utfall ( P
= 0,034 og 0,005, henholdsvis tabell 4). Tvert imot, kreftceller Cav-1 nivå unnlatt å prognosticate GC pasientens tilbakefall og overlevelse i den samtidige modellen (tabell 4).

Den døde prediktiv verdi av CAV-1 terskler i kreftceller og i kafeer ble analysert også. Som vist i figur 5, Cav-1 nivå i kafeer spådd død med god ytelse; området under kurven var 0,627 (95% KI: 0,515 til 0,738; P
= 0,032). Mens, Cav-1 nivå i tumorceller ikke klarte å forutsi døden, med areal under kurven for 0,551. (95% KI: 0,438 til 0,664; P
= 0,393)

Diskusjoner

rapporterte vi at Cav-1-immunoreaktivitet er hovedsakelig observert ved cellemembranen og cytoplasma. I gastritt uten IM vev, er Cav-en signal hovedsakelig påvist i bunnen og nakke av fundus kjertel celler. I gastritt med IM vev, lokaliserer Cav-en flekker hovedsakelig i absorberende celle og slimcelle av metaplastiske kjertler. Dette resultat korrelerer med en annen studie som analyserte Cav-1 i gastrisk vev via immunhistokjemi [27]. CAV-1-ekspresjonen gradvis avtar med progresjon av GC og ekspresjonsnivået i kafeer heller enn i tumorceller til en viss grad forut tilbakefall og overlevelse i GC-pasienter.

Roller av CAV-1-proteinet i tumorutvikling er tumor-avhengig og kupé-avhengig [12], [30]. CAV-1-genet er lokalisert til locus D7S522 av humant kromosom 7q31.1, som ofte er slettet i visse typer svulster [11]. Videre er Cav-1 implisert i caveolin stillas domene og kan forårsake inhibering av cytokin-reseptor-signalisering [14], som tyder på tumor suppressor rollen til Cav-1. Svulsten fremme aktiviteten til Cav-en har blitt mye bekreftet av nøye påvise dens uttrykk nivåer og kliniske verdier i varianter av kreft, for eksempel tunge plateepitelkarsinom, esophageal plateepitelkarsinom, blære overgangscellekreft, nasopharyngeal carcinoma og hals plateepitelkarsinom [16], [31], [32], [33], [34]. Cav-en har forskjellige roller i tumorceller og stromale celler. For eksempel, i bryst og prostata cancer, tap av stromal Cav-1, men ikke tumorceller Cav-1 bebuder dårlig prognose [6], [8], [12], [14], noe som indikerer lommeavhengig roller Cav- 1.

Våre resultater indikerer at Cav-en uttrykksnivået i epitel celler gradvis redusert med ondartet progresjon av GC. Lignende resultater ble rapportert i en studie [26] undersøke Cav-1-ekspresjon av IM og GC, noe som tyder på Cav-1 kan betraktes som en tumor suppressor i utviklingen av GC. Videre har både tumorceller og kafeer Cav-1-protein ekspresjon status ble ikke korrelert til de typiske clinicopathological parametere, slik som T stadium, TNM scene og Lauren klassifikasjon. Det var i kontrast til den andre studien [26] som viste at den lave ekspresjon av tumorceller Cav-1-protein ble korrelert med høy T stadium, TNM scene og lymfeknutemetastase. Forskjellen kan skyldes den evalueringsmetode: vi har evaluert farging ved å multiplisere intensitet og andelen av celler farget og bestemt cutoff punkt som hadde optimal sensitivitet og spesifisitet av ROC-kurve basert på total overlevelse status; mens på den annen forskning eneste prosentandelen av immunopositive-celler ble evaluert og terskelen av positiv eller negativ ble ikke presentert. Dessuten sikrer større utvalg av vår studie påvirket resultatene også.

kafeer er blant de mest essensielle komponenter i tumor stroma, med viktige funksjoner indusere deponering av ECM, regulerer epitelial differensiering og inflammatorisk respons og samspill med mikrovaskulaturen ved å skille matriksmetalloproteinaser og vaskulær endotelial vekstfaktor [35]. Siden Cav-1-proteinet er nødvendig strukturell komponent av caveolae, endret ekspresjon av Cav-1-protein i kafeer ville påvirke forskjellige patologiske prosesser og følgelig fremme tumorutvikling. Tap av Cav-1-proteinet i kafeer fremmer aktiveringen av kafeer via aktivering av TGF-β veien, og derfor lette svulsten mikromiljøet ombygging og tumorutvikling [12]. Men en annen studie publisert i Cell
rapportert strid funksjoner av kafeer Cav-1 protein som stromal Cav-en favoriserer tumorinvasjon og metastasering gjennom kraftavhengig arkitektonisk regulering av mikromiljøet [36]. Derfor er usikkert hvilken rolle kafeer Cav-en. Resultatene som presenteres her vist en uavhengig prognostisk prediktor for GC som involverer Cav-1-ekspresjon nivå i kafeer. Lav ekspresjon av Cav-1 i kafeer, men ikke i tumorceller uavhengig prognosticated tidlig tilbakefall og dårlig overlevelse av GC pasienter. ROC-analyse indikerte at død forutsi verdien av lav Cav-1 i kafeer. Resultatene antydet den tumorinhiberende rollen kafeer Cav-1 protein og var i samsvar med det funn i bryst- og prostatakreft, som klarlagt at tap av stromal Cav-1 bebuder dårlig prognose [8], [12], [15]. Også i brystkreft, er det klart at med utvikling av kreft, blir svulsten mikromiljøet en hypoksisk og dårlig ernæring nisje, stimulerende autofagi i kafeer. Da den unormale aktivert autofagi degraderer Cav-en i kafeer. Selvfølgelig, om liknende mekanismer eksisterer i GC krever flere in vitro
studier.

Videre, tap av stromal Cav-en har stor prediktiv verdi i ER (+), PR (+), HER2 (+), og de såkalte trippel-negativ brystkreft pasienter (ER (-) /PR (-) /HER2 (-)). Samtidig innførte endokrin behandling påvirker ikke sin prediktiv verdi, noe som gjør det til en ny universell eller allment gjeldende brystkreft prognostisk markør [37]. GC er den fjerde felles og tredje død forårsaker kreft i verden, [38], som fortsatt mangler tilstrekkelig egnede biomarkører for prognostisk evaluering og tilpasset anti-cancer behandling. HER2 positiv GC pasienter blir dratt nytte av trastuzumab behandling, men bare noen få pasienter er HER2 positive, for eksempel bare 19% av GC pasientene viste HER2-positiv i vår studie. I dag er avanserte GC pasienter med negativ HER2 fortsatt lider av dårlig overlevelse. Dermed identifisere flere mål som undertrykker GC utvikling er svært nødvendig. Heri, demonstrerte vi verdiene ved bruk av stromale proteiner som biomarkører i GC, noe som kan bidra til den molekylære typing av GC og følgelig ved behandling av GC, verifisere en avgjørende rolle tumor stroma i tumorutvikling. Videre er en prospektiv studie sterkt anbefalt å validere den prognostiske verdi og for å undersøke den kliniske betydningen av å oppdage Cav-en i kafeer.

En interessant ting er at selv om kafeer Cav-en status kan brukes som en prediktor når sammenhengen mellom kafeer Cav-1-nivåer og klassiske clinicopathological parametre for GC ble analysert, ble ingen signifikant sammenheng funnet. Således fremme tumorinvasjon og metastase kan ikke være den primære mekanismer som tap av kafeer Cav-1 fremmer GC utvikling. Kjemoterapi er den vanligste tilleggsbehandling som er anbefalt til de midtre og avanserte stadium GC pasienter i Kina. Kombinert med resultatene som vises her, fremhevet vi at om lav uttrykk for Cav-en i kafeer korrelert med cellegift resistens kan være en merkbar problem fortjent videre studier.

Til slutt, i vår studie, via avanserte QDS baserte dobbel immunofluorescent merking teknologi, Cav-1 protein i kafeer ble nøyaktig plassert. De pseudo-farge samlokalisering bilder tillatt oss å evaluere Cav-1 nivå i kafeer utelukkende imidlertid QDS-IHC og QDS basert dobbel immunfluorescens merking teknologi er ikke vanligvis brukes i kliniske laboratorier. Immunhistokjemi er det mest vanlig praktisert teknologi i kliniske laboratorier. Vår tidligere studie manifesterer at QDS-IHC metoden er så følsom og spesifikk som IHC [22]. Hvis du ønsker å oppdage samtidig to forskjellige proteiner som Cav-1 og α-SMA i en sklie, QDS basert dobbel merking er en roman, pålitelig og alternativ metode, som vi kan få resultatene så presis som mulig.

Konklusjoner

i konklusjonen, vår studie evaluerte Cav-1 uttrykk i både kreftceller og kafeer og undersøkt deres kliniske betydning for GC pasienter. Det er bemerkelsesverdig at ekspresjon av Cav-1 i kafeer snarere enn tumorcellene særlig anvendelig i å forutsi begynnelsen av tilbakefall og dårlig overlevelse utsikter til GC pasienter, noe som tyder Cav-1 i kafeer kan være en kandidat terapeutisk mål, og et nyttig prognostisk markør for GC pasientene . Videre studier er nødvendig for å undersøke mekanismer som høye nivåer av Cav-1 i kafeer undertrykker GC progresjon og, eventuelt, for å utvikle terapeutiske midler målretting Cav-1. Videre vil ytterligere kliniske studier være avgjørende for å verifisere den prognostiske verdien av kafeer Cav-en i GC, og om det kan bidra til personlig anti-kreftbehandling.

bekreftelser

Forfatterne takker Dr. Kathryn A Solka, Avdeling for biokjemi, Rush University Medical Center for å skrive hjelp.

• PLoS ONE: prognostisk verdi of Cancer Stem Cell Marker CD133 uttrykk på Gastric Cancer: En systematisk Review
• PLoS ONE: Targeting CDH17 Undertrykker tumorprogresjon hos Gastric Cancer av Downregulating Wnt /β-catenin Signa