PLOS ONE: Fas Signaling Promove gástrica metástase de câncer através de regulação positiva STAT3 Dependente de Fascin

Abstract

Fundo

Fas transdutores de sinal ativado por sinalização e ativadores de transcrição 3 (STAT3) é necessário para upregulation fascina. Como uma proteína de agregação de actina, fascina pode mediar câncer gástrico migração celular (GC).

Métodos

O câncer gástrico células AGS foram tratados com anti-Fas (5 mg /ml) durante 2 h , a fim de estimular a activação da sinalização Fas. O in vitro
migração de células AGS ativada por sinalização FAS foi avaliada através de câmaras Transwell. Os níveis de A fascina e STAT3 fosforilado foi detectado por análise de mancha Western. Ratinhos nus foram injectados por via intravenosa com células AGS tratados com anti-Fas ou tratados com inibidor da STAT3 sem anti-Fas; metástases tumorais pulmonares foram medidas. A fascina expressão da proteína em tecidos de tumor foi detectado por imuno-histoquímica. Os níveis de Fas e fascina mRNA em tecidos tumorais de pacientes com GC foram medidos por PCR em tempo real e sua correlação foi analisada.

Resultados

A ativação da sinalização Fas promovido a migração celular e resultou em a fascina upregulation dependente de STAT3 nas células AGS. STAT3 reforçada níveis fascina in vivo
. A fascina era o mediador da migração de células AGS induzida por sinalização Fas in vitro
e in vivo
. Além disso, houve uma correlação positiva entre os níveis de Fas e mRNA fascina em tecidos tumorais de pacientes do GC.

Conclusões

sinalização Fas promove GC metástases através da STAT3 via /A fascina, o que pode proporcionar uma nova alvo para a terapia GC

Citation:. Yang Y, Zhao Q, Z Cai, Cheng G, Chen M, Wang J, et al. (2015) Fas Signaling Promove gástrica metástase de câncer através de regulação positiva STAT3 Dependente de fascina. PLoS ONE 10 (5): e0125132. doi: 10.1371 /journal.pone.0125132

Editor do Academic: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, United States |

Recebido: 06 de janeiro de 2015; Aceito: 11 de março de 2015; Publicado: 18 de maio de 2015

Direitos de autor: © 2015 Yang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel

Financiamento:. Este trabalho foi financiado pela National Science Foundation Natural da China No. 81200014 para JLW (http://www.nsfc.gov.cn/); a Fundação de Ciência Natural da província de Zhejiang No. LY14H160011 para YSY; No. LY12C08002 para ZJC e No. LY12H13003 de MC (http://www.zjnsf.gov.cn/). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer gástrico (CG) é o quarto câncer mais comum ea segunda principal causa de mortes relacionadas ao câncer em todo o mundo. Como a maioria dos cânceres, a metástase é a principal causa de falha da terapia clínica de GC. Diagnosticado numa fase precoce, sem metástase, GC pode ser erradicada por cirurgia. Uma vez que a metástase ocorre, o prognóstico da GC é significativamente pior. Em pacientes com extensa metástase, o resultado da cirurgia combinada com quimioterapia e imunoterapia está longe de ser ideal, com uma taxa global de sobrevida em 5 anos sendo apenas 24% [1,2]. Por conseguinte, existe uma necessidade urgente para uma melhor compreensão do mecanismo da metástase GC, a fim de desenvolver uma melhor estratégia terapêutica.

Fas via de sinalização é um dos mecanismos clássicos para induzir apoptose [3]. Após ligação com o seu ligando natural, FasL, receptor Fas forma a induzir a morte-complexo de sinalização, provocando a activação de caspase-8, que por sua vez activa as caspases a jusante, que resulta em apoptose [4]. Tem sido relatado que a morte celular mediada por Fas é responsável pela função anti-cancro da via de sinalização Fas no cancro da próstata [5]. No entanto, na maioria dos tumores, em vez de induzir a apoptose, a activação de sinalização Fas promove a progressão tumoral [6,7]. As células tumorais muitas vezes respondem à estimulação Fas com a proliferação reforçada [8,9]. Vários estudos demonstraram também que a sinalização Fas podem promover migração celular e invasão do tumor [10-12]. Em um estudo recente, a alta expressão de Fas em células de GC tem sido demonstrada estar correlacionada com a ocorrência de metástases para os nódulos linfáticos regionais [13], sugerindo que a sinalização Fas promove a metástase do cancro gástrico.

A fascina, uma actina -bundling proteínas, foi identificado como uma molécula-chave em metástase tumoral [14]. A fascina desempenha um papel importante na migração das células do tumor e a expressão de A fascina é aumentada em vários tipos de cancros, incluindo GC [15,16]. A fascina é um gene alvo directo STAT3 em resposta a IL-6 em células humanas de cancro da mama [17] e do rato. sinalização Fas tem sido referida como estando envolvida na activação da STAT3 [18-20]. Por isso, especula-se que a sinalização Fas promove a migração de células GC e subsequente metástases tumorais através da regulação positiva dependente de STAT3 de fascina.

O presente estudo foi desenhado para demonstrar o envolvimento de Fas na regulação da expressão fascina através da ativação STAT3 em células AGS. Temos uma tentativa de vincular o nível fascina reforçada com motilidade celular e metástase de células AGS in vivo
. Analisamos também a correlação entre os níveis de Fas e mRNA fascina em tecidos tumorais de pacientes com GC. Esperava-se que os nossos resultados revelaria um novo mecanismo para a metástase GC, fornecendo uma base para o futuro desenvolvimento da estratégia terapêutica baseada em Fas para GC avançado.

Materiais e Métodos

amostras de tecido humano

amostras de tecido humano GC foram coletados de 23 pacientes (14 com metástase e 9 sem metástase) submetidos a cirurgia antes da quimioterapia no Hospital do Câncer Zhejiang (Hangzhou, China) entre 2012 e 2014. as características clínicas dos pacientes com GC são resumidos na Tabela 1. o estudo respeitou as normas do Ministério da Saúde da China e as directrizes internacionais Organização Mundial da Saúde Comitê de revisão Ética em pesquisa para a pesquisa envolvendo seres humanos e a Declaração de Helsínquia sobre os princípios éticos da investigação médica em seres humanos. O protocolo do estudo foi revisto e aprovado pelo Institutional Review Board do Hospital de Câncer de Zhejiang. O consentimento informado foi obtido a partir de cada um dos pacientes antes do estudo inicial.

Reagentes

de ratinho anti-humano de Fas (2R2) anticorpo monoclonal foi comprado de eBioscience (San Diego, CA, EUA) . De ratinho anti-humano de Fas (CH11) de anticorpo monoclonal e STAT3 inibidor S3I-201 foram adquiridos a Merck Millipore (Billerica, MA, EUA). O STAT3 de coelho anti-humano (79D7) e STAT3 fosforilado anti-humano de anticorpos monoclonais (D3A7) foram adquiridos a partir de Cell Signaling Technology (Danvers, MA, EUA). O rato A fascina (-10 D) anticorpo monoclonal anti-humano, humano fascina siRNA, STAT3 ARNip, controlo negativo de siRNA (NC siRNA), e inibidor de STAT3, Stattic, foram adquiridos a partir de Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, EUA). O kit de proliferação de células CCK8 foi adquirido a partir de Molecular Technologies DOJINDO (Kumamoto, Japão). O kit de detecção de apoptose FITC anexina V-foi adquirido de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EUA). As câmaras Transwell (8 mícrons de tamanho de poro) foram adquiridos a partir de Costar (Cambridge, MA, EUA).

Animais

ratinhos nus atimicos de seis semanas de idade foram obtidos a partir de SIPPR-BK Experimental animal Co. (Shanghai, China). Os ratinhos foram alojados em instalações livres de patogénios. Os protocolos experimentais foram revistos e aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso do animal de Hospital de Câncer de Zhejiang.

Células e cultura de células

As células humanas GC linhas AGS e MNK-45 foram obtidas a partir da American Colecção de Culturas tipo (Manassas, VA, EUA) e mantidas em meio de cultura contendo 1640 10% de soro fetal de bovino (FBS) a 37 ° C com 5% de CO _2.

análise Western blot

Um total de 20 ug de proteínas bruto extraído a partir de lisados ​​de células foi separado por electroforese em gel de poliacrilamida de sulfato de dodecilo de sódio a 10% e transferidas para membranas de difluoreto de polivinilideno (Millipore, Billerica, MA). As membranas foram bloqueadas com BSA a 5% em solução salina tamponada com Tris mais Tween-20 a 0,05% e depois incubadas com anticorpos primários correspondendo a 4 ° C durante a noite. Após lavagem com solução salina tamponada com Tris mais 0,05% de Tween-20, as membranas foram incubadas com anticorpos secundários conjugados com HRP correspondente. As proteínas foram visualizadas usando SuperSignal Oeste Femto máxima (Thermo, IL, EUA).

A detecção de apoptose celular

células AGS (2 × 10 ^{5 /ml) foram tratados com 1 ou 5 ug /ml de anticorpo anti-Fas monoclonal (anti-Fas) ou anticorpo de isotipo (ISO) durante 24 h, as células apoptóticas foram coradas com anexina V-FITC e iodeto de propídio durante 5 min a 4 ° C no escuro e então analisadas por citometria de fluxo com um citómetro de fluxo FACSCalibur (Becton Dickinson, San Jose, CA, EUA).}

ensaio de migração de células do cancro da in vitro

células AGS (1 × 10 ^{6 /ml) foram tratadas com 5 ng /ml de anti-Fas ou ISO durante 2 h a 37 ° C. Em seguida, 2 × 10 5 células tumorais AGS foram transferidos em 100 ul de meio isento de soro e cultivadas para a câmara superior das câmaras Transwell (8 mícrons de tamanho de poro). A câmara inferior foi preenchida com 800 ul de meio de cultura 1640 contendo 20% de FBS. Depois de 48 h de incubação a 37 ° C, as células foram fixadas com metanol durante 20 min, e lavou-se três vezes com PBS, 20 min cada. As células fixadas foram coradas com 10 mg /ml de DAPI, durante 30 min e lavadas com PBS. As células coradas foram examinadas sob um microscópio de fluorescência. Para determinar os efeitos da STAT3 sobre a migração de células, 10 uM de Stattic foi adicionado ao meio de cultura. Para determinar o papel de fascina na migração celular, antes da estimulação anti-Fas, um total de 40 duplexes nM fascina siRNA foram transfectados em células AGS (2 × 10 5 /poço) com 3 mL de reagente de transfecção INTERFERin siRNA ( Polyplus, Nova Iorque, CA, EUA) em uma placa de 24 poços. A eficiência de silenciamento transiente fascina foi confirmada por Western blotting.}

proliferação celular ensaio

AGS células foram tratadas com 5 ug /mL de anti-Fas ou ISO por 24, 48, ou 72 h, e 20 ul de CCK8 foram adicionados a cada poço e as células foram incubadas durante mais 4 h. A absorvância de cada poço foi lida a 450 nm. A proliferação celular foi calculado dividindo-se a densidade óptica das células tratadas com as DOs das células de controlo.

-PCR em tempo real

O ARN total foi extraído com o reagente TRIzol e o ADNc foi sintetizado utilizando um PrimeScript RT kit reagente (Takara Bio, Inc. Otsu, Shiga, Japão). Foram utilizadas as seguintes condies de PCR: 1 ciclo a 95 ° C durante 30 s e depois 40 ciclos de 5 segundos a 95 ° C e 34 s a 60 ° C. PCR em tempo real foi realizada em 7500 uma em tempo real do sistema de PCR da Applied Biosystems (Foster City, CA, EUA). Os resultados foram normalizados contra ARN β-actina. As sequências dos iniciadores de PCR utilizados foram como se segue: sentido, 5'-CCACGAAACTACCTTCAACTCC-3 'e anti-sentido, 5'-GTGATCTCCTTCTGCATCCTGT-3' para β-actina; sentido, 5'-GTGAGGGAAGCGGTTTACGA-3 'e anti-sentido, 5'-AGATGCCCAGCATGGTTGTT-3' para Fas; sentido.

ensaio metástase, 5'-TGTCTGCCAATCAGGACGAG-3 'e anti-sense, 5'- CACGCCACTCGATGTCAAAG-3' para fascina Lung In vivo

células AGS ( 5 × 10 ^{6 por ratinho) pré-tratados com anti-Fas ou ISO durante 2 h foram injectadas em ratinhos nus de 6 semanas de idade através de uma veia da cauda. Para determinar os efeitos de STAT3 nas metástases de tumor e expressão fascina In vivo
, células tumorais AGS (5 × 10 6 por rato) foram injectadas por via intravenosa em ratinhos nus de 6 semanas de idade e 24 h mais tarde , os ratos receberam uma injecção intravenosa de S3I-201 (5 mg /kg, a cada 2 dias para um total de 3 vezes). Três semanas após a injecção das células, os ratinhos foram anestesiados por inalação de hidrato de cloral e sacrificados e os pulmões foram removidos e o número de focos do tumor do pulmão foram contadas sob um microscópio de dissecação.}

A imuno-histoquímica

A focos tumorais de os pulmões foram fixados em formalina a 10%, desidratados em etanol e embebidos em parafina. As secções de tecido foram cortadas com 4 mm, montadas em lâminas e secou-se a 60 ° C durante 4 h. Após curta digestão proteolítica e um bloqueio da peroxidase das lâminas de tecido, utilizando 2,5% de peróxido de hidrogénio em metanol durante 30 minutos à temperatura ambiente, as lâminas foram incubadas com o anticorpo anti-A fascina durante a noite a 4 ° C. Após a lavagem, as lâminas foram incubadas com o polímero marcado com peroxidase e substrato cromogénio. Finalmente, as amostras foram incubadas em solução salina tamponada com fosfato contendo diaminobenzidina durante 5 min. Um microscópio Olympus foi utilizada para visualizar a coloração dos tecidos tumorais.

A análise estatística

Os resultados foram comparados usando ANOVA one-way. O teste de correlação de ordem de Spearman foi utilizado para examinar as correlações entre os níveis de Fas e mRNA fascina em tecidos tumorais de pacientes do GC. Um valor de p < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo

Resultados

A ativação da sinalização Fas promove a migração de células AGS

Primeiro, confirmou a expressão de. receptor Fas em AGS e células MNK-45 por PCR em tempo real e Western blot análises e encontraram células MNK-45 expressa maior receptor Fas do que as células AGS fez (Fig 1A). Ambas as linhas de células também mostrou um elevado nível de expressão de FasL (dados não mostrados). A seguir, examinar se a ligação do receptor Fas poderia induzir a apoptose em células AGS e MNK-45. Depois de estimulação com anti-Fas ou ISO a uma concentração de 1 ug /ml ou 5 ug /ml, era MNK-45, mas não as células AGS mostrou melhoramento dependente da concentração da apoptose (Fig 1B). Por isso, nós investigamos se a activação da sinalização Fas pode causar outros efeitos sobre as células da AGS em vez de indução de apoptose nas experiências seguintes. O ensaio de migração celular AGS foi realizada in vitro
e encontramos a migração de células AGS foi aumentada significativamente após estimulação com 5 ug /ml de anti-Fas (Fig 1C). Para excluir a possibilidade de que o aumento da migração de células AGS foi causada por sua proliferação elevada após estimulação anti-Fas, foi examinada a proliferação de células ACS e não encontrou diferença evidente entre as células tratadas com ou sem anti-Fas (Figura 1D), o que sugere que o aumento da migração de células não era um resultado das propriedades proliferativas após estimulação anti-Fas. Tomados em conjunto, estes resultados indicam que a sinalização Fas pode aumentar a mobilidade das células GC in vitro
.

A ativação da sinalização Fas upregulated expressão fascina nas células AGS através da ativação da STAT3

tem sido relatado que a sinalização Fas está envolvida na activação da STAT3 [18-20]. No presente estudo, examinamos se a ativação da sinalização Fas causaria activação STAT3 em células AGS. Como mostrado na Fig 2A, após estimulação com anti-Fas, por um período curto, a STAT3 fosforilado foi significativamente aumentado nas células AGS. Também foi documentado que fascina podem aumentar a motilidade de células tumorais e é um gene alvo directo da STAT3 [17]. Assim, foi detectada a expressão de A fascina em células AGS após estimulação com anti-Fas. Como mostrado na Fig 2B, os níveis de mRNA de fascina aumentou de uma forma dependente do tempo e culminou após 12 h de estimulação anti-Fas nas células AGS. Para confirmar ainda mais a regulação positiva de A fascina, que detectou o nível de proteína de fascina e encontrou o aumento dos níveis de proteína fascina no anti-Fas mas não ISO trataram células AGS (Fig 2C). Para demonstrar a relação entre a STAT3 e fascina em células AGS após Fas sinalização de activação, que trataram células AGS com Stattic, um inibidor específico da STAT3, antes da estimulação anti-Fas e descobriram que o aumento induzido por anti-Fas em proteína A fascina foi totalmente abolida na presença de Stattic (Figura 2D). Também se pode detectar a activação da STAT3 em células AGS após estimulação anti-Fas durante 24 h, mas a extensão activado foi ligeiramente mais baixa do que recebeu 2H estimulação de anti-Fas (Fig 2C e 2D). Para confirmar ainda que STAT3 estava envolvido na regulação da expressão fascina após a estimulação anti-Fas, que derrubou a expressão STAT3 usando STAT3 siRNA específico antes de estimulação anti-Fas e detectou a eficácia STAT3-knockdown por análises de Western blot. Como mostrado na Fig 2E, STAT3 siARN mas não NC siARN transfecção inibiu marcadamente a expressão em células de STAT3 AGS. Como era de esperar, a proteína A fascina não foi induzida em células AGS knockdown-STAT3 após estimulação anti-A fascina (Figura 2F). Estes resultados sugerem que a STAT3 activado é necessária para a regulação positiva da expressão fascina causada por activação de sinalização Fas em células AGS.

migração celular promovido de sinalização Fas depende STAT3 /via fascina

Foi A fascina mostrado que medeia a migração de células de tumor [17]. No presente estudo, examinamos se knockdown de fascina iria inibir a migração celular induzida por sinalização Fas in vitro
. Verificou-se que uma diminuição na proteína A fascina podia ser detectada em células transfectadas com AGS fascina siARN mas não o siARN NC (Fig 3A). Em seguida, foram realizados ensaios de migração de células tumorais para detectar a motilidade das células AGS fascina-knockdown após estimulação anti-Fas. Como mostrado na Fig 3B, quando a estimulação anti-Fas acentuadamente promovida a migração de células AGS, este efeito foi evidentemente inibido em células tratadas com siRNA A fascina, mas não NC siARN. Uma vez que a STAT3 é necessário para a expressão Fas em células fascina AGS induzida sinalização-, nós próxima analisados ​​os efeitos da STAT3 Fas na migração celular em células AGS sinalização mediada-. Como mostrado na Fig 3C, depois tratou-se com Stattic, migração de células de sinalização Fas-enhanced foi completamente abolida. Consistente com esse resultado, STAT3 siRNA também significativamente inibido Fas migração de células AGS reforçada de sinalização (Fig 3D). Estes resultados indicam que a sinalização Fas promoveu a migração de células e isso depende da activação da STAT3 /via fascina.

sinalização Fas promove a metástase de células in vivo através da activação da STAT3 /A fascina via

Para demonstrar ainda mais o relação entre o Fas sinalização e GC metástase, transferimos células AGS anti-Fas-estimulados por via intravenosa em ratinhos nus e detectados focos de tumor nos pulmões. Observou-se aumento nos focos do tumor nos pulmões de ratinhos transferidas com células pré-tratadas com anti-Fas mas não a norma ISO (Fig 4A). Para esclarecer a relação entre fascina e Fas metástase de tumor mediada por sinalização, foi realizada a detecção imunohistoquímica de fascina em tecidos tumorais. Observou-se uma expressão mais elevada fascina em tecidos de tumor de ratinhos que receberam células AGS anti-Fas-estimuladas do que a de ratinhos que receberam células ISO ou AGS un-estimuladas (FIG 4B). Desde STAT3 é necessário para a regulação positiva induzida por anti-Fas de fascina e aumento da motilidade em células AGS, investigamos os efeitos da STAT3 em metástase de células AGS in vivo
. Após o tratamento com S3I-201, um inibidor da sonda química da actividade de STAT3 [21], os focos do tumor nos pulmões diminuiu significativamente (Figura 4C). Além disso, a expressão fascina em tecidos tumorais de S3I-201 ratos tratados também foi inibida (Fig 4D), sugerindo o controle do fascina por STAT3 in vivo
. Tomados em conjunto, estes resultados indicam que a sinalização Fas pode promover metástases de células In vivo
, dependente da activação da STAT3 /via fascina.

A fascina expressão está correlacionada com a expressão Fas nos tecidos tumorais de pacientes com GC

uma vez que a sinalização Fas promove a expressão fascina, determinou-se se houve uma correlação entre Fas e expressão fascina nos tecidos tumorais de pacientes do GC. Foram analisados ​​os níveis de mRNA de Fas e fascina nos tecidos tumorais de pacientes do GC. Como se mostra na figura 5, os níveis de mRNA de Fas e fascina mostraram uma correlação positiva. Este resultado fornece evidência para a noção de que a sinalização Fas promove a expressão fascina no GC.

Discussão

Geralmente, seguindo trimerização de Fas após a ligadura com FasL, a apoptose é iniciada. cluster de Fas recruta a proteína adaptadora FADD e forma o complexo de sinalização indutor de morte, causando a activação de caspase-8. A caspase-8, por sua vez, activa as caspases a jusante, tais como caspase-3, culminando em apoptose [4]. Além disso para induzir a morte de células, o Fas também transmite sinais de proliferação e activação em células tumorais [22]. Tem sido relatado que a FAS mediar a proliferação de células da mucosa astric é dependente de ERK [23], mas a activação da via de sinalização de ERK não pode induzir a proliferação de células de melanoma murino B16 [24]. Portanto, Fas pode induzir a proliferação de alguns, mas não todos os células tumorais eo mecanismo relevante ainda é em grande parte desconhecido. Aqui, encontramos Fas era inválido na indução de proliferação celular AGS. sinalização Fas também foi demonstrada para induzir motilidade de células tumorais resistentes à apoptose através do activador de plasminogénio uroquinase [10]. No presente estudo, nós desvendado um novo mecanismo de Fas-mediar a motilidade de células tumorais, o que dependeu da regulação positiva de A fascina através da activação da STAT3.

Acredita-se geralmente que para escapar apoptose causada por FasL-T positivas células, células tumorais desenvolveram várias formas de resistir aos efeitos de morte celular induzida por FasL. As células tumorais têm sido demonstrados para regular negativamente ou mesmo perder a expressão do receptor de Fas [25] ou anular a via intracelular de sinalização Fas através de mutação em Fas [26]. As células tumorais também pode regular positivamente a proteína enzima-inibidor-FADD como IL-conversora 1β celular ou fosforilar a caspase-8 para inibir a activação de caspase-8 e bloquear a via de sinalização a jusante de Fas [27,28]. No presente estudo, encontramos a ativação da STAT3 em células AGS após a estimulação anti-Fas. A activação da STAT3 foi mostrado para proteger as células cancerosas de estímulos apoptóticos que emanam do receptor Fas [29]. Pré-tratamento de inibidor STAT3 não poderia iniciar a apoptose de células AGS após activação de sinalização Fas (dados não mostrados), sugerindo que a activação da STAT3 não está envolvido na prevenção da AGS células da apoptose induzida por Fas.

Foi relataram que Lewis células de carcinoma de pulmão foram constitutivamente resistentes a apoptose mediada por Fas, mas a sobre-expressão de Fas nestas células permite que a apoptose mediada por Fas, após ligação cruzada com anticorpo agonista anti-Fas [30], o que sugere que não existe uma diferença qualitativa nas células de sinalização ativadas receber, o que determina o seu destino após Fas ligadura sinalização. O nível de expressão de Fas é moderada em células estimuladas com AGS e dose elevada de anticorpos anti-Fas (20 ug /ml); nós encontramos que as células AGS mostrou um ligeiro aumento da apoptose (dados não mostrados). Isto indica que a indução de apoptose e sinalização de promoção de migração podem ambos ser activados após a ligação do receptor de Fas, o que pode estar relacionado com o nível de anticorpos anti-Fas utilizado em tais experiências. Se altos níveis de Fas de sinalização de entrega não pode ser alcançado sob condições fisiológicas, a sinalização de promoção da migração irá assumir após a ligadura receptor Fas e causar aumento da metástase GC.

Para implementar metástases à distância, motilidade poderosa é necessária para as células tumorais . A fascina, como uma proteína de agregação da actina, é importante para a manutenção e estabilidade de feixes de actina filamentosa, e, portanto, envolvido na motilidade celular [31]. No presente estudo, revelou que a sinalização Fas estava envolvido na regulação positiva da expressão fascina. IL-6 é relatado para regular a expressão de células A fascina GC [32]. A sinalização Fas também foi demonstrada para promover a secreção de IL-6 em células tumorais [33]. Estas evidências indicam que a sinalização Fas provavelmente amplifica o efeito de regulação positiva fascina através de IL-6. Demonstramos ainda que a expressão Fas e fascina intimamente relacionada em pacientes GC, fortalecendo a importância do eixo de Fas-A fascina no processo de metástase GC.

De acordo com estudos anteriores, foi demonstrado que a activação do FAS-induzida STAT3 foi exigido para a regulação positiva de a fascina. No modelo de metástases do pulmão de rato nu, o inibidor de STAT3, S3I-201, pode inibir a expressão fascina em tecidos tumorais. FasL recombinante murino foi incapaz de activar a activação da STAT3 (dados não mostrados), sugerindo que activado sinalização iniciada por FasL nas células AGS si é suficiente para mediar a activação da STAT3 e supra-regulação A fascina jusante. Além de regular a expressão fascina, STAT3 também está envolvida na proliferação celular e sobrevivência, oncogénese, e a metástase de cancros em GC [34-36]. Um inibidor de pequena molécula da STAT3 oralmente biodisponível foi descoberta e pode ser um agente terapêutico potencial para o cancro humano [37]. Especula-se que a STAT3 inibidor é um promissor agente que pode ser utilizado na terapia clínica de GC no futuro próximo.

Em conclusão, nós demonstramos que a sinalização Fas está envolvida na metástase GC através de regulação positiva dependente da STAT3 de fascina. Nossos resultados também sugerem a Fas /STAT3 /via fascina pode ser um alvo molecular para a terapia GC.

Reconhecimentos

Nós apreciado Dr. Hua Wang para fornecer o cDNA extraído de tecidos tumorais de pacientes GC . Nós também apreciado o editor de Medjaden para a modificação deste manuscrito.

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