Абстрактный
<р> PRR11 является потенциальным кандидатом онкоген, который участвует в патогенезе рака легких, однако роль PRR11 в желудочном рак в настоящее время неясно. В настоящем исследовании мы исследовали роль PRR11 в развитии рака желудка путем оценки его состояния экспрессии в образцах из когорты 216 больных раком желудка. PRR11 было установлено, что избыточно экспрессируется в 107 (49,5%) больных с помощью иммуногистохимии микрочипов ткани, полученные с использованием образцов пациентов. Кроме того, PRR11 избыточная экспрессия была обнаружена значительно коррелируют с клиникопатологическими функциями, такими как опухолевой инвазии, дифференцировки опухоли и стадии заболевания. Выживание анализ когорты показал, что PRR11 является независимым прогностическим фактором для больных раком желудка. PRR11 стабильно притихли в желудочном клеточной линии карциномы с использованием подхода, shRNA основе, и обработанные клетки показали, уменьшилось клеточную пролиферацию и образование колоний в пробирке и клеточного роста в естественных условиях, вождалось снижение экспрессии CTHRC1 и повышенная экспрессия LXN, белки, участвующие в опухолевой прогрессии. Оценка образцов желудочного рака человека показали, что экспрессия PRR11 также было связано с увеличением CTHRC1 и снижение экспрессии LXN. Эти данные указывают на то, что PRR11 может быть широко активируется при раке желудка человека и согласуются с гипотезой, что функции PRR11 как онкоген в развитии и прогрессии рака желудка
<р> Цитирование:. Песня Z, W Лю Сяо Y , Чжан М, Ло Y 1, W Юань и др. (2015) PRR11 является прогностическим Маркер и потенциал онкогенов у пациентов с раком желудка. PLoS ONE 10 (8): e0128943. DOI: 10.1371 /journal.pone.0128943
<р> Редактор: Кепинг Се, Университет Техаса MD Anderson Cancer Center, США
<р> Поступило: 13 января 2015 года; Принято: 1 мая 2015 года; Опубликовано: 7 августа 2015
<р> Copyright: © 2015 песни и др. Это статья открытого доступа распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются
<р> Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в пределах своих подтверждающей информации, файлов бумаги и
<р> финансирование:.. авторы не имеют никакой поддержки или финансирования сообщать
<р> конкурирующие интересы:. авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов
Введение
<р> рак желудка (GC) является четвертым наиболее распространенным злокачественным во всем мире с предполагаемой частотой одного миллиона новых случаев в 2008 году, что составляет 8% новых случаев раковых заболеваний. Смертность, связанная с GC также ошеломляет, с 0,73 миллиона случаев смерти составляет 10% от общего числа смертей, связанных с раком оценкам за 2008 год Следует отметить, что около 70% новых случаев GC и смертельных случаев, связанных с GC происходят в развивающихся странах [1] , Хотя были важные медицинские достижения в области диагностики и лечения ГК в течение последних нескольких десятилетий эта болезнь остается второй наиболее распространенной причиной рака, связанных с смертности в мире, частично из-за того, что он обычно обнаруживается у пациентов с поздним стадия болезни, отменяя успешное хирургическое лечение для многих пациентов [1, 2].
<р> в то время как частота ставок GC существенно в Северной Америке и в большинстве северных и Западной Европе уменьшилось, болезнь по-прежнему распространен в Восточной Европе , Россия, Центральная и Южная Америка, и Восточной Азии [3]. В настоящее время существует несколько новых тканей на основе прогностические и терапевтические маркеры для рака желудка. К ним относятся эпидермального фактора роста человеческого рецептора-2 (HER2) [4, 5], фактор роста эндотелия сосудов рецептора 2 (VEGFR-2) [6], ремонт иссечение кросс-комплементационная группа 1 (ERCC1) [7], В-клетки лимфома-2 (Bcl-2) и Ки-67 [8]. Тем не менее, большинство из этих маркеров обычно не использовались в клинической практике, поскольку они не всегда точно и эффективно прогнозировать исход или терапевтическую эффективность. Существует в настоящее время большое клиническое потребность в новых молекулярных маркеров, которые могут улучшить обнаружения, диагностики и прогнозирования рака желудка и устраняет необходимость в дорогостоящих и неэффективных методов эндоскопического скрининга. В 2013 году богатый пролином белок 11 (PRR11) был идентифицирован как новый ген и функционально характеризуется Цзи Ин и др. который обнаружил, что PRR11 играет важную роль в прогрессировании и онкогенеза как клеточного цикла. Этот белок, из-за его роли онкогенов, было указано в качестве потенциальной цели нового в диагностике и лечении рака легкого человека. Посредством регулирования важных генов, участвующих в клеточных циклов и онкогенеза, PRR11 участвует в инициации и прогрессии рака легкого [9] и эпителиально-к-мезенхимального перехода при раке молочной железы [10].
Однако в настоящее время, знания относительно роли PRR11 при раке желудка не сообщалось ранее. В данном исследовании мы оценивали состояние экспрессии PRR11 в когорте 216 пациентов с GC и проанализировали взаимосвязь между выражением PRR11 и клинико-патологическими параметрами, чтобы определить, можно ли предсказать PRR11 GC прогноз пациента. Кроме того, глушение PRR11 в нескольких карциномы желудка клеточных линий тормозится клеточные скорость пролиферации, миграции раковых клеток в формировании клеток колонии, и рост опухоли в естественных условиях эксперимента. Эти выводы имеют важное значение, поскольку они согласуются с предыдущими гипотезами, что PRR11 может быть важным фактором онкогенными в различных раковых заболеваний.
Выбор и тканей Когорта приобретение
<р> когорта состояла из 216 пациентов с ГК, которые получили хирургические резекция в Changhai больнице в Шанхае, Народной Республики Китая, с 2001 по 2005 пациентов последующей деятельности не было получено в клинических отчетах до марта 2010 года, и каждый из пациентов был подтвержден, чтобы иметь достаточное количество ГК магазина для построения микрочипов ткани (АПМ) Среди информации о пациенте собираемой характеристики, включая возраст, пол, размер опухоли, Т стадии, N стадии, M стадии и дифференцировки опухоли (Таблица 1). Все образцы ткани были получены после того, как пациенты дали письменное информированное согласие. Экспериментальный проект был утвержден Институциональным наблюдательным советом Changhai больницы до начала исследования.
Клеточные линии и условия культивирования
<р> выражение белка было обнаружено с помощью пяти GC клеточных линий SGC7901, MKN45, MKN28, HGC27 и MGC803, которые были приобретены у сотового банка, Китайской академии наук. линии GC клеток поддерживали в модифицированной среде Дульбекко Игла (DMEM) (Привет-Clone), плюс 10% FBS, при 37 ° С с 5% СО2.
Нокдаун PRR11 по лентивирусов вектор-нагруженный shRNA в GC клетки
<р> Упаковка лентивирусов частицы проводили следующим образом. Вкратце, лентивирусные плазмиду экспрессии, содержащие небольшое интерференционную РНК (5'-ACGCAGGCCUUAAGGAGAATT-3 ') таргетирование PRR11 была построена GENECHEM Corporation (Шанхай, Китай) и использовали для заражения ГХ клеток в присутствии 6 мкг /мл полибрена. Зараженные Клетки рака желудка были выбраны для использования пуромицин, и нокдаун PRR11 было подтверждено с помощью иммуноблоттинга клеточных лизатов с анти-PRR11 антитела.
Животные модели
<р> Подкожный ксенотрансплантата опухоли модели были выполнены, чтобы оценить в естественных условиях функции изменение PRR11-нокдаун в клеточной линии SGC-7901. PRR11-KO SGC-7901 клетки и органы управления (1 × 106 клеток в 0,1 мл PBS) вводили подкожно в левый фланг 4-недельных самок BALB /C голых мышей (Животный центр второго военного медицинского университета) ( N = 5). Диаметр опухоли измеряли каждые три дня. Через две недели после имплантации, умерщвляли всех животных. Опухоли были собраны и объем опухоли (мм3) рассчитывали как V = 0,52 (длина × ширина × глубина). Этот эксперимент был одобрен животных Комитета по этике животных Второго военного медицинского университета по.
статус выражение PRR11 коррелирует с клинико-патологическими важных характеристик желудка
рака <р> Выражение PRR11 оценивали с помощью иммуногистохимии в когорте из 216 пациентов с раком желудка. Низкая интенсивность цитоплазматического PRR11 иммунным окрашиванием была видна в нормальных эпителиальных клеток (рис 1А). Высокая интенсивность PRR11 иммунное окрашивание наблюдалось в частности, в клетках рака желудка, и интенсивность окрашивания варьировала между пациентами (рис 1В и 1С). Из этих образцов опухолей, 107 из 216 (49,5%) имели положительную экспрессию PRR11 и 109 случаев показал PRR11 отрицательное выражение (рис 1C). Вестерн-блоттинга и ОТ-ПЦР-анализ также подтвердил, что PRR11 белка и мРНК была увеличена в образцах опухолей по сравнению с таковым в нераковых тканей (рис 1D и 1E). Хвалить эти результаты, относительно высокий уровень уровня экспрессии белка PRR11 был также обнаружен в пяти GC клеточных линий, в том числе MKN45, MKN28, SGC7901, HGC27 и MGC803 (S1) Рис.
<Р> Выражение PRR11 достоверно коррелирует с числом из клинико-патологических параметров T стадии, степени дифференцировки опухоли и стадии TNM (таблица 1). Выражение PRR11 не было установлено, что связано с возрастом, полом, размер опухоли и N стадии. Эти результаты свидетельствуют о том, что экспрессия высокий PRR11 белок связан с агрессивным фенотипом рака желудка.
Нокдаун результатов PRR11 в понижающей регуляции CTHRC1 и повышающая регуляция LXN
<р> Мы проводили вестерн-блот анализ, чтобы исследовать, был ли изменен выражение CTHRC1 и LXN в PRR11-KO SGC-7901 рака желудка клетки. Результаты показали, что CTHRC1 была подавлена и LXN был повышающей регуляции в клетках PRR11-KO по сравнению с контрольной группой (рис 4, а). Дальнейший анализ коэкспрессией проводили в ГХ образцах опухолей с помощью иммуногистохимии (фиг.4В). Данные IHC подтвердили, что экспрессия CTHRC1 была положительно связана с выражением PRR11 (г = 0,299, р &л; 0,001). И экспрессии LXN был отрицательно связан с выражением PRR11 (R = -0.188, р = 0,005) в тканях GC (рис 4в)
Обсуждение
<р> PRR11 является относительно новым белком молекулярного, которые могут играть определенную роль в патогенезе рака, и в настоящее время существует лишь несколько статей, описывающих роль PRR11 при раке легких [13]. В то время как PRR11, как сообщается, повышающей регуляции при раке легкого, возможные механизмы для этого увеличение экспрессии не сообщалось, и, кроме того, большой объем работы необходимо оценить клиническую значимость PRR11. В попытке, чтобы исследовать этот вопрос, в настоящее время было проведено исследование, чтобы охарактеризовать экспрессию PRR11 в желудочном карциномы вместе с какой-либо ассоциации с клиникопатологическими характеристиками.
<Р> Наше исследование показало, что как мРНК PRR11 и белок вверх регулируется в тканях GC по сравнению с нормальной слизистой оболочки; находка, которая поддерживает понятие про-онкогенных роли PRR11 в раке желудка. Кроме того, положительное выражение PRR11 было в значительной степени связано с агрессивным CANER фенотипа, в том числе опухолей с увеличением количества инвазии, увеличение дифференцировке опухоли и зашедшей стадии болезни. Кроме того, мы установили желудочный линию клеток карциномы, в которой PRR11 стабильно снесен. Эта клеточная линия демонстрирует уменьшенный клеточную пролиферацию и существенно уменьшилось образование колоний в наших тестах. Взятые вместе, эти результаты свидетельствуют о том, что экспрессия белка PRR11 может играть решающую роль в развитии и прогрессии рака GC.
<Р> постановка рака TNM Общепризнанно систему классификации в руководстве лечения рака и прогнозирования прогноз. Неудивительно, что у пациентов в нашем исследовании с резекций на более ранней стадии имели более длительный интервал выживания, чем те, с более поздним стадией заболевания. В последнее время, биологические маркеры, достигли своего пика интерес клиницистов как способ оценки /прогнозирования терапевтической эффективности и результатов лечения пациентов. Некоторые примеры таких маркеров, которые используются в настоящее время являются HER2, MTOR и ANXA1 [14-16]. Наше исследование поддерживает потенциальную прогностическую роль для измерения PRR11 при раке желудка, как Каплан-Майера анализ показал, что положительный уровень экспрессии PRR11 был связан с плохим прогнозом, как в раннем TNM стадии (TNM I /II) и в поздней стадии TNM (ТНМ III /IV). Дальнейшие многофакторные анализы показали, что избыточная экспрессия PRR11 была независимым прогностическим фактором выживаемости пациентов GC после резекции первичной опухоли. Это первый отчет, что выражение PRR11 ассоциируется с плохим исходом после операции у больных ГЦ.
<Р> Возможные механизмы, лежащие в основе PRR11 способствующего канцерогенеза не были полностью исследованы. было проведено предыдущее исследование PRR11 и интерпретированы в постановке рака легких и показал, что PRR11-нокдаун дизрегуляции экспрессию множественного важного гена в критических путей, таких как клеточный цикл, онкогенеза и метастазирования (например, CCNA1, RRM1, MAP4K4 и EPB41L3) [ ,,,0],9].
<р> в собственном анализе микрочипов (S1 и S2 таблиц) [17], мы обнаружили, что два новых генов-кандидатов (CTHRC1 и LXN) были заметно изменены после того, как PRR11-нокдаун. CTHRC1 был впервые описан в качестве нового секреторного белка в травмированных и больных артерий, и считается, что CTHRC1 может ингибировать экспрессию коллагена и способствует миграции клеток, оба из которых являются необходимыми функциями для инвазивного рака [18]. Дальнейшие исследования показали, что CTHRC1 белок экспрессируется на высоком уровне в метастатических поражений по сравнению с неметастатическим опухолями, и ингибирование экспрессии результатов CTHRC1 снижению миграции клеток в пробирке [19]. В последнее время было показано, экспрессия белка thatCTHRC1 тесно связана с развитием рака печени [20, 21], рак поджелудочной железы [22], рак желудка [23], и колоректального рака [24]. LXN является относительно новый ген, который, как сообщалось, подавлена в человеческом GC. Канонически, LXN, как полагают, обладают опухолевые супрессоры подобные функции [25]. Он также сообщил, что LXN обладает свойствами подавляющих опухоли в злокачественную меланому [26] и гепатоцеллюлярной карциномы [27]. Мы также показали, что избыточная экспрессия CTHRC1 положительно коррелирует с опухолевой инвазии, регионарных метастазов лимфатических узлов, прогрессирования заболевания и исхода пациентов (S2 рис), в то время как LXN избыточная экспрессия отрицательно связан с метастазов в лимфатических узлах, дифференцировки опухоли и стадии заболевания (S3 Таблица), что указывает на роль онкогенных CTHRC1 и подавляющий роль LXN в GC. Интересно отметить, что наше исследование показало, что глушителей PRR11 вызывало уменьшение экспрессии CTHRC1 и повышенную экспрессию LXN, что указывает на перекрестные помехи между PRR11 и CTHRC1 и LXN. Кроме того, существует значительная корреляция между экспрессией PRR11 и CTHRC1 и экспрессии LXN в образцах GC. Эти результаты свидетельствуют о том, что PRR11 может способствовать прогрессии рака через взаимодействие с CTHRC1 и LXN. Тем не менее, точный механизм нуждается в дальнейшем исследовании.
<Р> В заключение PRR11 часто выражается в человеческом GC, и его экспрессия связана с плохой выживаемостью пациентов GC. Дополнительный в пробирке и в естественных условиях исследования показали, что нокдаун PRR11 ингибирует пролиферацию клеток GC, способность колониеобразующих, и рост опухоли в желудочном клеточной линии карциномы. Дальнейший анализ корреляции показал, что экспрессия PRR11 также положительно коррелирует с экспрессией CTHRC1 и отрицательно коррелирует с экспрессией LNX, предоставляя намеки на возможный механизм для онкогенных функции PRR11. Настоящее исследование обеспечивает основу для дальнейшего изучения этих новых прогностических маркеров, которые могут оказаться полезными целями в отношении обнаружения, скрининга и лечения больных ГЦ.
Выражение признательности
<р> Благодарим д-р Ин Чен, Changhai больницы, Шанхай, Китай, который любезно предоставить желудка образцов рака.
Этот пепто, вероятно, не поможет вашей язве
Замена красного мяса заменителями мяса на растительной основе снижает риск сердечно-сосудистых заболеваний
Новый инструмент для расшифровки микробиома кишечника
Микробы на языке могут быть использованы для диагностики рака поджелудочной железы
Оральный секс может вызвать бактериальный вагиноз
Будут ли диеты на основе ДНК и персонализированные лечебные продукты - будущее для похудения?
Микробиомы древних приматов могут дать больше информации о развитии человека
Микробиомы древнего человека находятся под микроскопом из-за того, что они рассказывают ученым о людях давным-давно. Новое исследование, опубликованное в журнале Границы экологии и эволюции в феврал
Исследование связывает потребление ферментированных овощей с низкой смертностью от COVID-19
Новое интригующее исследование, проведенное европейскими исследователями, предполагает, что показатели смертности от коронавируса 2019 года (COVID-19), вероятно, будут ниже в странах, где диеты богаты
Как справиться с синдромом раздраженного кишечника
Считается, что синдром раздраженного кишечника (СРК) поражает от 25 до 45 миллионов американцев, в основном женщины в возрасте от позднего подросткового возраста до начала 40-х годов. Состояние предст