PLoS ONE: Функциональная PstI /RsaI полиморфизма CYP2E1 связан с развитием, прогрессом и неблагоприятный исход рака желудка

Абстрактный

Фон
<р> цитохрома Р450 2Е1 (CYP2E1), этанол-индуцируемый фермент, было показано, что метаболически активировать различные канцерогены, которые имеют решающее значение для развития и прогрессирования рака. Он показал, что CYP2E1
полиморфизм изменяют транскрипционной активности гена. Тем не менее, исследования о взаимосвязи между CYP2E1
полиморфизмы ( Pst
I /АСР
Я или Дра
I) и рак желудка у сообщили противоречивые результаты , Таким образом, цель настоящего исследования состояла в том, чтобы исследовать вопрос о том CYP2E1
полиморфизм связан с развитием и прогрессированием рака желудка и его прогноза у китайских пациентов.

Методы
<р> в исследовании случай-контроль был проведен, в котором CYP2E1 Pst
I АСР
I и Дра
I полиморфизмы были проанализированы в 510 китайских пациентов с раком желудка и 510 ВОЗРАСТ- и гендерно здоровой контрольной группой с помощью ПЦР-ПДРФ. Отношение шансов были оценены многовариантного логистической регрессии, а срок службы был рассчитан на кривых выживаемости Каплана-Мейера. Кроме того, мета-анализ был проведен также для проверки результатов.

Результаты

Для CYP2E1 Pst
I /АСР
Я полиморфизм, c2c2 гомозиготы (OR = 2,15; CI: 1.18-3.94) и C2 носители (OR = 1,48; CI: 1.13-1.96) были связаны с повышенным риском развития рака желудка по сравнению с c1c1 гомозигот. Оба c1c2 и c2c2 генотипы были связаны с продвинутой стадии, но не степень рака желудка. Кроме того, c2c2 генотип был идентифицирован как независимый маркер плохой общей выживаемости при раке желудка. Тем не менее, не было никакой значимой связи между CYP2E1 ДРА
Я полиморфизм и риск развития рака желудка. В мета-анализе, объединенные данные 13 исследований подтвердили, что CYP2E1 Pst
I /Rsa
Я полиморфизм был связан со значительным увеличением риска развития рака желудка.

Вывод изображения

CYP2E1 Pst
I /Rsa
I полиморфизм связан с повышенным риском развития, прогрессирования и плохим прогнозом рака желудка у китайских пациентов. Объединенные данные 13 исследований, в основном в азиатских странах, находятся в согласии с нашими выводами
<р> Образец цитирования:. Фэн J, Пан X, Ю. J, Z Чэнь, Сюй Н, Эль-Рифаи W и др. (2012) Функциональная PstI /RsaI
полиморфизма CYP2E1
связан с развитием, прогрессом и неблагоприятный исход рака желудка. PLoS ONE 7 (9): e44478. DOI: 10.1371 /journal.pone.0044478
<р> Редактор: Джорджина Л. обездвиживания, Университет Абердина, Великобритания
<р> Поступило: 23 мая 2012 года; Принято: 7 августа 2012 года; Опубликовано: 5 Сентября, 2012
<р> Copyright: © Feng и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Эта работа Работа выполнена при поддержке Национального фонда естественных наук Китая [NO. 81072031 (BA10)]. Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Фон
<р> рак желудка, один из наиболее распространенных видов рака и второй ведущей причиной смерти от рака во всем мире, остается важной проблемой общественного здравоохранения. Исследования показали, что 989,600 новых случаев рака желудка произошло в 2008 году и что 738,000 пациентов ежегодно умирают от этого заболевания [1] - [2]. Существует значительная географическая изменчивость в желудочном заболеваемости раком, с более высокими показателями в Азии и некоторых частях Южной Америки. Рак желудка является одним из наиболее распространенных злокачественных опухолей в Китае, что составляет 38% мировых случаев каждый год [3] - [4]. Хотя хорошо известно, что факторы окружающей среды, пищевые привычки и HELICOBACTER
инфекции пилори связаны с риском развития рака желудка, хозяин генетический фактор также считается важным в процессе канцерогенеза желудка [5]. Генетические восприимчивости можно объяснить, в частности, с помощью единичных нуклеотидных полиморфизмов (SNP) восприимчивых генов [6] - [7]. Поэтому определение и понимание генетических и молекулярных факторов, участвующих в развитии рака желудка и прогнозирования может помочь выявить новые генетические биомаркеры и выделить потенциальные направления исследований для целенаправленной терапии.

цитохрома P450 2E1
( CYP2E1
), который расположен на хромосоме 10q26.3, представляет собой ген, 11,7 кб, состоящий из 9 экзонов и 8 интронов, и кодирующий белок, состоящий из 493 аминокислот [8]. CYP2E1 представляет собой этанол, индуцируемого фермента, который активирует метаболически различные канцерогены, такие как бензол, винилхлорид и N-нитрозаминов [9] - [10]. N-нитрозаминов присутствуют в табачном дыме, и активация N-нитрозаминов был связан с развитием различных видов рака, включая рак желудка [11] - [12]. Функциональная <ЕМ> CYP2E1
генные полиморфизмы, которые изменяют транскрипционную активность гена и, таким образом, его вещества, такие как N-нитрозаминов будет влиять на чувствительность раковых образований. Два генетических полиморфизмов в области 5'-боковой поверхности (обозначенные Rsa
I является -1053C > T (rs2031920) и Pst I
является -1293G &° С (rs3813867), соответственно), которые в тесном неравновесия по сцеплению, как сообщалось, изменить транскрипционной активности гена [13] - [14]. Лица с преимущественным гомозиготной аллели (C1 /C1), гетерозиготного аллеля (C1 /C2) и редкой гомозиготной аллели (C2 /C2) из ​​ Pst
I /Rsa
I полиморфизм назвал дикого типа гомозиготы, гетерозиготы и гомозиготы редкие, соответственно [15] - [17]. Другим важным полиморфизм обнаруживается с помощью Ога
Я в интроне 6 является T7632A (rs6413432), мутация Т А, который, как сообщается, может изменить транскрипцию CYP2E1
гена [13].
<р> за последние два десятилетия, несколько исследований исследовали ассоциации CYP2E1
полиморфизма с риском развития рака легких [18], рак ротовой полости [19], и рак поджелудочной железы [20] , В последнее время несколько исследований о взаимосвязи между CYP2E1
полиморфизм и рак желудка также были опубликованы, но эти исследования дали противоречивые результаты [21] - [33]. Кроме того, не было ни одного доклада об ассоциации между CYP2E1
полиморфизма и выживаемость больных раком желудка. Таким образом, цель данного исследования состояла в том, чтобы исследовать вопрос о том CYP2E1
полиморфизм связан с развитием и прогрессированием рака желудка и его прогноза у китайских пациентов. Кроме того, мы также провели мета-анализ отобранных высококачественных исследований, опубликованных в период с 1990 по 2011 год, с целью выявления более точную связь между CYP2E1
полиморфизм и рак желудка.

Материалы и Методы

Исследуемая популяция
<р> в исследование были включены 510 пациентов, которые были допущены для лечения рака желудка в первой филиал больницы Нанкин медицинского университета в период с мая 2006 года по сентябрь 2008 года и 510 возраста и пола соответствием здоровых людей. Все предметы были связаны этнические ханьских китайцев и жителей в провинции Цзянсу. Все случаи были впервые диагностированным и гистологически подтвержденным без предварительной химиотерапии или лучевой терапии. Патологическая стадия рака желудка была классифицирована в соответствии с опухолью лимфоузла-метастазирования (TNM) системы классификации в стадии I (T1-T2N0M0), этап II (T1-T2N1M0 или T3N0M0), III стадия (T3N1M0, T1-T3N2M0, TanyN3M0 или T4NanyM0), или стадия IV (TanyNanyM1) [34]. степень злокачественности сгруппирована в низкой (хорошо дифференцированной), промежуточное соединение (умеренно дифференцированной), или высокий класс (плохо дифференцированная) по данным Всемирной организации здравоохранения классификации класса (ВОЗ) [35]. Здоровые органы управления были набраны из людей, живущих в одних и тех же жилых районах, которые принимали участие в рутинной медицинской экспертизы в той же больнице withnormal выводы в ходе проверки и были возрастные (± 5 лет) и пола соответствует случаям.
<р> исследование было одобрено Комитетом по этике первой филиал больницы Нанкин медицинского университета по и номер документа был 2008 (1101). Письменное информированное согласие было получено от всех субъектов.

ДНК Добыча и генотипирование CYP2E1

<р> цельную кровь собирали в ЭДТА покрытием пробирки и центрифугировали в течение 15 мин, а охристые пальто слой был выделен. Геномную ДНК экстрагировали из 200 мл лейкоцитарной пленки с использованием набора Qiagen QIAamp ДНК крови Mini Kit (Qiagen Inc., Valencia, CA). Полимеразная цепная реакция длины фрагмента-ограничение полиморфизма (ПЦР-ПДРФ) использовали для анализа генов. Структура праймера и рестриктазами, приведены в таблице 1. Определение генотипа проводили без знания состояния корпус /контрол. Гелевые изображения были прочитаны независимо двумя научными сотрудниками. Если консенсус не был достигнут на протестированных генотипов, то генотипирование повторяли независимо друг от друга до тех пор, пока не будет достигнуто консенсуса. Для проверки метода ПДРФ, 100 (50 случаев, и 50 из контроля) образцов были выбраны случайным образом для прямого секвенирования с Dye Terminator секвенирования Kit ABI PRISM (Applied Biosystems, Foster City, CA) с образцами нагружают на ABI 3700 секвенсор. Скорость Совпадение этих двух методов составляла 99%.

Статистический анализ
<р> Харди-Вайнберга аллелей оценивали с помощью критерия хи-квадрат. Сравнение возраста между случаями и контролем оценивали с помощью теста Манна-Уитни U. Разница в распределении генотипов между случаями и контролем определяли с помощью критерия хи-квадрат, а также связь между полиморфизмом CYP2E1 и риска развития рака желудка оценивали по отношение шансов (OR) с 95% доверительный интервал (ДИ). Логистическая регрессия была использована для контроля выбранных потенциальных вмешивающихся (пол, возраст и курение привычки) и оценить сырую нефть и скорректировать или и 95% ДИ. Совокупные общие кривые выживаемости были построены с использованием метода Каплана-Мейера, а разница оценивалась с помощью теста логарифмического рангового. Все данные анализы были сделаны с использованием программного обеспечения SPSS (версия 11.0, Чикаго, Иллинойс, США). A P
значение &л; 0,05 считалось статистически значимым

Мета-анализ
<р> Электронные базы данных PubMed, EMBASE и веб-науки, были искали исследований, имеющих право на. включение в настоящем мета-анализа, используя термины: "CYP2E1", "P4502E1", "полиморфизм (ы)", "желудочный" и "рак или рак или опухоль или новообразование". Верхний предел на 5 декабря 2011 года был применен, в то время как нижний предел дата была 1990. Все опубликованные документы английского языка с полным текстом, соответствующие правомочные критерии были получены. Процитированные в определенных статьях и в обзорных статьях также были рассмотрены. Когда же популяция пациентов была включена в более чем одной публикации, только самая последняя или самая полная одна была включена в мета-анализ. Критерии включения: (а), случай-контроль исследование ассоциации между CYP2E1 АСР
I /Pst I
или Дра
Я полиморфизм и рак желудка; (Б), английский издание; (С), достаточное количество опубликованных данных, доступных для иоценивают или при 95% ДИ; и (d), генотипы контроля в соответствии с Харди-Вайнберга распределения. Информация была тщательно и независимо друг от друга, извлеченные из всех подходящих публикаций по двум из авторов в соответствии с критериями включения, перечисленных выше. Несогласие была решена путем дискуссии между двумя авторами. Если оба автора не достигли консенсуса, третий автор консультировался и окончательное решение было принято большинством голосов. Следующие данные были собраны из каждого исследования: первый автор наименование, дата публикации, этнической принадлежности, дизайн исследования, патологические типы рака желудка, общее количество случаев и контроля, а также информацию о CYP2E1
( Pst
I /АСР
I и /или ДРА
I) полиморфизм. Тогда мы использовали 4.2 программное обеспечение (The Cochrane Collaboration, Оксфорд, Великобритания) для мета-анализа.

Результаты

Характеристики Популяция исследования
<р> Демографическая и патологическая Review Manager характеристики больных и контроля приведены в таблице 2. Там не было никаких существенных различий в демографических данных между случаями и контролем. Тем не менее, 51,6% случаев были курильщиками в то время как этот показатель составил 44,1% для контрольной группы (OR = 1,35, 95% ДИ: 1.05-1.73, P
= 0,017). Из пациентов с раком желудка, 41 (8,0%), 181 (35,5%), 160 (31,8%) и 25 (4,9%) были этапы I, II, III и IV опухолей, соответственно, и 56 (11,0%) , 116 (22,7%) и 231 (45,3%) были низким, средним и полноценными опухоли, соответственно.

Ассоциация между CYP2E1
полиморфизмов и рака желудка Риск
<р> частоты генотипов полиморфизмов в контрольной согласуются с распределением Харди-Вайнберга ( P
= 0,055 для Pst
I, и P =
0,056 для ДРА
I). В таблице 3 показано распределение частот CYP2E1 Pst I
или Dra I
генотипов и оцененные ОШ (95% ДИ) для рака желудка. В CYP2E1 Pst
рестрикционного анализа I, существует значительная разница в распределении генотипов между корпусом и контрольными группами. Лица с C1C2 или c2c2 генотипа имели значительно повышенный риск развития рака желудка по сравнению с c1c1 гомозигот, с ОШ (95% ДИ) 1,35 (1.01-1.80) и 2.15 (1.18-3.94), соответственно. Кроме того, C2 носители (c1c2 или c2c2) имели ОШ (95% ДИ) 1,48 (1.13-1.96), по сравнению с c1c1 гомозигот. Тем не менее, в CYP2E1 ДРА
рестрикционный анализ I, не было никаких существенных различий между корпусом и контрольной группой в распределении генотипов. ОШ (95% ДИ) для ТА, АА, а носители были 0,76 (0.58-1.01), 1.34 (0.83-2.17), и 0,85 (0.65-1.10), соответственно, по сравнению с гомозигот ТТ. Когда CYP2E1 Pst
I и Дра
Я генотипы были проанализированы вместе, люди с c2c2 /AA, имели значительно повышенный риск развития рака желудка, с исправленным ОР (95% ДИ) 2,66 (1.27-5.57), по сравнению с генотипом c1c1 /ТТ (таблица 3).

Ассоциация между CYP2E1
полиморфизмов и Рак желудка Болезнь Статус
<р> В CYP2E1 Pst
рестрикционный анализ I, как C1C2 и c2c2 генотипы были связаны с продвинутой стадии, но не степень рака желудка (таблица 4). Частоты c1c2 генотипа были 21,9%, 24,9%, 31,5%, и 44,0% в стадии I, II, II и IV, соответственно, в то время как частоты c2c2 генотипа были 4,9%, 4,4%, 11,1%, и 24,0%, соответственно. C2c2 генотип был связан с продвинутой стадией рака желудка, среди всех трех анализа подгрупп ( т.е.
III против
I;. III + IV против
я. III + IV против.
I + II), и скорректированные ОШ (95% ДИ) были 5,17 (1.05-25.54), 4.80 (1.03-22.45), и 4,38 (1.92-9.97), соответственно, по сравнению с в c1c1 гомозигот. Кроме того, C1C2 генотип был связан с продвинутой стадией рака желудка только при анализе подгруппы сравнения стадии III + IV со стадиями I + II) (ОШ = 1,89; CI: 1.18-3.03), по сравнению с c1c1 гомозигот. Тем не менее, никакой связи между CYP2E1 Rsa
I полиморфизм и желудка класса рака обнаружено не было (таблица 4).
<Р> В CYP2E1 ДРА
рестрикционный анализ I, не наблюдалось значимой связи либо желудка стадии рака или класса (таблица 5).

Ассоциация между CYP2E1
полиморфизмов и рака желудка выживания
<р> в целом, у пациентов с раком желудка наблюдались в течение медианы (диапазон) 39 (3-72) месяцев. Кривые выживаемости Каплана-Мейера (рис 1А) и лог-ранговый тест показать, что CYP2E1 Pst I
полиморфизм был связан с плохой общей выживаемости рака желудка. C1C2 или c2c2 генотип был заметно бедную общую выживаемость, по сравнению с c1c1 генотипа ( P <
0,001). Средний показатель кумулятивного выживаемость была значительно ниже в c1c2 или c2c2 носителей (28 месяцев; 95% ДИ: 22.1-33.9 месяцев или 23months; 95% ДИ: 14.0-32.0 месяцев, соответственно), по сравнению с c1c1 носителями (44 месяцев; 95 % ДИ, 38.6-49.4 месяцев). Тем не менее, выживание не было в значительной степени связано с CYP2E1 ДРА
I полиморфизм (рис 1B).

Мета-анализ на ассоциации между CYP2E1
полиморфизмов и Желудочный риска развития рака
<р> в общей сложности 13 публикаций соответствовали критериям включения [21] - [33]. Из этих исследований, одно исследование [33] был исключен, так как те же данные были доступны в более поздней публикации [27]. С помощью объединенных данных от этих предыдущих исследований и нашего нынешнего расследования, этот мета-анализ были включены 2937 случаев и 3602 управления. Характеристики этих исследований представлены в таблице 6. Был статистически значимая связь между c2c2 генотипа (OR = 1,73; 95% ДИ: 1.26-2.38; P
= 0,0008) и риск развития рака желудка (рис 2A ). Тем не менее, не было никакой значимой связи между C2 носителей и риском развития рака желудка. Обобщенные ОШ для C2 носителей были 1,01 (95% ДИ: 0.80-1.28; <ЕМ> P
= 0,93), по сравнению с гомозиготным дикого типа генотип (С1 /С1) (Фигура 2В). До настоящего исследования, было только два предыдущих исследований, оценивающих связь между CYP2E1 ДРА
Я полиморфизм и риск развития рака желудка [21], [29]. Поскольку образцы этих исследований были слишком малы, чтобы генерировать достаточную мощность, мы не провели мета-анализ по этому полиморфизма. Тем не менее, все три исследования сообщили, что не было никакой значимой связи между Дра
Я полиморфизм и риск развития рака желудка.

Обсуждение
<р> В настоящем исследовании случай-контроль, для CYP2E1 Pst I
полиморфизма, мы обнаружили, что оба носители C2 и c2c2 генотипы были значительно связаны с риском развития рака желудка и плохим клиническим прогнозом. Тем не менее, мы не нашли каких-либо значимую связь между CYP2E1 ДРА
I полиморфизма и как риск развития рака желудка и клиническим прогнозом. Кроме того, наш мета-анализ также подтвердил, что CYP2E1 Pst I
полиморфизма, но не ДРА
I, была в значительной степени связано с риском развития рака желудка, что обеспечило дополнительные доказательства с указанием ассоциации между этим функциональным полиморфизмом и желудка, предрасположенность к раку.
<р> рак желудка является многостадийным процессом, в котором генетические и экологические факторы взаимодействуют между собой в развитии рака. Межиндивидуальной генетические различия в восприимчивости к воздействию химических канцерогенов являются одними из наиболее важных факторов хозяина в организме человека рака [36] - [38]. Было высказано предположение, что различные факторы, принимающие влияют на восприимчивость к раку, даже по тому же воздействие окружающей среды канцерогенных факторов [39] - [41]. Особый интерес представляет CYP2E1
которого полиморфизмы связаны с существенной межиндивидуальной изменения в метаболизировать канцерогены и риски рака [42] - [44]. Наши результаты, указывающие на связь между CYP2E1
полиморфизмом и риском развития рака желудка являются биологически правдоподобным. CYP2E1 катализирует окисления и ДНК образование аддукта некоторых низкомолекулярных канцерогенами рака желудка [45] - [46]. Было выявлено, что Pst
I и сайты Rsa
Я рестрикции в области транскрипции регуляции CYP2E1
[14]. Десятикратное увеличение экспрессии гена гомозиготными C2 /C2 генотипа CYP2E1
используя Pst I
или Rsa
Я переваривание сообщалось [14]. В противоположность этому, полиморфизм обнаружен <ЕМ> Дра
Я переваривание CYP2E1
расположен в интрона 6, а не функциональное значение этого полиморфизма не существует. Это может объяснить, почему Pst
I / АСР
I, а не Ога
I, полиморфизм CYP2E1
присвоен более высокий риск развития рака желудка в этом исследовании. Наша мета-анализ представил дополнительные доказательства того, связь между CYP2E1 Pst
I /Rsa
I полиморфизм и желудка, предрасположенность к раку. Он согласен с предыдущим мета-анализа в 2007 году [47], в котором сообщалось, что CYP2E1 Pst
I / Rsa
I полиморфизм может быть фактором риска развития рака желудка у азиатов. <Бр>

Еще одна интересная находка в данном исследовании было объединение CYP2E1 Pst
I /АСР
Я полиморфизма с желудочным стадии рака, который может зеркальными существенную роль этого полиморфизма в прогрессия. Мы также сообщали, в первый раз, что этот полиморфизм влияет желудка выживание рака. В последнее время исследования показали, что CYP2E1 играет важную роль в прогрессировании опухоли, и может быть использован в качестве прогностического индикатора. Например, Vaclavikova и др.
Отмечено, что увеличение экспрессии CYP2E1 было связано с инвазивным раком молочной железы, и предложил свою потенциальную роль в качестве прогноза рака молочной железы маркер [48]. Tsunedomi <ЕМ> и др.
Также обнаружили, что экспрессия CYP2E1 был связан с прогрессированием вируса гепатита С-ассоциированной гепатоцеллюлярной карциномы [49]. Кроме того, CYP2E1 положительность тесно коррелирует с плохим выживаемости пациентов с немелкоклеточным раком легкого, а экспрессия CYP2E1 при бронхиальной эпителия имеет прогностическое потенциал [50]. И наоборот, исследование на животных показали, что блокада цитохрома Р450 значительно снижает образование капилляров и размер опухоли в глиальных опухолей, образованных путем инъекции крысы глиомы 2 (RG2) клеток, а также привело к увеличению продолжительности жизни животных [51]. Кроме того, эпидемиологические исследования также показали, что CYP2E1 Pst
I /Rsa
I полиморфизм связан с развитием рака и прогнозом [52], [53]. CYP2E1
c2c2 генотип в значительной степени связано с передовыми клинических стадиях, а также связано с рецидивом опухоли, так как это важно для определения параметров, связанных с опухолевой прогрессии и неблагоприятных исходов у больных с головы и шеи плоскоклеточный рак [52 ]. Хак AK и др.
Отмечено, что CYP2E1 аллель дикого типа был в значительной степени связано с лучшей выживаемостью немелкоклеточного рака легкого и экспрессии р53 [53]. Тем не менее, остается неясным, CYP2E1 Pst
Я ли /Rsa
I полиморфизм связан с дифференциацией рака. В нашем исследовании мы обнаружили, что не было никакой значимой связи с дифференциацией рака желудка.
<Р> Были несколько ограничений в данном исследовании. Во-первых, данные о состоянии стадии рака и дифференцировки были неизвестны в течение нескольких пациентов, которые могут принести некоторую погрешность в результаты, указывающие на связь между полиморфизмом и статусом рака. Во-вторых, хотя мы провели мета-анализ, с целью дальнейшего подтверждения наших результатов, только опубликованные исследования были включены в него. Это, возможно, ограничил власть объединенных результатов.
<Р> В заключение CYP2E1 Pst
I /Rsa
I полиморфизм связан с развитием и прогрессированием рака желудка и бедных прогноз больных раком желудка. Тем не менее, не было никакой значимой связи между CYP2E1 ДРА
Я полиморфизм и риск развития рака желудка. Будущие исследования в этой области должны быть направлены на выяснение механизмов, лежащих в основе между CYP2E1 Pst
I /Rsa
Я полиморфизм и рак желудка.

Выражение признательности
<р> авторы благодарят Medjaden
Bioscience Limited за помощь в подготовке этой рукописи.

• PLoS ONE: секретируемого белка Кислотные и Рич в цистеин (SPARC) Подавляет ангиогенеза вниз-регуляцию экспрессии VEGF…
• PLoS ONE: Соотношение между отрицательными и положительными лимфоузлов Подходит для оценки прогнозе у больных р…