Ploche ONE: Zvýšená expresia CD151 predpovedá prognóza pacientov s resekciou rakoviny žalúdka

abstraktné

Účel

tetraspanin CD151 pôsobí ako promótor metastázy a invázia v niekoľkých nádorov. Avšak úloha CD151 v ľudskej rakovine žalúdka (HGC) zostáva nejasný.

Metódy

Dvadsať HGC vzorky a krytej nontumor vzorky, ľudské žalúdočné epitelové bunky (HGEC) a štyri žalúdočné nádorové bunka línie boli použité na analýzu expresie CD151. Short vlásenka RNA sprostredkovaná upregulace CD151 expresie v bunkách HGC bola vykonaná skúmať úlohu CD151 v proliferácie a metastázovaniu /invázie HGC buniek in vivo stroje a in vitro
. Vzťah CD151 sa integrínu alfa3 do HGC buniek bola skúmaná umlčením integrín alfa3 nasledované ko-Imunoprecipitácia a fluorescenčnou farbenie. A konečne, prognostický význam CD151 a integrínu alfa3 bola hodnotená pomocou IHC v mikroskopických sústav tkanív z 76 pacientov HGC.

Výsledky

CD151 bol exprimovaný vo vyšších hladinách v HGC tkanivách a bunkách ako v HGC nontumor tkanivá a bunky HGEC. Down-regulácia CD151 podľa vshRNA-CD151 poruchou metastázy a invázia buniek HGC-27, ale nemá vplyv na proliferáciu buniek. CD151 tvoril komplex s integrín alfa3 do HGC bunkách. CD151-cDNA transfekcia zachránil metastatické potenciál a invazivitu HGC-27-vshCD151 buniek, ale nie tí HGC-27-vshintegrin alfa3 buniek in vitro
. Klinicky, CD151 nadmerná expresia významne koreluje s vysokou TNM štádiu, hĺbkou invázie a zapojenie pozitívne lymfatických uzlín ( p
menšie ako 0,05), a vysoké hladiny integrinových alfa3 boli spojené s veľkou veľkosť nádoru, vysoká TNM štádiu, hĺbka zapojenie invázie a lymfatických uzlín ( p
menšie ako 0,05). Dôležité je, že pooperačná 5-ročné celkové prežívanie pacientov s CD151 ^{nízky a /alebo integrínu α3 nízka bola vyššia ako u pacientov s CD151 vysoké a /alebo integrínu α3 vysoká.}

Záver

CD151 je pozitívne spojená s invazivitě HGC a CD151 alebo kombinácia CD151 a integrínu α3 je nový marker pre predikciu prognózu pacientov HGC a môžu byť potenciálnymi terapeutické ciele.

Citácia: Yang YM, Zhang ZW, Liu QM, Sun YF, Yu JR, Xu WX (2013) Nadmerná expresia CD151 predpovedá prognóza pacientov s resekciou rakoviny žalúdka. PLoS ONE 8 (3): e58990. doi: 10,1371 /journal.pone.0058990

Strih: Yves St-Pierre, INRS, Kanada

Prijaté: 7. októbra 2012; Prijaté: 08.02.2013; Uverejnené: 22.března 2013

Copyright: © 2013 Yang et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Toto dielo bola podporená akademika Workstation fondu Shaoxing Second ľudovej nemocnice. Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

Ľudský karcinóm žalúdka (HGC) je najčastejšou príčinou úmrtí na nádorové ochorenia [1]. Výskyt HGC bola odhadnutá na 934,000 prípadov ročne s 56% nových prípadov vyskytujú vo východnej Ázii, vrátane 41% v Číne a 11% v Japonsku [2]. Aj keď sa globálna výskyt GC v posledných rokoch znížila, jej miera úmrtnosti v Číne je najvyššia zo všetkých nádorov a predstavuje 25% úmrtnosti GC po celom svete [3]. Napriek nedávnej pokroky v chemoterapie a chirurgických techník, 5-ročné celkové prežívanie (OS) sadzba v Číne je nízka, 40%. Väčšina HGCs sú diagnostikované vo fáze III alebo IV, a miera lymfatických uzlín z GC je vysoká (50-75%) [4]. Patogenéza HGC je multifaktoriálne, vrátane genetickej predispozície a environmentálne faktory. Niektoré genetické zmeny sú spojené s predispozíciou k HGC, vrátane tých, ktoré zahŕňajú tumor supresorové gény, onkogény, molekuly bunkovej adhézie, rastové faktory, a genetická nestabilita [5]. Z tohto dôvodu dosiahnutia lepšieho porozumenia molekulárnych mechanizmov zapojených do HGC a identifikáciu cenné diagnostických markerov a nových liečebných postupov má veľký klinický význam.

Tetraspanins sú bunkové povrchové proteíny, ktoré sa klenú Membrána štyrikrát, a sa nachádzať v niekoľkých typoch buniek v mnohých organizmoch. Vykazujú početné vlastnosti určujúce pre ich fyziologický význam bunkovej adhézie, pohyblivosti, aktivácie a proliferácie, ako aj ich prínos k patologických stavov, ako sú metastázy a patologické angiogenézu [6], [7], [8]. CD151 je bunkový povrchový glykoproteín patriaci do tetraspanin superrodiny, ktorá bola prvýkrát preukázané, že podporuje metastáz v štúdii, v ktorej neznáma protilátka špecificky inhibovala tvorbu metastáz v humánnom epidermoidním karcinómu in vivo
[ 9
]. Protilátka uznaný CD151 a inhibuje migráciu buniek bez ovplyvnenia adhézie alebo proliferácie. Malé interferujúce RNA (siRNA) sprostredkovanej upregulace CD151 expresiu v primárnych melanocytov za následok stratu pohyblivosti, zatiaľ čo to malo len malý účinok na hladiny v rovnovážnom stave integrínov. Okrem toho, tieto zmeny mohli byť obrátené, keď CD151 bola znovu vyjadrila [10]. Nadmerná expresia CD151 bolo zistené, že aktivujú integrinové a receptora rastového faktora závislých signálne dráhy, čo malo za následok zvýšenie motility a invazívnosti nádorových buniek [11]. Tento proces bol tiež navrhol, aby prispeli k aktivácii dráh sprostredkovaných malé GTPázy, čo zvyšuje sa viažuci k Cdc42 a Rac, organizátormi bunkového cytoskeletu GTP. Adhézie závislé aktivácia Ras, EKR /MAPK1 /2 a proteínkinázy B (PKB) /Akt bolo preukázané, že je modulovaný CD151 [7], [12]. Široká škála funkcií CD151, a najmä jeho zapojenie do invazívnosti a metastázovaniu rakovinových buniek, naznačujú, že lepšie pochopenie jeho expresie a úloha vo HGC môže byť dôležité.

V tejto štúdii sme skúmala expresia CD151 v žalúdku človeka epiteliálnych buniek (HGEC), HGC bunkové línie, vzorky HGC a priľahlé nontumorous tkaniva. Ďalej sme skúmali účinok siRNA umlčanie CD151 na proliferáciu, invazívnosti a metastatického schopnosťou buniek HGC-27, a skúmal vzťah medzi CD151 a integrínu alfa3. Konečne, expresia CD151 a integrínu alfa3 bola skúmaná imunohistochemicky na mikroskopické sústavy tkanív skladajúci sa z 76 prípadov HGC a prognostické úloha CD151 a /alebo integrínu α3 do HGC bola skúmaná.

Materiály a metódy

bunkové línie

HGEC a HGC bunkové línie, vrátane HGC-27, AGS, MKN28 a MGC803, boli získané z American Type Culture Collection a udržiava sa v našom laboratóriu. Všetky bunkové línie boli udržiavané v Dulbeccova modifikovanom Eaglovho média (DMEM, Invitrogen) doplnenom 10% fetálnym hovädzím sérom (Hyclone) pri 37 ° C vo zvlhčenom inkubátore v atmosfére obsahujúcej 5% CO _2.

Pacienti a nadväzujúce

o dvadsať čerstvých vzorkách nádorového tkaniva oblastiach blízko okraja tumoru a prispôsobené non-nádorového tkaniva (viac ako 3 cm od nádoru) boli získané od slepo po sebe idúcich pacientov s HGC, ktorí podstúpili kuratívne resekcii medzi februárom 2009 a v novembri 2010 v Shaoxing druhej ľudovej nemocnici (Shaoxing, Čína). Ďalších 76 pacientov s karcinómom žalúdka, ktorí podstúpili R0 resekcia s predĺženou lymfadenektómia (D2) od septembra 2005 do septembra 2008 v Shaoxing druhej ľudovej nemocnici boli zaradení do tejto štúdie. Vyhodnotenie vyňatých vzoriek bolo vykonané v súlade s pokynmi japonskej žalúdočné rakovinové asociácie (1998). Každé štandardné resekcia zahŕňala odstránenie skupiny 1 a 2 lymfatických uzlín (rozmedzie 36-60, priemer 47,6). Klasifikácia etapa bola vykonaná podľa klasifikácie TNM pre HGC (UICC). Vzorky boli vybrané na základe dostupnosti vhodných formalinových fixované, parafínové zaliatych tkanív a kompletné patologickým a nadväzujúcich údajov od pacientov. Charakteristiky študovaných subjektov boli zhrnuté v tabuľke 1. Táto štúdia bola schválená Shaoxing Hospital Research etickou komisiou druhom ľudovej a písomný informovaný súhlas bol získaný od všetkých jedincov. Žiadny z pacientov dostávala chemoterapiu alebo rádioterapiu pred alebo po chirurgickom zákroku ako súčasť adjuvantnej programu. Zber dát nadväzujúce bol ukončený v septembri 2012. Medián follow-up bola 43,0 mesiacov (rozmedzie 6-78 mesiacov). Nadväzujúce postupy pozostávala z priebežnej anamnézy, fyzikálneho vyšetrenia, posúdenie nádorových markerov (CEA, CA-199), abdominálna ultrasonografia a každé 2-3 mesiace röntgen hrudníka alebo CT každých 6 mesiacov. Celkového prežívania (OS) bola definovaná ako interval medzi operáciou a smrťou alebo medzi chirurgie a posledné pozorovanie v prežívajúcich pacientov. Údaje boli cenzurované na poslednú sledovanie bývanie pacientov.

RNA extrakcia a reverznej transkripcie-polymerázovej reťazovej reakcie (RT-PCR)

Celková RNA bola extrahovaná za použitia tri činidlo (Sigma ) podľa protokolu výrobcu. RNA sa potom spracuje s DNaseI (Roche Diagnostics), čistí cez kolónu RNeasy (Qiagen) a elektroforeticky pre určenie integrity RNA pred použitím v 5'-RACE experimenty. Komplementárna DNA (cDNA) sa pripraví z 2 ug celkovej RNA za použitia náhodných hexamérov (Proligo) a Superscript III reverznej transkriptázy (Invitrogen). RT-PCR bola vykonávaná na paneli bunkových línií a nádorových vzoriek. Primery použité pre PCR boli nasledujúce: CD151, 5'-ACTTCATCCTGCTCCTCATCAT-3 'a 5'-TCCGTGTTCAGCTGCTGGTA-3'; integrín α3, 5'-CGAGAGGAAAGAGGAAGTAGGGGGT-3 'a 5'-ATGAAGAAGGAGTGAGGGGTGAGCA-3'; Glyceraldehyd 3-fosfát dehydrogenázy (GAPDH), 5'-GGCATCCTGGGCTACACTGA-3 'a 5'-GTGGTCGTTGAGGGCAATG-3'. Podmienky RT-PCR boli nasledovné: 10 min pri 94 ° C, denaturácia pri teplote 94 ° C počas 20 s, Annealing pri 59 ° C počas 30 sekúnd a predĺženie pri 72 ° C počas 60 sekúnd. Expresie CD151 a integrínu α3 vzhľadom k upratovacia génu GAPDH bola analyzovaná analýzou hustoty pomocou softvéru v5.0 Pásmo skenovania. Všetky experimenty boli vykonávané v triplikátech.

imuno-blottingom a imunofluorescenčný test

Celkový bunkový extrakt proteín (30 ug) sa oddelí na SDS-polyakrylamidovom gélu, prenesú na polyvinylidendifluoridovou membránu a inkubované s zodpovedajúce protilátky. Membrány boli vyvíjané s zvýšenou chemiluminiscenčná metóda (Pierce, Rockford, IL, USA). Myšou anti-humánne CD151 (11G5a, 1: 200, Serotec, UK) a anti-integrinové alfa3 monoklonálne protilátky (P1B5, 1: 300; Chemicon International, Temecula, CA) boli použité na detekciu expresie CD151 a integrínu alfa3, v danom poradí , GAPDH (1: 5,000, Chemicon, USA) bol použitý ako vnútorná kontrola. Všetky experimenty boli vykonávané v triplikátech.

bunky HGC-27 boli použité pre detekciu polohy CD151 a integrínu alfa3, ako bolo opísané skôr [13]. Myšou anti-humánne CD151 monoklonálna protilátka (11G5a, 1: 200, Serotec, UK) a myší anti-ľudská protilátka integrín α3 (P1B5, 1: 300; Chemicon International, Temecula, CA) boli použité. Rezy boli analyzované fluorescenčnej mikroskopie (Leica Microsystems Imaging Solutions).

transfekcia lentivirálním vektorov s malým Vlásenka RNA proti CD151 a integrín α3

pGMLV /Neo-zhrnieme CD151 vektor bol konštruovaný v súlade s pokynmi výrobcu (pGMLV, malé vlásočnicové RNA (zhrnieme) Ja Vector, Shanghai Genomeditch Co. Ltd). Tri zhrnieme CD151 lentivirové vektory (pGMLV-GFP-zhrnieme -CD151) boli vytvorené na umlčanie expresie CD151 v HGC-27 buniek (zhrnieme CD151-HGC-27). Tieto Zhrnieme cielenie sekvencie CD151 boli nasledovné:
, 5'-CATGTGGCACCGTTTGCCT-3 ';, 5'-TACCTGCTGTTTACCTACA-3 ';, 5-CATACAGGTGCTCAA TAAA-3 '. Zhrnieme zacielenia sekvencie pre integrínu alfa3 bolo nasledovné: 5'-CCTCTATATTGGGTACACGAT-3 '(Shanghai Genomeditech, Shanghai, Čína). Stabilne transfekované klony boli charakterizované pomocou RT-PCR a analyzované imunoblotováním pre úrovne expresie CD151 a integrínu alfa3 proteíny.

MTT testu, Cell migrácie a invázie Matrigelu testy

Bunky boli schovať do 96-jamkových doštičiek (2,000 per-200 ul na jamku) a inkubované po dobu 24, 48 a 72 hodín. Objem 20 ul roztoku MTT bolo pridané v uvedených časových bodoch a inkubované po dobu 4 hodín. Médium (200 ul DMEM s obsahom 10% fetálneho séra hovädzieho dobytka), bol potom nahradený 150 ul DMSO, doštičky boli trepanie po dobu 10 minút a absorbancia pri 490 nm bola meraná na stanovenie počtu životaschopných buniek v každej jamke. Všetky experimenty boli vykonané trikrát.

Migrácia buniek bola hodnotená pomocou testu na hojenie rany. Bunky boli pestované do 80-90% zhlukovania v 24-jamkových doštičkách. Rana bola vyrobená ťahaním plastové pipety na povrchu buniek. Zostávajúce bunky boli trikrát premyté na odstránenie zvyškov buniek a inkubované pri 37 ° C s médiom bez séra. V uvedených časoch, migráciu buniek na rany pred boli fotografované a porovnané. Boli vykonané tri oddelené experimenty

invázie buniek Testy boli vykonávané za použitia 24-jamkových transwells (veľkosť pórov 8 um, Millipore). Potiahnuté Matrigel (Falcon 354480, BD Biosciences). Celkom 1 x 10 ^{5 buniek sa potom suspenduje v 500 ul DMEM s obsahom 1% FBS a pridá sa do hornej komory, zatiaľ čo 750 ul DMEM obsahujúcim 10% FBS bol umiestnený v dolnej komore. Po 48 hodinách inkubácie, Matrigel a bunky, ktoré zostali v hornej komore boli odstránené bavlnených tampónov. Bunky na spodnom povrchu membrány boli fixované v 4% paraformaldehydu a farbené Giemsa. Bunky v 5 mikroskopických polí (zväčšenie, x 200) boli spočítané a fotografované. Všetky experimenty boli vykonávané v troch vyhotoveniach.}

In vivo testoch metastázy

metastáz testoch in vivo, MGC-803-Mock, MGC-803-vshRNACD151 a MGC-803-vshRNA CD151-cDNA- CD151 bunky boli transplantované do nahých myší (5 týždňov starých myší Balb /c-nu /nu, 5 na skupinu, 1 x 10 ^{6 buniek na každej myši) cez laterálnu chvostovú žily [14]. Po 7 týždňoch boli myši usmrtené. Ich pľúca boli odobraté a podrobené hematoxylínom a eosínu (H &E) farbenie. Celý výskum zahŕňajúci zvierat bola vykonaná v súlade s protokolmi schválená Shaoxing Second ľudovej zvieracie nemocnice komisie Care.}

Co-Imunoprecipitácia (Co-ip) testy

Bunky sa lyžovali lyzačním pufra RIPA doplnená 40 mM fluoridu sodného, ​​100 um na _{3VO 4 a úplné inhibítorom proteázy (Roche). Po odstránení nerozpustného materiálu centrifugáciou pri 12000 x g, sa prečistiť lyzáty boli inkubované s primárnou mAb vopred absorbovaný proteín A-Sepharose a G-guličiek (Pierce Biotechnology) cez noc pri 4 ° C. Zrazeniny boli premyté trikrát lyzačním pufra, varené vo 2 vyrovnávacia pamäť vzorky × SDS po dobu 5 minút a proteíny boli rozdelené SDS-PAGE na 10% géloch s gradientom. Následné imunoblotu boli sondovania s príslušnou protilátkou a detegované pomocou ECL.}

Výstavba Tkanivové a imunohistochémia

mikroskopických sústav tkanív boli vyrobené, ako je opísané skôr [15]. Stručne povedané, všetky vzorky od pacientov boli preskúmané HGC histologicky hematoxylínom &Co. eosínu a reprezentatívne oblasti boli vopred označené na parafínové bloky, od nekrotických a hemoragické materiálov. Duplikáty valcov 1-mm-priemer z dvoch rôznych miestach, nádorové stredu a najbližšie nenádorové rozpätie (označované ako intratumor a peritumor, v tomto poradí, celkovo štyri údery) boli zahrnuté v každom prípade, spolu s rôznymi ovládacími prvkami, pre zaistenie reprodukovateľnosti a homogénne farbenie preparátov (Shanghai biočipu Co. Ltd, Shanghai). Tak štyri rôzne mikroskopické sústavy tkanív bloky boli postavené, z ktorých každá obsahuje 140 valca. Sekcia 4 um hrubé boli umiestnené na sklíčka potiahnutá s 3-silán. Monoklonálna myšou anti-humánne CD151 (11G5a, 1: 200, Serotec, UK) a myší anti-ľudský integrín α3 (P1B5, 1: 300; Chemicon International, Temecula, CA) boli protilátky použité na detekciu expresie CD151 a integrínu alfa3 , Snímky boli zachytené pomocou v3 softvérom Leica QWin Plus. Intenzita pozitívneho farbenia bola meraná, ako bolo popísané. Intenzita CD151 a integrínu alfa3 bol klasifikovaný do dvoch úrovní expresie v závislosti na strednej oblasť pozitívneho farbenia ako hodnota cut-off nasledovne: CD151 ^{vysoký, > 50% z časti nádoru; a integrín α3 vysoká, na teplotu 25% z časti nádoru; CD151 nízka, < 50%, a integrínu α3 nízka, < 25% [15]}

Štatistická analýza

Štatistická analýza bola vykonaná pomocou softwaru SPSS 16.0 (. SPSS). Hodnoty sú vyjadrené ako stredná hodnota ± štandardná odchýlka. Pre imunohistochemických markerov, limitná pre definovanie podskupín bola hodnota mediánu intenzity. Χ ^{2-testu a t test boli použité pre porovnanie medzi skupinami. OS bola definovaná, ako bolo opísané skôr [15]. Prognostický význam bola hodnotená pomocou odhadov prežitie Kaplan-Meier a log-rank testy. Cox proporcionálny nebezpečenstvo regresný model bol použitý pre analýzu nezávislých prognostických faktorov. Všetky testy boli dvojchvostý a p Hotel < 0,05 bola považovaná za štatisticky významnú}

Výsledky

CD151 je nadmerne vystavený v HGC

CD151 prejavu bola analyzovaná. RT-PCR a chémiou v HGC nádoru a uzavreté nontumor tkanív. CD151 bol exprimovaný v nízkych hladinách v nontumor tkanivách v porovnaní s HGC tkanív. Ako je znázornené na Obr. 1A, B a C, relatívna expresia proteínu CD151 vo vzorkách HGC bola 2,95 ± 0,21 (rozmedzie 1,13 až 3,59) v porovnaní s 1,30 ± 0,09 (rozsah, 1.00-1.81) v nontumor vzorkách, a rozdiel bol štatisticky významný ( p Hotel < 0,01). Okrem toho, CD151 expresné hladiny boli v HGEC výrazne nižšie ako v HGC-27, AGS, MKN28 a MGC803 buniek (p menšie ako 0,05). Žiadne rozdiely v úrovni expresie CD151 boli medzi HGC buniek (obr. 1D, E a F) detekovaný. Immunohistochemstry (IHC) analýzy potvrdili, že proteín CD151 bol vyjadrený na vyšších úrovniach v HGC tkanivách než v spárovaných nontumor tkanivách (obr. 1G).

CD151 podporoval inváziu a metastázy z HGC Bunky in vitro a in vivo

Ak chcete skúmať úlohu CD151 v HGC bunkách, sme upravili expresiu CD151 v bunkách HGC-27 o interferencie RNA a cDNA-CD151 transfekcia (obr. 2A). Výsledky testu hojenie rán ukázali oneskorenie v rýchlosti uzatvorenia rany buniek zhrnieme CD151-HGC-27 na 48 hodín v porovnaní s HGC-27-Mock buniek, ktorý sa izoluje cDNA-CD151 transfekciu (viď obr. 2B). Down-regulácia CD151 nemal žiadny významný účinok na proliferáciu buniek ( p Hotel &0,05, obr 2C.). Avšak, zníženie expresie z CD151 výrazu sťažovali invazivitu HGC-27 buniek (obr. 2D, E).

Ak chcete ďalej skúmať úlohu CD151 v nádorových metastáz in vivo, MGC-803-Mock, MGC- 803-vshRNACD151 a MGC-803-vshRNACD151-cDNA-CD151 boli bunky transplantované do nahých myší cez laterálnu chvostovú žily. Histologický rozbor pľúcach myší, bolo potvrdené, že down-regulácia CD151 potlačiť tvorbu pľúcnych metastáz. Počet a veľkosť pľúcnych metastáz uzliny boli v skupine MGC-803-vshRNACD151 v porovnaní s MGC-803-Mock a MGC-803-vshRNACD151-cDNA-CD151 buniek (obr. 2 F, G) významne znížil. Dohromady, naše výsledky naznačujú, že CD151 je pozitívny regulátor žalúdka nádorových metastáz.

CD151 tvorí komplex s integrínu alfa3 a Umlčanie integrínu alfa3 zhoršuje HGC invázie buniek indukovaných nadmernou expresiou CD151

zapojenie tetraspanins v integrínu sprostredkované regulácii nádorových metastáz bola preukázaná, a α3β1 integrín bolo preukázané, že podporuje inváziu GC a metastáz [16]. Preto sme skúmali vzťah medzi integrín alfa3 a CD151 v HGC bunkách. Ako je znázornené na Obr. 3A, integrínu α3 bol exprimovaný vo vyšších hladinách v HGC bunkách než v bunkách HGEC. Koimunoprecipitačními experimenty ukázali, že CD151 tvoril komplex s integrín alfa3 do HGC-27 buniek (obr. 3B, C). Okrem toho, CD151 a integrín α3 ko-lokalizované na plazmatické membráne HGC-27 buniek, ako je ukázané pomocou imunofluorescencie (obr. 3D).

Ak chcete ďalej skúmať zapojenie CD151 v integrínu funkcii alfa3, bunky boli podrobené interferencie RNA alebo cDNA transfekcia a analyzované pomocou transwell experimenty po výmene matrice gélu s laminínu-332 [17]. Výsledky ukázali, že umlčanie integrínov alfa3 výrazne inhibuje inváziu buniek HGC-27 a CD151 cDNA transfekcia zachránil invazívnej schopnosť HGC-27-vshRNACD151, ale nie to HGC-27-vshRNA integrínu alfa3 bunky. Okrem toho, integrínu alfa3 protilátky inhibujú inváziu do HGC-27-vshRNACD151-cDNA-CD151 buniek (obr. 3E, F). Tieto výsledky svedčia pre koordinovanú funkciu alfa3 komplexu CD151-integrín, a je uvedené, že vysoké hladiny CD151 a integrínu alfa3 sú spojené so zvýšeným metastatickým potenciálom GC buniek.

Expresia CD151 alebo integrín alfa3 jasne súvisí s malígnym fenotypu HGC imunohistochemicky

expresie CD151 a integrínu α3 proteín bol skúmaný u 76 pacientov primárnych HGC použitie tkanivových mikročipov (TMA). CD151 proteín lokalizovaný imunoreaktivita na bunkovej membrány (obr. 4A). V nádorových tkanivách, CD151 expresie ukázala značnú heterogénnosť v jednotlivých vzorkách (obr. 4A1, b1, c1 a d1). CD151 ^{s vysokým predstavoval 50% (38/76) z celého súboru. Ako je uvedené v tabuľke 1, CD151 vysoko významne koreluje s veľkosťou nádoru ( p = 0,021
), hĺbka invázie ( p = 0,004
), zapojenie lymfatických uzlín ( p = 0,028
) a fáza s vysokým tumor ( p = 0,002
). Avšak, iné klinické vlastnosti, vrátane veku, pohlavia a diferenciácie nádoru, neboli významne súvisí s expresiou CD151.}

Membrány nádorových buniek farbených pozitívne na integrínu alfa3 (obr. 4a2, b2, c2, a d2). Vo všetkých analyzovaných tkanivách, boli zistené vysoké hladiny expresie integrínu alfa3 v 27 vzorkách HGC tkanív (35,52%). V súlade s výsledkami predchádzajúcich štúdií [16], [18], pacienti s vysokým integrínu alfa3 prejavu boli viac pravdepodobné, že vykazujú agresívne rysy. Integrín α3 ^{vysokej pacienti vykazovali väčší nádory ( p =
3.46-4), väčšia hĺbka invázie ( p = 0,001
), vyšší stupeň tumor ( p =
0,005), a väčšie zapojenie lymfatických uzlín ( p =
0,040) ako u pacientov s nízkym integrín alfa3 expresie (tabuľka 1).}

nadmernú expresiu CD151 a /alebo alfa3 integrínu sú nezávislé faktory predpovedanie prognózu HGC Pacienti

až do posledného sledovanie sadzby OS 3- a 5-ročnej v rámci celej populácie bol 53,0 a 40,78%, 5-ročnej OS v CD151 ^{nízka skupina bola významne vyššia ako v CD151 vysokej skupiny (68,42% vs.
23,68%, v uvedenom poradí, p
= 0,007, obr. 4B), a pooperačné 5-ročnej OS pacientov HGC bola vyššia v integrínu alfa3 s nízkym než v integrínu alfa3 s vysokým skupina (66,67% vs.
13,51%, p
= 6,67 E-6). Vyhodnotenie kombinovaného účinku CD151 a integrínu alfa3 na prognóze HGC ukázali, že 5-ročnej OS CD151 vysoká /integrínu α3 vysoké pacientov (skupina III, n = 23) bola 17,40%, čo bolo výrazne nižšie ako u CD151 low /integrínu α3 nízke pacientov (77,78% kategórie i, n = 27), a to buď nízke pacientov (pacienti s nízkom CD151 alebo samotnej nízkou integrín alfa3) (23,08%, skupiny II , n = 26, obr. 4C a D).}

Jednorozmerná analýza ukázala, že veľkosť nádoru, hĺbku invázie, postihnutím lymfatických uzlín, vysoký stupeň tumoru, vysoká CD151 expresiu, vysoká úroveň integrínu alfa3 a súčasnej expresie z CD151 a integrín alfa3 boli prediktory pre OS. Ostatné vlastnosti, vrátane veku, pohlavia a diferenciáciu nemal prognostický význam pre OS (tabuľka 2). S viac premennými Cox pomerného rizika modelu ukázala, že hĺbka invázie bol nezávislý prognostickým indikátorom pre OS (tabuľka. 2).

Diskusia

Výsledky tejto štúdie ukázali, že CD151 bola vyjadrená na vyšších úrovniach v GC buniek a nádorových tkanivách ako v HGEC bunkách a nontumor tkanív, čo je v súlade s predchádzajúcimi správami o CD151 expresiu v rôznych nádorov, vrátane intrahepatálna cholangiokarcinom, HCC, prsníka, pľúc, hrubého čreva a prostaty [15], [19] , [20], [21]. Okrem toho, naša štúdia ukázala, že CD151 tvorí funkčný komplex s integrín alfa3, a downregulaci CD151 alebo integrínu α3 expresie výrazne inhibuje inváziu a metastázovaniu HGC buniek in vitro. Klinicky Naše výsledky ukazujú, že vysoká hladina expresie CD151 alebo druhého nadmernú expresiu CD151 a integrínu alfa3 môže mať nepriaznivý prognostické dôsledky pre pacientov s GC.

Počiatočné dôkaz, že CD151 podporuje metastáza pochádza z štúdiu, ktorá dokazuje, že protilátka s neznámou špecifickosťou inhibuje tvorbu metastáz ľudský epidermoidný karcinóm línie in vivo
. Protilátka uznáva CD151 a inhibujú migráciu buniek bez ovplyvnenia adhézie alebo proliferácie [22]. Nadmerná expresia CD151 bola zistená u mnohých typov nádorov, a zvýšená expresia CD151 bola spojená so zlou prognózou u rakoviny prsníka, pankreasu a pľúc nemalých buniek, rovnako ako HCC. Okrem toho, CD151 bolo preukázané, že je lepšie predpovedať prognózy u pacientov s karcinómom prostaty, ako histologické triedenie [23]. V tejto štúdii, dva riadky dôkazy ukázali, že nadmerná expresia CD151 je klinicky významný u HGC. Po prvé, zvýšená expresia CD151 bola častejšie u pacientov HGC so zlou prognózou. Po druhé, zvýšená expresia CD151 zvyšuje inváziu a metastázovaniu HGC buniek. Okrem toho, klinické údaje, bolo zistené, že zvýšená expresia CD151 prekonal ďalšie bežne používané klinické parametre, ako je zvýšená veľkosť nádoru a zlé rozlíšenie pre predikciu HGC prognózu. Dohromady tieto výsledky ukazujú, že CD151 hrá dôležitú úlohu v progresii HGC. V tejto štúdii sme sa ukázať, že interaguje s CD151 integrínu alfa3 do HGC bunkách. Modulácia hladiny expresie integrínu alfa3 do HGC-27-vshCD151-cDNA-CD151 buniek odhalilo tvorbu funkčného CD151-integrín alfa3 komplexu, a ukázal, že ko-nadmerná expresia CD151 a integrínu alfa3 bolo spojené so zvýšeným metastatickým potenciálom HGC buniek , S ohľadom na zavedenú úlohu integrínu alfa3 v HGC [16], je rozumné predpokladať, že nadmerná expresia CD151 môžu podporovať metastáz /inváziu do GC.

Vzhľadom na ich hydrofóbna charakter, tetraspanins stýkať so sebou a s ostatnými membránou proteíny [24]. V skutočnosti je dobre známe, že poskytujú tetraspanins signalizačné platformu v plazmatickej membráne prostredníctvom tvorby tetraspanin obohateného mikrodomén (mach) [6], [7]. K dnešnému dňu, rôzne druhy membránových proteínov, vrátane receptorov pre rastový faktor, integríny, imunoglobulínovej domény a EWI-F (podčeľaď Ig proteínov), boli nájdené v mech [25]. Okrem toho, že funkcie týchto membránových proteínov boli opísané, ktoré majú byť tesne spojené s mech. Napríklad bolo zistené, že rôzne kombinácie, ktoré tetraspanins mô ovplyvniť funkciu receptorov rastových faktorov a integrínu. Dôležitejšie je, že hladina expresie jednotlivých tetraspanins v mech má tiež významný vplyv na asociované proteíny [26], [27]. V nedávnych štúdiách, knock-down z CD151 bolo preukázané, že narušiť tvorbu mô a CD151 delécie inhibuje funkciu niekoľkých membránových proteínov, čo naznačuje, že CD151 zohráva rozhodujúcu úlohu pri tvorbe a funkcii TEM [7], [26]. Navyše blokovanie CD151 výrazne narušila invazívnosti a metastatického potenciálu nádorových buniek, a zameriavajú sa na CD151 proteín alebo mach sa stal sľubnú terapeutickú stratégiu [23]. V tejto štúdii expresie CD151 Bolo preukázané, že nezávislý prediktor pre OS. Avšak kombinovaná expresia CD151 a integrínu α3 bol spoľahlivejší prediktorom OS ako CD151 alebo integrínu alfa3 výraz sám, čo podporuje predstavu, že ako CD151 a integrínu α3 hrajú dôležitú úlohu v HGC. Z tohto dôvodu, naše výsledky sú významné a naznačujú, že CD151 alebo CD151-integrín α3 komplex môže byť dôležitým cieľom v liečbe pacientov s GC.

Na záver, CD151 nadmerná expresia je prediktorom zlého výsledku u pacientov s HGC a CD151 alebo CD151-integrín α3 komplex môže byť potenciálnym cieľom pre liečbu HGC.

• Ploche ONE: PKG II inhibuje EGF /EGFR vyvolaná migrácia na žalúdočné rakovinu Cells
• Ploche ONE: Renovácia Mir-1228 * Expression Potláča epitelu mezenchymálnych prechod v žalúdočnej Cancer