Ploche ONE: Regulačné B Cell funkcia je potlačená fajčenie a obezita v H. pylori-infikovaných pacientov a koreluje so zvýšeným rizikom rakoviny žalúdka

abstraktné

Helicobacter pylori
infekcia sa vyskytuje vo viac ako polovicu svetovej populácie a je hlavnou príčinou rakoviny žalúdka. Rad životného štýlu a nutričné ​​faktory, ako je fajčenie a obezita, zistilo sa, že zvýšiť riziko vzniku rakoviny. V tejto štúdii sme sa snažili určiť imunologických aspektov počas H
. pylori
infekcie a vývoj rakoviny žalúdka. Zistili sme, že B-bunky z H
. pylori
-infected pacienti prezentované zmeneným zložením a funkcie v porovnaní s neinfikovanými pacientmi. IL-10-exprimujúce CD24 ^{+ CD38 + B bunky boli up-regulované v H
. pylori
-infected pacienti, obsahoval silný regulačný aktivitu pri inhibícii T bunkovej sekrécie prozápalový cytokínov, a reagoval priamo na H
. pylori
antigén stimulácie. Je zaujímavé, že v H
. pylori-
infikovaných fajčiarov a obéznych jedincov je počet IL-10 + B bunky a CD24 + CD38 + B bunky boli znížené v porovnaní s H
. pylori
-infected asymptomatickou. Regulačné funkcie sprostredkované CD24 + CD38 + B bunky boli tiež narušená. Okrem toho pozitívnych pacientov s rakovinou žalúdka znížila IL-10 na produkciu B buniek frekvencie po H
. pylori
-stimulation. Dohromady tieto údaje naznačujú, že u H
. pylori
-infection, CD24 + CD38 + B bunka je stimulovaná a hrá úlohu pri potláčaní pre-zápalové reakcie, napríklad prostredníctvom IL-10, funkcie, ktorá nebola pozorovaná u fajčenia a obéznych pacientov}

Citácia :. Li G, H Wulan, Song Z, Paik PA, Tsao ML, Goodman GM, et al. (2015) Regulačné B Cell funkcia je potlačená fajčenie a obezita H
. pylori
-Infected Predmety a koreluje so zvýšeným rizikom rakoviny žalúdka. PLoS ONE 10 (7): e0134591. doi: 10,1371 /journal.pone.0134591

Editor: Masaru Katoh, National Cancer Center, JAPAN

Prijaté: 3. februára 2015; Prijaté: 13. júla 2015; Uverejnené: 30. júla 2015

Copyright: © 2015 Li et al. Toto je článok o otvorenej distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Data Dostupnosť: Všetky relevantné údaje sú v novinách

financovania: .. autori nemajú žiadnu podporu ani finančné prostriedky hlásiť

Konflikt záujmov :. autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

Helicobacter pylori (H
. pylori)
je druh gramnegatívnych patogénnych baktérií vo viac ako polovicu svetovej populácie a prednostne inhibuje hornej časti tráviaceho ústrojenstva, vrátane žalúdka a dvanástnika epitelu dýchacích [1,2]. Hoci drvivá väčšina (viac ako 80%) infekcií je asymptomatická, bude 10-20% osôb infikovaných vírusom rozvíjať vredovej chorobe, zatiaľ čo 1-2% získa rakovina žalúdka [3]. Presný mechanizmus vzniku rakoviny v dôsledku H
. pylori
infekcie nie je dobre definovaná, ale chronický zápal neošetrené v hornej časti gastrointestinálneho traktu, sa predpokladá, že prispieva k trvalému poškodeniu žalúdka epitelu [4,5]. Konkrétne, zápal súvisiaci s signálnych molekúl, ako je napríklad faktor nekrotizujúci nádory alfa (TNF-a), bolo zistené, že k podpore žalúdočné tumorigenezi a je up-regulovaná v H
. pylori
infekcie [6]. Ďalšie pre-zápalové cytokíny vylučované T bunkami, vrátane IL-2, IL-17 a interferón gama (IFN-g), sú up-regulované v H
. pylori
infekcie a sú spojené so zvýšeným rizikom vzniku nádorov žalúdka [7-10]. Rad ďalších faktorov, ako je kontinuálna expozícia fajčenie tabaku a obezity, sú pozitívne koreluje so zvýšeným rizikom rakoviny žalúdka, aj keď základný mechanizmus nie je jasné, [3,11].

V poslednej dobe sa role tolerance- indukciu B buniek bola charakterizovaná v rade infekčných chorôb a autoimunitných ochorení [12]. U myší, CD1d ^{hiCD5 bolo zistené + B buniek, ktoré uľahčia tolerogenní prostredie v tkanivách a majú úlohu v prevencii autoimunitného indukcii [13]. U ľudí, CD19 + CD24 hiCD38 hi B bunky majú podobné tolerancie vyvolávajúce úlohu vo zdravé, rovnako ako HBV infikovaných jedincov [14]; nástup autoimunitného ochorenia súvisí so stratou regulačné funkcií u tejto podskupiny B buniek [15]. IL-10 je pleiotropný imunoregulačnou cytokín, ktorý je schopný inhibovať rad prozápalových cytokínov, vrátane IL-2, IL-17, IFN-g a TNF-a, a je preukázané, že účinne potláča schopnosť prezentujúca antigén z bunky prezentujúce antigén [16]. Stredná pre všetky tolerancie vyvolávajúce bunkových podskupín B, produkcia IL-10 je rozhodujúca pre reguláciu B buniek sprostredkovanej potlačenie T bunkami sprostredkovanej zápalom [12,17]. Úloha bunkami sprostredkované reguláciu B v H
. pylori
infekcie a následné vyvolanie rakoviny žalúdka, však nebola doteraz študovaná.}

V tejto štúdii sme analyzovali B bunkového zloženia a prejavu cytokínov profil H
, pylori
-infected predmety. Zvýšené percenta CD24 ^{+ CD38 + B buniek a zníženie percentuálneho podielu naivných B buniek a odpočinku pamäťové B lymfocyty boli nájdené v H
. pylori
i-infikovaných subjektov. CD24 + CD38 + B lymfocytov v H
. pylori-infikovaných pacientov sa
zvýšené percento produkcie IL-10, a potlačil expresiu pre-zápalový cytokín, keď spoločne kultivované s autológnym T bunkami. H
. pylori s
timulated CD24 + CD38 + B lymfocytov od H
. pylori-
infikovaných pacientov silne vylučované IL-10. Je zaujímavé, že H
. pylori infikovaných fajčenia
predmety a obézni subects mal zníženej hladiny CD24 + CD38 + B lymfocytov. Okrem toho, CD24 + CD38 + regulačné B buniek v fajčenia a obéznych jedincov bolo zistené, že vykazujú stratu supresívne funkcie, ak spoločne kultivované s autológnym T bunkami a stimulovanej zníženej hladiny IL-10 po priamej H
. pylori
stimulácie. Okrem toho, v fajčenie a obéznych pacientov, ktorí neskôr vyvinutých karcinómu žalúdka, frekvencia IL-10-secernujúcich B bunky boli ďalej znížené, v porovnaní so subjektmi, ktoré sa nevyvinula rakovina žalúdka. Dohromady tieto dáta ukázali, že CD24 + CD38 + B bunky boli up-regulované v H
. pylori
-infected a mal funkčne potlačil produkciu zápalových cytokínov T buniek. CD24 + CD38 + B bunky U fajčiarov a obéznych jedincov, však, boli refraktérne na H
. pylori
-stimulation, produkoval menej IL-10, a postrádal supresívnu kapacitu.}

Materiály a metódy

Študijné predmety

Primárne vzorky periférnej krvi boli získané od 55 H
. pylori
-infected pacienti vred prosté, z ktorých 15 sú primárnymi konzumentmi tabakového dymu a 15 sú triedy I obézni (30 kg /m ^{2 < BMI < 35 kg /m 2 ) subjekty, rovnako ako 15 zdravý H
. pylori
-uninfected vred bez jedinci. Jedinci s chronickou expozíciou pasívnemu fajčeniu boli zo štúdie vylúčení. Neboli nájdené žiadne významné rozdiely týkajúce sa veku, pohlavia a predchádzajúce histórie nákazy medzi študijných skupín. Všetci pacienti boli sledovaní po dobu 5 rokov pre stav vývoja rakoviny. Všetky predmety boli nepríbuzných jedincov z provincie Che-nan a okolitom regióne. Pacienti boli prijatí medzi Jan 2008 a decembra 2013 z 155. Centrálne nemocnice PLA v Číne. Kontroly boli rakovinou bez jedincov náhodne vybratých z komunitného rakovinu skríningového programu pre včasné odhalenie rakoviny vykonávané v rovnakých oblastiach počas rovnakého obdobia pacienti boli prijatí. Miera odpovedí u oboch kontrol a prípadov bolo 95%. Výberové kritériá pre zdravých kontrol zahrnuté rakovinou bez jednotlivcov a frekvenčné zladenie na prípady, podľa pohlavia a veku (± 5 rokov). Na náboru, písomný informovaný súhlas bol získaný od každého subjektu a osobných údajov, ako je pohlavie, vek, hmotnosť, výška a fajčenie tabaku boli zozbierané prostredníctvom dotazníka. Nie je vzorky u všetkých jedincov, "boli použité vo všetkých pokusoch v dôsledku neúplnej spolupráci pacienta a nedostatočné buniek u niektorých pacientov. Táto štúdia bola schválená Institutional Review Board of 155. Centrálne nemocnice PLA.}

Príprava vzoriek

mononukleárnych bunky periférnej krvi (PBMC) boli izolované z periférnej krvi vzoriek sa štandardným postupom Ficoll-Hypaque a zmrazí ihneď pri -150 ° C až do doby použitia, alebo sa používajú v experimentoch okamžite, ak uvedené. Pravidelné kultivačné médium RPMI-1640 doplnenom 10% fetálnom hovädzom sérom, 100 U penicilínu 5 ml /0,1 mg /ml streptomycínu, 2 mM a 5 ml L-glutamínu. Bunky boli kultivované v 5% CO _{2 pri teplote 37 ° C po uvedenú dobu.}

izolácie Cell

T a B bunky boli izolované za použitia ľudských T-buniek alebo B-buniek negatívny Voľba Kit (StemCell, Vancouver, Kanada) podľa protokolov poskytnutých výrobcom. Že čistota bunkových izoláciou T a B boli väčšie ako 94% pomocou prietokovej cytometrie. Pre vyčerpanie CD24 ^{+ CD38 + B bunky v niektorých pokusoch, čistené B bunky boli zafarbené PE CD24 protilátkou proti ľudskému a APC anti-ľudský CD38 po dobu 30 minút. Bunky potom boli zaslané žiť triedenie buniek a CD24 + CD38 + bunky boli vyčerpané. V nastavení celého B buniek, celkový B bunky boli zaslané do živých buniek, bez toho aby triedenie protilátok}

Prietoková cytometria

Boli použité nasledujúce anti-ľudské monoklonálne protilátky :. IL-10, TNF-a a (eBioscience, San Diego, CA, USA); CD3, CD4, CD19, CD20, CD21, CD24, CD27, CD38 (BioLegend, San Diego, CA, USA); IFN-g (BD Biosciences, San Jose, CA, USA); CD8 (Invitrogen, Grand Island, NY, USA). Izolovaný ľudský IgG (BioLegend, San Diego, CA, USA) bol použitý na blokovanie Fc receptory pri farbení populácií B-buniek, ktoré obsahujú. U niektorých experimentoch forbol-12-myristát-13-acetátu (PMA, Sigma) ionomycinu (Sigma, Mníchov, Nemecko) alebo teplom usmrtených H
. pylori
(Sigma, Mníchov, Nemecko) boli použité pre stimuláciu buniek. GolgiStop a GolgiPlug bolo pridané 6 h pred bunkovým úrody, na intracelulárne farbenie IL-2, IL-17, IFN-g, TNF-a a IL-10. FlowJo bol použitý pre analýzu prietokovou cytometriou.

Luminex test

IL-2, IL-17, IFN-g, TNF-a a IL-10 z T-buniek a B-buniek bola kvantitatívne meria multiplexové Luminex testom nasledujúcich protokolov poskytnutých výrobcom s úpravami (EMD Millipore, Etobicoke, Kanada). Celkom 2x10 ^{5 T buniek a /alebo B-buniek bolo vysiate do každej jamky 96-jamkové doštičky (Corning, Tewksbury, MA, USA). Pre stimuláciu B lymfocytov, teplom usmrtených H
. pylori
boli pridané do B buniek, ktoré boli umiestnené v dolnej časti 96-jamkové doštičky transwell (Corning, Tewksbury, MA). Pre bunkovú stimuláciu T, spodná časť transwell dosky bola vopred inkubovaná s anti-ľudskou CD3 (klon OKT3) cez noc a premyje sa, po ktorej sa čistia T bunky boli prenesené do dosky. korálky ľudských cytokínov zachytávanie protilátok boli pridané do hornej komory 96-jamkové doštičky transwell. O dvanásť hodín neskôr, perličky boli zozbierané, premyté a čítať podľa protokolu výrobcu.}

Štatistická analýza

D'Agostino a Pearson Test študenti normalita bol použitý na preverenie, či boli dáta normálne distribuovaný. Jednosmerná analýza rozptylu (ANOVA) bol použitý pre porovnanie medzi viacerými skupinami s následnou Dunn testom. t testu študent bol použitý pre porovnanie medzi dvoma skupinami. Ak dátovej sady výrazne odchýlil od normálneho rozdelenia, boli použité Neparametrické testy. Všetky štatistické analýzy boli vykonané s použitím Prism (GraphPad Software). P menšia ako 0,05 bola považovaná za významnú. Výsledky boli uvedené ako priemer ± SEM.

Výsledky

H
. pylori
-infected predmety zmenil cirkulujúcich B-lymfocytov zloženie

Ak chcete analyzovať prípadné zmeny v úlohe odpovede B buniek v H
. pylori
infekcie a ako to môže mať vplyv fajčenia a obezita, 15 zdravého H
. pylori
-uninfected ( H
. pylori
-uninfected) dobrovoľníci, 20 H
. pylori
-infected bezpríznakové nefajčiarske neobéznymi (bezpríznakové) predmety, 15 H
. pylori
-infected fajčenie non-obéznych (fajčenie) predmetov a 15 H
. pylori
-infected nefajčiarske obézna (obézny) subjektov boli prijatí pre túto štúdiu. Demografické a klinické údaje sú zhrnuté v Tabuľke 1.

cirkulujúcich B buniek v periférnej krvi zdravých jedincov sú zložené z hlavne IgD ^{+ CD27 - naivný B bunky a CD21 + CD27 + pokojovej pamäte B buniek, zatiaľ čo u chronických infekcií, je často k poklesu naivných B buniek a odpočinku pamäťových B buniek, a zvýšenie CD21 lo aktivované B bunky a CD24 + CD38 + B lymfocyty [15,18]. Najprv sme skúmali zloženie cirkulujúcich B-buniek v H
. pylori
-infected predmety. Mononukleárny bunky periférnej krvi (PBMC) boli zafarbené na expresiu povrchových markerov priamo ex vivo
(obrázok 1A). Zistili sme, že v porovnaní s H
. pylori
-uninfected zdravých jedincov všetko H
. pylori
-infected skupiny obsahovali nižší podiel z IgD + CD27 - naivné B bunky (P < 0,001 pre všetkých, Fig 1B a 1C). Percentá CD21 + CD27 + pokojovej pamäťové B bunky boli v H
znížená. pylori
-infected fajčiarov a obéznych pacientov v porovnaní so zdravými jedincami (P 0,001 pre oba), a percento CD21 + CD27 + B bunky u obéznych jedincov sa znížil v porovnaní s H
. pylori
-infected asymptomatickou (P < 0,01). Zaujímavé je, že percentuálne zastúpenie CD24 + CD38 + B bunky boli menené medzi rôznymi skupinami H
. pylori
-infected predmety. H
. pylori
-infected asymptomatickou obsahoval oveľa vyššie percento CD24 + CD38 + B buniek ako zdravých kontrol (P 0,001). Percento CD24 + CD38 + B buniek bola znížená v fajčiarov v porovnaní sa u asymptomatických jedincov (P 0,05), ale stále vyššia ako u zdravých jedincov (p 0,001). U obéznych jedincov, percento CD24 + CD38 + B bunky sa významne nelíši od zdravých jedincov, ale bol znížený z toho u asymptomatických jedincov (P 0,001)}

H
. pylori
-infected predmety zmenili B buniek cytokínov profil expresie

V minulosti sa zistilo, že B bunky k zosilneniu alebo potlačenie imunitnej odozvy cez výrobu radu cytokínov s rôznymi funkciami, vrátane pro- zápalové cytokíny, ako je IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-g a TNF-a, ako aj IL-10 a transformujúci rastový faktor beta (TGF-b) ako regulačné cytokíny [19] , Tu sme skúmali expresiu cytokínov B buniek v študijných predmetov. Zistili sme, že ex vivo
expresie IL-2, IFN-g a TNF-a B bunkami boli v H
zvýšil. pylori
-infected fajčiarov a obéznych subjektov než u zdravých jedincov (obr 2A). Žiadne významné rozdiely boli zistené u TGF-b prejavu.

CD24 ^{+ CD38 + B bunky majú regulačné funkcie v iných štúdiách a mal zaujímavé úrovne expresie v rôznych H
. pylori
-infected skupiny (obr 1C). Skúmali sme expresiu intracelulárnej cytokínov CD24 + CD38 + B buniek. Ako je znázornené na obr 2B, expresia cytokinové CD24 + CD38 + B bunky boli odlišné od non-CD24 + CD38 + B bunky (celkom B bunky mínus CD24 + CD38 + B bunky), v tom, že nemali produkciu vysokých hladín IFN-g a TNF-a po stimulácii PMA /ionomycin, ale vyjadril veľmi vysokej hladiny IL-10, a to ako v nestimulovaných a stimulovaných podmienok. Porovnávali sme produkciu IL-10 z rôznych B buniek podskupín a bolo zistené, že CD24 + CD38 + B lymfocytov vo všetkých študijných skupinách vylučovaný oveľa vyššia, IL-10, ako non-CD24 + CD38 + B buniek, a to ako za nestimulovaných podmienok, ako aj PMA /ionomycinem stimulovaných podmienok (obr 2c). tak považujeme CD24 + CD38 + frakcie ako hlavný IL-10 na produkciu B buniek podmnožiny. V rámci H
. pylori
-infected skupina, s asymptomatickou mal vyšší podiel IL-10-exprimujúce bunky v CD24 + CD38 + B buniek, ako zdravých jedincov, zatiaľ čo H
. pylori
-infected obéznych pacientov mali nižšie IL-10-exprimujúce bunky CD24 + CD38 + B buniek, ako u asymptomatických pacientov (obr 2c). My potom násobí frekvenciu IL-10 + buniek v CD24 + CD38 + B bunky s percentom CD24 + CD38 + buniek v celkovom B bunky k získaniu "počet" IL-10-exprimujúce bunky v B-buniek, a zistili, že obaja H
. pylori
-infected asymptomatickou a fajčiarske predmety mali vyššie hladiny IL-10 + B lymfocytov ako zdravých jedincov (P < 0,001 a P < 0,01, v tomto poradí). V rámci H
. pylori
-infected skupina, fajčenie a obezita významne znížila frekvencia IL-10 + B buniek (P 0,001 pre oboch). Z asymptomatickou}

Dohromady tieto údaje preukázali, že regulačné cytokínov IL-10 je produkovaný hlavne CD24 ^{+ CD38 + B buniek a je zvýšená v H
. pylori
-infected asymptomatickou. Fajčenie a obezita znížila IL-10 expresie v CD24 + CD38 + B bunky.}

H
. pylori
-infected asymptomatickou mal viac tolerogenní aktivitu sprostredkovanú CD24 + CD38 + B bunky ako fajčenie a obéznych jedincov

Regulačná B bunky boli známe, že inhibujú reakcie T lymfocytov u chronických infekcií, ako je infekcia vírusom hepatitídy B a infekcie vírusom ľudskej imunodeficiencie [14,20], a to stanovením tolerogenní prostredia prostredníctvom IL-10 pred vyvolaním zápalu [15,21]. Skúmali sme, či sa IL-10 produkujúce CD24 ^{+ CD38 + B bunky mali podobné regulačné účinky na H
. pylori
-infection. CD4 + T bunky ko-kultivované autológne CD24 + CD38 + - ochudobneného B-bunky sa významne zvýšenej produkcii IL-2, IL-17, IFN-g a TNF-a, ako CD4 + T bunky cocultured s celými B lymfocytov, vo H
. pylori
-infected asymptomatických pacientov (obr 3A). U fajčiarov a obéznych jedincov, nebola pozorovaná takýto účinok. Rovnako tak CD8 + T bunky z H
. pylori
-infected asymptomatickou spoločne kultivované s autológnej CD24 + CD38 + - vyčerpanej B lymfocytov významne zvýšená IFN-g a TNF-a sekréciu než tie ko-kultivujú s celými B-buniek ( obr 3B). Opäť platí, že takýto účinok nebol pozorovaný u fajčiarov a obéznych jedincov. Potlačenie expresie T buniek cytokínov sa zdá byť sprostredkovaný CD24 + CD38 + B lymfocytov, pretože najnižšie produkcia cytokínov bola pozorovaná u buniek CD4 + a CD8 + T bunky ko-kultivujú s CD24 + CD38 + B samotnej bunky. Dohromady tieto údaje preukázali, že CD24 + CD38 + B bunky v H
. pylori
-infected predmety potlačená CD4 + T-buniek produkciu + a CD8 prozápalový cytokínov vo H
. pylori
-infected asymptomatickou. Fajčenie a obezita inhibuje regulačných akcií CD24 + CD38 + B bunky.}

IL-10 sekrécie CD24 + CD38 + B lymfocytov upon H
. pylori
stimulácie v rôznych predmetoch

Ďalej sme sa snažili skúmať mechanizmus IL-10 upregulace v B bunkách H
. pylori
-infected predmety. Produkcia IL-10 je rozhodujúca pre funkciu regulačného B buniek [12,13]. signalizácia receptora Toll-like je hlavný IL-10 upregulace mechanizmus B-buniek, a bolo preukázané, že moduluje expresiu cytokínov v H
. pylori
infekcie [22,23]. Testovali sme, či prítomnosti H
. pylori
môžu priamo upregulate sekréciu IL-10 v CD24 ^{+ CD38 + B lymfocytov. Čistené B bunky z PBMC boli kultivované v neprítomnosti alebo v prítomnosti tepelne usmrtených H
. pylori
baktérie. Po 72h inkubácii sekrécie IL-10 v supernatante bola meraná Luminex. B bunky boli zozbierané na intracelulárny IL-10 farbenie. Ako je znázornené na obr 4A, IL-10 sekrécie v supernatante je v oboch H
zvýšil. pylori
-uninfected zdravých dobrovoľníkov a H
. pylori
-infected nefajčiarske non-obéznych asymptomatickou po H
. pylori
-stimulation (P < 0,01 a P menšia ako 0,05, v tomto poradí). Obr 4B ukazuje, že percento IL-10-secernujúcich B-buniek bola up-regulovaná v CD24 + CD38 + B buniek po H
. pylori
stimulácia u zdravých jedincov a asymptomatických (p nižšie ako 0,001 a P menšia ako 0,05, v tomto poradí). Na rozdiel od toho, že koncentrácia IL-10 v roztoku a podiel IL-10 na produkciu CD24 + CD38 + B lymfocytov od H
. pylori
-infected fajčiarov a obéznych predmety neboli významne po H
zvýšil. pylori
-infection. Tieto dáta ukázali, že fajčenie a obezita bola narušená indukciu IL-10 z B buniek po H
. pylori
stimulácie, a navrhol, že v časti, strata regulačné funkcie CD24 + CD38 + B lymfocytov od fajčiarov a obéznych jedincov bolo možno kvôli neschopnosti upregulovat IL-10 vylučovanie v odozve na stimuláciu bakteriálneho antigénu (viď diskusia).}

žalúdočné pacientov s rakovinou-pozitívnych na H
. pylori
-infected fajčenia a H
. pylori
-infected obézny skupiny mali nižšie frekvencie IL-10 ^{+ B lymfocytov}

fajčenie a obezita bolo známe, že zvyšujú riziko vzniku rakoviny žalúdka v H
. pylori
-infected predmety. Vzhľadom k tomu, fajčenie a obezita takisto potlačená normálne regulačné funkcie B lymfocytov, sme skúmali, či tieto dva javy boli spojené. Zistili sme, že v fajčiarov a obéznych pacientov, tí, čo sa stal pozitívny stav rakoviny žalúdka malo výrazne nižšia frekvencia IL-10 ^{+ buniek v CD24 + CD38 + B lymfocytov po H
. pylori
stimulácia, než tí, ktorí zostali negatívne pre vývoj rakoviny žalúdka (obr 5A P. ≪ 0,05 pre oboch). Na druhej strane, sme nezistili, že rakovina pozitívnych a negatívnych pacientov s rakovinou boli významne líšia, pokiaľ ide o ich frekvencia CD24 + CD38 + B buniek v celkovom B-buniek (obr 5B). Nie H
. pylori-
infikovaných asymptomatických pacientov v tejto štúdii sa stala rakovina žalúdka pozitívne.}

Diskusia

H
. pylori
infekcie je hlavnou príčinou vzniku rakoviny žalúdka. Hoci väčšina infekcií boli asymptomatické a liečiteľné, podmnožina subjektov zlyhá zaobchádzanie a postupovať k rakovine žalúdka. Okrem toho, fajčenie a obezita zvyšuje riziko rozvoja rakoviny, zatiaľ čo mechanizmy nie sú úplne jasné. V tejto štúdii sme prvýkrát pozorovali zmeny v cirkulujúcich B buniek kompozícia, v H
. pylori
-infected asymptomatickou v porovnaní s neinfikovanými zdravými jedincami, ktorých sa týka zníženia IgD ^{+ CD27 - naivný B bunky a zvýšiť citlivosť CD24 + CD38 + B lymfocytov , CD24 + CD38 + B bunky boli tiež zistené, že hlavné IL-10-secernujúce B buniek podmnožina. Potom sme vykonali T cell-B buniek kultivácia experimenty a zistilo sa, že T-bunky CD24 + CD38 + B lymfocytov zbavenú ko-kultúry vylučované vyššie hladiny prozápalových cytokínov ako T bunkách, ktoré spoločne kultivovaných s celými B-buniek, zatiaľ čo T-lymfocyty cocultured s CD24 + CD38 stačilo + B lymfocytov najnižšiu produkciu prozápalový cytokínov. Ďalej sme zistili, že prítomnosť H
. pylori
mohla priamo zlepšiť IL-10 vyjadrenia od CD24 + CD38 + B-bunky. Spoločne tieto údaje ukázali, že H
. pylori
-infected predmety sa stimulovaná frekvencia cirkulujúcich CD24 + CD38 + B bunky, ktoré vyjadrené vysoké hladiny IL-10 a vystavoval regulačnú funkciu. Je zaujímavé, že v H
. pylori
-infected fajčiarov a obéznych jedincov je cirkulujúcej CD24 + CD38 + B bunky boli znížené vo frekvencii v porovnaní s H
. pylori
-infected asymptomatickou, neboli schopní potlačiť T buniek produkciu prozápalový cytokínov pri pokusoch ko-kultúry, a nijako významne upregulate IL-10 expresie po H
. pylori
stimulácie. Okrem toho Sledovali sme predmety po dobu piatich rokov a následne zistené, že v porovnaní s pacientmi s rakovinou žalúdka pozitívne, pacienti s rakovinou negatívny žalúdočnej mala viac produkciu IL-10 po H
. pylori
stimulácie. Chronické zničenie bunkové a tkanivové poškodenia v pretrvávajúcej H
. pylori
infekcie boli hlavnými prvkami, ktoré prispievajú k rozvoju rakoviny žalúdka [24]. Z výsledkov uvedených v tomto dokumente, je možné, že zvýšená IL-10 expresiu B-buniek sa môže chrániť H
. pylori
-infected predmety znížením T-buniek sprostredkovanú zápal a obmedzuje tkanivové lézie, ale U fajčiarov a obéznych jedincov, B bunkami sprostredkovaná ochrana tkanivo nebol prítomný. Ďalšie štúdie sú potrebné v budúcnosti preskúmať, či prítomnosť IL-10 + B lymfocytov koreluje so zníženým poškodenia tkanív u H
. pylori
infekcie. To však nebolo možné v tejto štúdii, pretože to vyžaduje, aby vzorky žalúdočné tkaniva.}

Bolo zistené, že fajčenie tabaku je spojené so zvýšeným oxidačným stresom a pre-zápalových uvoľňovanie cytokínov, ktoré sa môžu v dôsledku fajčenia tkaniva vyvolanej poškodenie [25,26]. Obezita je tiež spojená so zvýšeným nízkeho stupňa, chronický zápal [27]. V tejto štúdii sme zistili, že H
. pylori
-infected fajčiarov a obéznych jedincov malo menej IL-10 ^{+ B buniek ako H
. pylori
-infected asymptomatickou. Následne, na rozdiel od toho u asymptomatických jedincov, prítomnosť CD24 + CD38 + B bunky z fajčiarov a obéznych jedincov vo bunka-B bunkovej spoločnej kultúre T neznížila T buniek produkciu prozápalový cytokínov. Zníženie produkcie IL-10 a nedostatok regulačné funkcie v B-buniek môže byť dôsledkom celkovo vyššiemu zápalového stavu v fajčenie a obezita. V skutočnosti, naše dáta ukázali, že B-bunky z H
. pylori
-infected fajčenia a Obézni ľudia, nie však z bezpríznakových jedincov, mali vyššie IL-2, IFN-g, a TNF-a produkciu ako B-bunky z neinfikovaných zdravých jedincov, čo svedčí o skosenie smerom k viac prozápalové fenotyp. V rovnakej dobe, vystavenie chronické fajčenie a obezita sú známe spájať so zvýšeným rizikom rakoviny žalúdka. Dohromady, tieto údaje naznačujú, že pre-zápalové imunitný profil fajčenia a obézny populácie môže prispieť k rozvoju rakoviny žalúdka.}

Vzhľadom na nedostatok regulačné B bunky a špecifické transkripčné faktory a povrchové molekuly, rôzne non špecifické sady povrchových markerov, vrátane CD1d ^{hiCD5 +, CD19 + CD24 hiCD38 hi a CD19 + TIM-1 +, boli použité v predchádzajúce štúdie na označenie B-bunky s regulačnými činnosťami [15,22,28,29]. V tejto štúdii sme sa zamerali na CD24 + CD38 + - exprimujúce B-bunky, pretože sme zistili, že IL-10, kľúčovým cytokíny v funkciu regulačného B buniek, je obohatený v tejto podskupiny, a obrázok 3 ukázala, že táto podmnožina mal regulačný aktivitu v produkcii cytokínov bunkovou potlačenie T. Táto voľba povrchových markerov však predsa mal avíza, pretože CD19 + CD24 hiCD38 hi boli predtým opísané ako nezrelých /prechodových B-buniek [30,31]. B-bunky môžu pôsobiť ako významné antigén prezentujúcich buniek a zistilo sa, že podporuje diferenciáciu subpopulácií T buniek a údržby [32]. V tomto bode, nie je známe, či CD24 + CD38 + B bunky v našej štúdii boli potenciálne nezrelé /prechodná B bunky, ktoré môžu byť menej účinné pri prezentácii antigénu. Tento problém zabrániť, sme porovnávali celé B bunky s CD24 + CD38 + - vyčerpanej B bunky (obe skupiny s zrelých B buniek schopných "normálny" prezentácie antigénu) a následne opätovne stimulované T bunky s anti -CD3 pre priamu aktiváciu receptora T-buniek (TCR). Hoci sme tiež zahŕňal CD24 + CD38 + B lymfocytov len pre skupinu v ko-kultivačné experiment, a zistil, že T-bunky v týchto spoločných kultúrach bola významne znížená produkcia prezápalovú cytokínov ako T-buniek CD24 + CD38 + B lymfocytov zbavenú kokultur, nemôžeme vylúčiť možnosť, že toto zníženie patrili k prezentácii potenciálne chybné antigénu počas spoločnej kultúre, pred priamou aktiváciou TCR.}

role regulačných bunky imunitného systému sa často vnímané ako dvojsečný meč u chronických infekcií. Na jednej strane, potlačenie zápalu regulačných T-buniek a B-buniek môže zabrániť nadmernému poškodeniu tkaniva sprostredkované imunitným systémom. Na druhej strane, sa myslelo, že regulačné T buniek a B buniek sprostredkovaná inhibícia imunitný aktivácia prispieť k patogénu vytrvalosť, efektorové T bunky vyčerpania a zníženú možnosť vymazať infekcií. Predtým bolo zistené, že IL-10-sekrécie B buniek, aby prispeli k Salmonella typhimurium stroje a mliečnej žľazy u myší vírus nádoru u myší vytrvalosť a vytrvalosť HIV u ľudí [20,33,34]. V tejto štúdii sme zistili, že prídavok H
. pylori
mohol priamo aktiváciu B buniek produkciu IL-10, ale nie je jasné, ako sa upregulace CD24 ^{+ CD38 + B buniek a sekrécia IL-10 môže mať vplyv na H
. pylori
infekcie. Či regulačný B bunky prispievajú k bakteriálnej pretrvávanie v H
. pylori
infekcie vyžaduje viac štúdií.}

• Ploche ONE: HIF-1α Indukuje mnohopočetné liekovej rezistencie v žalúdku nádorových buniek tým, že prinúti Mir-27a
• Ploche ONE: Zic1 Promoter hypermetylace v plazme DNA je potenciálny biomarkerov pre rakoviny žalúdka a intraepiteliálna Neoplasia