Ploche ONE: Reverzný korelácia medzi mikroRNA-145 a FSCN1 Týka sa rakovina žalúdka Migrácia a Invasion

abstraktné

mikroRNA (Mirs) hrajú dôležitú úlohu pri modulácii génovej expresie v priebehu procesu vzniku nádorového ochorenia a vývoj nádoru. Predchádzajúce štúdie preukázali, že mier-145 je down-regulovaná v žalúdku novotvarov a súvisí s migráciou a inváziou nádoru. Avšak, ako molekulárnej mechanizmus a funkcie MIR-145, v karcinómu žalúdka, zostávajú nejasné. Táto štúdia je prvá demonštrácia významné down-reguláciu MIR-145 expresie v infiltrative rakoviny žalúdka v porovnaní s rozšírením rakoviny žalúdka. Navyše korelácia analýzy odhalili silnú inverzný korelácia medzi Mir-145 a expresných hladín FSCN1 v infiltratívny rakoviny žalúdka. Ďalej sme preukázali, že mier-145 sa priamo zameriava na FSCN1 a potláča migráciu a inváziu buniek u karcinómu žalúdka. Zrážanie expresiu FSCN1 viedlo k potlačeniu migrácie a invázie do buniek karcinómu žalúdka, a re-exprimujúce FSCN1 v Mir-145 s nadmernou expresiou buniek obrátené ich migrácie a invázie chyby. Tak sme dospeli k záveru, že mier-145 reguluje bunkovú migráciu a inváziu do rakoviny žalúdka primárne zamerala sa priamo na FSCN1

Citácia :. Chen Jj, Cai Wy, Liu XW, Luo, QC, Chen G, Huang WF, et al , (2015) Reverzný Korelácia medzi mikroRNA-145 a FSCN1 ovplyvňujúcich rakovina žalúdka migrácie a invázie. PLoS ONE 10 (5): e0126890. doi: 10,1371 /journal.pone.0126890

Akademický Editor: Chengfeng Yang, Michigan State University, Spojené štáty

prijatá: 14. januára 2015; Prijaté: 08.4.2015; Uverejnené: May 26, 2015

Copyright: © 2015 Chen et al. Toto je článok o otvorenej distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Data Dostupnosť: Všetky relevantné údaje spadajú do papiera a jeho podporné informácie súbory

Financovanie :. 1. Národná prírodná Science Foundation of China (Grant No. 81172283) JCC (http://www.nsfc.gov.cn/). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo príprave rukopisu. 2. Natural Science Foundation provincie Fujian (Grant č 2012D037) JCC (http://xmgl.fjkjt.gov.cn/). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

Žalúdočné rakovina má jednu z najvyšších úmrtnosťou na zhubné nádory po celom svete [1]. Vylepšená lekárska technika môže zlepšiť výsledok rakoviny žalúdka. Avšak, rakovina žalúdka zostáva druhou najčastejšou príčinou úmrtí súvisiacich s rakovinou [2], ktoré je spôsobené nádorové invázie a metastáz. Spolu, invázia a metastázy tvoria spôsob, pri ktorom malígne nádorové bunky preniesť z primárneho miesta do ďalších oblastí, a potom tvoria nádory na vzdialené miesto lymfatickým kanálom, krvné cievy alebo telesnej dutiny [3]. Z tohto dôvodu objasnenia molekulárnych mechanizmov podieľajúcich sa na vývoji a invazivitě rakoviny žalúdka nie je nutná.

V roku 1977, Ming klasifikované žalúdočných karcinómov do rozšírenia a infiltrované druhy na základe ich rastu a invasiveness vzorov [4]. Tieto druhy sú ľahko rozpoznateľné histologicky. Expandujúcej karcinómy rastú hromadne a expanziou, čo vedie k tvorbe jednotlivých nádorových uzlíkov, vzhľadom k tomu, infiltrovaný karcinómy sú nádorové bunky, ktoré napadnú jednotlivo [5]. Z týchto dvoch typov rakoviny žalúdka, infiltratívny rakovina žalúdka je viac invazívna než rozširovanie rakovinu žalúdka. Taká kvalifikácia čím poskytuje referenčné rozlíšiť vzorky rakovina žalúdka klinicky a umožňuje podrobné štúdie týkajúce sa molekulárnych mechanizmov rakoviny žalúdka.

mikroRNA (Mirs) zohrávajú kľúčovú úlohu v mnohých biologických procesov, vrátane rakoviny procesov tým, že priame inhibícia expresia cieľových mRNA prostredníctvom rôznych molekulárnych mechanizmov [6, 7]. Navyše Mirs podstúpiť nenormálnej regulácii v priebehu karcinogenézy a môžu pôsobiť buď ako onkogénov alebo nádorových supresor [7]. Nedávne štúdie ukázali, že mnoho Mirs vplyv na proliferáciu a inváziu v karcinómu žalúdka. Mier-21 je up-regulovaný u karcinómu žalúdka a podporuje proliferáciu nádoru a invázii v karcinómu žalúdka zacielením Ptení [8]. Na rozdiel od toho MIR-145 je down-regulovaná v ľudskom karcinómu žalúdka [9]. Okrem toho, výskum ukázal, že mier-145 môže potlačiť migráciu a inváziu buniek tým, že inhibuje transláciu proteínov N-cadherinu v buniek karcinómu žalúdka [10]. Avšak, Kamikihara et al [11] zistilo expresných hladín N-cadherinu v 146 pacientov s rakovinou žalúdka imunohistochemicky, a výsledky ukázali, že iba 31 pacientov (21%) malo N-cadherinu-pozitívne expresie. Z tohto dôvodu niektoré ďalšie molekulárne mechanizmy MIR-145 môže regulovať bunkovú migráciu a inváziu v rakoviny žalúdka.

FSCN1 je 55-kDa aktínu viažuci proteín, ktorý je spojený s filopodií a tvorbou výstupok aktínu báze, a to podporuje pohyblivosť buniek, migráciu a inváziu [12, 13]. FSCN1 výraz chýba alebo je nízka v normálnom epitelu, ale FSCN1 je nadmerne exprimovaný v mnohých karcinómoch, vrátane hrubého čreva a adenómy, epiteliálne rakoviny vaječníkov a pažeráka spinocelulárneho karcinómu [14-16]. Okrem toho mnoho štúdií ukázali, že vykonané FSCN1 expresie zvyšuje proliferáciu a inváziu nádorov vaječníkov a rakovinou žalúdka bunky [17, 18].

Nedávne štúdie zistili, že mier-145 funguje ako nádorový supresor, a že MIR-145 nadmerná expresia potláča migráciu a inváziu v rakoviny prostaty a rakoviny močového mechúra zacielením FSCN1 [19, 20]. Okrem toho, mier-145 potláča žalúdočnú migráciu nádorových buniek a inváziu, a to určením N-cadherin. Avšak, pozitívne expresie miera N-cadherinu v žalúdočných rakovinových tkanivách, je iba 21% [10, 11]. Preto stanovenie kľúča cieľový gén MIR-145, v regulácii rakovina žalúdka invázii je nutné.

V tejto štúdii sme zistili, že prvý MIR-145 bola expresia významne down-regulované v infiltratívny karcinómu žalúdka v porovnaní s v rozširovaní rakoviny žalúdka. Navyše sme poskytli dôkazy o tom, že mier-145 potlačenú migráciu buniek a invázie do rakoviny žalúdka primárne zamerala sa priamo na FSCN1, ktorý vyzdvihol úlohu Mir-145 a FSCN1 v regulácii rakoviny žalúdka malígnym fenotypu.

Materiály a metódy

klinické vzorky

Všetky klinické vzorky boli odobrané sa informovaného súhlasu pacientov, ktorí podstúpili gastrektómii v Zhongshan nemocnici Xiamen University v Sia-men (provincie Fujian, Čína), od júna 2012 do októbra 2013 . celkom so 160 pármi zhromaždených klinických vzoriek zahŕňala 80 vzoriek nezaradené rakovinou žalúdka, 40 infiltrative vzoriek rakoviny žalúdka a 40 rozširujúce sa vzorky rakoviny žalúdka. Nádor patologický typ bol potvrdený patológie skúškou, a zodpovedajúce normálne žalúdočnej sliznice boli odobraté z viac ako 5 cm od nádorov.

Ethics vyhlásenie

Študijné protokoly boli v súlade s etické pokyny Helsinskej deklarácie (1975) a boli schválené etickou komisiou Medical (č 20081012) Zhongshan nemocnice Xiamen University v Sia-men (provincie Fujian, Čína). Získali sme písomné vyhlásenie o súhlase zo všetkých účastníkov zapojených do tejto štúdie.

Bunkové línie

MGC-803 a SGC-7901 ľudskej bunkové línie rakoviny žalúdka boli zakúpené z Ústavu bunkovej biológie (Shanghai , Čína, http://www.cellbank.org.cn). Ľudské embryonálne obličkové bunkové línie 293T bol získaný z American Type Culture Collection (ATCC, MD, USA). MGC-803 a SGC-7901 bunky boli udržiavané v médiu RPMI-1640, zatiaľ čo 293T bunky boli udržiavané v DMEM. Všetky médiá obsahovala 10% fetálne hovädzie sérum (FBS), 100 U /ml penicilínu a 100 ug /ml streptomycínu (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).

Luciferase reportér test

Bunky boli transfekovány luciferázové reportéri gény, beta-galaktozidázy (β-gal) a mier-145 napodobenín či MIR-145 inhibítor (Guangzhou RiboBio) s použitím Lipofectamine 2000 transfekčního činidla (Invitrogen). Aktivita Luciferase sa meria za 48 hodín po transfekciu a účinnosť transfekcia je normalizované k vnútornej aktivite β-gal.

extrakcie RNA a RT-qPCR

Celková RNA bola extrahovaná za použitia TRIzolu činidla (Invitrogen ) a reverznej transkripcii s M-Mulva reverznej transkriptázy (Qiagen) za vzniku cDNA podľa protokolu výrobcu. Real-time PCR bola vykonaná za použitia detekcie SYBR Green založené na Rotor-Gene 6000 nástroje (Corbett Life Science) podľa návodu výrobcu a za použitia párov primérov uvedených v tabuľke 1. Mir-145 a U6 primery boli získané od firmy Qiagen. GAPDH alebo U6 endogénnej kontrola bol použitý ako vnútorný štandard, a výsledky boli vypočítané s použitím △△ CT (CT, kde je prah cyklu) metódy.

Plasmid Zoznam Stavebníctvo

Primery použité pre výstavba luciferázového reportérov a plazmidov sú uvedené v tabuľke 1. ľudská FSCN1 3 'nepreložené oblasti (UTR) bol amplifikovaný z MGC-803 cDNA pomocou PCR amplifikácie s LA Taq DNA polymerázy (Takara) a klonovaný po prúde od kódovania luciferázy sekvencie v pMIR-REPORT (Ambion) vektora v reštrikčných miest sacom a Mlul (Promega) postaviť ľudský FSCN1-3'UTR-luciferázy reportéra. Mutácie boli zavedené do Mir-väzobných miest pomocou QuikChange mutagenéza Kit (transgénu). Pre mier-145 a FSCN1 expresné plazmidy, sekvencie boli amplifikované pomocou PCR a klonované do miest Spel /Nhel a Xbal /Ndel miesta, v danom poradí, z PLV-cs.4.0-základným vektorom (Promega). Pre interferenčné FSCN1 plazmidu, dva páry sekvencií boli žíhané a subklonovány do PLKO.1 podľa protokolu výrobcu.

Lentivirový výroba a transfekcia

HEK293T bunky boli schovať na 6-jamkové doštičky po 24 hodín pred transfekcia. MIR-145 expresný plazmid, FSCN1 zhrnieme plazmidy alebo FSCN1 expresné plazmid sa potom kotransfekovány balenia plazmidy (PHR a pCMV-VSV-G) s použitím transfekčního činidla Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Vírusové supernatanty boli zbierané v čase 48 hodín po transfekciu, odstredí pri 3000 g počas 15 minút a potom sa prefiltruje cez 0,45 um filter (Millipore). Vírusové titre boli stanovené transdukciu Hela bunky v postupnom zriedení a analýzu expresie GFP s použitím prietokovej cytometrie. MGC-803 bunky alebo 7901 buniek na 50-70% zhlukovania boli infikované s vírusovými supernatanty s obsahom 10 mg /ml polybrenu po dobu 24 hodín. Čerstvé médium sa potom pridá do infikovaných buniek, ktoré boli neskôr vybrané s puromycinu.

migrácie a invázie buniek test

Cells (3x10 ^{5) boli nanesené na 8,0 um veľkosťou pórov Boyden komory (transjamkových, Corning Life Sciences, Acton, MA, USA), a to buď potiahnuté 10 ug Matrigelu (BD Bioscience, Bedford, MA, USA) na jamku (pre inváziu testy) alebo doľava nepotiahnutá (pre migračné testy) v bezsérové médiom, ktoré obsahuje 10 g /l hovädzieho sérového albumínu. Médiá, obsahujúceho 10% FBS slúžil ako chemoatraktantu v dolnej komore. Non-napadajúce bunky boli odstránené pomocou vatovej tyčinky po 36 h (invázia testy) alebo 20 hodín (pre migračné testy). Napadli bunky boli zafarbené hematoxylínom (HE) a spočítané. Údaje sú uvedené ako priemer ± SD z troch samostatných experimentov}

Western blotting

Proteíny boli extrahované erytrocytov lyzačného pufra (ELB;. 50 mM Tris, 140 mM NaCl, 0,5% NP- 40 a 100 mM NaF (pH 7,6)), obsahujúci 1 mM PMSF fenylmethansulfonylfluorid (Sigma-Aldrich, USA). Každá vzorka sa oddelí na 10% SDS-PAGE gélu a prenesené na polyvinylidendifluoridovou (PVDF) membrány. Membrány boli blokované 5% mliekom a inkubované s primárnou králičie anti-ľudskej FSCN1 protilátkou (1: 3000, Cell Signaling Technology, USA), alebo myšou anti-ľudský GAPDH (1: 5000, Sigma-Aldrich) protilátky cez noc pri 4 ° C , Membrány potom boli inkubované s príslušnou chrenovou peroxidázou (HRP) konjugovanou sekundárnych protilátok (Thermo Fisher Scientific). Pásy boli vyvinuté za použitia rozšírenej chemiluminiscencie (ECL) Systém (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK). GAPDH proteín bol použitý ako kontrola nanášania.

Štatistická analýza

Údaje sú vyjadrené ako priemer ± SD. Štatistická významnosť bola analyzovaná pomocou Studentovho t-testu. Korelácia medzi úrovňou Mir-145 a hladiny mRNA FSCN1 /proteínové expresie v ľudských karcinómov žalúdka bola vypočítaná korelácia Spearmanův. Všetky štatistické analýzy boli vypočítané s použitím GraphPad Prism štatistický software (GraphPad Software). P Hotel < 0,05 bola považovaná za štatisticky významný (NS, nie je významný; * P Hotel &0,05; ** P Hotel < 0,01; *** P
. < 0,001)

Výsledky

Strong inverzný vzťah medzi expresiou Mir-145 a jeho domnelého ciele, FSCN1 do ľudského infiltratívny typ rakoviny žalúdka

Použili sme databázu TargetScan (http://www.targetscan.org) na identifikáciu 3 'UTR špecifických cieľových mRNA z MIR-145, ktoré môžu regulujú migráciu a inváziu buniek karcinómu žalúdka. Všetkých predpokladaných mRNA, sme vybrali FSCN1, ktorý bol predtým zapletený do migrácie a invázie nádoru. FSCN1 má tiež vysoko konzervované sekvencie na 3 'UTR, ktoré sú komplementárne k sekvencii MIR-145 semien.

Najprv sme skúmali, či je korelácia Mir-145 a FSCN1 môže byť klinicky relevantné meraním expresie Mir-145 a FSCN1 mRNA hladiny /proteín v normálnom /nádoru párované vzorky od 80 pacientov s rakovinou žalúdka. Štatistická analýza ukázala významný inverzný koreláciu medzi expresiou Mir-145 a expresie mRNA FSCN1 /bielkoviny v 80 párov klinických vzoriek (obr 1A a 1B).

Ming klasifikované žalúdočných karcinómov do expandujúceho typu a infiltratívny typ založený na raste a invasiveness vzory, a existuje korelácia medzi Mingových klasifikácie a klinického prognózou [5]. Z tohto dôvodu, 40 infiltrovaný vzorky žalúdočné rakovina a 40 rozširujúce sa vzorky s karcinómom žalúdka, boli vybrané, ako je uvedené, že sa zástupca HE farbenie (obr 2A). V tejto klasifikácie, bunky karcinómu rozširujúce sa tým, že vzhľadom na svoje obmedzené prenikavú silu, kameniva a vyrobíme opisujúce hmotu vo forme polypovitými a fungating lézií. Naproti tomu, bunky karcinómu infiltratívny šíri po obvode a široko a hmotnosť tumoru netvoria. Testovali sme expresiu Mir-145 a FSCN1 mRNA u karcinómu žalúdka v porovnaní s priľahlou normálnou žalúdočnej sliznice real-time PCR. MIR-145 bola pozoruhodne down-regulované v infiltratívny karcinómu žalúdka v porovnaní s rozširujúce rakovinu žalúdka, zatiaľ čo expresia FSCN1 mRNA bola pozoruhodne up-regulovaná (obr 2B). Vybrali sme 10 vzoriek infiltrative rakovinou žalúdka a 10 rozširujú vzoriek rakoviny žalúdka spolu so svojimi susednými normálne tkaniva pre analýzu expresie qPCR a western blotting. Celková hladina expresie MIR-145 boli nižšie, najmä v infiltratívny karcinómov žalúdka v porovnaní s priľahlou normálnou žalúdočnú sliznicu. Na rozdiel od toho sa celkovej hladiny mRNA /proteín FSCN1 boli vyššie v infiltratívny rakovinou žalúdka (obrázok 2C). V dôsledku toho je expresia Mir-145 a jeho údajného cieľ FSCN1 mal silný inverzný vzťah do ľudského infiltratívny typ rakoviny žalúdka, a tým naznačuje, že základné úlohy Mir-145 a FSCN1 sú v žalúdku rakoviny invázii.

mir -145 priamo zameraný na FSCN1 v žalúdočných rakovinových bunkách

Pre stanovenie, či MIR-145 reguluje expresiu FSCN1 do buniek karcinómu žalúdka, najprv up-regulované hladinu MIR-145 v karcinómu žalúdka MGC-803 buniek, za použitia vektor lentivirus báze. potom sa vykonáva qPCR experimentu, ktorý odhalil, že mier-145 Nadmerná expresia významne down-regulované úroveň mRNA FSCN1 (obr 3A), a experimenty Western blot potvrdili, že hladina proteínu FSCN1 bola potlačená v Mir-145 s nadmernou expresiou buniek (Obr 3B ). Naopak, knockdown hladín MIR-145 za použitia inhibítora MIR-145 k významne vyvolanú expresiu /proteínov FSCN1 mRNA ako v SGC-7901 a MGC-803 buniek (obr 3C). sme dosiahli luciferázy svetlušiek reportéri vektor obsahujúci FSCN1 3 'UTR a potom kotransfekovány MGC-803 bunky s Mir-145 napodobenín či inhibítorom MIR-145 sa preskúmať, či FSCN1 je priamym cieľom MIR-145. Lyzáty boli analyzované na aktivitu luciferázy 24 hodín po transfekciu. Test luciferázy sa ukázalo, že napodobňuje MIR-145 viedlo k približnej zníženie 55% aktivity, zatiaľ čo inhibítor Mir-145 v MGC-803 buniek, zvyšuje aktivitu luciferázy o 62% v porovnaní s Mir-negatívnej kontroly (3D Obr). Navyše sme zmutovaný tri hlavné predpokladané rozpoznávacie zložky MIR-145 (MRes) v 'UTR cez QuikChange mutagenéza FSCN1 3 pre použitie v luciferázového testu (obr 3D). Výsledky ukázali, že regulačné účinky napodobňuje Mir-145 a mier-145 inhibítora boli primárne zrušené, ktorá potvrdila, že tlmenie hluku účinky Mir-145 na FSCN1 boli zrušené narušením interakcií MIR-Mre (3D Obr). Súhrnne, tieto štúdie za predpokladu, presvedčivý dôkaz, že FSCN1 je priamym cieľom MIR-145, v buniek karcinómu žalúdka.

Represie FSCN1 je nevyhnutné pre mier-145 inhibovať migráciu a inváziu buniek karcinómu žalúdka

karcinóm žalúdka MGC-803 a SGC-7901 boli bunky stabilne transfekované s dvoma rôznymi FSCN1 shRNAs k potlačeniu FSCN1 lepšie pochopiť potenciálnu úlohu FSCN1 v Mir-145-sprostredkované migrácie nádoru a invázie. Účinnosť interferencie z FSCN1 shRNAs bola potvrdená analýzou Western blot (obr 4A a 4B). Výsledky Transwell testu ukázali, že schopnosť buniek migrovať a invázii bola veľmi potlačená po zrážanie expresiu FSCN1 v MGC-803 a SGC-7901 buniek v porovnaní s negatívnou kontrolnou bunky (obr 4C a 4D), čím sa naznačuje základnú úlohu z FSCN1 v týchto procesoch.

MIR-145 je známe, že potláčajú migráciu a inváziu mnohých typov rakoviny, vrátane rakoviny žalúdka [10, 19, 21]. Ako sa dalo očakávať, nútená expresie MIR-145 malo za následok výrazne znížila migrácie a invázie sadzby MGC-803 a SGC-7901 buniek. Ďalej, súčasné re-expresie FSCN1 ohrozená v Mir-145-potlačená migrácia a invázia buniek schopnosť takmer úplne na oboch Mir-145-transfekciou MGC-803 a SGC-7901 buniek (Obr 5A a 5B). Naopak sme použili FSCN1 zhrnieme pre inhibíciu FSCN1 expresie Mir-145 v inhibítora transfekované MGC-803 a SGC-7901 bunky. Vyradenie FSCN1 úplne opačná aktiváciu inhibítora sprostredkovanej MIR-145 migrácie a invázie buniek, čo naznačuje zásadnú úlohu FSCN1 v tomto procese (obr 5C a 5D). Súhrnne uvedené výsledky ukazujú, že potlačenie FSCN1 je nevyhnutné pre mier-145 inhibovať migráciu a inváziu buniek karcinómu žalúdka.

Diskusia

Deregulácia Mirs sa podieľa na rôznych ľudskej rakoviny, vrátane ľudskej rakoviny žalúdka. Avšak, neboli úplne definované molekulárne mechanizmy, ktorými Mirs modulujú proces karcinogenézy a správanie nádorových buniek. Diferenciálnej expresie Mir v nádoroch v porovnaní s ich susednými normálnych tkanív alebo medzi skupinami nádorových vzoriek s priaznivým alebo zlým klinickým výsledkom bol použitý pre generovanie MIR podpisov potenciálnych prognostických a /alebo prediktívne hodnotou, ktorá v určitých typov rakoviny. Avšak zapojenie aberantne vyjadrených Mirs v ľudskej rakovine žalúdka zostáva z veľkej časti nepreskúmané. Predchádzajúce štúdie uvádzajú, že mier-145 je down-regulovaná v rôznych ľudských nádorových ochorení, vrátane rakoviny prsníka, rakoviny pľúc a rakoviny žalúdka [9, 22, 23]. Lu et al [24] zistili, že mier-145 funguje ako nádorový supresor a zameriava sa dva onkogény, a to ANGPT2 a NEDD9, v karcinómu obličiek. Ďalšie štúdie ukázali, že mier-145 potláča migráciu a inváziu buniek tým, že inhibuje transláciu proteínov N-cadherinu v buniek karcinómu žalúdka [10]. Avšak, Kamikihara et al [11] zistili, že iba 21% pacientov s karcinómom žalúdka, majú N-cadherinu-pozitívnej expresie ako bolo analyzovaných imunohistochemicky. Preto, alternatívne molekulárnej mechanizmus stojaci MIR-145 sa podieľa na regulácii migrácie a invázie buniek karcinómu žalúdka.

V tejto štúdii sme potvrdili, že mier-145 je down-regulovaná v žalúdočných rakovinových tkanivách v porovnaní na susedné normálne žalúdočnú sliznicu, čo je v súlade s predchádzajúcimi poznatkami [9]. V snahe identifikovať nové downstream cieľov MIR-145, sme použili databázu TargetScan na vykonanie skríningové experimenty. Z niekoľkých kandidátov sme vybrali FSCN1 pre ďalšie experimenty, pretože sa zistilo, FSCN1 hrať dôležitú úlohu v oblasti migrácie a invázie nádoru. Niekoľko línií dôkazov ukazuje, že FSCN1 je priamym downstream cieľom MIR-145. Po prvé, FSCN1 obsahuje vysoko konzervatívny sekvencie na 3 'UTR, ktoré sú komplementárne k sekvencii MIR-145 semien. Po druhé, inverzný korelácia medzi Mir-145 a FSCN1 bol nájdený v párových vzorkách od pacientov s rakovinou žalúdka. Napokon, pri klasifikácii klinických vzoriek do rozšírenia typ a infiltratívny typ založený na klasifikáciu Mingových, sme zistili, že mier-145 je pozoruhodne down-regulované v infiltratívny karcinómu žalúdka v porovnaní s rozšírením karcinómu žalúdka. Medzitým bol tiež zistený silnejší inverzný korelácia medzi Mir-145 a FSCN1 hladín expresie v infiltratívny rakoviny žalúdka. Táto štúdia vrhajú nové svetlo na koreláciu medzi Mir-145 a FSCN1 v infiltratívny rakoviny žalúdka. V predchádzajúcej štúdii, Lauren rozdelená karcinómov žalúdka do nasledujúcich dvoch typov: črevnej písať a rozptyľovať typ [25]. Črevná rakoviny typ je opísaný ako žľazového nádoru hrubého pripomínajúce karcinóm, rakovina a difúzny typ sa skladá z osamelých alebo malé zhluky buniek bez tvorby žliaz. Tieto typy nádorov v Lauren a Mingových klasifikácia úzko navzájom zodpovedajú. Väčšina expandujúcej nádory majú vlastnosti rakoviny čriev typu, a najviac infiltrovaný tumory sú typu rakoviny rozptýlené [5]. Avšak, značný počet žalúdočných karcinómov, ktoré nemožno zaradiť do črevného typu alebo difúzneho typu, vrátane nediferencovaných karcinómov, ktoré nemajú preniknúť difúzne a žliaz rakoviny, ktoré infiltrujú difúzne. Okrem toho detekcia skoré rakoviny žalúdka pomocou Lauren klasifikácie je pomerne ťažké, pretože ranej fáze difúzna rakoviny typu, samozrejme, nie je difúzne. Avšak, Ming klasifikácia môže vyriešiť tieto problémy [5]. V klasifikácii Mingova, vzory distribúcia buniek jasne ukazujú zásadný rozdiel v ich rastový potenciál, rovnako ako sila penetrácie a invázie. Ako infiltratívny rakovina žalúdka je viac invazívna než rozširovanie rakovinu žalúdka, tieto výsledky naznačujú, že mier-145 a FSCN1 obaja hrajú zásadnú úlohu v žalúdku rakoviny invázii.

Aj keď niektoré správy sa podieľa na regulácii FSCN1 od Mirs v mnohých karcinómov [19, 20, 26], na nášho najlepšieho vedomia, žiadna správa navrhol, že FSCN1 je priamym cieľom MIR-145 pri liečbe rakoviny žalúdka. V tejto štúdii sme potvrdili, že mier-145 potláča FSCN1 expresiu a priamo sa zameriava na 3 'UTR FSCN1 do buniek karcinómu žalúdka. Okrem toho súčasné re-expresia FSCN1 ohrozená MIR-145-potlačená migráciu buniek a inváziu schopnosť takmer úplne v Mir-145-transfekciou MGC-803 a SGC-7901 buniek, čo naznačuje, že represia FSCN1 je nevyhnutné pre mier -145 inhibovať migráciu a inváziu buniek karcinómu žalúdka. Z tohto dôvodu, FSCN1 je dôležitým downstream cieľom Mir-145 v regulácii rakovina žalúdka inváziu.

Stručne povedané, táto štúdia zistila, že mier-145 je primárne down-regulované v infiltratívny karcinómu žalúdka, a že mier-145 expresie a FSCN1 výraz majú silnú inverznú koreláciu v infiltratívny rakoviny žalúdka. Funkčne sme ukázali, že mier-145 potláča bunkovú migráciu a inváziu do rakoviny žalúdka primárne zamerala sa priamo na FSCN1. Z tohto dôvodu obnovenia expresie MIR-145 môže byť preskúmané ako alternatívne liečebné stratégie proti rakovine žalúdka.

• Ploche ONE: Atomic Vhľad do zmeneného O6-metylguanín-DNA metyltransferázy architektúry proteínov v rakoviny žalúdka
• Ploche ONE: Zdravotné správanie kórejských rakovina žalúdka, ktorí prežili s hypertenziou: sklon Analýza KNHANES III-V (2005-2012)