Stomach Health > žalúdok zdravie >  > Gastric Cancer > žalúdočné Cancer

Ploche ONE: Fas signalizácia podporuje žalúdočnú nádorových metastáz cez STAT3 závislá Upregulace Fascin

abstraktné

Pozadie

FAS prevodníky signálu signalizačných aktivované a aktivátory transkripcie 3 (STAT3) je vyžadovaný pre Fascino up-regulácia. Ako proteín aktínu zväzovanie, Fascino môže sprostredkovať rakovina žalúdka (GC) migráciu buniek.

metódy

rakovina žalúdka AGS bunky boli ošetrené s anti-Fas (5 ug /ml) počas 2 hodín , s cieľom stimulovať aktiváciu signalizácie Fas. in vitro
migrácie FAS signalizáciu aktivovaných AGS buniek bola hodnotená pomocou transjamkových komôr. boli zistené hladiny fosforylovaného Fascino a STAT3 metódou Western blot analýzy. Nahých myší bolo intravenózne AGS buniek ošetrených anti-Fas alebo liečených inhibítorom STAT3 bez anti-Fas; nádorové pľúcne metastázy sa merali. Fascino expresie proteínu v nádorových tkanivách bol detekovaný pomocou imunohistochémia. Hladiny Fas a Fascino mRNA v nádorovom tkanive od pacientov s GC boli merané metódou real-time PCR a ich vzťah bol analyzovaný.

Výsledky

aktivácia Fas signalizácia podporovať migráciu buniek a viedlo STAT3 závislé Fascino up-regulácia v AGS bunkách. STAT3 zvýšená hladina Fascino in vivo
. Fascino bol prostredníkom Fas signalizačného indukované AGS migráciou buniek in vitro stroje a in vivo
. Okrem toho došlo k pozitívna korelácia medzi hladinami FAS a Fascino mRNA v nádorového tkaniva od pacientov GC.

Závery

FAS signalizácia podporuje GC metastáz cez STAT3 /Fascino dráhy, ktorý môže poskytnúť nový cieľ pre terapiu GC

Citácia :. Yang Y, Zhao Q, Z Cai, Cheng G, Chen M, Wang J., et al. (2015) Fas Signalizačné podporuje žalúdočnú nádorových metastáz cez STAT3 závislá Upregulace Fascino. PLoS ONE 10 (5): e0125132. doi: 10,1371 /journal.pone.0125132

Akademický Strih: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, Spojené štáty

prijatá: 6. januára 2015; Prijaté: 11.03.2015; Uverejnené: 18. mája 2015

Copyright: © 2015 Yang et al. Toto je článok o otvorenej distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Data Dostupnosť: Všetky relevantné údaje sú v novinách

Financovanie :. Táto práca bola podporená Národnej prírodnej Science Foundation of China No. 81200014 až JLW (http://www.nsfc.gov.cn/~~HEAD=pobj); Natural Science Foundation z provincie Zhejiang č LY14H160011 do YSY; Č LY12C08002 na ZJC a č LY12H13003 MC (http://www.zjnsf.gov.cn/). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

rakovina žalúdka (GC) je štvrtou najčastejšou rakovinou a druhou najčastejšou príčinou úmrtí súvisiacich s rakovinou po celom svete. Ako väčšina nádorov, metastáz je najčastejšou príčinou zlyhania klinickej liečby GC. Diagnostikovaná v ranej fáze bez metastáz, GC môže byť vykoreniť chirurgicky. Potom, čo dôjde k metastáz, prognóza GC je výrazne horšia. U pacientov s rozsiahlymi metastázami, výsledok operácie v kombinácii s chemoterapiou a imunoterapia nie je ani zďaleka optimálny, s celkovým 5-ročné prežitie je len 24% [1,2]. Preto existuje naliehavá potreba lepšieho pochopenia mechanizmu GC metastáz, aby sa vytvoril lepší terapeutickú stratégiu.

Fas signálne dráhy je jedným z klasických mechanizmov indukovať apoptózu [3]. Po ligácia so svojím prirodzeným ligandom, FasL, Fas receptor tvorí smrť indukujúce signalizačné komplex, čo spôsobuje aktiváciu kaspázy-8, ktorý zase aktivuje po prúde kaspázy, čo vedie k apoptóze [4]. Bolo oznámené, že Fas-sprostredkované zabíjanie buniek je zodpovedný za funkciu protirakovinové Fas signálnej dráhy pri karcinóme prostaty [5]. Avšak, vo väčšine nádorov, namiesto toho, indukcia apoptózy, aktivácia Fas signalizácia podporuje progresiu nádoru [6,7]. Nádorové bunky často reagujú na stimuláciu Fas so zvýšenou proliferáciou [8,9]. Niekoľko štúdií ukázalo, že tiež Fas signalizácia môže podporovať migráciu a inváziu [10-12] nádorových buniek. V nedávnej štúdii, vysoká expresia Fas v GC buniek bolo preukázané, že koreluje s výskytom metastáz do regionálnych lymfatických uzlín [13], čo naznačuje, že Fas signalizácia podporuje metastázy rakoviny žalúdka.

Fascino, aktínu -bundling proteín, bol identifikovaný ako hlavný molekuly nádorových metastáz [14]. Fascino hrá dôležitú úlohu v migrácii nádorových buniek a expresia Fascino sa zvyšuje v niekoľkých typov rakoviny, vrátane GC [15,16]. Fascino je priama STAT3 cieľový gén v reakcii na IL-6 tak v myších a ľudských buniek rakoviny prsníka [17]. Fas signalizácia bola hlásená byť zapojený do aktivácie STAT3 [18-20]. Preto sme sa špekulovať, že Fas signalizácia podporuje migráciu GC buniek a následné metastázovaniu nádoru cez STAT3 závislé up reguláciu Fascino.

Táto štúdia bola navrhnutá tak, aby sa preukázala účasť Fas v regulácii Fascino prejave prostredníctvom aktivácie STAT3 v AGS bunkách. Pokúsili sme sa spojiť zvýšenú hladinu Fascino s bunkovou pohyblivosť a metastázy z AGS bunky in vivo
. Tiež sme analyzovali vzťah medzi úrovňami FAS a Fascino mRNA v nádorového tkaniva od pacientov s GC. To bolo dúfal, že naše zistenia by odhalil nový mechanizmus pre GC metastáz, ktoré poskytujú základ pre budúci rozvoj Fas na báze liečebnej stratégie pre pokročilých GC.

materiály a metódy

tkanivového vzorky

vzorky tkaniva ľudského GC boli odobraté z 23 pacientov (14 s metastázami a 9 bez metastáz), ktorí podstúpili chirurgický zákrok pred chemoterapiou v Zhejiang Hospital Cancer (Hangzhou, Čína) medzi rokmi 2012 a 2014. Klinické charakteristiky pacientov s GC zhrnuté v tabuľke 1. štúdie dodržali predpisy ministerstva zdravotníctva z Číny a medzinárodnými smernicami Svetovej zdravotníckej organizácie Research Ethics Review výboru pre výskum zahŕňajúci ľudské subjekty a vyhlasuje v Helsinskej o etických zásadách pre lekársky výskum na človeku. Protokol štúdie bola prerokovaná a schválená Institutional Review Board Nemocnice Zhejiang rakoviny. Písomný informovaný súhlas bol získaný od každého z pacientov pred začatia štúdie.

Činidlá

myšou anti-ľudský Fas (2R2) monoklonálna protilátka bola získaná od eBioscience (San Diego, CA, USA) , monoklonálna protilátka, inhibítor a STAT3 myší anti-ľudský Fas (CH11) S3I-201 boli získané od firmy Merck Millipore (Billerica, MA, USA). Králičie anti-ľudský STAT3 (79D7) a anti-ľudský fosforylovaný STAT3 (D3A7) monoklonálne protilátky boli zakúpené od firmy Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). Myšou anti-ľudský Fascino (D-10) monoklonálna protilátka, ľudský Fascino siRNA, STAT3 siRNA, negatívne kontrolné siRNA (NC siRNA), a inhibítor STAT3, Stattic, boli zakúpené od Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Šírenie kit CCK8 buniek bola zakúpená od firmy Molecular Dojindo Technologies (Kumamoto, Japonsko). Súprava pre detekciu apoptózy annexin V-FITC bol zakúpený od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Transwell komory (8-um veľkosť pórov) boli zakúpené od firmy Costar (Cambridge, MA, USA).

Zvieratá

Šesť týždňov staré athymických nahých myší bolo získané z SIPPR-BK experimentálne animal Co. (Shanghai, Čína). Myši boli umiestnené v bez patogénov zariadení. Experimentálne protokoly boli preverené a schválené Výborom pre zvierat starostlivosť a používanie nemocnice Zhejiang rakoviny.

Bunky a bunkovej kultúre

Ľudské linky AGS GC buniek a MNK-45 boli získané z Ameriky type Culture Collection (Manassas, VA, USA) a udržiavaná v 1640 kultivačnom médiu obsahujúcom 10% fetálne bovinné sérum (FBS) pri 37 ° C s 5% CO 2.

Western blot analýza

celkom 20 ug surových proteínov extrahovaných z bunkových lyzátov sa oddelí 10% dodecylsulfát sodným polyakrylamidovom gélu a prenesené na polyvinylidendifluoridovou membránu (Millipore, Billerica, MA). Membrány boli blokované 5% BSA v Tris-pufrovanom fyziologickom roztoku a navyše 0,05% Tween-20 a potom inkubované so zodpovedajúcimi primárnymi protilátkami pri 4 ° C cez noc. Po premytí Tris-pufrovanom fyziologickom roztoku a navyše 0,05% Tween-20, boli membrány inkubované so zodpovedajúcimi HRP-konjugovanou sekundárnej protilátky. Proteíny boli vizualizované pomocou SuperSignal West Femto Maximálna (Thermo, IL, USA).

Detekcia bunkovej apoptózy

AGS bunky (2 x 10 5 /ml) sa zmieša s 1 alebo 5 ug /ml anti-Fas monoklonálne protilátky (anti-Fas) alebo izotypovo protilátky (ISO), po dobu 24 hodín, že apoptotické bunky boli zafarbené annexin v-FITC a propidium jodidom po dobu 5 minút pri teplote 4 ° C v tme a potom analyzované pomocou prietokovej cytometrie s FACSCalibur prietokový cytometer (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA).

Rakovina migráciu buniek test in vitro

AGS bunky (1 x 10 6 /ml) sa zmieša s 5 ug /ml anti-Fas alebo ISO po dobu 2 hodín pri teplote 37 ° C. Potom 2 x 10 5 AGS nádorové bunky boli prenesené do 100 ul média bez séra a nasadené na hornej komory Transwell komôr (8-um veľkosť pórov). Spodná komora bola naplnená 800 ul 1640 kultivačnom médiu obsahujúcom 20% FBS. Po 48 hodinách inkubácie pri 37 ° C, boli bunky fixované metanolom po dobu 20 minút a trikrát premyté PBS, 20 min každej. Fixované bunky boli zafarbené s 10 mg /ml DAPI počas 30 minút a premyté PBS. Zafarbený Bunky boli skúmané pod mikroskopom kvetu. Na stanovenie účinkov STAT3 na migráciu buniek, 10 uM Stattic bol pridaný do kultivačného média. Pre určenie role Fascino pri migrácii buniek, pred stimuláciou proti-Fas, celkom 40 nM Fascino duplex siRNA sa transfekovaly do AGS bunky (2 x 10 5 /jamka) za použitia 3 ul INTERFERin siRNA transfekční činidlá ( PolyPlus, NY, CA, USA) na 24-jamkové doštičky. Účinnosť Fascino prechodné umlčanie bola potvrdená metódou Western blot.

testu proliferácie buniek

AGS bunky boli ošetrené s 5 ug /ml anti-Fas alebo ISO pre 24, 48, alebo 72 hodín, a 20 ul CCK8 bolo pridané do každej jamky a bunky boli inkubované počas ďalších 4 hodín. Absorbancia každej jamky bola odpočítaná pri vlnovej dĺžke 450 nm. Proliferácia buniek sa vypočíta vydelením ODS z ošetrených buniek s ODS kontrolných buniek.

Real-time PCR

Celková RNA bola extrahovaná s činidlom TRIzolu a cDNA bola syntetizovaná za použitia PrimeScript RT činidlo kit (Takara Bio, Inc. Otsu, Shiga, Japonsko). Boli použité nasledujúce PCR podmienky: 1 cyklus pri 95 ° C počas 30 sekúnd a potom sa 40 cyklov 5 s pri 95 ° C a 34 s pri 60 ° C. PCR v reálnom čase bolo vykonané na Applied Biosystems 7500 real-time PCR systému (Foster City, CA, USA). Výsledky boli normalizované na beta-aktínu RNA. Sekvencie PCR primérov boli nasledovné: zmysel, 5'-CCACGAAACTACCTTCAACTCC-3 'a anti-sense, 5'-GTGATCTCCTTCTGCATCCTGT-3' pre beta-aktínu; sense, 5-GTGAGGGAAGCGGTTTACGA-3 'a anti-sense, 5'AGATGCCCAGCATGGTTGTT-3 "pre Fas; sense, 5-TGTCTGCCAATCAGGACGAG-3 'a anti-sense, 5-CACGCCACTCGATGTCAAAG-3 "pre Fascino.

Pľúcne metastázy testu in vivo

AGS bunky ( 5 x 10 6 na jednu myš) vopred ošetrené anti-Fas alebo ISO po dobu 2 h bolo do 6-WK-starých holých myší cez chvostovej žily. Na stanovenie účinkov STAT3 na nádorových metastáz a Fascino výrazom in vivo
, nádorové bunky AGS (5 x 10 6 na jednu myš) boli intravenózne injikované do 6-WK-starých holých myší a o 24 hodín neskôr sa myši dostali intravenóznu injekciu S3I-201 (5 mg /kg, každé 2 dni pre celkom 3 krát). Tri týždne po injekcii buniek boli myši anestéziu inhaláciou chloralhydrát a usmrtí a pľúca boli odobraté a počet nádorových ložísk pľúc sa počítali v mikroskope.

Imunohistochémia

nádorové ložiská z pľúc boli fixované v 10% formalínu, dehydratovaný v etanole, a vložené do parafínu. Tkanivové rezy boli narezané na 4 um, namontované na sklíčka a suší sa pri teplote 60 ° C počas 4 hodín. Po krátkej proteolytické štiepenie a peroxidázy blok snímok tkanív za použitia 2,5% peroxidu vodíka v metanole po dobu 30 minút pri teplote miestnosti, bola sklíčka inkubovaná s anti-Fascino protilátkou cez noc pri 4 ° C. Po premytí bola sklíčka inkubovaná s peroxidáze značené polyméru a substrátu chromogénu. Nakoniec boli vzorky inkubované vo fosfátom pufrovanom soľnom roztoku obsahujúcom Diaminobenzidine po dobu 5 minút. Olympus mikroskop bol použitý pre vizualizáciu farbenie nádorových tkanív.

Štatistická analýza

Výsledky boli porovnané za použitia jednosmerné ANOVA. Korelácia testu objednávka pozície Oštepár bolo vyšetrených korelácia medzi úrovňou FAS a Fascino mRNA v nádorového tkaniva od pacientov s GC. Hodnota p menšie ako 0,05 bola považovaná za štatisticky významnú

Výsledky

aktivácia Fas signalizácia podporuje migráciu buniek AGS

Po prvé, sme potvrdili expresiu. fas receptor v AGS a MNK-45 bunky by real-time PCR a analýzy Western blot a bolo zistené, MNK-45 bunky exprimovali vyššia fas receptor ako AGS bunky robil (obr 1A). Obe bunkové línie vykazovali tiež vysokú úroveň expresie FasL (dáta nie sú uvedené). Ďalej sme skúmali, či je podviazanie Fas receptora by mohlo vyvolať apoptózu u AGS a MNK-45 buniek. Po stimulácii s anti-Fas alebo ISO v koncentrácii 1 ug /ml a 5 ug /ml, bola MNK-45, ale nie AGS bunky vykazovali koncentráciu závislé zvýšenie apoptózy (obr 1B). Preto sme skúmali, či je aktivácia Fas signalizácia by mohlo spôsobiť ďalšie účinky na bunky AGS namiesto indukcie apoptózy v týchto experimentoch. Migrácia buniek Test bol vykonaný zápis in vitro stroje a zistili sme, migrácia buniek AGS sa významne zvýšila po stimulácii s 5 ug /ml anti-Fas (obr 1C). Ak chcete vylúčiť možnosť, že zvýšená migrácia AGS buniek bola spôsobená ich zvýšenej proliferácie po anti-Fas stimulácia sme skúmali proliferáciu ACS buniek a nenašli zrejmý rozdiel medzi bunkách ošetrených s alebo bez anti-Fas (obr 1D), čo naznačuje, že zvýšenie migrácia buniek nebola výsledkom proliferačnej vlastností po anti-Fas stimuláciu. Dohromady tieto výsledky naznačujú, že Fas signalizácia môže zvýšiť pohyblivosť GC buniek in vitro
.

aktivácia Fas signalizácia up-regulovaná Fascino expresiu v bunkách AGS prostredníctvom aktivácie STAT3

bolo zistené, že Fas signalizácia sa zúčastňuje aktivácia STAT3 [18-20]. V tejto štúdii sme skúmali, či aktivácia Fas signalizácia spôsobí aktiváciu STAT3 v bunkách AGS. Ako je znázornené na obr 2A, po stimulácii s anti-Fas na krátku dobu, fosforylovaný STAT3 bola výrazne zvýšená AGS bunkách. Bolo tiež doložené, že Fascino môže zvýšiť pohyblivosť nádorových buniek a je priamym cieľový gén STAT3 [17]. Tak sme zistili expresiu Fascino v AGS buniek po stimulácii s anti-Fas. Ako je znázornené na obr 2B, hladiny mRNA Fascino boli zvýšené v závislosti na čase a vyvrcholila po 12 h anti-Fas stimulácia v AGS bunkách. Pre ďalšie potvrdenie upregulaci Fascino sme zistili hladiny proteínu Fascino a našiel rastúce Fascino hladín proteínov v anti-Fas, ale nie ISO zaobchádzané AGS bunky (Obr 2C). Demonštrovať vzťah medzi STAT3 a Fascino v AGS buniek po Fas signalizáciu aktivácie, sme liečili AGS bunky s Stattic, špecifický inhibítor STAT3, ako anti-Fas stimulácia a zistil, že anti-Fas-indukovanej zvýšenie Fascino proteínu bola úplne zrušená v prítomnosti (obr Stattic 2D). Dalo by sa tiež zistiť aktivácia STAT3 v AGS bunkách po stimulácii anti-Fas po dobu 24 hodín, ale aktivovaný miery bol o niečo nižší ako získal 2 h anti-Fas stimulácia (obr 2C a 2D). Aby sa ďalej potvrdzujú, že STAT3 bol zapojený do regulácie expresie Fascino po anti-Fas stimulácia sme zrazil výraz STAT3 STAT3 pomocou špecifickej siRNA pred anti-Fas stimuláciu a zistil STAT3-porazený účinnosť metódou Western blot analýz. Ako je znázornené na obr 2E, STAT3 siRNA, ale nie NC siRNA transfekcia výrazne inhibujú expresiu STAT3 v bunkách AGS. Ocakavane sa Fascino proteín nebol indukovaný v STAT3-porazený AGS buniek po stimulácii anti-Fascino (obr 2F). Tieto výsledky naznačujú, že je potrebné aktivovať STAT3 pre up-reguláciu expresie Fascino spôsobené Fas signalizáciu aktivácie v AGS bunkách.

FAS signalizácia-podporoval migráciu buniek závisí na STAT3 /Fascino dráhy

Bolo preukázali, že Fascino sprostredkováva migráciu nádorových buniek [17]. V tejto štúdii sme skúmali, či porazený z Fascino by znemožňoval Fas signalizácia vyvolanú migráciu buniek in vitro
. Zistili sme, že by mohol byť zistený pokles Fascino bielkoviny v AGS bunkách transfekciou siRNA Fascino ale nie NC siRNA (Obr 3A). Potom sme vykonali testy nádorových migráciu buniek pre detekciu motility Fascino-knockdown AGS buniek po stimulácii anti-Fas. Ako je znázornené na obr 3B, keď anti-Fas stimulácia podporilo výrazne migráciu buniek AGS, tento účinok bol zjavne inhibuje v bunkách ošetrených Fascino siRNA, ale nie NC siRNA. Vzhľadom k tomu, STAT3 je nutná pre signalizáciu Fas-indukovanú expresiu v Fascino AGS bunkách, sme analyzovali ďalšie účinky STAT3 na Fas signalizácie sprostredkovanej migrácie buniek u AGS bunkách. Ako je znázornené na obr 3C, potom zmieša s Stattic, Fas signalizácia so zvýšenou migráciu buniek bol úplne zrušený. V súlade s týmto výsledkom, STAT3 siRNA tiež významne inhibovaná (obr 3D) Fas signalizácia so zvýšenou AGS bunková migrácia. Tieto výsledky naznačujú, že Fas signalizácia podporoval migráciu buniek a je závislá na aktiváciu STAT3 /Fascino dráhy.

FAS signalizácia podporuje bunkovú metastáz in vivo prostredníctvom aktivácie STAT3 /Fascino cesta

Pre ďalšie demonštráciu vzťah medzi Fas signalizácie a GC metastáz, sme previedli anti-Fas-stimulovanej bunky AGS intravenózne do holých myší a detekoval nádoru foci v pľúcach. Zistili sme, zvýšenie nádoru ohnísk v pľúcach myší prenesených s bunkami vopred ošetrené anti-Fas, ale nie ISO (obr 4A). Vyjasniť vzťah medzi Fascino a Fas sprostredkované signalizačné nádorových metastáz, sme vykonali detekciu Imunohistochémia Fascino v nádorových tkanivách. Pozorovali sme vyššiu Fascino expresiu v nádorových tkanivách z myší dostávajúcich anti-Fas stimulovaných buniek než AGS, že od myší, ktoré dostali ISO alebo un-stimulovaný AGS bunky (Obr 4b). Vzhľadom k tomu, STAT3 je nutné pre anti-Fas-indukovanej up-reguláciu Fascino a zvýšená pohyblivosť v AGS bunkách, sme skúmali účinky STAT3 na AGS buniek metastáz in vivo
. Po ošetrení sa S3I-201, ktorý je inhibítorom chemické sondy STAT3 aktivity [21], nádor ložiská v pľúcach významne znížila (obr 4C). Okrem toho, Fascino expresie v nádorových tkanivách z S3I-201 ošetrených myší bola tiež inhibovaná (obr 4D), čo naznačuje, kontrolu Fascino podľa STAT3 in vivo
. Dohromady tieto výsledky naznačujú, že Fas signalizácia môže podporovať bunkovú metastáz in vivo
, v závislosti na aktivácii STAT3 /Fascino dráhy.

Fascino expresie je korelované s expresie Fas v nádorových tkanivách pacienti s GC

Vzhľadom k tomu, Fas signalizácia podporuje Fascino výrazu, sme dospeli k záveru, či existuje korelácia medzi FAS a Fascino prejavu v nádorovom tkanive od pacientov GC. Analyzovali sme hladiny mRNA Fas a Fascino v nádorovom tkanive od pacientov s GC. Ako je znázornené na obrázku 5, hladiny mRNA Fas a Fascino vykazovali pozitívnu koreláciu. Tento výsledok poskytuje dôkazy o predstave, že Fas signalizácia podporuje Fascino vyjadrenie v GC.

Diskusia

Všeobecne platí, že po trimerisací Fas po podviazanie s FasL, apoptóza je zahájený. Fas klastra regrutuje adaptéra proteín Fadd a tvorí smrti vyvolávajúce signalizačného komplexu, čo spôsobuje aktiváciu kaspázy-8. Kaspázy-8, potom aktivuje následné kaspázy, napríklad kaspázy-3, kulminovať apoptózy [4]. Okrem indukovať bunkovú smrť, Fas tiež prenáša proliferácie a aktivačný signály v nádorových bunkách [22]. Bolo oznámené, že Fas sprostredkujúcej astric proliferáciu buniek sliznice je EKR závisí [23], ale aktivácia EKR signálnej dráhy nemôže indukovať proliferáciu myších melanómu buniek B16 [24]. Preto Fas môže vyvolať proliferáciu niektoré, ale nie všetky nádorové bunky a príslušný mechanizmus je stále do značnej miery neznáma. Na tomto mieste sme zistili, Fas bol neplatný pri indukcii proliferácie AGS buniek. FAS signalizácia tiež bolo preukázané, že indukujú motilitu nádorových buniek apoptózu rezistentné pomocou aktivátora plazminogénu urokinázou [10]. V tejto štúdii sme odhalili nový mechanizmus Fas-sprostredkovateľský nádorových buniek pohyblivosti, ktorá závisela na up-reguláciu Fascino prostredníctvom aktivácie STAT3.

Všeobecne sa predpokladá, že k úniku apoptózy spôsobené FasL-pozitívne T bunky, nádorové bunky vyvinuli niekoľko spôsobov, ako odolávať FasL-zabíjať bunky účinky. Nádorové bunky bolo preukázané, že znižuje expresiu alebo dokonca k strate expresie Fas receptor [25], alebo zrušila intracelulárne signálne dráhy Fas mutácií v Fas [26]. Nádorové bunky môžu tiež upregulate bunkovú FADD, ako IL-1-konvertujúceho enzýmu, inhibítory proteín alebo fosforylovať kaspázy-8 inhibovať aktiváciu kaspázy-8 a blokujú sa-stream signálne dráhy Fas [27,28]. V tejto štúdii sme zistili, že aktivácia STAT3 v bunkách AGS po anti-Fas stimuláciu. Aktivácia STAT3 bolo preukázané, že chráni nádorové bunky od apoptických podnetov vychádzajúcich z receptora Fas [29]. Predúprava inhibítora STAT3 nemôže začať AGS apoptózu buniek po Fas signalizáciu aktivácie (dáta nie sú uvedené), čo naznačuje, že aktivácia STAT3 sa nezúčastňuje na prevenciu AGS buniek Fas-indukovanej apoptóze.

Bolo uvádzajú, že Lewis karcinómu pľúc bunky boli konštitutívne rezistentný voči Fas-sprostredkované apoptosy, ale nadmerná expresie Fas na týchto bunkách umožňuje Fas-sprostredkovanú apoptosu po zosieťovanie s agonistom proti-Fas protilátky [30], čo naznačuje, že je kvalitatívny rozdiel v aktivovaných signálnych buniek prijímať, ktorá určuje svoj osud po Fas signalizačné podviazanie. Hladina expresie Fas je stredne AGS bunkách a stimulované s vysokou dávkou anti-Fas (20 ug /ml); sme zistili, že AGS bunky vykazovali mierne zvýšenú apoptózu (dáta nie sú uvedené). To znamená, že indukcia apoptózy a podporu migrácie signalizácie môže byť v oboch prípadoch po aktivácii receptora ligácia Fas, ktoré môžu byť v súvislosti s úrovňou anti-Fas použitý v týchto experimentoch. V prípade vysokej hladiny Fas signalizáciu dodania nedá dosiahnuť za fyziologických podmienok, podporu migrácie signalizácia prevezme po ligácia receptora Fas a spôsobujú zvýšenú GC metastáz.

implementovať vzdialené metastázy, je potrebná silná motility u nádorových buniek , Fascino, ako proteín aktínu zväzovanie, je dôležitá pre udržanie stability a vláknitých aktinových zväzkov, a preto sa podieľajú na bunkovej motility [31]. V tejto štúdii sme zistili, že Fas signalizácia sa podieľal na up-reguláciu expresie Fascino. IL-6 je údajne upregulate Fascino expresiu GC buniek [32]. Signálna Fas bola tiež preukázaná na podporu sekrécie IL-6 v nádorových bunkách [33]. Tieto dôkazy ukazujú, že Fas signalizácia zrejme zosilňuje účinok Fascino up-reguláciu prostredníctvom IL-6. Ďalej sme ukázali, že Fas a Fascino výrazy sú úzko súvisí u pacientov, GC, posilnenie významu Fas-Fascino osi v procese GC metastáz.

V súlade s predchádzajúcimi štúdiami, sme preukázali, že Fas-indukovanej aktivácie STAT3 bol vyžadovaný pre upregulaci Fascino. V nahých myšiach pľúcnych metastáz modelu, inhibítor STAT3, S3I-201, môže inhibovať Fascino expresiu v nádorových tkanivách. Myšou rekombinantný FasL bol neschopný aktivovať STAT3 aktivácie (dáta nie sú uvedené), čo naznačuje, že aktivuje signalizáciu iniciovaná FasL na AGS bunky samy o sebe postačuje na sprostredkovať aktivácia STAT3 a po prúde Fascino upregulaci. Okrem regulácie expresie Fascino, STAT3 je tiež zapojený do bunkovej proliferácie a prežívania, onkogenézy a nádorových metastáz v GC [34-36]. Orálne biologicky dostupný inhibítor s malou molekulou STAT3 bola objavená a môže byť potenciálne terapeutické činidlo pre ľudské rakoviny [37]. Domnievame sa, že inhibítor STAT3 je sľubný prostriedok, ktorý môže byť použitý v klinickej GC terapie v blízkej budúcnosti.

Na záver, nám ukazujú, že Fas signalizácia sa podieľa na GC metastáz pomocou STAT3 závislé na up-reguláciu Fascino. Naše výsledky tiež naznačujú, že Fas /STAT3 /Fascino cesta môže byť cieľ pre molekulárnu GC terapiu.

Poďakovanie

Ocenili sme Dr. Hua Wang pre poskytnutie cDNA získanú z nádorového tkaniva pacientov GC , Tiež sme ocenili editor Medjaden pre modifikáciu tohto rukopisu.

Other Languages