Ploche ONE: Zvýšená expresia eukaryotických translačný iniciačný faktor 5A2 (EIF5A2) koreluje s Cell agresivitou a nízke dosahované prežitie v žalúdočnej Cancer

abstraktné

Eukaryotic translačný iniciačný faktor 5A2 (EIF5A2) hrá dôležitú úlohu v progresii nádoru a prognózu hodnotenia. Avšak, len málo informácií je k dispozícii o jej potenciálnej úlohy na rakovinu žalúdka. Cieľom tejto štúdie bolo vyšetriť funkciu EIF5A2 do progresie nádoru a jeho možných mechanizmov. EIF5A2 expresie bola meraná v ľudských nádorových bunkových línií žalúdka, imortalizovaných žalúdočnej sliznice epitheliální bunkové línie (GES-1) a ľudského karcinómu tkaniva žalúdka a zrazil RNA interferencie alebo stimulovaná EIF5A2 plazmidu transfekcia. Bunková proliferácia, migrácia a invázia boli hodnotené in vitro
. Následný ciele EIF5A2 boli skúmané westernovým prenosom. EIF5A2 a jej potenciálne cieľové metastáz spojený proteín 1 (MTA1) expresie boli skúmané v 160 párov ľudskou rakovinou žalúdka a okolitom normálnom vzoriek za použitia imunohistochémia (IHC) farbenie a bola skúmaná ich korelácia s klinicko-funkcií a prežitie. Vyradenie EIF5A2
alebo MTA1
spôsobil zrejmý potlačenie proliferácie HGC27 bunka, migrácie a invázie. Po Vyradenie EIF5A2
v HGC27 buniek, hladiny E-cadherinu bola stimulovaná a vimentin, cyklin D1, cyklin D3, C-MYC a hladiny MTA1 boli downregulated. Upregulace EIF5A2 v bunkách MKN45 viedlo k hovoriť. IHC Výsledky ukázali pozitívnu koreláciu medzi EIF5A2 a MTA1 expresie v karcinómov žalúdka ( P Hotel &0,001). Obaja EIF5A2 a MTA1 nadmerná expresia boli korelované s pT fáze ( P
= 0,018 a P
= 0,042), PN etapa ( P
= 0,037 a P
= 0,020) a lymphovascular invázie ( P
= 0,016 a P
= 0,044). EIF5A2 alebo MTA1 nadmerná expresia bola významne spojené so zlou celkové prežitie a prežitie bez známok ochorenia (všetko P Hotel &0,05). Multivariačný analýzy identifikované EIF5A2 ako nezávislý prediktor ako pre celkové prežívanie ( P
= 0,012) a prežívanie bez známok ochorenia ( P
= 0,008) u pacientov s karcinómom žalúdka. Naše výsledky ukazujú, že up-regulácia EIF5A2 hrá dôležitú úlohu v onkogénne rakoviny žalúdka. EIF5A2 môžu predstavovať nový prediktor pre chudobných prežitie a je potenciálnym terapeutickým cieľom pre rakovinu žalúdka

Citácia :. Meng Q-B, Kang W-M, Yu J-C, Liu Y-Q, Ma Z-Q, Zhou L, et al. (2015) Nadmerná expresia eukaryotických translačný iniciačný faktor 5A2 (EIF5A2) koreluje s Cell agresivitou a nízke dosahované prežitie v rakoviny žalúdka. PLoS ONE 10 (3): e0119229. doi: 10,1371 /journal.pone.0119229

Akademický Editor: Jun Li, Sun Yat-sen University Medical School, Čína

Prijaté: 22. januára 2014; Prijaté: 29. január 2015; Uverejnené: 20.marca 2015

Copyright: © 2015 Meng et al. Toto je článok o otvorenej distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie: Táto práca bola podporená granty z Pekingu Mestské Natural Science Foundation (No. 7132209), provincia Hubei zdravie a rodinné plánovanie vedecký výskumný projekt (č WJ2015MB137) a hlavných vedeckých a technických projektov v Pekingu (č D141100000414004). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

rakovina žalúdka (GC) je vysoko metastatické ochorenie a jedným z najviac smrtiace zo zažívacieho malignít. [1] Cez pokroky v chirurgických a cytotoxické terapia pre GC, súčasné spôsoby liečby pre pacientov s pokročilým GC veľmi obmedzená. [2, 3] k vývoju nových liečebných postupov, je veľmi dôležité objasniť molekulárne mechanizmy, ktoré podporujú invazívne a metastatické vlastnosti GC buniek.

Eukaryotic translačný iniciačný faktor 5A2 (EIF5A2) sa nachádza na ľudský chromozóm 3q26.2, a je členom EIF5A
génovej rodiny. [4] Zvýšená expresia EIF5A2
mRNA v niektorých ľudských nádorových buniek, v porovnaní s nadmernou expresiou obmedzené na ľudské semenníkov a časti mozgu, navrhuje EIF5A2
je potenciálny onkogén. [4] Predchádzajúce štúdie zistili, že EIF5A2 bol nadmerne exprimovaný v mnohých ľudských rakovinách, ako duktálny adenokarcinóm, rakovinu vaječníkov, hepatocelulárny rakoviny, rakoviny pľúc, rakoviny hrubého čreva a melanómu a bola v korelácii so zlou prežitia pacientov s rakovinou a /alebo nádorových buniek agresivity. [5-11] Nedávne štúdie ukázali, že EIF5A2 má karcinogénne schopnosti prostredníctvom svojej aktivácii EIF5A2-MTA1 /C-MYC osi. [8] Avšak, málo informácií je k dispozícii o expresie proteínu EIF5A2, jej prognostický význam a potenciálne onkogénne úlohu v ľudskom GC.

v dôsledku toho sme sa prvýkrát skúmali expresiu EIF5A2
v ľudských bunkových líniách GC a jej potenciálny úlohe v bunkovej proliferácie, migrácie a invázie. Ďalej sme identifikovali možné downstream cieľových proteínov pre objasnenie vplyvu vyčerpania EIF5A2 alebo upregulace na bunkové funkcie GC buniek. Nakoniec sme analyzovali koreláciu EIF5A2 a MTA1 expresie v ľudskom GC a jeho význam pre klinicko-faktory a prežitie u pacientov GC.

materiáloch a metódach

Ethics Prehlásenie

štúdia bola schválená etickou komisiou z PUMCH, čínskej akadémie lekárskych vied a Peking Union Medical College, Peking, Čína, a písomný informovaný súhlas bol získaný od každého pacienta.

Pacienti a vzorky

GC tkaniva a uzavreté susedné vzorky non-nádorového tkaniva boli získané od 160 po sebe idúcich pacientov, ktorí v období od januára 2002 do decembra 2006. podstúpili chirurgickú resekciu primárnej GC na Peking Union Medical College Hospital (PUMCH) Žiadne pacienti dostávali neoadjuvantnej chemoterapiu alebo rádioterapiu. Dáta prežitia boli získané na základe oboch záznamoch pacientov a telefónne sledovanie. Stredná doba sledovania bola 53 mesiacov (rozmedzie 1-113 mesiacov). Ďalšie dva páry GC čerstvých tkanív a nenádorové žalúdočnej sliznice tkaniva boli získané od pacientov, ktorí podstúpili chirurgické resekciu pre zle diferencované adenokarcinóme žalúdka u PUMCH v roku 2014.

sme definovali lymphovascular inváziu, zatiaľ čo prítomnosť nádorových buniek embólie v priestoroch obklopený jasne vizualizované endoteliálny výstelky v periférii nádorových úsekov. [12, 13] Pacienti boli predstavený v závislosti na 7. vydanie klasifikácie AJCC TNM pre karcinóm žalúdka. [14] Lauren histotype bola rozdelená na črevnú a Difúzne zmiešaný typ kategórie. [15]

Bunková kultúra

päť typov ľudských bunkových línií GC boli získané z buniek centra Šanghaja ústavov pre biologických vied (AGS a MGC803, Shanghai, Čína) a cell Center of Institute of základných lekárskych vied (MKN45, SGC7901 a HGC27, Peking, Čína). Imortalizovaná žalúdočnej sliznice epitelové bunkové línie GES-1 bol získaný z Pekingu ComWin Biotech Co., Ltd (Peking, Čína). Všetky bunky boli kultivované v médiu RPMI 1640 doplnenom 10% fetálnym hovädzím sérom (FBS; Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) pri teplote 37 ° C vo vlhkej atmosfére vzduchu s obsahom 5% CO _{2. Bunky v logaritmickej rastovej fáze boli použité pre ďalšie experimenty.}

Vyradenie EIF5A2 alebo MTA1 malé interferujúce RNA- (siRNA)

siRNA špecificky proti EIF5A2 a MTA1 [16] a ich non-zacielenie riadiace siRNA (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) boli syntetizované chemicky pre túto štúdiu. Sekvencia EIF5A2 siRNA boli nasledovné:
: 5'-GGAUCUUAAACUGCCAGAATT-3 ', 5'-UUCUGGCAGUUUAAGAUCCTT-3';: 5'-GGUUCACCUUGUUGGAAUUTT-3 ', 5'-AAUUCCAACAAGGUGAACCTT-3; a: 5'-GCUUCCAGCACUUACCCUATT-3 ', 5'-UAGGGUAAGUGCUGGAAGCTT-3; non-zacielenie kontrola (NC1) siRNA: 5'-GAA UUC UCC CGU GUC ACG UTT-3 '; 5'-ACG UGA CAC GUU CGG AGA ATT-3 '). Tieto MTA1 siRNA sekvencie (Target 2 siRNA, T2-siRNA) boli: 5'-GCUGAGAGCAAGUUAAAGCdTdT-3 ', 5'-GCUUUAACUUGCUCUCAGCdTdT-3'), a bol použitý FAM značeným siRNA (AM4620) ako non-cielené riadenie siRNA (NC2 ).

Dvadsaťštyri hodín po vysiatí do šiestich jamkami, GC bunky boli transfekovány 100pmol EIF5A2-siRNA, MTA1-siRNA alebo kontrolné siRNA použitím Lipofectaminu 2000 transfekčního činidla (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA ) podľa inštrukcií výrobcu. Bunky boli zozbierané na Western blot pri 48 hodinách po transfekciu.

Plasmid konštrukcia a prechodná transfekcia

EIF5A2 expresný vektor (PIRES2-EGFP-EIF5A2) bol syntetizovaný Life Technologies. Bunky boli transfekovány PIRES2-EGFP-EIF5A2 alebo kontrolným plazmidom za použitia Lipofectamine 2000 (Life Technologies) podľa inštrukcií výrobcu.

Real-time kvantitatívne RT-PCR

Celková RNA bola izolovaná za použitia TRIzolu Reagent (Life Technologies) podľa protokolu výrobcu. PCR bola vykonaná s použitím sekvencie pre EIF5A2: vpred: 5'AACTGCCAGAAGGTGAACTAGG-3 '; vzad: 5'-GTTTCCGTTTATTTGCAGGGT-3 "a sekvencie pre MTA1: vpred: 5'-CCGGGCCTGCGAGAGCTGTTACAC-3 '; vzad: 5'-CACGGCTTCCAGCGGCTTGCGTAC-3 '. PCR bola vykonaná za použitia UltraSYBR zmes (CWbio.Co.Ltd) podľa protokolu výrobcu. Reverzný transkripcie bola vykonaná za použitia PrimeScript RT Master Mix kit (TAKARA Biotechnology Co. Ltd., Dalian, Čína). CDNA produkty boli podrobené real-time PCR s použitím súpravy SYBR Premix Ex Taq II (TAKARA Biotechnology Co., Ltd.). PCR v reálnom čase bolo vykonané v StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) za použitia nasledujúci program: 95 ° C počas 10 minút, nasledovaný 40 cyklami 95 ° C počas 15 sekúnd, a 60 ° C po dobu 1 minúty. GAPDH mRNA
v každej vzorke bola kvantifikovaná ako endogénne kontrola.

Western blotting

Koncentrácia proteínov bola kvantifikovaná pomocou testu BCA proteín kit (Thermo Scientific Pierce). Dodecylsulfát sodný elektroforéza v polyakrylamidovom géle (SDS-PAGE) sa používa na oddelenie fragmenty buniek. Proteíny boli prenesené na PVDF membrány a blokované tris-pufrovanom fyziologickom roztoku a 0,1% Tween 20 (TBST) s obsahom 5% hovädzieho sérového albumínu, a potom inkubované s týmito primárnymi protilátkami pri 4 ° C cez noc: králičie anti-EIF5A2 alebo -C- MYC (1: 1000; Epitomics, USA, katalógovéȪ9-1 a 1472-1), králičie anti-MTA1, -E-cadherin alebo -vimentin (1: 1000, Cell Signaling, USA, katalógȴ7, 3195 alebo 5741 ), alebo myšou anti-GAPDH (1: 1000, Santa Cruz, katalógové # sc-25778). Membrány sa promyly trikrát TBST a inkubujú sa s chrenovou peroxidázou (HRP) konjugovanou anti-králičie alebo anti-myšou sekundárnej protilátky (1: 3000, Santa Cruz, USA, katalógové # sc-2004 alebo sc-2005) po dobu 1 hodiny pri izbovej teplote. Proteínové pásy boli vizualizované pomocou ECL detekčný činidla (Pierce, USA). Relatívna hladiny expresie proteínov boli normalizované k GAPDH.

testu proliferácie buniek

Šírenie HGC27 a MKN45 buniek bola skúmaná pomocou Cell Counting Kit-8 (CCK-8) (Dojindo, Japonsko ) podľa inštrukcií výrobcu. V stručnosti, 24 hodín po transfekciu siRNA alebo plazmidmi, bunky boli schovať v hustote 1 x 10 ^{4 buniek /jamku v 96-jamkové doštičky a kultivované po dobu 0, 24, 48 a 72 hodín. Potom, v rôznych časových bodoch, 10 ul CCK-8 roztok sa pridá do každej jamky a inkubuje sa po dobu 2 hodín. Absorbancia bola odpočítaná pri 450 nm na čítačke doštičiek.}

Transwell testy

migračnej a invazívne schopnosť GC buniek bola detekovaná za použitia 24-jamkové Transwell cell culture komory (veľkosť pórov 8.0μm, Costar , Cambridge, MA, USA) podľa inštrukcií výrobcu. Pre test invázie buniek, vložkový membrány boli vopred potiahnuté Matrigelu (BD, San Diego, CA, USA). Pre test migrácie buniek, bol použitý bez Matrigelu. V priebehu 24 hodín po transfekciu boli bunky schovať na vhodnú hustotu (HGC27, 5 × 10 ^{5 /ml, MKN45, 1 x 10 7 /ml) v v hornej komore a kultivované OPTI-MEM (GIBCO, USA) bez FBS po dobu ďalších 24 hodín. Bunky boli ponechané migrovať smerom k médiu RPMI 1640 obsahujúcom 20% FBS v dolnej komore. Nemigrujícího bunky na hornom povrchu membrány boli odstránené s hrotom bavlny a migračné bunky prichytené k spodnej ploche membrány boli fixované 4% paraformaldehydom a zafarbené H &E. Počty napadnuté bunky boli spočítané v piatich náhodne vybraných oblastiach pod mikroskopom.}

imunohistochémia (IHC) farbenie a vyhodnotenie

IHC farbenie bolo vykonané na 5 um silná dielov z vzoriek parafínových. Monoklonálna králičie anti-ľudská protilátka EIF5A2 (Epitomics, USA, katalógovéȪ9-1), králičie anti-ľudská protilátka MTA1 (Cell Signaling, USA, katalógȴ7) a PV-6000 Polymer Systém detekcie (ZSBG-BIO, Čína) boli používa pre farbenie v súlade s pokynmi výrobcu. V stručnosti, sklíčka sa parafínových rezov boli zbavené parafínu a rehydratované xylénom etanolom. Endogénnej peroxidázy aktivita bola blokovaná 3% peroxidu vodíka po dobu 10 minút. Pre získanie antigénu, Doštičky boli mikrovlnnej liečených a varí sa v 0,01 M citrátovom pufri (pH 6,0) po dobu 10 min, a potom inkubované s 0,1% trypsínom pri teplote 37 ° C počas 5 min. Sklíčka bola inkubovaná s králičie monoklonálnou protilátkou proti ľudskému EIF5A2 alebo MTA1 protilátkou (riedenie 1: 100) po dobu 1,5 hodiny pri teplote 37 ° C vo vlhkej komore. Ako negatívna kontrola farbenie, primárna protilátka bola nahradená nešpecifickým IgG. Dva nezávislé patológovia hodnotili imunohistochemické farbenie EIF5A2 a MTA1. Polokvantitatívnej bodovacie metóda bola použitá s odkazom na predchádzajúcu štúdiu. [7]

Štatistická analýza

Všetky analýzy boli vykonané za použitia softvéru SPSS 12.0 (Chicago, IL, USA). Test Mcnemar bol použitý pre porovnanie EIF5A2 alebo MTA1 farbením v ľudskom GC a okolitom normálnom vzoriek. Tento test chi-square bol použitý k porovnaniu rozdielov medzi kategorické premenné, zatiaľ čo spárovaný dvojchvostý Študent je t
-tests boli použité k porovnaniu rozdielov medzi kategorické premenné. Korelácia medzi EIF5A2 a MTA1 bola analyzovaná pomocou Spearmanova rank testu. Pre jednorozmerné analýze prežitie, krivky prežitie boli konštruované za použitia metódy Kaplan-Meierovej a porovnané pomocou log-rank testu. Použila Cox modelu proporcionálneho rizika s mnohorozmerné analýzy vyšetrovať nezávislé prognostické faktory. Všetko P
hodnoty boli obojstranné a P
hodnoty menšie ako 0,05 boli považované za štatisticky významné. Všetky experimenty boli vykonávané aspoň v technických a biologických trojmo.

Výsledky

EIF5A2 Expresia v GC buniek a tkanív a validáciu intervenčné

Sledovali sme expresiu EIF5A2 v päť GC bunkové línie a imortalizované žalúdočnej sliznice epiteliálne bunková línia GES-1 in vitro
ako QRT-PCR (obr. 1A) a westernovým prenosom (obr. 1B). EIF5A2 proteín v ľudských tkanivách GC bola vyššia ako u spárovaných vzdialených nenádorových tkanív (viď obr. 1C). Vzhľadom k vysokej endogénnej hladinou expresie EIF5A2 a relatívne vysokej účinnosti transfekcia v HGC27, sme si vybrali túto bunkovú líniu pre RNAi analýze, a vybrané MKN45 buniek pre zvýšenie expresie EIF5A2 pokusy vzhľadom k svojej relatívne nízkej EIF5A2 prejavu a vysokej účinnosti transfekcia.

Všetky tri siRNA mohla účinne potlačiť EIF5A2 expresiu v HGC27 bunkách (obr. 1D, E). Použili sme siRNA
ako EIF5A2 cielené siRNA (T1-siRNA) pri dodatočných pokusoch. EIF5A2 expresie bola up-regulovaná významne prechodnú transfekcia plazmidov EIF5A2 v bunkách MKN45 (obr. 1F, G). T2-siRNA mohla účinne potlačiť MTA1 expresiu v HGC27 bunkách (obr. 1 H, I).

EIF5A2 alebo MTA1 expresné hladiny ovplyvnil agresivitu GC buniek in vitro

Vyradenie EIF5A2 podľa T1 siRNA významne inhibujú proliferáciu buniek (obr. 2A), migrácia a invázia (obr. 2B) v HGC27 bunkách v porovnaní s tými z rodičovských buniek. Upregulace EIF5A2 podľa EIF5A2 plazmidu expresie podporované zvýšenou proliferáciu (Obr. 2C), migrácia a invázia (obr. 2D) na MKN45 buniek. Vyradenie MTA1 T2-siRNA významne inhibovala proliferáciu buniek (obr. 2E), migrácia a invázia (obr. 2F) v HGC27 bunkách v porovnaní s tými z rodičovských buniek.

Možné cieľovej génovej expresie po EIF5A2 Knockdown alebo nadmerná expresia

Po Vyradenie EIF5A2 v HGC27 bunkách, boli up-regulovaná hladiny epitelové markeru E-cadherinu, zatiaľ čo hladiny mezenchymálnych markerov vimentin boli downregulated a sprevádzané proteíny proliferácie spojené s cyklin D1 a cyklin D3 a metastázy -associated C-MYC a MTA1 zníženie expresie (obr. 3A). Na rozdiel od toho po EIF5A2 nadmernú expresiu v bunkách MKN45, expresia E-cadherinu bola downregulated, pričom úroveň vimentin bola up-regulovaná v sprievode cyklin D1, cyklin D3, c-myc a up-reguláciu MTA1 (obr. 3B). Porazený alebo nadmerná expresia EIF5A2 nemal žiadny významný účinok na MMP9 prejavu v HGC27 a MKN45 buniek (obr. 3A, B).

Združenie EIF5A2 a MTA1 výraz s klinicko-funkcií u pacientov s GC

pozitívne signály EIF5A2 sa prevažne nachádza v cytoplazme a jadre nádorových buniek, zatiaľ čo MTA1 signály boli lokalizované prevažne v jadre nádorových buniek (Obr. 4). Stanovili sme hodnoty imunozbarvení 0-3 ako normálnou hladinou expresie EIF5A2 alebo MTA1, zatiaľ čo imunologické hodnoty 4-12 bola definovaná ako nadmerné expresie EIF5A2 alebo MTA1. EIF5A2 zvýšená expresia bola nájdená v 75 nádorových vzoriek, v porovnaní s iba sedem z 160 spárovaných susedných bez nádoru sliznice ( P Hotel &0,001). Reprezentatívny IHC farbenie EIF5A2 v moderately- alebo zle diferencované adenokarcinóme žalúdka, invázia nádorových buniek plavidiel a non-nádorovom tkanive, je znázornený na obr. 4A, B, C a D, resp. Z 160 analyzovaných prípadov, 70 (43,75%) bolo pozitívnych na MTA1, Štatistická analýza expresných vzorov ukázalo, že existuje pozitívna korelácia medzi EIF5A2 a MTA1 výrazom (r = 0,510, P Hotel &0,001) , Typické farbenie fotografie pre nadmernú expresiu EIF5A2 a MTA1 v adenokarcinóme žalúdka bolo znázornené na obr. 4E a 4F.

Ako je uvedené v tabuľke 1, a to ako EIF5A2 a MTA1 nadmerná expresia bola v pozitívnej korelácii s pokročilejšom štádiu pT ( P
= 0,018 a P
= 0,042) , PN etapa ( P
= 0,037 a P
= 0,020) a pozitívne lymphovascular invázie ( P
= 0,016 a P
= 0,044), vzhľadom na to, že neboli spojené s ďalšími klinicko-funkciami.

Zvýšená EIF5A2 alebo MTA1 expresie koreluje s horšou prežitia pacientov GC

na poslednej kontrole, zomrelo 75 zo 160 pacientov. Z nich 73 ľudí zomrelo recidívy. Analýza Kaplan-Meier ukázali, že ako 5 rokov celkové prežívanie (OS) a prežívanie bez ochorenia (DFS) pre nadmerné expresie skupinu EIF5A2 boli kratšie, než pre normálne EIF5A2 expresie skupiny ( P Hotel < 0,001 a P
= 0,001, obr. 4G, H). Dôsledne pacienti s MTA1 zvýšenou expresiou vykazovali zlú prognózu pre OS a DFS ( P Hotel < 0,001 a P
= 0,001)

Premenné s významom v jednorozmerné analýze. metódy Kaplan-Meierovej boli zaradené do viac premennými Cox regresnej analýzy. Ako je uvedené v tabuľke S1 a S2 tabuľke, multivariačný analýzy zistené, že zvýšená expresia EIF5A2 bol nezávislý faktor bude mať vplyv na OS (pomer rizika 1,831, 95% interval spoľahlivosti 1.135 do 2.857, P
= 0,012, S1 tabuľka) a DFS (pomer rizika 1,880, 95% CI1.177 do 3.002, P
= 0,008, S2 tabuľka) pacientov liečených kuratívny resekcii pre GC. Avšak, nadmerná expresia MTA1 nevyrábal nezávislý prognostický význam pre OS a DFS v viacrozmerné analýzy.

Diskusia

Eukaryotic iniciačný faktor 5A 2 (EIF5A2) je lokalizovaná na chromozomálne oblasti často poznamenali pre chromozomálne nestability v GC a mnoho ďalších typov rakoviny, 3q. [17-20] EIF5A2, ako jedna z iba dvoch izoforiem EIF5A rodiny, je potvrdené, že onkogénne proteín, a môže byť tiež dôležitým biomarker pre prognózu a terapeutický cieľ mnoho druhov ľudských nádorov. [21] Hoci predchádzajúce štúdie skúmal EIF5A2
génovej expresie v primárnom GC, aktuálne štúdie poskytuje prvé dôkazy klinického významu EIF5A2 expresie v ľudskom GC a jeho možnú úlohu pri regulácia GC buniek agresivity. [22]

sme prvýkrát vykonaná EIF5A2 vyraďujúce a nadmerná expresia experimenty in vitro
. Výsledky ukázali, že potlačenie EIF5A2 v HGC27 buniek viedlo k významnému zníženiu bunkovej proliferácie, migrácie a invázie, zatiaľ čo jeho up-regulácia v bunkách MKN45 viedlo k hovoriť. Tieto výsledky sú v súlade s predchádzajúcimi zisteniami v iných nádorov. [8, 10, 23] Tiež sme zistili, že MTA1 vyraďujúce v HGC27 bunkách významne inhibovala proliferácia buniek, migrácie a invázie. Ale mechanizmus, ktorým EIF5A2 zvyšuje GC buniek agresivitu je stále neznámy.

Z tohto dôvodu sme vykonali ďalšie štúdie z možných cieľov EIF5A2 in vitro
. Naše výsledky ukazujú, že EIF5A2 pozitívne regulovaný cyklin D1 a cyklin D3, ktoré hrajú dôležitú úlohu pri proliferáciu GC buniek a reguláciu bunkového cyklu. [24, 25] Všetky tieto výsledky podporili hypotézu, že EIF5A2 podporuje proliferáciu GC buniek prostredníctvom up-reguláciu cyklin D1 a cyklin D3. V rovnakej dobe, predchádzajúce štúdie ukázali, že EIF5A2 podporuje bunkové invázie /metastázy a epitelových-mezenchýmových prechod (EMT) prostredníctvom aktivácie MTA1 /c-myc u kolorektálneho karcinómu. [8] MTA1 a C-MYC, rovnako ako programu EMT, bol tiež zapojený do regulácie GC metastáz. [26 až 28] preto sme skúmal MTA1, C-MYC a dva EMT asociované markery, E-cadherinu a vimentin. Naše štúdie preukázali, že EIF5A2 pozitívne regulovaný MTA1, C-MYC a vimentin a negatívne regulovaný E-cadherin. Všetky tieto výsledky naznačujú, že EIF5A2 mohli regulovať migráciu a inváziu buniek reguláciou MTA1, C-MYC a EMT in vitro
, ale sú potrebné ďalšie štúdie, aby preskúmala presný mechanizmus.

Výsledky zo súčasnej štúdie tiež ukázala, že proteín EIF5A2 v pozitívnej korelácii s pT fáze a PN fáze. Podobné výsledky boli tiež pozorované v ľudskej rakoviny vaječníkov. [5] Tieto výsledky naznačujú, že EIF5A2 môže byť spojená s invázie tumoru a lymfatických uzlín v určitých typov ľudských nádorov, vrátane GC. Viac zaujímavé, že v tejto štúdii, EIF5A2 zvýšená expresia bola tiež nájdená v invázii rakovinových buniek (invázia nádoba), a zvýšenú expresiu proteínu v EIF5A2 primárnej GC tkanive korelovala s prítomnosťou lymphovascular invázie. V súlade so zistenými v predchádzajúcich štúdiách iných ľudských malignít vrátane epiteliálnych nádorov vaječníka, karcinómu močového mechúra, karcinómu pľúc a hrubého čreva a konečníka, že nadmerná expresia EIF5A2 v súčasnej štúdii výsledkov bola v korelácii so zlou prežitia pacientov s GC. [5, 8, 29] Okrem toho, multivariačný analýza ukázala, že proteín EIF5A2 je nezávislý prediktor pre zlé prežitie u pacientov po operáciách pre GC.

MTA1, ako metastáz spojené s génom kandidáta, bolo preukázané, že hrajú kritickú úlohu v karcinómu žalúdka buniek agresivita. [27] Zvýšená expresia MTA1 je významne spojená so zlou prognózou u pacientov s pN0 GC. [30] Táto štúdia ukázala, že expresia EIF5A2 v pozitívnej korelácii s MTA1 expresie v ľudských tkanivách GC. Imunohistochemické analýza kombinovanej štúdie in vitro ukázali, že EIF5A2-MTA1 osi môže hrať dôležitú úlohu v žalúdku rakoviny agresivity.

V súhrne výsledky tejto štúdie ukázali, že nadmerná expresia EIF5A2 úzko súvisí s GC bunková proliferácia, migrácia a invázia cez tvorbu metastáz asociované proteíny MTA1. V rovnakom čase, môže EIF5A2 byť dôležité v regulácii EMT v GC. Nadmerná expresia EIF5A2 by mohol byť nezávislý faktor predpovedanie zlé prežitie a atraktívny terapeutický cieľ pre GC, ale sú potrebné ďalšie štúdie.

Podporné informácie
S1 tabuľku. Analýza faktorov spojených s celkové prežívanie (OS)
doi :. 10,1371 /journal.pone.0119229.s001
(DOC)
S2 Tab. Analýza faktorov spojených s prežitím bez známok ochorenia (DFS)
doi :. 10,1371 /journal.pone.0119229.s002
(DOC)

Poďakovanie

Autori by radi poďakoval pánovi De-Tian Wang, pani Yu-feng Luo a profesor Pei Gu za ich technickú podporu.

• Ploche ONE: Vplyv intratumorová expresných hladín fluórpyrimidínu-metabolizujúcich enzýmov na spracovanie výsledkov Adjuvant S-1 terapia u rakoviny žalúdka
• Ploche ONE: Aberrant CCR4 Expression je zapojený do invázie tumoru lymfatických uzlín negatívny rakovina žalúdka u ľudí