Ploche ONE: Enhanced Expression of Long nekódujúca RNA hotair je spojený s rozvoj rakoviny žalúdka

Abstraktné

dlhé nekódujúca RNA hotair bolo hlásené, že zlý prognostický biomarker v rôznych zhubných nádorov. Avšak, len málo je známe o asociácii hotair s rakovinou žalúdka. Skúmali sme expresiu hotair v 68 vzorkách s karcinómom žalúdka za použitia kvantitatívnu real-time RT-PCR a analyzovať ich koreláciu s klinickými parametrami. Funkčné význam hotair bola skúmaná generovaním rakovina žalúdka u ľudí bunkových línií so zvýšenou alebo potlačenú expresiu hotair. Ukotvenie -independent rast bol hodnotený pomocou mäkkého agaru testu. Zvýšená alebo potlačená hotair vyjadrenie rakovinové bunky žalúdočnej boli injekčne do chvostovej žily alebo peritoneálnej dutiny imunodeficientných myší skúmať vplyv tejto molekuly o metastázy a peritoneálnej šírenie. Expresie hotair bol v rakovinových lézií významne vyššia ako v susedných nerakovinových tkanív karcinómov žalúdka človeka. V difúzneho typu rakoviny žalúdka, skupina High-hotair (hotair /GAPDH > 1) vykazovala výrazne vyššiu žilovej inváziu, časté metastáz v lymfatických uzlinách a nižšie celkové prežívanie v porovnaní s Low-hotair skupiny (hotair /GAPDH < 1). Tvorba kolónií na mäkkom agare bol zlepšený v hotair-závislým spôsobom. Hotair exprimujúce MKN74 tvorený viac pečeňových metastáz v porovnaní ku kontrole, keď boli injikované do chvostovej žily myší. Okrem toho znížená expresia hotair Kato III potlačená peritoneálnej šírenia. Tieto výsledky naznačujú, že hotair hrá kľúčovú úlohu v rozvoji rakoviny žalúdka

Citácia :. Endo H, Shiroka T, T Nakagawa, M Yokoyama, Tamai K, Yaman H, et al. (2013) Rozšírená Expression of Long nekódujúca RNA hotair je spojené s rozvojom rakoviny žalúdka. PLoS ONE 8 (10): e77070. doi: 10,1371 /journal.pone.0077070

Editor: Dajun Deng, Peking University Hospital Cancer Institute a Čína

prijatá: 10.06.2013; Prijaté: 05.09.2013; Uverejnené: 10.10.2013

Copyright: © 2013 Endo et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Toto dielo bola podporená JSPS KAKENHI grantu numbers24791480 a 24591022 (http://www.jsps.go.jp/j-grantsinaid/index.html) a grant-v-pomoc od Hiromi Medical Research Foundation (http: //www.smtb .jp /osobné /poverenie /správa /public /príklad /pdf /prírodný 06a.pdf) a Daiwa Securities Health Foundation (http://www.daiwa-grp.jp/dsh/grant/outline.html). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

incidencia a úmrtnosť na rakovinu žalúdka dramaticky klesla za posledných 50 rokov vo väčšine oblastí sveta, ale stále zostáva druhou najčastejšou príčinou úmrtí súvisiacich s rakovinou po celom svete [1]. Napriek nedávnej pokroky v diagnostických metód, ako je zväčšovacie endoskopia s narrow band imaging (NBI) [2], a ošetrenie, vrátane cieľovej terapie [3,4], stále existujú veľké počty pacientov s karcinómom žalúdka so zlou prognózou. Patogénne mechanizmus prispieva k agresívnej biologické funkcie v tejto rakoviny je ešte potrebné objasniť.

sekvenovania genómu projekty, zistilo sa, že ľudský genóm sa skladá z génov kódujúcich menej ako 2% bielkovín, a viac ako 90% genómu je prepísaný ako nekódovacích RNA (ncRNA) [5-7]. Tieto ncRNAs sú rozdelené do dvoch skupín v závislosti na veľkosti nukleotidov. Mikro RNA sú približne 18-25 nukleotidov, zatiaľ čo dlhá nekódujúcej RNA sa skladá z viac ako 200 nukleotidov. Hotair je dlhá nekódujúca RNA, ktorý bol identifikovaný z vlastného obrábanie pôdy poľa na HOXC lokuse. Hotair bolo preukázané, že trimethylate Histon H3 lyzín-27 HOXD lokuse s polycomb represívne komplex 2 (PRC2) a inhibujú HOXD génovej expresie, ktorý sa nachádza na inom chromozóme [8]. Hotair podporuje metastáz prostredníctvom interakcie s PRC2 potláčať transkripciu mnohých génov supresor metastáz pri karcinóme prsníka [9]. Zvýšená expresia hotair je spojená s invazívnosti, metastázami a zlou prognózou u množstva nádorových ochorení ako je rakovina prsníka, hrubého čreva, pankreasu a rakovinu pľúc [9-12]. Avšak, len málo je známe o expresiu a /alebo funkciu hotair v rozvoji karcinómu žalúdka. V súčasnej štúdii sme skúmali zapojenie hotair vo vývoji ľudskej rakoviny žalúdka a skúmala, či by jeho expresie koreluje s agresívnym správaním rakoviny žalúdka.

Materiály a metódy

Tkanivá

68 rakovina žalúdka tkaniva boli získané od pacientov, ktorí podstúpili chirurgický zákrok na Miyagi Cancer Center (Natori, Japonsko), medzi rokmi 2007 a 2011. Všetky vzorky boli okamžite zmrazený skoro po resekcii v tekutom dusíku a skladované pri -80 ° C, alebo v pevnej 10% pufrovaného formalínu a vložené do parafínu. Žalúdočné nádory boli histopatologicky klasifikované ako črevnú typu (n = 36), difúzneho typu (n = 32) podľa klasifikácie Svetovej zdravotníckej organizácie a skorších správ [13]. Žiadne pacienti dostávali chemoterapiu a rádioterapiu pred chirurgickým zákrokom. Pre štatistickú analýzu, celkové prežívanie bol definovaný úmrtia z akejkoľvek príčiny, a boli použité prežitie Kaplan-Meier krivky.

Bunkové línie

rakovina žalúdka bunkové línie MKN74 (črevné typ) [14] a KATO III (difúzny typ) [15] boli získané z Riken BioResource Center (Tsukuba, Japonsko). Obe bunkové línie boli udržiavané v médiu RPMI-1640 (Gibco /Life Technologies Co., CA) obsahujúci 10% inaktivované FBS (EuroClone, Milano, Taliansko), 100 jednotiek /ml penicilínu a 100 ug /ml streptomycínu (Gibco /Life Technologies Co. , CA) a kultivované vo zvlhčenej 5% CO _{2 inkubátora pri teplote 37 ° C.}

príprava RNA, reverzná transkripcia a kvantitatívne PCR v reálnom čase

Celková RNA zo zmrazených vzoriek a bunkové línie bola extrahovaná ISOGENE (NIPPON Gene, Tokyo, Japonsko) podľa protokolu výrobcu. cDNA zo všetkých vzoriek boli syntetizované z 1,0 ug celkovej RNA PrimeScript® 1. vlákno cDNA Synthesis Kit (Takara Bio, Siga, Japonsko) po protokolu výrobcu. Expresia hotair bola kvantifikovaná LightCycler Brilliant SYBR Green QRT-PCR kit (Roche Applied Science, IN) podľa návodu výrobcu so špecifickými primerov podľa predchádzajúcej štúdii [9]. Hladina expresie hotair v každej vzorke je normalizované na príslušnú GAPDH úrovní expresie. Špecifickosť každej PCR reakcie bolo potvrdené analýzou krivky topenia.

hotair expresné, antiretrovírusovou vektor

Human hotair cDNA (addgene, Cambridge, MA), bol amplifikovaný pomocou PCR a bol vložený do pBabe Puro vektor (pBabe -HOTAIR). Rekombinantný retrovírus bol vyrobený s Platinum-A (Plat-A, za predpokladu, prof Kitamura) baliace bunkové línie, ako bolo opísané skôr [16]. V stručnosti, bunky Plat-A boli transfekovány pBabe -HOTAIR alebo pBabe-puro vektor (EV). Fügen-6 (Roche Applied Science) a Opti-MEM I (Gibco /Life technologies Co.) sa pridá po protokolu výrobcu. Štyridsať osem hodín po transfekciu sa supernatant obsahujúci retrovírus sa oddelí a nechá prejsť 0,45 um filter. MKN74 bunky boli infikované rekombinantnej retrovírusy a potom vybrané puromycin.

interferencie RNA

Ak chcete porazený hotair Kato III, použili sme Knockout RNAi Systems ™ (Clontech Laboratories, Inc., Mountain View, CA) podľa protokolu výrobcu. Stručne povedané, sme navrhli štyri zhrnieme sekvenciu cielené hotair, ako je uvedené v tabuľke 1. Po žíhaní komplementárnych oligonukleotidov zhrnie, sme sa ligu napojenej oligonukleotidov do pSIREN vektora (shHOTAIR). Potom sme sa transfekované bunky Plat-A s shHOTAIR alebo pSIREN vektor (EV), a infikované Kato III s rekombinantnej retrovírusy a vybrané puromycin. Bunky transdukované s SH-HOTAIR2 a -3 vektora, boli vybrané pre ďalšie štúdium. Každý v vitrto
experiment bol vykonaný v troch opakovaniach, opakuje trikrát a sú uvedené reprezentatívne údaje.
zhrniem
Sequence
shHOTAIR-1sensegatccgaacgggagtacagagagattttcaagagaaatctctctgtactcccgttcttttttganti-senseaattcaaaaaagaacgggagtacagagagatttctcttgaaaatctctctgtactcccgttcgshHOTAIR-2 sensegatccgccacatgaacgcccagagattttcaagagaaatctctgggcgttcatgtggttttttg anti-senseaattcaaaaaaccacatgaacgcccagagatttctcttgaaaatctctgggcgttcatgtggcgshHOTAIR-3 sensegatccgtaacaagaccagagagctgttttcaagagaaacagctctctggtcttgttattttttganti-senseaattcaaaaaataacaagaccagagagctgtttctcttgaaaacagctctctggtcttgttacgshHOTAIR-4sensegatccaattcttaaattgggctggttcaagagaccagcccaatttaagaattttttttganti-senseaattcaaaaaaaattcttaaattgggctggtctcttgaaccagcccaatttaagaattgTable 1. Sekvencia Zhrnieme vložky pre exprimujúce vektor shHOTAIR.
CSV stiahnutie vo formáte CSV

Rast buniek Test

1 x 10 ^{4 bunky boli schovať na jamku v 96-jamkových doštičkách v normálnom bunkovom raste media. Test 3- (4,5-dimetyl-thiazol-2-yl) -2,5-difenyltetrazoliumbromid, žltý tetrazol (MTT) bola vykonaná za použitia bunkovej proliferácie Kit I (GE Healthcare Life Sciences, NJ) podľa protokolu výrobcu. Meranie absorbancie pri 570 nm VersaMax (Molecular Devices, CA) boli vykonané pre odhad produkcie MTT-formazánu po 24, 48 a 72 hodinách inkubácie. Index bol hodnotený po 48 a 72 hodinách normalizuje na po 24 hodinách.}

Mäkký agar tvorba kolónií test

mäkkom agare testy boli vyrobené v 6-jamkových doštičkách. Základná vrstva z každej jamky sa skladala z 1 ml sa konečnej koncentrácie 1 x média (RPMI-1640 plus 10% inaktivovaného FBS) a 0,6% agarózy s nízkou teplotou topenia. Doštičky boli chladené pri izbovej teplote, až kým pevná látka, pričom v tomto okamihu nachádza 1 ml agar rast vrstva sa naleje, ktorá sa skladá z 1 x 10 ^{4 buniek suspendovaných v 1 x médiách a 0,3% agarózy s nízkou teplotou topenia. Doštičky boli znova ochladí pri teplote miestnosti, kým sa rast vrstvy stuhnuté. Pridá sa ďalší 1 ml 1 x média bez agarózy na hornej strane rastu vrstvy v deň 0 a znova 14. deň rastu. Bunky sa nechali rásť pri teplote 37 ° C počas 4 týždňov a celkový počet kolónie boli spočítané.}

Zvieratá

6 týždňov staré samice NOD /Shi-SCID-IL2Rγ ^{null (NOG ) myši boli zakúpené od hlavného ústavu pre pokusné zvieratá (CIEA, Kawasaki, Japonsko) a použitý v tomto experimente. Im umožnilo aklimatizovať jeden týždeň pred pokusom. Boli umiestnené v čistej miestnosti zariadení starostlivosti o zviera v Cancer Research Center Miyagi a udržiava sa za štandardných podmienok teploty, vlhkosti a časových svetelných podmienok a za predpokladu myší žrádlo /voda ad libitum.}

chvostovej žily stanovenie obsahu nádorových buniek metastáz

vyhodnotiť vplyv hotair prejave na krvný prenášaných metastázy, máme injekcií 1,0 x 10 ^{5 článkov z HOTAIR- (n = 9) alebo EV-exprimujúce (n = 9) MKN74 s 0,2 ml PBS do chvostovej žily myší. Myši boli pozorované všeobecne na príznaky ochorenia týždenne dĺžke experimentu, a boli usmrtené 8 týždňov po injekcii. Pľúca, pečeň, obličky, nadobličky, a sleziny myší boli vyrezané a boli skúmané makroskopicky na prítomnosť metastáz.}

peritoneálnej metastázy

1,0 x 10 ^{6 buniek shHOTAIR- (n = 5) alebo EV-exprimujúce (n = 5) KATO III boli injikované 0,2 ml PBS do peritonea myšou na vyhodnotenie účinku hotair prejave na peritoneálnej metastázy. Myši boli pozorované všeobecne na príznaky ochorenia týždenne dĺžke experimentu, a boli usmrtené 8 týždňov po injekcii. Prítomnosť uzlíkov a ascitu v brušnej dutine bola skúmaná.}

Histológia a imunohistochémia

Odstránené tkaniva boli fixované v 10% pufrovanom formalínu po dobu 24 hodín, potom strih a vložený do parafínu pre mikroskopické vyšetrovanie. Vzorky boli narezané na 4-um silné oddiely a zafarbené hematoxylínom a eosínu (H &E). Skúmali sme prítomnosť mikro-metastáz, že nebola uznaná makroskopicky. Uznávané Nádory boli ďalej skúmané imunohistochemicky pomocou primárnej protilátky k ľudskému cytokeratin (proti cytokeratin Low, DC10 /5D3, Nichirei Co, Tokyo, Japonsko), aby sa uistil, že boli odvodené z vstrekovaného rakovina žalúdka u ľudí bunke. Po Deparafinizace sa tkanivové rezy boli inkubované v metanole s 0,3% peroxidu vodíka v destilovanej vode po dobu 20 minút, aby sa zablokovanie endogénnej peroxidázy. Antigén vyhľadávanie bolo vykonané tlakom varenie pri teplote 95 ° C po dobu 5 minút v 10 mM citrátového pufra, pH 6,0, a potom sa nechá vychladnúť na teplotu miestnosti po dobu 30 minút. Endogénne biotín alebo avidín miesta viažuci boli blokované sekvenčné inkubáciou po dobu 30 minút. Rezy boli inkubované cez noc pri 4 ° C s primárnou protilátkou je popísaný vyššie, a nechá reagovať s druhou protilátkou. Avidín-biotín-peroxidáza komplex bol použitý na detekciu druhej protilátky. Farbenie bola vizualizované s Diaminobenzidine (DAB). Rezy boli kontrastne hematoxylínom, premyje a dehydratuje za použitia gradientu etanolu, xylénu.

Štatistická analýza

Korelácia hotair expresie s klinicko-premenných pacienta a rýchlosť metastáz v injekčne myši boli analyzované pomocou testu chí-kvadrát. Štatistická významnosť rozdielov medzi skupinami 2 bola stanovená za použitia Wilcoxonova testu a P
hodnotu (

< 0,05), bola považovaná za štatisticky významnú. Štatistický rozdiel medzi 3 skupinami bola hodnotená pomocou oceľovej Dwass test alebo Bonferroniho analýzu a P
hodnota (menej ako 0,017) bol považovaný za štatisticky významné celkovej pravdepodobnosti prežitia bola analyzovaná pomocou metód Kaplan-Meier a vyhodnotené log-rank test, a P
hodnota (menšie ako 0,05), bola považovaná za štatisticky významnú. Všetky štatistické analýzy boli vykonané pomocou Ekuseru-Toukei 2012 (Social Survey Research Information Co., Ltd., Tokyo, Japonsko). P
hodnota (< 0,05) bol považovaný za štatisticky významný

Ethics

Institutional Review Board na Miyagi Cancer Center (MCC) schválila tento protokol štúdie ,. a písomný informovaný súhlas bol získaný od každého pacienta (povolenie číslo: MCC-22-30). Protokol o experimentoch na zvieratách bolo schválené používanie a ošetrovanie výboru MCC zvierat (Povolenie číslo: MCC-AE-2011-12).

Výsledky

The hotair vyjadrením ľudských vzoriek s karcinómom žalúdka

hladiny hotair expresie nádorových a priľahlých noncancerous tkaniva od pacientov s rakovinou žalúdka boli skúmané QRT-PCR a normalizované úrovňou GAPDH výrazu. Priemerná úroveň expresie hotair bola 4.952 ± 6.462 a 3.804 ± 6.721 (hotair /GAPDH ± štandardná odchýlka) pri karcinóme a non-rakovinové lézie, resp. Hladiny expresie hotair boli významne vyššie u karcinómu lézií v porovnaní s tými, non-rakovinové lézie ( P
= 0,019, 1A).

asociácie medzi expresiou hotair a klinicko-faktory v ľudskej rakoviny žalúdka

ľudské rakovinové tkanivá žalúdka boli histopatologicky klasifikované do čriev (n = 36) a difúznych typov (n = 32). Ľudské žalúdočné rakovinové tkanivá boli ďalej rozdelené podľa úrovní expresie hotair do skupiny High-hotair (hotair /GAPDH > 1,0) a Low-hotair skupina (hotair /GAPDH < 1,0) (obr 1B a C). Združenie hotair expresie s klinicko-funkciou črevnej a difúzneho typu rakoviny žalúdka sú zhrnuté v tabuľkách 2 a 3, v uvedenom poradí. V črevnom typu rakoviny žalúdka, nebola nájdená žiadna významná korelácia medzi expresiou hotair a klinicko-nálezy (tabuľka 2). Okrem toho, žiadny významný vzťah bol zaznamenaný medzi hotair prejavu a celkové prežitie, aj keď skupina na vysokej hotair tendenciu vykazujú kratšie prežitie ako Low-hotair skupiny (obrázok 2A). Na druhej strane, významná súvislosť bola zistená medzi hotair prejavu a lymfatických uzlín (p = 0,043), žilovej infiltrácie ( P
= 0,0083), a krátke celkové prežívanie ( P =
0,018) v rozptyľovať typ karcinómu žalúdka (tabuľka 3 a obrázok 2B). Avšak, nebol zistený žiadny vzťah medzi fáze a expresie hotair.
hotair nízka
hotair s vysokým
P
hodnota
Age73.07 ± 9.1870.87 ± 10.650.53Gender0.63Male1016female37T0.87T1, T2610T3, T4713N0.26N078N1, N2 , N3615Ly0.68ly069ly1, ly2, ly3714v0.19v089v1, v2, v3514Stage0.501,27153,4680.50Table 2. združenia hotair prejavu s klinicko-funkciou črevnej typu rakoviny žalúdka.
CSV na stiahnutie vo formáte CSV
hotair nízka
hotair vysoká
P
hodnota
Age59.250 ± 10.7566.35 ± 10.160.07Gender0.71male812female48T0.87T1, T212T3, T41118N0.043*N086N1,N2,N3414ly0.40ly067ly1,ly2,ly3613v0.0083*v0119v1,v2,v3111Stage0.311,2783,4512Table 3. Združenie hotair prejavu s klinicko-funkcie v difúznym typom rakoviny žalúdka.
CSV na stiahnutie vo formáte CSV

Generovanie hotair hore a dole regulované buniek a koreláciu s životaschopnosti buniek

, aby posúdila funkčný význam hotair vo vývoji rakoviny žalúdka, sme vytvorili stabilne hotair vyjadrenie MKN74 buniek (MKN-hotair) a stabilne shHOTAIR bunky exprimujúce KATO III (KATO-shHOTAIR). QRT-PCR analýza ukázala, že MKN-hotair bunky exprimovali úroveň hotair asi 10 krát, že z EV exprimujúcich (MKN-EV) alebo rodičovských MKN74 buniek, a že expresie tejto molekuly bol v KATO-shHOTAIR buniek znížená o 30 až 70% v porovnaní s EV transdukované (KATO-EV) alebo rodičovských KATO III (KATO-EV) bunkách (obrázok 3a). Výsledky testu MTT preukázali, že ani up-regulácia ani down-regulácia hotair ovplyvnená žalúdočné proliferáciu nádorových buniek (obr S1).

Mäkký agar tvorba kolónií test

Na objasnenie funkcie hotair na ukotvenie nezávislý rast buniek karcinómu žalúdka, sme použili na mäkkom agare testu. MKN-hotair bunky tvorili väčší počet kolónií než MKN-EV buniek ( P
= 0,009, obrázok 4A). V súlade s týmto zistením, KATO-shHOTAIR bunky vykazovali významné menej ako kolónie KATO-EV bunkách (Obrázok 4B). Okrem toho žalúdočné rakovinové bunky s podobnou hotair úrovne expresie (MKN-hotair a shHOTAIR-3, obrázok 3B), vytvorené podobné počty kolónií, čo ukazuje, že ukotvenie nezávislý rast buniek karcinómu žalúdka bolo upravené v hotair-závislým spôsobom.

hotair expresie a rakovina žalúdka buniek metastáz a peritoneálnej šírenie

Vzhľadom k tomu, hotair lepšie ukotvenie nezávislé, ale nie závislých na ukotvenie rast buniek karcinómu žalúdka, sme predpokladali, že by mohli prispieť k hotair vzdialených metastáz a /alebo peritoneálnej šírenie skôr než priame invázie do okolitých orgánov. Pre riešenie tohto problému sme zamestnali chvostovej žily testu a peritoneálnej injekciu buniek, aby preverila, či hotair výraz podporuje krvný -borne metastázy a peritoneálnej šírenie, resp. Ako sa dalo očakávať, MKN-hotair bunky často vystavené pečeňové metastázy ( P
= 0,01) v porovnaní s MKN-EV buniek. Okrem toho, čísla a veľkosti metastatických nádorov pečene bol významný väčší s MKN-hotair buniek než s MKN-EV buniek ( P
= 0,03 a P
= 0,019, v tomto poradí, obr 5A a B). Je zaujímavé, že jeden myši injekčne MKN-hotair ukázal metastáz do obličiek a nadobličiek, okrem pečene, zatiaľ čo s MKN-EV buniek vytvorený metastatické nádory len v pečeni. Dôsledne, peritoneálnej šírenie bola významne znížená (1/5, P
= 0,009), kedy sa hotair inaktivuje v bunkách KATO III, zatiaľ čo všetky kontrolné bunky tvorili peritoneálnej šírenia (5/5) (obrázky 6A a B). Tieto metastatický nádory boli histologicky potvrdené a ukázali intenzívny pozitívny farbenie pre ľudskú cytokeratin (obr 5C a 6C).

Diskusia

V tejto štúdii sme skúmali expresiu hotair u karcinómu žalúdka a preskúmať jeho korelácia s klinicko-funkciami, vrátane prognózu pacienta. Naše výsledky jasne odhalili zvýšenú expresiu hotair v rakovinových tkanivách v porovnaní s non-rakovinové tkanivá žalúdka a že expresia vysoká úroveň tejto molekuly bola spojená s lymfatických uzlín, žilovej inváziu a zlé prežitie v difúzny typu rakoviny žalúdka. Tieto zistenia sú v súlade s nedávnym štúdiu, ktorá dokazuje, že up-regulácia hotair sa nachádza pri karcinómu žalúdka v porovnaní s normálnymi tkanivami a je v korelácii s uzlín fázy nádoru a lymfatické [17]. Okrem toho, hotair-exprimujúcich rakovinových buniek žalúdočnej vykazovali zvýšenie kotviaceho nezávislý rast buniek in vitro stroje a metastázy do pečene in vivo
pri zníženej expresie hotair do buniek karcinómu žalúdka viedlo znížil na ukotvenie nezávislý rast a šírenie peritoneálnej, čo naznačuje, že hotair hrá kľúčovú úlohu v progresii rakoviny žalúdka.

Vyššie expresie hotair bola detekovaná v nádorových bunkách ako v zodpovedajúcich nenádorových buniek v rôznych druhov rakoviny, vrátane rakoviny prsníka, hrubého čreva, pečene, pankreasu a rakoviny nosohltana [9-11,18-20]. V týchto rakovín, hotair Bolo tiež preukázané, že sú spojené s metastázami a /alebo zlou prognózou. Okrem toho vysoká úroveň hotair expresie korelovala s krátkym prežitia bez choroby u karcinómu pľúc [12]. Preto naše súčasné výsledky sú v súlade s predchádzajúcimi štúdiami čo naznačuje, že expresia hotair sa podieľa na zvýšenej agresivite rôznych typov rakovinových buniek. Na druhú stranu sa nám nepodarilo nájsť negatívny prognostický efekt hotair v črevnom typu rakoviny žalúdka, hoci skupina na vysokej hotair tendenciu ukázať kratšie celkové prežívanie v porovnaní s Low-hotair skupiny. To by mohlo byť vzhľadom k malému počtu pacientov v štúdii, pretože núteným vyjadrenie hotair v črevnej žalúdočné rakovina bunkové línie (MKN74) získal agresívny fenotyp in vitro stroje a in vivo
. Ďalšie výskumy s veľkým počtom vzoriek navyše k experimentálnej štúdie používajúce iné črevné žalúdočné rakovina bunkových línií by bolo potrebné, aby tento problém riešiť.

V súčasnej štúdii Neboli nájdené súvislosť medzi hotair prejavu a bunkového rastu rakovina žalúdka. V prsníka, hrubého čreva a rakoviny pečene, zapojenie hotair v bunkového rastu nebola preukázaná [9,10,18], zatiaľ čo hotair podporoval a zníženej proliferáciu buniek u rakoviny pankreasu [11] a rakovinou pľúc [12], resp. Ďalej, žiadny významný rozdiel bol zistený v podkožnom rastu nádoru u myší NOG medzi hotair expresiou a kontrolné bunky v tejto štúdii (dáta nie sú ukázaná). Na základe týchto zistení, je pravdepodobné, že spojenie medzi hotair prejavu a proliferáciu buniek je závislá na type rakoviny. Na rozdiel od toho ukotvenia nezávislý rast buniek karcinómu žalúdka bol zreteľne lepšie v hotair-závislým spôsobom. Okrem toho hotair výraz spôsobil viac metastáz do pečene a ďalších orgánov, a vada hotair potlačil peritoneálnej šíreniu rakovinových buniek žalúdka. Tieto pozorovania, spolu so skutočnosťou, že výraz hotair prispieva k metastáz v rôznych karcinómov [9-12,18], ukazujú, že hotair sa zameriava predovšetkým na metastatického procesu, skôr ako v raste primárneho nádoru.

Na záver, zvýšená expresia hotair v difúzny typ karcinómu žalúdka bola spojená s výskytom venóznej invázie a zlou prognózou nezávisle na T faktora, a nútenej expresiu hotair do buniek karcinómu žalúdka podporoval ukotvenie nezávislý rast buniek in vitro stroje a metastáz do pečene in vivo
. Tieto výsledky naznačujú, že je hotair ktoré sa môžu podieľať na vývoji rakoviny žalúdka, a môže byť tiež terapeutickým cieľom v liečbe rakoviny žalúdka.

Podporné informácie
Obrázok S1.
Asociácie proliferáciu buniek s hotair výrazom. Výsledky MTT testom hodnotené po 72 hodinách boli normalizované na ktorej po 24 hodinách. Žiadny vzťah bol nájdený medzi hotair prejavu a šírenie žalúdočné nádorových buniek
doi :. 10,1371 /journal.pone.0077070.s001
(TIF)

Poďakovanie

Ďakujeme profesor Kitamura (University of Tokyo, Tokyo, Japonsko) za poskytnutie buniek Platinum-A.

• Ploche ONE: Natural History of malígneho do kostí v rakoviny žalúdka: Konečné výsledky multicentrickej Kostná metastázy Survey
• Ploche ONE: Aktivácia STAT3 v rakovina žalúdka ľudských bunkách pomocou interleukínu (IL) -6-Type cytokínov Signalizačné koreluje s klinickými Implications