Pozadie
Beclin 1 je hlavným aktérom autofagie. Expresie Beclin 1 a jeho prognostický úlohu v karcinómu žalúdka je do značnej miery bez prehliadky. Účelom tejto štúdie je zistiť expresiu beclin 1 do buniek karcinómu žalúdka, tkanív a jeho vzťahu s prognózou.
Expresia Beclin 1 bola detekovaná u 271 jedincov lymfatické uzliny pozitívnych pacientov s rakovinou žalúdka imunohistochemicky. Korelácia Beclin 1 prejave k patologickým funkcií a prežitie rakoviny žalúdka bol študovaný. Beclin-1 expresie v žalúdočných rakovinových bunkových línií a klinických vzoriek je tiež detekovaná pomocou reverznej transkripcie-PCR a Western blotting.
Beclin 1 je up-regulovaná na úrovni mRNA a množstva bielkoviny v šesť žalúdočné rakovinové bunkové línie v porovnaní s tými, ktoré v normálnej žalúdočnej sliznice bunkové línie (GES-1). Expresie Beclin-1 v žalúdočných klinických vzorkách je tiež vyššia ako v priľahlých nenádorové tkaniva. Z celkového počtu 271 pacientov, 229 (84,5%) bolo Beclin 1 vysoká expresie nádoru pomocou IHC. Beclin 1 expresia je úzko spojená s intravaskulárnej embóliu. Kaplan-Meierova analýza preukázala vysokú beclin 1 expresie bola spojená s dlhším celkovým prežitím. Obaja jednorozmerné analýzy a multivariačný analýza ukázala, že Beclin 1 expresie boli nezávislé prognostické faktory u pacientov s karcinómom žalúdka s pozitívnymi uzlinami.
Naše zistenia silne naznačujú, že Beclin 1 má potenciálnu úlohu v vzniku nádorov rakoviny žalúdka a môže byť sľubnú biomarker pre predpovedanie prognózu pacientov s lymfatických uzlín-pozitívnym karcinómom žalúdka. To by mohlo slúžiť aj ako nový terapeutický cieľ pre žalúdočné liečenie rakoviny
Citácia :. Geng Q-R, Xu D-Z, on L-J, Lu J-B, Zhou Z-W, Zhan Y-Q, et al. (2012) Beclin-1 expresie je významným prediktorom prežitia u pacientov s lymfatických uzlín-pozitívnej rakoviny žalúdka. PLoS ONE 7 (9): e45968. doi: 10,1371 /journal.pone.0045968
Strih: Alejandro H. Corvalan, Pontificia Universidad Católica de Chile, Chile
prijatá: 04.04.2012; Prijaté: 23 augusta 2012; Uverejnené: 27.septembra 2012
Copyright: © Geng et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané
Financovanie :. Toto dielo bol podporený Medical Science Foundation v provincii Kuang-tung (č 2010B031600071). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu
Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú
Úvod
karcinóm žalúdka zostáva veľkým problémom verejného zdravia na celom svete, najmä v krajinách východnej Ázie, incidencia vekovo štandardizovaná je > 20 za 100000 [1]. Pre pokročilého karcinómu žalúdka, jej prognóza je stále zlá, pričom sa očakáva celkové 5-ročné prežitie 25% alebo menej [2], [3]. Lymfatických uzlín je najsilnejší prognostický ukazovateľ po kuratívny resekcii [4] - [7]. Asi 75% pacientov s pokročilým rakovinu žalúdka uzol-pozitívny, ktorého prognóza sú výrazne horšie ako u pacientov s ochorením s negatívnymi uzlinami [4].
V predchádzajúcich štúdiách sme zistili, pomer pozitívnych lymfatických uzlín je nezávislý prognostickým indikátorom pre pacientov s pozitívnymi uzlinami karcinómu žalúdka a intraperitoneálna chemoterapiu môžu byť prospešné [8], [9]. Avšak zásadný krok smerom k zlepšeniu prežitia pacientov s uzlina-pozitívnym karcinómom žalúdka spočíva vo zvýšení porozumenie nádorové biologickej správanie a hľadaním možných cieľov pre individuálnu terapiu [10], [11]. Napríklad ľudský epidermálny rastový faktor receptor 2 (HER2) sa stal teraz nový marker rakoviny žalúdka nasledujúcich zásad založených na dôkazoch [12] .Adding trastuzumab k štandardnej chemoterapii môže zmeniť zlé prežitie u pacientov s karcinómom žalúdka HER2-pozitívnym [13] - [15]
v poslednej dobe sa role autofagie v rozvoji rakoviny a liečenie rakoviny bolo udelené veľké obavy [16] - [18] .. Beclin 1, kľúčovým regulátorom tvorby autofagie, bolo zistené nadmerné expresie v rôznych ľudských nádorových ochorení [19] - [22].
Avšak, stále existuje relatívne málo štúdií, ktoré skúmali vzťah medzi Beclin 1 a rakovina žalúdka. Najmä dispozícii žiadne údaje o ich účinkoch na prognózou u rakoviny žalúdka, neboli doposiaľ hlásené.
Táto štúdia skúmala Beclin 1 expresiu v rakovinových bunkách žalúdka, tkanív a jeho patologickým významný u pacientov s uzlina-pozitívnym žalúdočných rakovina. Okrem toho sme analyzovali vzťahy medzi Beclin 1 výrazu s prognózou určiť, či Beclin 1 možno predpovedať klinický výsledok.
Bunkové línie a kultivačné podmienky
ľudských nádorových bunkových línií žalúdočné HGC-27, MKN803, MGC-803, SGC-7901, MKN-28, BGC-823 boli dary od Peking University School of Oncology (Peking, Čína PR.) [23], [24]. Normálny žalúdočnej sliznice bunková línia, GES-1, odvodené od ľudského plodu epitelu žalúdočnej sliznice, bola získaná od pričlenené nemocnice Sunjatsenův University [25]. Tieto bunkové línie boli udržiavané v médiu RPMI 1640 (Invitrogen) doplnenom 10% fetálnym hovädzím sérom (Hyclone), penicilínom (100 jednotiek /ml) a streptomycínom (100 jednotiek /ml) pri 37 ° C a 5% CO2 vo vlhkom inkubátore .
Reverzný transkripcie-PCR
Celková RNA bola extrahovaná metódy TRIzolu. RNA bola vopred ošetrená DNázy a použitý pre syntézu cDNA s náhodnými hexamérov. Táto zmes (25 ul celkovo) pre PCR sa skladala z 0,5 ul cDNA, 0,5 U Taq DNA polymerázy, 2,5 ul 10 x PCR pufra, 2,5 mM dNTP zmesi, a 50 pM sense a antisencie primérov každý. Beclin 1 boli analyzované nasledujúcimi primery: Beclin 1 5'CGTGGAATGGAATGAGAT3 '
reverznej primer 5' GTAAGGAACAAGTCGGTAT3 ';
aktínu: 5'AGCCATGTACGTAGCCATCC3 "
a 5' GTGGTGGTGAAGCTGTAGC 3 '.
Western blot analýza
Bunky boli lyžovanie v lyzačním pufri a koncentrácia proteínu bola stanovená metódou Bradford farbivá (Bio-Rad Laboratories). Rovnaké množstvo bunkového extraktu boli podrobené SDS-PAGE a prenesené na PVDF membránu (Bio-Rad). Expresia Beclin 1 bola stanovená s králičie monoklonálnou protilátkou (1: 1000, Novus Biologicals, NB500-249) v súlade s navrhovanými protokolov výrobcu.
Štúdia sa skladala zo 271 žalúdočných onkologickí pacienti, ktorí podstúpili radikálnu resekciu pre histologicky potvrdený karcinóm žalúdka z Cancer Center Sun Yat-sen University v období od januára 1998 do decembra 2006 sme získali informovaný súhlas od všetkých účastníkov zapojených do tejto štúdie. Etický súhlas bol získaný od Sun Yat-sen University Cancer Center výskumu etickou komisiou. Medzi kritériá zahŕňali histologicky potvrdené R0 resekciu, ktorá bola definovaná ako žiadne makroskopické a mikroskopické reziduálneho tumoru a pooperačné doba prežitia ≥6 mesiacov. Pacienti s vzdialených metastáz alebo predoperačné terapiu alebo lymfatické uzliny negatívne boli zo štúdie vylúčení. 7thTNM klasifikácia spoločného výboru amerického rakoviny a Medzinárodnej únie proti rakovine kritériá sa použili na patologickým stagingu [26]
Všetci pacienti mali nasledovať-up po chirurgickom zákroku na 6 až 12 mesačných intervaloch .; Priemerné sledovanie v 38 (v rozmedzí 10-145) mesiaca pre všetkých pacientov. Celková doba prežitia bola definovaná ako bol definovaný ako obdobie medzi dobou chirurgie a smrti, alebo bol cenzurovaný pri poslednom sledovaní.
Beclin 1 bola detekovaná s králičie monoklonálne protilátky ( 1: 100, Novus Biologicals, NB500-249). Všetky nádorové vzorky boli získané z chirurgicky resekovaných karcinómov žalúdka pred adjuvantnej terapie. Formalínom fixované, parafínové bloky boli skladované pri izbovej teplote označený identifikačným číslom. Postupy boli vykonané podobným spôsobom ako v postupe skôr popísaného [23]. Tieto imunologicky rezy boli vyhodnotené a tkaniva z ľudského adenokarcinómu prostaty slúžil ako pozitívna kontrola. Všetky snímky boli hodnotené dvoma nezávislými pozorovateľmi na základe podielu pozitívne zafarbených nádorových buniek a intenzity farbenia. Podľa nedávno popísaných kritérií pre hodnotenie Beclin 1 expresiu, intenzita membránového farbenie pohybovala od slabé na to silný: 0 (žiadne farbenie), 1 (slabé farbenie), 2 (stredná farbenie) a a 3 (intenzívne farbenie) [27]. Percento pozitívnych nádorových buniek bola hodnotená ako 0 (menej ako 5%), 1 (6% až 25%), 2 (26% až 50%), 3 (51% až 70%) a 4 (viac ako 70% ). Index farbenie bola vypočítaná na základe súčtu intenzitu skóre farbenie a percento pozitívnych buniek skóre. Imunoreaktívnych skóre rovná alebo vyššia ako 4 sa používa pre klasifikáciu nádorov s vysokou Beclin 1 prejavu a farbenie skóre pod 4 sa používa na označenie nízky Beclin 1 výrazu.
Všetky štatistické analýzy boli vykonávané s použitím SPSS softvéru (verzia 18 pre Windows; SPSS, Chicago, IL). Rozdiely v P < .05 boli považované za štatisticky významné. Združenie Beclin-1 expresie s rôznymi funkciami clinicalopathologic bola analyzovaná s použitím testu chí-kvadrát. Krivky prežitia boli vynesené pomocou metódy Kaplan-Meier a porovnané pomocou log-rank testu. Cox proporcionálny model riziká (vzad, po krokoch) pre viac premenných analýzu bola použitá v závislosti na faktoroch, ktoré dosiahli význam v univariable analýze.
Beclin 1 expresie v žalúdočných rakovinových bunkových línií
Zvýšená expresia Beclin 1 bola zaznamenaná u mnohých druhov rakoviny. Jeho expresia postavenie v žalúdočnej rakovinové bunkové línie, však zostáva nejasná. Pre stanovenie hladiny expresie beclin-1 transkriptov a proteínov, semi-kvantitatívnej reverznej analýzy transkripcie-PCR a Western blot analýzy boli vykonané oddelene v normálnych ľudských žalúdočných epiteliálnych buniek (GES-1) a šiestich žalúdočných nádorových bunkových línií (HGC-27, MKN803, MGC-803, SGC-7901, MKN-28, BGC-823). Zistili sme, že Beclin 1 mRNA a proteín hladina expresie up-regulovaná vo všetkých šiestich bunkových línií karcinómu žalúdka v porovnaní s normálnou žalúdočnej epitelových buniek GES-1. (Obr. 1 A a B)
Beclin 1 expresie v karcinómu žalúdka tkanivách
Ak chcete zistiť beclin-1 mRNA a expresiu proteínu v žalúdku rakovinových tkanív, 4 spárované žalúdočné rakovinové tkanivá a nerakovinové tkanivá priľahlé k rakovine lézie boli detekované analýzou reverznej transkripcie-PCR a analýzy western blot, oddelene. Bolo zistené, že Beclin-1 vo všetkých štyroch vzorkách tkaniva nádoru mali významne vyššiu expresiu tak na úrovni mRNA a bielkovín, než tie, ktoré sa v normálnej tkanive v blízkosti nádoru z rovnakých pacientov (obr. 1 C a D).
beclin 1 expresie v žalúdku
rakoviny
Ak chcete zistiť, či je beclin-1 by mohla klinicky koreluje s progresiou žalúdočné rakoviny, expresie a subcelulárnu lokalizáciu beclin 1 proteínu bola detekovaná imunohistochemicky v 271 parafínových rakovinou žalúdka tkanív. Špecifické Beclin 1 farbenie sa väčšinou nachádzajú na membránovom-plazme a cytoplazme v rakovinových bunkách, príležitostne jadra. Obrázok 2 ukazuje reprezentatívne príklady Beclin 1 imunobarvení. Z celkového počtu 271 pacientov, 229 (84,5%) bolo Beclin 1 vysokú expresiu nádory.
Pacienti s Beclin 1 nízka expresia rakoviny žalúdka ukázal výrazne kratšia 5-ročnej celkové prežívanie (OS , p = 0,011, obr. 3), a ochorení prežitia bez (DFS, p = 0,010, obr. 4), ako tie, ktoré sa Beclin 1 vysokú expresiu ty. Expresia Beclin 1 je úzko spojená s intravaskulárnej embólia (p = 0,017). Avšak, neexistuje žiadny významný vzťah medzi úrovňou expresie Beclin 1 a veku, pohlavia, miesto, veľkosť nádoru, T, N klasifikácie klasifikácie, alebo patologické fáze pacientov s rakovinou žalúdka (tabuľka 1). Beclin jeden výraz, miesto, intravaskulárnej embólia, patologická klasifikácia T, patologické klasifikácie N a patologická fázy boli nezávislé prognostické faktory v jednorozmerné analýze (dáta nie sú uvedené) .V viac premenných analýzy, Beclin jeden výraz, intravaskulárnej embólia, miesto a patologická fázy boli významným nezávislým prognostický faktor pre dobu prežitia (tabuľka 2).
Diskusia
Autofagie je mechanizmus, self-degradácie a spojená s progresiou nádoru. Beclin 1, cicavčie ortolog kvasinkového Atg6, hrá kľúčovú úlohu v vačkov nukleace procese autofagie [28]. Ide o gén, nevyhnutný pre prvých fázach autofagie [29] - [30].
Táto štúdia má prvýkrát ukázal, Beclin 1 je up-regulovaný tak na úrovni mRNA a bielkovín v šiestich karcinómu žalúdka bunkové línie v porovnaní s tými, ktoré v normálnej žalúdočnej epitelových bunkách GES-1. Tiež ukázal, Beclin 1 expresia je zvýšená u primárnych nádorov žalúdka v porovnaní so štyrmi párovaných vzoriek žalúdočnej rakovinou priliehajúcich k nádorom z týchto pacientov pomocou reverznej transkripcie-PCR a westernovým prenosom. Výsledky sa líšia od tých, ktoré uvádzajú v rakovinových bunkách pečene a nádorových buniek krčka maternice, ktorý ukázal, Beclin 1 expresie výrazne nižšie v porovnaní so zodpovedajúcimi normálnymi tkanivami [31], [32]. Možné explaination je, že beclin-1 expresie v karcinómov žalúdka prispieva k indukcii autophagic bunkovej smrti, čím sa vytvára selektívne tlak potlačiť bunkovú smrť v priebehu vývoja rakoviny [27], [33].
V súčasnej štúdii sme pozorovali, že 229 (84,5%) pacientov malo vysokú expresiu Beclin 1 z 271 pacientov s karcinómom žalúdka, v súlade s nálezom predchádzajúce štúdie dát Ahn et al.Their ukázal, žiadny alebo len veľmi slabý výraz Beclin1 v normálnych slizničných buniek žalúdok imunohistochemicky [27]. Avšak, nemali preskúmať beclin-1 expresie na úrovni mRNA v bunkových líniách, ani skúmať jeho úloha v prognóze.
analyzujú vzťah medzi expresiou beclin-1 a klinické charakteristiky pacientov , Nebol nájdený signifikantná korelácia medzi expresiou beclin-1 a vek, pohlavie, T klasifikácii, N klasifikácie, či etapy pacientov s rakovinou žalúdka. Zaujímavé, v našej súčasnej štúdii, tam bol významný vzťah medzi expresiou beclin-1 a intravaskulárneho embóliu. To naznačuje, že beclin-1 by mohol byť použitý ako marker intravaskulárnej embolem u pacientov s rakovinou žalúdka a pozitívnymi uzlinami. Tieto pozorovania zdôrazňujú dôležitú úlohu beclin-1 v rozvoji rakoviny žalúdka.
Ďalej sme zistili, low beclin-1 expresie bola silne spojená so zníženou prežitia u pacientov s karcinómom žalúdka ( P Pokiaľ je nám známe, táto štúdia je prvou správou, ktorá Beclin 1 mal významne vyššia expresiu v rakovinových bunkách a tkanivách žalúdka ako na mRNA a proteínovej úrovni v porovnaní s ich normálnymi náprotivkami. Navyše sme zistili, vysoká beclin 1 expresie bola spojená s dlhším celkovým prežitím. Obaja jednorozmerné analýzy a multivariačný analýza ukázala Beclin 1 výraz, miesto, intravaskulárnej embóliu a patologická fázy boli nezávislé prognostické faktory. Výsledky silne naznačujú, že Beclin 1 má potenciálnu úlohu pri vzniku nádorov rakoviny žalúdka. Mohlo by to byť sľubnú biomarker a román terapeutickej stratégie pacientom s lymfatických uzlín-pozitívnym karcinómom žalúdka. Sú potrebné aj ďalšie štúdie na objasnenie mechanizmu, ktorým autofagie herec Beclin 1 sa podieľa na rozvoji a progresiu rakoviny žalúdka.
= 0,011) a intravaskulárnu embóliu podmnožinu ( P
= 0,017). V multivariable analýze, Beclin-1 expresie udržal jeho nezávislosť ako prognostický faktor ( P
= 0,044). Tieto výsledky naznačujú sľubná užitočnosť beclin-1 ako prognostický a prežitie indikátora. Tento mechanizmus nie je doposiaľ známy. Alternatívne vysvetlenie pre to môže byť, že beclin-1 expresie v karcinómov žalúdku obmedzuje chromozomálne nestability a znižuje frekvenciu ďalších mutácií [34].
Biologická terapia môže znížiť riziko závažného ochorenia COVID-19
Model novonarodených myší poskytuje vodítka k príčine devastujúcej črevnej choroby u anemických preemií
Stanovenie kapacity neutralizácie kyselín pre OTC antacidá
Strava a výživa ovplyvňujú mikrobiómy v sliznici hrubého čreva
Štúdia opisuje počiatočnú východiskovú databázu zdravých črevných mikrobiómov a profil početnosti
Vykazujú etikety na komerčných výrobkoch z kefíru správne mikrobiálne hladiny?
IBD je oveľa bežnejší, ako sa očakávalo,
a v budúcnosti sa bude len zvyšovať Existuje trikrát viac ľudí s chronickou a oslabujúcou črevnou poruchou nazývanou zápalové ochorenie čriev (IBD), ako sa kedykoľvek predtým myslelo, podľa novej štúd
Liek na chudnutie Wegovy schválený FDA
Americký úrad pre kontrolu potravín a liečiv (FDA) schválil injekciu Wegovy (semaglutid) (2,4 mg jedenkrát týždenne) ako liečbu chronickej regulácie hmotnosti u dospelých s obezitou alebo nadváhou s v
Črevný mikrobióm spojený s problémami správania u detí
Deti s problémami so správaním môžu mať v črevnom mikrobióme rôzne zloženie, pričom rodičia hrajú hlavnú úlohu v tom, aké výrazné boli rozdiely, okrem jedla, ktoré poskytujú, naznačuje nová štúdia.