Ploche ONE: β, β-Dimethylacrylshikonin indukuje Mitochondrie Závisí Apoptóza prostredníctvom EKR v rakovina žalúdka SGC-7901 Cells

abstraktné

β, β-Dimethylacrylshikonin, jedna z aktívnych zložiek v koreňovom extraktov Lithospermum erythrorhizon, vlastniť protinádorovú aktivitu. V tejto štúdii sme diskutovali molekulárne mechanizmy beta, beta-dimethylacrylshikonin v apoptóze SGC-7901 bunky. β, β-Dimethylacrylshikonin znižuje životaschopnosť buniek SGC-7901 buniek od dávky a je závislý na čase a indukované apoptózy buniek. β, liečba β-Dimethylacrylshikonin v SGC-7901 bunkách down-regulovaná expresia XIAP, CIAP-2 a Bcl-2 a up-reguluje expresiu Bak a Bax a spôsobila stratu mitochondriálnej membránový potenciál a uvoľnením cytochrómu c , Navyše, β, β-dimethylacrylshikonin ošetrenie viedlo k aktivácii kaspázy-9, 8 a 3, a štiepenie poly (ADP-ribóza) polymerázy (PARP), ktorá bola zrušená predchádzajúcej liečbe inhibítorom pan-kaspasy Z-VAD-FMK , β, β-Dimethylacrylshikonin indukovanú fosforyláciu extracelulárnej signál regulované Kinase (EKR) v SGC-7901 bunky. U0126, špecifický inhibítor MEK, blokovali aktiváciu EKR tým, beta, beta-dimethylacrylshikonin a zrušilo beta, beta-dimethylacrylshikonin indukovanej apoptózy. Naše výsledky preukázali, že β, β-dimethylacrylshikonin inhibujú rast rakovinových buniek žalúdka SGC-7901 navodením EKR signálne dráhu, a poskytne stopu pre predklinické a klinické hodnotenie, beta β-dimethylacrylshikonin pre liečbu rakoviny žalúdka.

citácie: Shen XJ, Wang HB, Ma XQ, Chen JH (2012) β, β-Dimethylacrylshikonin indukuje Mitochondrie Závisí Apoptóza prostredníctvom EKR u rakoviny žalúdka u ľudí SGC-7901 bunky. PLoS ONE 7 (7): e41773. doi: 10,1371 /journal.pone.0041773

Editor: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, Spojené štáty |

prijatá: 01.03.2012; Prijaté: 25. júna 2012; Uverejnené: 27.července 2012

Copyright: © Shen et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Toto dielo bol podporený dotácií z provincie Zhejiang Natural Science Foundation Číny k X-QM (LY12H28005), a Grantovou agentúrou Zhejiang čínskej lekárskej univerzity na H-BW (2011ZY05). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

karcinóm žalúdka je jedným z agresívnych malígnych nádorov, aj keď s rozvojom rádioterapia, chemoterapia a bioterapie sú závažné nežiaduce účinky sú nevyhnutné [1], a preto účinnejšie protinádorová liečivá s menšími vedľajšími účinkami pri liečbe rakoviny žalúdka sú potrebné.

Lithospermum erythrorhizon je dôležitým čínskej byliny. To má niektoré aktívne zložky: Deoxyshikonin, Isobutyrylshikonin, Acetylshikonin, Isovalerylshikonin, β, β-Dimethylaerylshikonin (obr. 1a) a shikonin [2]. V tradičnej čínskej medicíne, vykazuje viac biologických funkcií, vrátane anti-mikrobiálnych, protizápalové, protinádorové, imunitný reguláciu a anti-HIV vlastnostiam [3] - [6]. Protinádorový účinok shikonin a jeho deriváty boli prvýkrát preukázaná ich činnosti proti rastu nádoru u myšieho sarkómu-180 [7]. Shikonin vykazuje účinok nielen zabíja nádorové bunky priamo, ale aj pomocou inhibície nádorovej angiogenézy [8]. Štúdia ukázala, že indukované apoptózy shikonin do ľudského malígneho melanómu, rakoviny močového mechúra, rakoviny krčka maternice, rakovinu pľúc a rakovinu pečene, a tak ďalej [9] - [13]. Avšak, to má menej vedľajších účinkov a ďalšie ochranné účinky na ľudské normálne bunky [14], [15]. Hsu PC et al ukázala, že shikonin viedlo k bunkovej apoptózy pomocou up-regulácie p27, p53, Bax a down-regulácia Bcl-2 a Bcl-XL v ľudskom karcinómu hrubého čreva a COLO 205 buniek [16]. Nádor invázia inhibovaná shikonin v niektorých nádorových buniek môže cez down-reguláciu NF-kB sprostredkovanej MMP-9 expresie [17]. Shikonin tiež vyvoláva apoptózu prostredníctvom tvorby ROS v hepatocelulárneho karcinómu [12]. Singh F et al tiež zistené, že sa znížil Shikonin fosforylovaných hladiny EGFR, EKR a proteín tyrozínkinázy a zvýšenie intracelulárnej hladiny proteínov apoptózy súvisiace, čo spôsobilo epidermoidný karcinóm bunky podliehajú apoptóze [18].

Nedávne dôkazy ukázali, že β, β-dimethylacrylshikonin mal významný protinádorový účinok na hepatocelulárneho karcinómu aktiváciou kaspázy-3 [19]. Avšak, takýto účinok beta, beta-dimethylacrylshikonin na ľudských buniek karcinómu žalúdka nebola hlásená a molekulárne mechanizmy, stále nie sú dobre známe. Tak, v tejto štúdii, budeme diskutovať vplyv beta, beta-dimethylacrylshikonin na ľudské bunky rakoviny žalúdka SGC-7901 a jeho príbuzných signalizáciou pre lepšie pochopenie mechanizmu beta, β-dimethylacrylshikonin na rakovinu žalúdka.

materiály a metódy

materiály a činidlá

SGC-7901 bunky boli zakúpené z čínskej akadémie vied Cell Bank of Type Culture Collection (Shanghai, Čína). β, β-Dimethylacrylshikonin bol zakúpený od firmy Tokyo chemického priemyslu (Tokyo, Japonsko). MTT a DAPI boli zakúpené od firmy Calbiochem (San Diego, CA, USA). U0126 bol zakúpený od firmy Cell Signaling (Boston, MA, USA). inhibítor Pan-kaspázy (Z-VAD-FMK) bol zakúpený od Beyotime Institute of Biotechnology (Shanghai, Čína). Protilátka pre cytochróm c bol zakúpený od Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Protilátky proti EKR, fosfo-EKR, Bcl-2, Bcl-XL, XIAP, CIAP-2, survivn, Bax, Bak, štiepi kaspázy-9, štiepená kaspázy-3, štiepená PARP a p-aktínu boli zakúpené od Cell Signaling ( boston, MA, USA). Kit FITC-annexin V Apoptóza detekcie bol zakúpený od firmy Becton Dickinson (San Diego, CA, USA).

Bunková kultúra a teste proliferácie buniek

SGC-7901 bunky boli pestované v médiu RPMI 1640 s 10% fetálne hovädzie sérum (Hyclone, UT), a udržiava sa pri teplote 37 ° C vo zvlhčenej atmosfére 5% CO _{2. Potom boli bunky schovať na 96-jamkové misky na finálnu koncentráciu 5 x 10 ^{3 buniek /jamku a inkubované v médiu RPMI 1640 obsahujúcom 10% FCS po dobu 24 hodín, potom boli bunky ošetrené s uvedenou koncentráciou β, β-dimethylacrylshikonin po dobu 24 hodín a 48 hodín. Bolo médium odstránené a čerstvé médium sa pridalo do každej jamky sa spolu s 20 ul roztoku MTT (5 mg /ml). Po 4 hodinách inkubácie sa 150 ul dimetylsulfoxidu sa pridá do každej jamky. Doštičky boli odpočítané pri vlnovej dĺžke 570 nm za použitia Varioskan Flash MultiMode Reader (Thermo Scientific, USA). Štyri zdvojiť jamky bolo použitých pre každé ošetrenie a experimenty boli opakované trikrát.}}

morfologické zmeny

SGC-7901 bunky boli umiestnené do jamky šiestich jamkami. Po 24 hodinách sa bunkové kultúry, ktoré boli ošetrené s beta, beta-dimethylacrylshikonin za stanovených časových obdobiach. Bunková morfológia bola pozorovaná za použitia inverzného mikroskopu. (Model IX70, Olympus, Tokyo, Japonsko)

DAPI (4 ', 6-diamidínov-2-fenylindolu) farbenie

SGC-7901 bunky boli umiestnené do jamky šiestich jamkami s. Po 24 hodinách sa bunkové kultúry, ktoré boli ošetrené s beta, beta-dimethylacrylshikonin na uvedených časových obdobiach, potom boli bunky fixované v chladnom acetóne po dobu 30 minút, a inkubujú sa s DAPI (1 mg /ml) po dobu 30 min. Proapoptotický jadra charakterizovať ako intenzívne zafarbia boli detekované pomocou fluorescenčnej mikroskopie. (Model IX71, Olympus, Tokyo, Japonsko)

annexinu /PI testy pre apoptózy

annexinu /PI testy, články boli zafarbené AnnexinV-FITC a PI, a vyhodnocované apoptózy prietokovou cytometriou podľa protokolu mannufacturer je (BD Pharmingen, San Diego, CA, USA). Stručne povedané, 1 x 10 ^{5 boli bunky dvakrát premyté PBS, a farbené s 5 ul AnnexinV-FITC a PI 5 ul v 500 ul väzbového pufru počas 15 minút pri teplote miestnosti v tme. Že apoptotické bunky boli stanovené za použitia BD FACS Diva softvéru (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ). Annexin V sfarbenie slúži ako meradlo fosfatidylserínu externalizácie a buniek, ktoré sú annexin V + /PI -. Predstavujú zavčas apoptotických buniek}

Meranie potenciálu mitochondriálnej membrány

Cells ( 5 x 10 ^{5 buniek /ml) boli ošetrené s alebo bez p, β-dimethylacrylshikonin (10 pmol /l) počas 24 hodín a zafarbené JC-1 (BD MitoScreen JC-1 Kit, Becton Dickinson, USA) po dobu 15 min pri 37 ° C. Potenciálu mitochondriálnej membrány bola detekovaná prietokovou cytometriou (FACSCanto II, Becton Dickinson, USA).}

Western Bloting analýza

Bunky boli ošetrené s uvedenou koncentráciou beta, beta-dimethylacrylshikonin pre uvedenú dobu v médiu RPMI 1640 s 10% FCS. Bunky boli zhromaždené v ľadovo chladnom PBS, a bunkové extrakty boli pripravené v RIPA pufri s inhibítormi proteinázy kokteilom z Calbiochem (San Diego, CA). Koncentrácia proteínu v bunkových lyzátov bola stanovená a varí sa gél-nanášacieho pufru počas 10 minút pri 100 ° C. Vzorky obsahujúce 30 ug celkového proteínu boli podrobené elektroforéze na 10% SDS-polyakrylamidových géloch a prenesené na PVDF membránu (Millipore, Temecula, CA). Po prenose sa membrána bola blokovaná v TBST (TBS s obsahom 0,1% Tween 20) obsahujúcim 5% odstredené mlieko po dobu 2 hodín, nasledovala inkubácia cez noc pri 4 ° C s príslušnou primárnej protilátky. Po premytí trikrát TBST, boli membrány inkubované po dobu 2 hodín pri teplote 37 ° C s 1: 5000 chrenovej peroxidázy konjugovanej so zodpovedajúcimi sekundárnymi protilátkami. Nakoniec sa membrány boli vizualizované za použitia rozšírenej detekcie chemiluminiscencie systém (Immun-Star WesternC Kit, Bio-Rad, USA).

Imunofluorescenčný farbenie

Immunofluorescene farbenie bol použitý na analýzu subcelulárnu distribúcie cytochrómu c v SGC-7901 buniek indukovanej beta, beta-dimethylacrylshikonin. Buniek kultivovaných na sterilných sklenených coverlips boli fixované v chladnom acetóne po dobu 10 minút. Po permeabilizovány 0,3% Triton X-100 po dobu 20 minút pri izbovej teplote boli bunky blokované v 3% hovädzieho sérového albumínu po dobu 30 minút a inkubované cez noc pri 4 ° C s anti-cytochróm c protilátky (1:30). Po premytí trikrát v PBS, SGC-7901 bunky boli značené s Alexa Fluór 488-konjugovanou sekundárnou protilátkou. DAPI bol následne pridaný k jadrovej farbenie. Mikroskopická analýza bola vykonaná pomocou fluorescenčnej mikroskopie (model IX71; Olympus, Tokyo, Japonsko).

Štatistická analýza

Uvedené údaje majú priemer ± štandardná odchýlka (SD) z troch nezávislých experimentov. Ktoré boli hodnotené jednosmernou analýzou rozptylu (ANOVA). Významné rozdiely boli stanovené pri p. ≪ 0,05

Výsledky

β, β-Dimethylacrylshikonin inhibuje životaschopnosť SGC-7901 buniek

Na určenie, cytotoxický účinok beta, β-dimethylacrylshikonin na rakovinových bunkách žalúdka. SGC-7901 bunky boli ošetrené 2,5, 5, 7,5, 10 umol /l beta, beta-dimethylacrylshikonin po dobu 24 hodín a 48 hodín, zníženej životaschopnosti buniek ošetrených beta, beta-dimethylacrylshikonin bol 92,41 ± 6,06%, 76,49 ± 3,18%, 67,19 ± 1,82%, a 61,76 ± 0,18%, respektíve na 24 hodín v porovnaní s bunkami ošetrenými vehikulom (obr. 1B). Pre 48 h ošetrenie, životaschopnosť buniek bola 52,03 ± 9,45%, 38,99 ± 1,43%, 30,70 ± 1,58%, a 27,4 ± 0,31% (viď obr. 1B). Polovica maximálnej inhibičnej koncentrácie (IC _{50) z beta, β-dimethylacrylshikonin pre SGC-7901 buniek bolo 11.04 uM a 2,89 uM po 24 h a 48 h, resp.}

β, β-Dimethylacrylshikonin indukuje SGC -7901 buniek apoptózu

bunky SGC-7901 boli najprv ošetrené beta, beta-dimethylacrylshikonin, výsledky ukázali, že bunky podstúpila označené morfologických zmien po spracovaní s 10 pmol /l beta, beta-dimethylacrylshikonin v porovnaní s neošetrenou kontrolou pre 24 h. V prítomnosti p, β-dimethylacrylshikonin, SGC-7901 znižuje počet buniek a bunky sa stali koleso a malé vo forme, a odpojenie od dosky v porovnaní s negatívnou kontrolnou skupinou (obr. 2A). β, β-dimethylacrylshikonin tiež spôsobovať nukleárne kondenzácie s intenzívnym farbením DAPI v porovnaní s nukleárnej kontrolných buniek SGC-7901 po dobu 24 h (Obr. 2B).

Na určenie, či cytotoxity z p, β-dimethylacrylshikonin zúčastňuje apoptózy sme hodnotili proapoptotický účinok beta, beta-dimethylacrylshikonin v SGC-7901 buniek pomocou prietokovej cytometrie na annexin v a propidium jodidu (PI) farbenie. Percento skorých apoptotických buniek (annexin V ^{+ /PI -) bol 1,6%, 7,2%, 18,1%, 24,3% a 24,4% v závislosti na vozidle, 2,5, 5, 7,5 a 10 pmol /l β, β-dimethylacrylshikonin, respektíve po dobu 24 hodín (obr. 2c). Je zaujímavé, že Neskoré apoptotické bunky (annexin V + /PI +) boli významne zvýšil v SGC-7901 bunkách (29,7% 7,5 umol /l a 33,6% s 10 pmol /l p, β-dimethylacrylshikonin liečby ) (obr. 2C).}

β, β-dimethylacrylshikonin indukuje mitochondriálnej udalosti spojené s apoptózou v SGC-7901 buniek

rodiny Bcl-2 proteíny zahŕňajú pre-apoptotické proteíny (Bax, Bak a bid) a anti-apoptotické proteíny (Bcl-2, Bcl-XL, CIAP-2, XIAP a survivin). Ktoré môžu aktivovať alebo inhibovať uvoľňovanie nadväzujúcich faktorov, ktoré vedú k aktivácii kaspázy-3 a PARP v prevedení apoptózy [20]. Aby bolo možné odhaliť proteínov apoptózy súvisiace, pre-apoptotické proteíny (Bax, Bak) a anti-apoptických proteínov (XIAP, CIAP-2, Bcl-2, Bcl-xL, survivin) boli detekované westernovým prenosom po SGC-7901 bunky boli ošetrené rôznymi koncentráciami beta, beta-dimethylacrylshikonin (0, 2,5, 5, 7,5 a 10 umol /l) počas 24 hodín. Výsledky ukázali, že β, β-dimethylacrylshikonin znižujú expresiu XIAP, CIAP-2, Bcl-2 (Obr. 3A). Avšak, down-regulácia XIAP a Bcl-2 boli menej výrazné, zatiaľ čo down-regulácia CIAP-2 bola dosť dramatické a závislé od dávky. Tam bol žiadna významná zmena Bcl-XL a survivn v SGC-7901 buniek. Či p, β-dimethylacrylshikonin môžu modulovať expresiu pre-apoptotických proteínov (Bax, Bak), bola tiež skúmaná. Zistili sme, že β, β-dimethylacrylshikonin zvýšil expresiu Bak v spôsobom závislým od dávky, ale mala malý účinok na Bax (obr. 3B).

kaspázy rodiny proteínov sú kritické enzýmy vykonať apoptózu. Medzi členmi rodiny kaspázy, kaspázy-3 je kľúčovým kat pre apoptózy v cicavčích bunkách [21]. To môže byť aktivovaný prostredníctvom smrti receptorom sprostredkovanej vonkajšieho kaspázy-8 dráhy a mitochondrie závislé-kaspázy-9 vnútorný systém [22], [23]. S cieľom ďalšieho pochopenie molekulárnej mechanizmus apoptózy, SGC-7901 bunky boli ošetrené s beta, beta-dimethylacrylshikonin a detekované Western blot analýzy pre expresné zmenu kaspázy-3, kaspázy-8 a kaspázy-9, výsledky ukázali výška závislá od dávky štiepené kaspázy-3, štiepená kaspázy-8 štiepia a kaspázy-9 v p, β-dimethylacrylshikonin ošetrené bunky. Štiepenie PARP, ďalší známy charakteristické pre apoptózu, bola tiež nájdená v p, liečených β-dimethylacrylshikonin buniek (obr. 3C). Mitochondriálna dysfunkcia indukovanej apoptózy, ktorá je často dôsledkom poklesu mitochondriálneho membránového potenciálu. Bolo preukázané, že ústredné pre apoptotické dráhy. SGC-7901 bunky boli ošetrené s alebo bez P, β-dimethylacrylshikonin (10 pmol /l) po dobu 24 hodín, výsledky ukázali, mitochondrie membránový potenciál sa znížil z 98,6% na 56,9% po β, β-dimethylacrylshikonin bola spracovaná tak, aby na SGC- 7901 buniek (obr. 3D). Ďalej sme skúmali distribúciu a subcelulárnu lokalizáciu cytochrómu c zistiť, či je dráha mitochondrie sa podieľa na p, β-dimethylacrylshikonin indukovanej apoptózy. Potom, čo bola SGC-7901 bunky ošetrené p, β-dimethylacrylshikonin (10 pmol /l) po dobu 24 hodín, distribúcia cytochrómu c bolo vizualizované s konfokálním laserovým mikroskopom, ošetrené β, β-dimethylacrylshikonin bunky vykazovali neostré morfológiu (Obr. 3E), na rozdiel od samozrejme číry vzhľad v kontrolných bunkách, čo naznačuje translokáciu cytochrómu c z mitochondrií do cytoplazmy v beta, β-dimethylacrylshikonin ošetrené bunky.

pre ďalšie stanovenie úlohy aktivácie kaspázy v β, β-dimethylacrylshikonin- indukovanú apoptózu, sme liečili SGC-7901 buniek s inhibítorom pan-kaspasy Z-VAD-FMK (10 pmol /l) pred beta, beta-dimethylacrylshikonin liečby. Inhibítor kaspázy pán-Z-VAD-FMK predčistenia znížil expresiu štiepené kaspázy-3, štiepená PARP a zníženie beta, β-dimethylacrylshikonin indukovanej apoptózy (Obr 3F &Co .. G). Tieto dáta ukazujú, že mitochondriálnej sprostredkovaná kaspázy kaskáda systém hrá veľmi dôležitú úlohu v p, β-dimethylacrylshikonin indukovanú apoptózu.

β, β-Dimethylacrylshikonin vyvoláva trvalé aktivácia EKR v SGC-7901 buniek

bolo ukázané, že MAPK signalizácia zapojený do niekoľkých udalostí bunkových namáhanie a podnety, vyvolané apoptózu buniek [24], [25]. Preto sme sa zaoberali aktivácii EKR, JNK a p38 po beta, beta-dimethylacrylshikonin liečby. Ako je znázornené na Obr. 4A & B, úrovne fosforylácie EKR a JNK boli zrejme zvýšená v reakcii na p, p-dimethylacrylshikonin liečbe po dobu 2 hodín, a úrovňou fosforylácie vykazovali spôsobom závislým od dávky. Okrem toho, že úrovne fosforylácie EKR posledných dvadsať štyri hodín. Avšak, žiadne významné zmeny úrovne fosforylácie p38 sa pozorovala po beta, β-dimethylacrylshikonin liečby (obr. 4C). Tieto výsledky naznačujú, že trvalá aktivácia EQF sa podieľa na p, β-dimethylacrylshikonin-indukovanej apoptózy v SGC-7901 bunky.

EKR signálne dráhy sa podieľa na p, β-dimethylacrylshikonin indukovanej apoptózy v SGC-7901 bunky

preskúmané či β, β-dimethylacrylshikonin vyvolané trvalé aktivácia EKR signálnej dráhy hrá úlohu v apoptóze. Ako je znázornené na Obr. 5A & B, blot test Western ukázalo, že U0126 (špecifický inhibítor MEK) inhibuje trvalú aktiváciu EKR a štiepenie kaspázy-3, PARP v beta, beta-dimethylacrylshikonin ošetrenie, zatiaľ čo inhibítor pan-kaspázy Z-VAD-FMK nemal žiadny účinok na beta, β-dimethylacrylshikonin indukovanej aktivácie EKR (obr. 5D). Okrem toho sa zníži U0126 beta, β-dimethylacrylshikonin-indukovanú apoptózu v SGC-7901 bunky (obr. 5c). Tieto výsledky ukázali, že β, β-dimethylacrylshikonin indukovanú apoptózu v SGC-7901 bunky sú sprostredkované trvalou aktivácii EKR signálnej dráhy.

Diskusia

deriváty Shikonin sú aktívne zložky izolované z čínskej bylinnej Lithospermum erythrorhizon [5]. Tieto zlúčeniny sú sľubné kandidátov liečiv, ako boli hlásené mať viac protirakovinové účinky in vivo a in vitro, [5], [26]. Medzi zložiek Lithospermum erythrorhizon, β, β-Dimethylaerylshikonin má významné protinádorové účinky v porovnaní s inými účinnými látkami [27]. S ohľadom na aktivitu proti rakovine, shikonin stvárnené apoptózu aktiváciou kaspázy-závislé na dráhe bol nájdený v mnohých malígnych nádorov. V tejto štúdii sme skúmali účinok beta, beta-dimethylacrylshikonin na ľudských rakovinových buniek žalúdočnej SGC-7901. Naše výsledky ukazujú, že liečba SGC-7901 buniek beta, β-dimethylacrylshikonin vykazovali výrazný cytotoxický účinok proti SGC-7901 buniek na dávke a čase spôsobom závislé, a p, β-dimethylacrylshikonin indukovanú apoptózu v SGC-7901 buniek bolo preukázané zvýšená zavčas apoptotické bunky (annexinu ^{+ /PI -). a neskoro apoptotické bunky (annexin V + /PI +)}

pomer anti-a proapoptotický expresie proteínu, ako je Bcl-2 /Bax, je rozhodujúci pre indukciu apoptózy, a rozhodne citlivosti buniek k podliehajú apoptóze [28]. Mitochondrie hrajú dôležitú úlohu v prenose signálu apoptózy [29]. Translocalization apoptotických proteínov z cytosolu do mitochondrií vedie k uvoľneniu cytochrómu c a druhý mitochondriálnej odvodené aktivátor kaspázy poklesom mitochondriálneho membránového potenciálu [30], [31]. Shikonin Bolo popísané, že indukuje apoptózu prostredníctvom mitochondrie dráhy v bunkách HepG2 [32]. V tejto štúdii sme ukázali, že β, β-dimethylacrylshikonin down-regulovaná expresia XIAP, CIAP-2 a Bcl-2 a up-regulované expresie Bak a Bax, a spôsobil stratu potenciálu mitochondriálnej membrány a uvoľnenie cytochrómu c v SGC-7901 buniek, v súlade s mitochondrie závislé apoptózy. Pozorovanie beta, β-dimethylacrylshikonin sprostredkovanú aktiváciu kaspázy-9, kaspázy-3 a následné štiepenie PARP, a tiež za následok, že pán-kaspázy inhibítor Z-VAD-FMK znížená β, β-dimethylacrylshikonin indukovanú apoptózu v SGC-7901 buniek, čo naznačuje, že mitochondriálnej sprostredkované kaspázy kaskády systém hrá kľúčovú úlohu v p, β-dimethylacrylshikonin-indukovanej apoptózy. Dohromady, naše výsledky ukazujú, že β, β-dimethylacrylshikonin reguluje hladiny expresie proteínov apoptózy súvisiace, spôsobuje uvoľňovanie cytochrómu c a trigs kaspasy závislú bunkovú proapoptotický smrť.

mitogénom aktivovanej proteínkinázy (MAPK) regulujú rozmanité bunkovej programy vrátane embryogenézy, proliferácie, diferenciácie a apoptózy [33]. Rodina MAPK proteíny sú zložené z troch proteínkinázy: ERK1 /2 (extracelulárnej signál regulované kinázy 1 a 2), JNK (c-Jun N-terminálne kinázy) a P38 [34], [35]. Všeobecne platí, že aktivácia EQF prechodné vedie k bunkovej proliferácii, ale trvalé aktivácia EKR je assoctiated s diferenciáciou [36]. Objavujúce sa dôkazy naznačujú, že aktivácia EQF prispieva k apoptóze. Jeong et al. ukázal, že kaempferol spôsobené rakovinou bunku podstúpiť apoptózu prostredníctvom EKR závislé dráhy [21], [37], [38]. V poslednej dobe bolo publikované, že icaritin vyvoláva inhibíciu rastu a apoptózy v ľudských PSMCs cez EKR signálnej dráhy [39]. Li et al. preukázané, že aktivácia Raf /MEK /ERK signálnej dráhy hrá rozhodujúcu úlohu v vápnika indukovanej apoptózy šošoviek epitelových buniek [40]. Tu sme tiež zistili, že trvalá aktivácia EQF sa podieľa na p, β-dimethylacrylshikonin-indukovanú inhibíciu rastu a apoptózy v SGC-7901 bunky. U0126, špecifický inhibítor MEK (MAPK /ERK kinázy), účinne blokovaný β, β-dimethylacrylshikonin indukovanú EKR aktiváciu a stlmené β, β-dimethylacrylshikonin indukovanú apoptosu, čo naznačuje, že pre-apoptotické účinky beta, beta-dimethylacrylshikonin v SGC-7901 bunky sú sprostredkované trvalou aktiváciu ERK1 /2 signálne dráhe.

na záver, sme zistili, že β, β-dimethylacrylshikonin inhiboval rast buniek a indukovanú apoptózu v SGC-7901 bunky. Tiež sme študovali základných mechanizmov zapojených do beta, β-dimethylacrylshikonin indukovanej apoptózy. Naše výsledky ukazujú, že β, β-dimethylacrylshikonin indukovanú apoptózu spočíva v redukcii XIAP, CIAP-2 a Bcl-2 expresie proteínu a indukciu expresie Bak a Bax proteín, a spôsobil stratu potenciálu mitochondriálnej membrány a uvoľnením cytochrómu c v SGC-7901 buniek. Naše výsledky tiež ukázali, že β, β-dimethylacrylshikonin indukovanú apoptózu zahŕňa aktiváciu kaspázy-3, kaspázy-8 a kaspázy-9 a štiepenie PARP. Okrem toho, EKR signálne dráhy tiež sa zúčastnil p, β-dimethylacrylshikonin-indukovanej apoptózy. Naše výsledky ukazujú, že β, β-dimethylacrylshikonin by mohli byť vyvinuté ako potenciálneho protirakovinového lieku proti ľudskému rakoviny žalúdka.

Poďakovanie

Radi by sme poďakovali H-BW pre svoju technickú pomoc a my tiež ďakujeme X -QM a J-HC za užitočné komentáre k tomuto článku.

• Ploche ONE: Plasma microRNA MIR-223, mier-21 a mier-218, ako nových potenciálnych biomarkerov žalúdočné detekciu karcinómu
• Ploche ONE: Asociácie medzi jednotlivými SNP alebo haplotypu Matrix metaloproteinasy 1 a rakovinou žalúdka vnímavosť, vývoj a prognóza