Stomach Health > žalúdok zdravie >  > Gastric Cancer > žalúdočné Cancer

Ploche ONE: Analýza Met expresie mRNA v karcinómov žalúdku Použitie RNA in situ hybridizácia test: jeho klinický význam a porovnanie s imunohistochemické a Silver in situ Hybridization

abstraktné

Skúmali sme sa stretol
mRNA stav expresie pomocou RNA in situ hybridizácia (ISH) techniky v primárnych a metastatických lézií 535 chirurgicky po resekcii žalúdka, karcinóm (GC) prípadoch. Porovnávali sme výsledky s tými, imunohistochémia a striebra in situ hybridizácia, a skúmali súvislosť s patologickým vlastnosťami a prognózu. Medzi 535 primárnej GC, 391 (73,1%) boli hodnotené 0, 87 (16,3%) boli hodnotené 1, 38 (7,1%) boli hodnotené 2, 12 (2,2%) boli hodnotené 3 a 7 (1,3%) bola hodnotená 4 od RNA ISH. High sa stretol
expresie mRNA (skóre ≥3) bol spojený s lymfatických uzlín ( P
= 0,014), vzdialených metastáz ( P
= 0,001) a vyššia TNM štádium ( P Hotel < 0,001). sa stretol
expresia mRNA korelovala s expresiou proteínov (r = 0,398; P Hotel < 0,001) a počet kópií génu (r = 0,345; P Hotel <. 001). Pacienti nezaťažovať sa stretol
mRNA v primárnych alebo metastatických lézií mal kratšiu prežitia než tí, ukazujúci nízku sa stretol
mRNA (primárnych nádorov, P
= 0,002; metastatické lymfatické uzliny, P Hotel < 0,001). Pacienti s pozitívnym premenu sa stretol
stavu mRNA v metastatické lymfatické uzliny mal kratšiu prežitia ako pacienti bez konverzie ( P
= 0,011). Analýza s mnohými premennými preukázala, že high sa stretol
mRNA expresie v metastatické lymfatické uzliny bol nezávislý prognostický faktor pre celkové prežívanie ( P
= .007). Preto sa táto štúdia ukazuje, že sa stretol
mRNA expresie hodnotená RNA ISH by mohla byť užitočná ako potenciálny ukazovateľ na identifikáciu sa stretol
onkogén-závislý GC

Citácia :. Choi J Lee HE, Kim MA, Jang BG, Lee HS, Kim WH (2014) Analýza sa stretol
mRNA Expresia v karcinómov žalúdku Použitie RNA in situ hybridizácia test: jeho klinický význam a porovnanie s imunohistochémia a Silver in situ hybridizácia. PLoS ONE 9 (11): e111658. doi: 10,1371 /journal.pone.0111658

Editor: Svetlana Pack, CCR, National Cancer Institute, NIH, Spojené štáty |

prijatá: 11.03.2014; Prijaté: 06.10.2014; Uverejnené: 03.11.2014

Copyright: © 2014 Choi et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Toto dielo bol podporený National Research Foundation programu Kórea (NRF) A3 Foresight (http://www.nrf.re.kr). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

v poslednom desaťročí, receptor tyrozín kinázy (RTK) dráhy sa ukázala ako atraktívna liekovej ciele pre protinádorovej terapii [1], a MET dráha je jeden z týchto sľubných cieľov. MET
je preto-onkogén nachádza v 7q31 lokuse a kóduje RTK pre hepatocytov rastový faktor (HGF) [2], [3]. Tesné regulácia dráhy HGF /THP, ktorá je pozorovaná v oblasti vývoja a regenerácie je stratený v rakovine, a táto deregulácia dochádza prostredníctvom rôznych mechanizmov [1]. Nenormálne aktivácia MET hrá dôležitú úlohu v nádorových buniek prežitie, rastu, angiogenézy, metastázy a v rôznych rakovín vrátane rakoviny pľúc, prsníka, obličiek a nádorových ochorení gastrointestinálneho traktu [4]. Avšak, aj keď stratifikácia pre pacienta podľa THP, expresiou alebo aktivitou je dôležitá pre terapeutický úspech metódy pre posúdenie úrovne Met expresiou alebo aktivitou neboli stanovené [4].

V prípade karcinómu žalúdka (GC), aberantne MET aktivácia bola myšlienka byť príbuzný génu liekovej efektom [5], a sa stretol
amplifikácie génu (GA) alebo proteín nadmerná expresia bolo spojené s agresívnymi vlastnosťami nádorových a /alebo horší klinický výsledok [6] - [14]. Okrem toho sa stretol
-amplified alebo -overexpressed GC ukázala reakcia na liečbu s niekoľkými inhibítormi HGF /THP, signálne dráhy v predklinických štúdiách [15] a I. fázy klinických skúšok [12], [16]. Z tohto dôvodu, inhibícia MET má potenciál ako ďalšie úspešné liečebnej stratégie nasledujúce ľudský receptor epidermálneho rastového faktora 2 (HER2) -targeted terapie u pokročilého GC. Avšak, predchádzajúce štúdie používajú rôzne metódy pre identifikáciu MET-pozitívne GC a ukázali, rozdiel v prevalencii MET nadmernej expresie alebo amplifikácie: MET nadmerná expresia v rozmedzí 18% až 73,7% v štúdiách s použitím imunohistochémia (IHC) [7] - [9], [13], [14], [17], sa stretol
počet kópií génu (GCN) zisk pohyboval v rozmedzí 10% až 21,2% v štúdiách s použitím kvantitatívneho real-time PCR (qPCR) [10], [ ,,,0],11], a sa stretol
GA sa pohybovali 2% až 3,9% v štúdiách s použitím fluorescenčnej in situ hybridizácia (FISH) [12], [18] alebo striebornej in situ hybridizácia (Sish) [13]. Z týchto metód, IHC je široko používaný v klinickej praxi a s najväčšou pravdepodobnosťou skríningové metódy pre detekciu MET-pozitívne GC. Stále je však potrebný ďalší prieskum nájsť prediktívne biomarker alebo metodika testu inhibícia MET terapiu.

V tejto štúdii sme vykonali RNA in situ hybridizácia (ISH) testu pomocou spárovaná DNA oligonukleotidové sondy a predzosilňovača zosilňovač -label sondy pre vizualizáciu [19]. Táto metóda používa formalínu fixované, parafínové (FFPE) tkaniva a umožňuje single-molekula vizualizáciu pod jasnom poli mikroskopu. V našej predchádzajúcej štúdii sme preukázali, že HER2
mRNA expresie hodnotená RNA ISH bol dobre koreluje s nadmernou expresiou proteínov a GA hodnotený IHC a ryby vo 211 prípadoch GC [20]. Tiež sme ukázali vzájomný vzťah medzi MET
GCN a expresiu proteínu v predchádzajúcej štúdii [13]. Tu sme hodnotili sa stretol
mRNA expresie metódou RNA ISH, a porovnal výsledky s tými IHC a Sish vo veľkých sérií GC. Okrem toho patologickým parametre a klinické výsledky pacientov GC podľa sa stretol
mRNA status výraz boli vyhodnotené.

materiáloch a metódach

Pacienti a tkanivové vzorky

Zhromaždili sme vzorky archívne tkanive pacientov, ktorí GC postupne prekonal gastrektómia na Seoul National University Hospital, Soul, Kórea, od januára 2004 do decembra 2005. a konečne, 535 vzoriek primárneho GC a 199 vzoriek simultánneho regionálneho metastatické lymfatické uzliny (LN) z 535 pacientov bolo k dispozícii pre túto štúdiu. K patologickým charakteristiky pacientov boli skúmané kontrolou lekárskej grafy a patologické záznamy (tabuľka 1). TNM etapa bola klasifikovaná podľa systému spoločného výboru amerického o rakovine Staging Manual, 7 ročníka. Klinické výsledky boli sledované až od dňa, kedy operáciu až do smrti alebo 60 mesiacov.

Všetky vzorky tkaniva boli fixované v 10% pufrovanom formalínu 24-48 hodín a potom vložený do parafínu. Jadrové tkaniva (s priemerom 2 mm) boli nadobudnuté za použitia trepanie prístroja (Superbiochips Laboratories, Soul, Kórea). Pre primárne GC, bol vybraný invázia prednej každého primárneho nádoru. Metastatické LNS boli podrobené poli tkanív, ale prípady s micrometastasis boli vylúčené. Celkom 22 tkanivo microarray bloky, ktoré obsahovali až 60 jadier boli postavené.

etické oznámení

Všetky ľudské vzorky boli získané počas liečebného zákroku. Účastníci neposkytla písomný súhlas s účasťou v tejto štúdii. Retrospektívna štúdia bola vykonaná za použitia vzoriek cez políc po nich stanovená diagnóza, a všetky vzorky boli anonymné pred začatím štúdie. Naša IRB (Seoul National University Hospital) schválil túto retrospektívnu štúdiu za stavu anonymizácie (Referencie: H-1006-035-320).

RNA ISH

pre detekciu in situ o THZ
mRNA, test 2,0 súprava RNAscope FFPE (Advanced Cell Diagnostics, Hayward, CA, USA) bol použitý podľa návodu výrobcu. Stručne, 2 až 3 um hrubé FFPE tkanivové rezy boli zbavené parafínu, vyhrievaný, spracuje proteázou, a hybridizována so sondou pri teplote 40 ° C po dobu 2 hodín (s referenčnou sekvenciou, NM_001127500; sonda regiónu, 1236-2257). Po premytí a zosilnenie, 3, 3'-Diaminobenzidine bol pridaný na detekciu cieľovej RNA. Jadrá bola kontrastne hematoxylínom. Pozitívne farbenie bolo indikované hnedé bodkovité bodky v jadre a /alebo cytoplazme. sa stretol
expresné hladiny mRNA boli rozdelené do 5 stupňov podľa bodovacieho pokynu výrobcu: skóre 0, bez škvŕn alebo < 1 bod za bunke; strelí 1, 1-3 bodov na bunku (viditeľné pri 20-40 ×); skóre 2, 4-10 bodov na bunku a žiadny alebo len veľmi málo bodových zhlukov (viditeľné pri 20-40 ×); 3 body, > 10 bodov na jednu bunku a < 10% pozitívnych bunky majú dot klastrov (viditeľný pri teplote 20 ×); skóre 4, > 10 bodov na jednu bunku a > 10% pozitívnych bunky majú dot klastrov (viditeľný pri teplote 20 ×) (obrázok 1). Sondy pre UBC
(ubikvitin C) a dapB
(bakteriálny gén) boli použité ako pozitívne a negatívne kontroly, resp. Vzorky boli považované za primerané, ak boli UBC
mRNA signály ľahko viditeľné pod 10x objektívom a dapB
signál nebolo vidieť.

IHC a Sish

Imunohistochemické farbenie pre THP bola vykonaná s anti-totálnej MET (SP44) králičích monoklonálnych protilátok (primárny Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, USA). Automatický immunostainer (referenčný XT, Ventana Medical Systems) bol použitý podľa návodu výrobcu. MET imunologické bola hodnotená s pokynmi HercepTest mení na GC (DAKO, Glostrup, Dánsko): Výsledok 0, žiadna membránové farbenie alebo membránové farbenie v < 10% nádorových buniek; skóre 1, Slabé /ťažko pozorovateľné sfarbenie membrány čiastočné v > 10% nádorových buniek; skóre 2, slabý až stredne farbenie celej membrány v > 10% nádorových buniek; 3 body, silné sfarbenie celej membrány v >. 10% nádorových buniek (obrázok 2)

Dual-color Sish test bol vykonaný s informujú o THP sondy DNA, a informovať chromozómu 7 sondu (Ventana Medical Systems) na Ventana Benchmark XT nasledujúcich protokolov výrobcu. Signály boli vyčíslené na 40 nádorových jadra na jadro a sa stretol
stav gén bol klasifikovaný do 6 skupín pomocou University of Colorado Cancer Center kritériá epidermálneho rastového faktora receptor génu [21] (obrázok 2).

Štatistická analýza

χ 2 testu alebo Fisherov presný test bol použitý na testovanie súvislosť medzi stavom stretol a patologickým faktorov. Študent je t
-test bol použitý k porovnaniu prostriedky spojitých premenných. Korelácia testu Oštepár bol použitý, aby posúdila vzťahy medzi RNA ISH výsledky a IHC alebo výsledkov Sish. Spôsob podľa Kaplan-Meiera bol použitý k odhadu celkového prežívania (OS), a OS rozdiely medzi skupinami s rôznym THP boli porovnané pomocou log-rank testu. Viacnásobnej analýzy prežitia sa vykonáva za použitia Cox proporcionálneho rizika pomer modelu. Analýza dát bola vykonaná pomocou SPSS verzia 20.0 (SPSS, Chicago, IL, USA), a výsledky boli považované za významné pri P
. ≪ 0,05

Výsledky

1. sa stretol
stav mRNA hodnotená RNA ISH

535 primárnych nádorov, 391 (73,1%), 87 (16,3%), 38 (7,1%), 12 (2,2%) a 7 ( 1,3%) ukázala, RNA ISH skóre 0, 1, 2, 3, a 4, v uvedenom poradí. Pri porovnaní výsledkov RNA ISH s patologickým dát vrátane prežitie, a analyzované výsledky RNA ISH s IHC a Sish údajov, skupiny bodov 3 a 4 ukázali špecifické črty. Preto sme považovali skóre 3 a 4 ako vysoko sa stretol
skupina mRNA, a spolu 19 prípadov (3,5%) patril na vysoko sa stretol
mRNA.

Vysoká - sa stretol
mRNA bola spojená s vyšším vekom ( P
= .002), väčšiu veľkosť nádoru ( P
= 0,006), LN metastázy ( P
= 0,014), lymfatická invázie ( P Hotel < 0,001), zvýšený počet metastatických lymfatických uzlín ( P Hotel < 0,001), vzdialených metastáz ( P
= 0,001) a vyššie TNM štádium ( P Hotel < 0,001) v porovnaní s nízko- sa stretol
mRNA (tabuľka 2). Avšak, vysoko sa stretol
mRNA neukázal žiadnu spojitosť s pohlavím, umiestnenia nádoru, Lauren klasifikácii, a hĺbkou invázie (tabuľka 2).

199 synchrónnych metastatických LNS, 119 (59,8% ), 45 (22,6%), 22 (11,1%), 4 (2,0%) a 9 (4,5%) ukázala, RNA ISH skóre 0, 1, 2, 3 a 4, v uvedenom poradí. Z tohto dôvodu, 13 prípadov (6,5%) bolo vysoko sa stretol
mRNA. Medzi 199 párov primárnych a metastatických lézií, 186 (93,5%) vykazovala zhodné sa stretol
stav mRNA a 13 (6,5%) nie. Z týchto 13 nesúhlasných prípadoch negatívny konverzia bola nájdená u 50% (7/14) z vysoko sa stretol
mRNA primárnych nádorov a pozitívne konverzia bola nájdená v 3,2% (6/185) z nízku sa stretol
mRNA primárne nádory (tabuľka 3).

2. MET proteín a stav GCN hodnotená IHC a Sish

Použitie IHC, 236 (44,1%), 171 (32%), 113 (21,1%) a 15 (2,8%) primárne nádory boli hodnotené 0, 1, 2 a 3, v uvedenom poradí. IHC skóre 3 ukázala výrazné klinické jednotky črty, a to MET nadmerná expresia skupina bola významne spojená s vyšším vekom ( P
= .005), väčšiu veľkosť nádoru ( P
= 0,009), hĺbka invázie ( P
= 0,05), LN metastázy ( P
= 0,018), lymfatická invázie ( P
= 0,026), zvýšený počet metastatických lymfatických uzlín ( P Hotel < 0,001), vzdialených metastáz ( P
= .007), a vyššie TNM štádium ( P
= 0,001). Avšak, nadmerná expresia MET neukázal žiadnu spojitosť s pohlavím, umiestnenia nádoru, a Lauren klasifikácie (tabuľka S1).

199 synchrónnych metastatických LNS, 46 (23,1%), 92 (46,2%), 46 (23,1 %) a 15 (7,5%) ukázala, IHC skóre 0, 1, 2 a 3, v uvedenom poradí. Medzi 199 párov primárnych a metastatických lézií, 187 (94,0%) vykazovala zhodné status MET bielkovín a 12 (6,0%) nie. Z týchto 12 nesúhlasných prípadoch negatívny konverzia bola nájdená u 36,4% (4/11) primárnych nádorov s nadmernou expresiou o THP, a pozitívne konverzia bola nájdená v 4,3% (8/188) primárnych nádorov bez THP zvýšenou expresiou.

Použitie Sish, sa stretol
GA bola pozorovaná u 2,6% (14/535) primárnych nádorov. sa stretol
GA ukázala významnú súvislosť s väčšou veľkosti nádoru ( P
= 0,038), lymfatické invázie ( P
= 0,009), zvýšený počet metastatických lymfatických uzlín ( P Hotel < 0,001), vzdialených metastáz ( P
= .005), a vyššie TNM štádium ( P
= 0,002). Avšak, sa stretol
GA neukázal žiadnu spojitosť s pohlavím, umiestnenia nádoru, Lauren klasifikácie, hĺbkou invázie a metastázy LN (tabuľka S2).

3. Korelácia THP hodnotené RNA ISH, IHC a Sish

hodnotená RNA ISH a IHC korelácia medzi sa stretol
mRNA a stav bielkovín sú uvedené v tabuľke 4. V 535 primárnych nádorov, existuje bol to pozitívna korelácia medzi sa stretol
mRNA a expresie proteínov (r = 0,398, P Hotel < 0,001). Všetkých 7 prípadov s RNA ISH skóre 4 ukázal THP bielkovín nadmernú expresiu. Medzi 12 prípady s RNA ISH skóre 3, 5 prípadov (41,7%) bolo dosiahnuté IHC skóre 3. prípadoch s RNA ISH skóre 2 vykazovala variabilný IHC skóre. Prípady s RNA ISH skóre 0 alebo 1 nevykazovali THP bielkovín zvýšenú expresiu okrem 1 prípadu. Medzi 10 prípadoch ukazuje rozdiel (tj pozitívna na RNA ISH aj negatívne v IHC alebo naopak), 8 ukázal IHC skóre 2 alebo RNA ISH skóre 2. V 199 metastatických LNS, tam bola dobrá pozitívna korelácia medzi
mRNA a expresiu proteínu (r = 0,462, P Hotel < 0,001). (Tabuľka S3)

Okrem toho bol pozitívna korelácia medzi sa stretol
mRNA expresie a MET
GCN (R = 0,345; P Hotel < 0,001) (tabuľka 4). Medzi 7 prípadoch s RNA ISH skóre 4, 6 (85,7%) ukázala, MET
GA a iba jeden prípad ukázal, HP (14,3%). Týchto 12 prípadov s RNA ISH skóre 3 ukázala, GA (50%) alebo polyzomie (50%) by Sish. Prípady s RNA ISH skóre 2 ukázala rôzne vzory Sish vrátane GA (5,3%). Žiadny z prípadov s RNA ISH skóre 0 alebo 1 ukázala, GA.

Tabuľka 5 zhŕňa výsledky RNA ISH, IHC a Sish primárnej GC. Z 535 prípadov, 513 prípadov (95,9%) boli negatívne ako RNA ISH a IHC, a len 22 prípadov (4,1%) bolo dosiahnuté pozitívnych výsledkov buď RNA ISH alebo IHC. Tieto prípady 22 vystavoval sa stretol
GA (54,5%) alebo polysomy (45,5%), ktorú Sish a dizomií alebo Trizomiu nebola nikdy pozorovaná. Pokiaľ ide o Sish, medzi 14 prípadoch ukazuje GA, 11 prípadov (78,6%), vykazovali vysokú expresiu ako mRNA a proteínu. Medzi 58 prípadoch ukazuje HP, však, len 7 prípadov (12,1%), vykazovali vysokú expresiu buď mRNA alebo proteínu. Medzi 111 prípadov ukazujú LP, iba 3 prípady (2,7%) vykazovali vysokú expresiu mRNA. Všetky 352 prípady ukazujúce dizomie alebo trisomie vykazovali negatívne výsledky RNA ISH a IHC.

4. Prognostické dôsledky stavu stretli v primárnych a metastatických lézií

high sa stretol
mRNA v primárnych nádorov alebo metastatický LNS bol významne spojený so zlou OS (primárnych nádorov, P
= 0,002, 3A, metastázujúce LNS, P Hotel < 0,001, 3D obrázok). V primárnych nádorov s nízkym sa stretol
mRNA, pacienti s pozitívnym konverziu ukázali horšie OS než tí bez konverzie ( P
= 0,011, obrázok 3F). V primárnej nádory s high sa stretol
mRNA, pacienti s negatívnym konverziu ukázali lepší OS, než tí bez konverzie, ale nebolo štatistická významnosť ( P
= 0,137, obr 3F )

MET nadmerná expresia v primárnych nádorov alebo metastatickým LNS bola významne spojená s chudobnými OS (primárnych nádorov, P
= 0,001, obr 3b;. metastazujúcich LNS, P
= 0,024, obr 3E). V primárnych nádorov, bez toho, aby o THP nadmernou expresiou, pozitívne premena vykazovala k predikciu zlé OS, ale nebolo štatistická významnosť ( P
= 0,393). V primárnych nádorov s nadmernou expresiou o THP, negatívne konverzie ukázali trend lepších než OS bez konverzie, ale to nedosiahlo štatistickú významnosť ( P
= .132). Okrem toho sa stretol
GA v primárnych nádorov bol tiež významne súvisí so zlou OS ( P
= 0,005, 3C).

V viacnásobnej analýzy vysoko sa stretol
mRNA v metastatických LNS bol nezávislý negatívny prognostický faktor pre OS, po úprave vzhľadom na vek (< 60 y vs. ≥60 y), Lauren klasifikácia (črevná typ vs. difúzny alebo zmiešaného typu) a TNM stupeň (I-II vs. III-IV). Bola hodnota pomeru rizika 2,27 ( P
= 0,007) (tabuľka 6). Avšak MET nadmerná expresia v metastatických LNS nebol štatisticky významný prognostický faktor podľa viacrozmerné analýzy, hoci bola hodnota pomeru rizika 1,76 ( P
= 0,067). Okrem toho, THZ,
GA, vysoko THZ,
mRNA alebo proteínu v nadmerná expresia primárneho nádoru nebol štatisticky významný prognostický faktor podľa viacrozmerné analýzy (dáta nie sú uvedené).

diskusie

v tejto štúdii sme ukázali, že vysoká THZ,
mRNA expresie sa významne spojené s nežiaducimi patologickým funkcií a zlou prognózou u veľkých sérií pacientov GC metódou RNA ISH. Okrem toho, výsledky RNA ISH boli dobre koreloval s tými Sish a IHC. Predchádzajúce štúdie hodnotiace THZ,
mRNA v GC použité Northern blot testu [8], [22] alebo reverznej transkripcie-polymerázovej reťazovej reakcie (RT-PCR) [8], [14], [23] - [25]. Avšak, väčšina z týchto štúdií mali malé veľkosti vzoriek, a len málo z nich vyšetroval jej klinické dôsledky, [22] [24] alebo uskutočneného porovnaní s DNA alebo stavu proteínov [14], [25]: Kuniyasu et al. Po prvé študoval výraz THP mRNA pomocou analýzy Northern blot, a oni hlásili, že expresia 6,0 kb transkriptov bola úzko koreluje s štádiu nádoru a LN metastáz [22]. Amemiya et al. hlásené, že pacienti Stage IV GC s pečeňových metastáz ukázali vyššiu expresiu stretli na oboch úrovniach mRNA a bielkovín, ako u pacientov fáza IV GC bez pečeňových metastáz pomocou RT-PCR a IHC [24].

V poslednej dobe sme informovali, že vysoké hladiny zo HER2
mRNA bol dobre koreluje s nadmernou expresiou proteínov a GA porovnaním výsledkov zo 4 rôznych metodík v situ na báze RNA (ISH, IHC, ryby a Sish) v 211 prípadoch GC [20]. Rovnako tak v tejto štúdii o THP, ktorých výsledky RNA ISH ukázali pomerne dobrú koreláciu s tými IHC a Sish. Tieto výsledky potvrdzujú, že RNA ISH môže byť spoľahlivý test na vzorkách tkanív FFPE, že hoci nie sú potrebné ďalšie validačné štúdie.

Preukázali sme, že sa stretol
GA, high sa stretol
mRNA a proteín nadmerná expresia hodnotená Sish, RNA a ISH IHC boli veľmi zhodné a vysoké postavenie na DNA, mRNA MET, a proteín boli významne spojené so zlou prognózou. Tieto nálezy potvrdzujú, že nadmerná expresia MET je hlavne kvôli zvýšil o MET
GCN a tento mechanizmus prispieva k agresívnemu správaniu sa stretol
onkogén závislých GC. Avšak, tam boli niektoré prípady ukazujú nesúlad medzi THP
GCN, mRNA a množstva bielkoviny. Domnievame sa, že technické problémy (napríklad citlivosť a špecifickosť sondy alebo protilátky, a nekvalitné mRNA FFPE tkanív) a intratumorová heterogenita THP môže byť hlavnými príčinami tohto rozdielu. Avšak, niektoré biologické mechanizmy môžu tiež súvisieť so tento rozpor. Napríklad MET zvýšenú expresiu bez GA môže dôjsť prostredníctvom transkripčný aktivácia cez HGF závislé na autokrinný /parakrinný slučky alebo iné signálne dráhy [23], [26]. Naopak, THZ,
GA nemusí zvyšovať génový produkt. Asaoka et al. hlásil, že pár GC bunkové línie nesúce THZ,
GA vyjadril proteín ako rovnakej úrovni ako ostatné bunkové línie bez GA, ale ich tyrozínu zvyšky v doméne kinázy boli viac fosforylované [27]. Mechanizmy aktivácia stretol a role HGF v GC zostáva objasniť.

Je dobre známe, že MET
hrá úlohu pri metastázujúcej progresii karcinómu. Niekoľko štúdií ukázalo, že MET
GA alebo zvýšená expresia bola spojená s LN metastáz [7], [13] [22], alebo vzdialených metastáz [13], u pacientov s GC. Okrem toho, bolo ukázané, že podávanie inhibítora znižuje MET peritoneálnej šírenie GC v modeli xenoimplantátu [23]. Okrem toho, Di Renzo et al. zistili, že rakovinové bunky nesúce o STH
aktivujúce mutácie boli vybrané v priebehu metastatického šírenia hlavy a krku skvamóznych karcinómov porovnaním sekvencie génu medzi primárneho nádoru a metastatické lymfatických uzlín [28]. Avšak, priame porovnanie stavu zasadal od primárneho nádoru a metastáz nebola vykonaná vo veľkej sérii GC. Keď sme porovnali štatút trhového výraz medzi 199 spárovaných primárnych nádorov a metastatických LNS a celková zhoda bola 93,5% a 94% RNA ISH a IHC, resp. Tieto výsledky naznačujú, že štatút trhového vyjadrenie GC je v priebehu metastáza do regionálnych LNS relatívne konštantné. Avšak pozitívny premena sa stretol
stav mRNA bola významne spojená so zlou prognózou u jednorozmerné a viacrozmerné analýzy. Preto tieto výsledky naznačujú, že zhodnotenie THP v metastatických lézií môže byť dôležité pre prognózu a určiť ďalšie kandidátov na MET-cielené terapie.

in situ založených na analýze RNA má niekoľko výhod oproti "grind a bind "analýzy, ako sú RT-PCR [19] a je použiteľný ako pre klinickú prax a retrospektívne výskum. Okrem toho, RNA ISH je priaznivejšie, než IHC, kedy nie je vhodné, keď protilátka alebo cieľová molekula je sekrečnú proteín ,. S ohľadom na o THZ
, táto výhoda môže byť užitočné, pretože HGF-produkujúce bunky môžu byť zobrazené v reze tkaniva s použitím HGF sondy. Avšak, zraniteľné stabilita mRNA počas spracovania tkanív a vyššie náklady ako u IHC sú nevýhody spôsobu RNA ISH. Dúfame, že ďalšie technické zhodnotenie vyrieši tieto nedostatky.

V tejto retrospektívnej štúdii, sa stretol
stav mRNA hodnotená RNA ISH je dobre koreluje s proteínom a GCN hodnotená IHC a Sish, respektíve, a sa stretol
GA je vysoko v zhode s vysokou expresiou buď mRNA alebo proteínu. V analýze prežitia, vysokou expresiou sa stretol
mRNA v primárnych alebo metastatických lézií, a pozitívne konverzie sa stretol
stav mRNA sú významne spojené so zlou prognózou. Okrem toho sa stretol
stav mRNA v metastatických LNS je nezávislý prognostický faktor podľa viacrozmerné analýzy. Naše zistenia naznačujú, že sa stretol
mRNA môže byť alternatívou markerom pre identifikáciu sa stretol
onkogén závislých GC.

podporné informácie
tabuľke S1.
doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s001
(DOCX)
tabuľke S2.
doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s002
(DOCX)
Tabuľka S3.
doi :. 10,1371 /journal.pone.0111658.s003
(DOCX)

Poďakovanie

Sme veľmi vďační pani Hyun Ju Park za jej technickú podporu

Other Languages