Účinky myentericus denerváciu na extracelulárnej matrix vlákien a distribúcie mastocytov v normálnom žalúdku a žalúdočných lézií

Účinky myentericus denerváciu na extracelulárnej matrix vlákien a distribúcie mastocytov v normálnom žalúdku a žalúdočných lézií
abstraktné
pozadia
V tejto štúdii účinky myentericus denerváciu vyvolaného benzalkonium chloridu (BAC) o rozdelení fibrilárnych zložiek extracelulárnej matrix (ECM) a zápalových buniek bola skúmaná v žalúdočnej karcinogenézy vyvolané N-metyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidinu (MNNG). Krysy boli rozdelené do štyroch pokusných skupín: non-denervated (I) a denervovaný žalúdka (II) bez liečby MNNG; non-denervated (III) a denervated žalúdky (IV) liečených MNNG. Pre histopatologické, histochemické a stereologických analýzy časti žalúdka fragmenty boli zafarbené hematoxylínom a eosínu, Picrosirius-hematoxylínom, Gömöri retikulín, Weigert je rezorcinol-fuchsínu, toluidínová modrá a Alcian-modrá /safraninovým (AB-SAF).
Výsledky
BAC denerváciu spôsobuje zvýšenie frekvencie retikulárne a elastických vlákien v denervated (skupina II), v porovnaní s non-denervovaných žalúdky (skupina i). Liečba zvierat s MNNG vyvolanou vývoj adenokarcinómov v non-denervovaných a denervovaných žalúdky (skupiny III a IV, príslušne) s pozoruhodným nárastom relatívneho objemu stróma, početnosti retikulárne vlákna a zápalového infiltrátu, ktorý bol intenzívnejšie skupiny IV. Nárast frekvencie elastických vlákien bola pozorovaná u adenokarcinómov denervated (skupina IV), v porovnaní s non-denervovaných žalúdky (skupina III), ktoré vykazovali degradáciu týchto vlákien. Vývoju lézií (skupiny III a IV) bol tiež spájaný s nárastom populácie mastocytov, najmä AB a AB-SAF pozitívy, a druhú zmenu hlavne v denervated skupine IV.
Závery
Výsledky ukazujú silná asociácia v morfologické zmeny z fibrilárnych zložiek ECM, zvýšenou hustotou mastocytov a vývoj nádorov vyvolaných MNNG v non-denervated potkana žalúdka alebo denervated podľa BAC. To naznačuje, že štúdia z extracelulárnej a intracelulárnej zložiek mikroprostredie nádoru prispieva k pochopeniu biológie nádorov pôsobením myentericus denerváciu.
Pozadie
Interakcia medzi nádorovými bunkami a okolité strómy je jedným z kľúčových aspektov v mechanizme proliferácie nádorových buniek a invázie [1]. Nádorové bunky robiť prerobiť extracelulárnej matrix (ECM), komplexné zmes vlákien (kolagén, retikulárne a elastické) a pozemné látky, ktorá poskytuje podporu bunka [2], s cieľom uľahčiť komunikáciu a únik ovládacieho prvku mikroprostredia [3]. Kolagén fibrilárna systém pôsobí ako nosné konštrukcie tkanív, kde sa vlákna spájajú retikulárne kolagénové vlákna s bazálnej lamiel epiteliálnych, svalových a tukových buniek; MIKROFIBRILA-elastín systém hrá úlohu v Jemným rozptýlením stres zachovať odolnosť voči požiadavkám miestnych tkanív [4].
štruktúrne a funkčné integritu kolagénu fibrilárnych a MIKROFIBRILA-elastínu systémy sú dôležité pre žalúdok zabaliť jedlo, k sekréciu enzýmov a kyselín rozbiť surovej živiny a prenos zmesi do tenkého čreva. Tieto tri úlohy sú závislé z vonkajšieho systému (sympatický a parasympatikový divíziou autonómneho nervového systému) a vnútorné inervácie (enterickej nervový systém - ENS). Hlavnými zložkami ENS sú dve siete alebo pletene neurónov a nervových vlákien sa myenteric a submukóznu plexus [5]. ENS význam pre reguláciu gastrointestinálnych funkcií je pozorované po miestnej aplikácii na katiónové povrchovo aktívne látky, benzalkóniumchlorid (BAC), na serózna vrstvu, ktorá vedie k čiastočnej a selektívnej deštrukcii plexus myentericus neurónov [6]. Korelácia medzi karcinogenéze a ENS bola preukázaná v experimentálnych modeloch s použitím myenteric denerváciu o BAC a indukcii nádorov, N-metyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidinu (MNNG), [7] a 1,2-dimetylhydrazid ( DMH) [8], so znížením výskytu a veľkosti gastrointestinálnych nádorov.
Imunitné bunky sú silnými zdrojmi parakrinný signálov na ENS. Zvlášť črevných žírne bunky sú strategicky umiestnené a majú silné farmakologické mediátory, ktoré pôsobia v tvári imunologických podnetov, ktoré môžu mať vplyv na integritu tráviaceho traktu [9]. Protilátka viažuci sa na žírne bunky činí schopný rozpoznať špecifické antigény a signál ich prítomnosť na ENS. ENS, podľa poradia, interpretuje chemické signály z mastocytov ako hrozbu, a snaží sa ho odstrániť, a tým zaistiť ochrannej odpovede [9]. Prítomnosť mastocytov bola popísaná v niekoľkých novotvarov, s Pro alebo protirakovinových rolí ich biologicky aktívnych mediátorov uvoľňovaných vplyvom mikroprostredie nádoru [10-12]. Pôsobenie pre-nádorových mediátorov, ako je histamín, tryptázy a chymasy môžu podporovať migráciu a proliferáciu buniek indukujúce expresiu adhéznych molekúl na endoteliálnych bunkách, a tým aktivuje proces nádorové angiogenézy, metastázy a proliferáciu [13-15]. Na druhej strane, niektoré cytokíny, ako interleukín (IL) -2 a -21, tumor nekrotizujúci faktor (TNF) a heparínu uvoľňované mastocyty, môžu pôsobiť ako protinádorová činidlá tým, že inhibuje ich rast [16, 17].
niekoľko štúdií ukázalo, že v priebehu karcinogenézy dochádza k nárastu počtu žírnych buniek, pozorované neurofibromy, lipómy, hemangiómy, nádory nadobličiek a pokožku [18], skvamóznych karcinómov [19], hrtanu dlaždicových buniek [20] a žalúdočné karcinómy [21]. V žalúdočných adenokarcinómov, malé uvoľňovanie obsahu uložených v cytoplazmatických granulách mastocytov bolo spojené so zmenami v mikrovaskulárna bazálnej lamiel, vrátane neoprávneného hrúbke, viac vrstiev, tak ako slabé spojenie s endoteliálnych buniek a pericytů, ktoré prispievajú k remodelácii ciev [22]. Po chirurgickom odstránení karcinómu žalúdka, štúdie prežitie ukázali, že u pacientov so zvýšeným počtom žírnych buniek ukázala horšiu prognózu ako u pacientov s nízkym počtom nimi.
Účelom tejto štúdie bolo zistiť účinky chemickej ablácia myenteric neuróny na rozloženie extracelulárnej matrix vlákien a mastocytov v žalúdočnej sliznici a non-denervovaných denervovaných žalúdky a v modeli žalúdočnej karcinogenézy vyvolanej podávaním MNNG u potkanov.
Materiál a metódy
Usporiadanie experimentu
štyri experimentálne skupiny boli vyhodnotené. Skupiny I (n = 5) a II (n = 5) a non-denervovaný denervated respektíve bez prítomnosti žalúdočných nádorov; skupiny III (n = 10) a IV (n = 10) a non-denervovaný denervovaný, v tomto poradí, za prítomnosti žalúdočných novotvarov. Fragmenty pylorické oblasti (antra) zo žalúdka použité v tejto štúdii boli získané z vyšetrovanie, ktoré uskutočnila Polli-LOPES et al. [7]. Experimentálne postupy boli vykonávané v súlade s pravidlami výboru pre starostlivosť a použitie laboratórnych zvierat z National Research Council v N.I.H. (USA) a etická komisia pre pokusy na zvieratách (CEEA) z FAMERP (Protokol č 6193/2008), São José do Rio Preto, SP.
Zvierat
Wistar krysy
váha 100 na 150 g, získané z zvierat zariadení na School of Medicine Ribeirão Preto, Brazília, boli umiestnení (4 zvieratá na klietku), pri teplotách medzi 23 až 25 ° C, a dostávali potravu a vodu podľa ľubovôle
.
žalúdočné denerváciu
zvieratá boli anestéziu im ketamínom hydrochloridu a thiazin-chloridu (0,15 ml /0,05 ml /100 g telesnej hmotnosti) [23]. Žalúdok každého zvieraťa boli vyvedené cez stredovej hornej časti brušnej laparotómia a izolované z peritoneálnej dutiny cez malý presklenia v plastovom liste pre tému použitie 0,6% alkoholu v krvi (v /v) (Aldrich Chemical Co. riedi fyziologickým roztokom (0,9% NaCl) [7, 24]. izolované žalúdky boli obalené gázou namočenou v BAC alebo fyziologický roztok a vlhký po dobu 30 minút [6, 7, 24]. Serózna povrch žalúdkov sa dôkladne premyje roztokom chloridu sodného, ​​boli vrátené orgány ich anatomické miesto a brušnej steny bola prišitá. zvieratá bola udržiavaná v plastických klietkach (4 zvieratá /klietka) pod kontrolovanou teplotou a dostávali potravu a vodu podľa ľubovôle
.
Indukcia novotvarov v žalúdočnej sliznici antra
šestnásť týždňov po operácii boli zvieratá zo skupiny III (non-denervovaný) a IV (denervovaný) požití roztok N-metyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidinu (MNNG) (Aldrich Chemical Co., Inc., Milwaukee, WI, USA) sa rozpustí v destilovanej a deionizovanej vode v koncentrácii 100 mg /l po dobu 28 týždňov. Boli zvieratá usmrtená 2 mesiace po poslednej príjmu MNNG a žalúdky boli zbierané pre morfologickú analýzu.
Morfologická a kvantitatívna analýza
extracelulárnej matrix vlákien
Fragmenty pyloru oblasti žalúdka (antra) boli odstránené do 4% pufrovaného formalínu po dobu 12 hodín, premyté vodou z vodovodu, dehydrované v rade etanolu a vložené do parafínu. Pre extracelulárnej matrix štúdie, úseky 4 um hrubé boli farbené hematoxylínom a eosínu [25], Picrosirius-hematoxylínom [26] a Gömöri retikulín [27] histopatologické analýzy a kolagénu a retikulárne vlákna vyhodnotenie, resp. Vlákna pružného systému boli študované pomocou Weigert je rezorcinol-fuchsínu, ktoré selektívne škvrny oba elastické a elaunin vlákna (ďalej len oxytalan vlákna zostávajú nepoškvrnený, pretože nie sú doteraz oxidujú v tejto štúdii) [28]. Vzorky boli analyzované pomocou svetelného mikroskopu Olympus BX60 (Olympus, Hamburg, Nemecko) a mikroskopické poľa bola zdigitalizoval s použitím Image-Pro Plus verzia 4.5 pre Windows softvér (Media Kybernetika, Silver Springs, MD). Päť náhodné oblasti žalúdočnej sliznice boli analyzované za použitia x 20 cieľ, a kalibrácia bola vykonaná za použitia Olympus odstupňované mikroskopické sklíčko. Kvantitatívna analýza bola stanovená v súlade s postupom z Weibel [29], skúšobná elektrickej siete s 168 bodmi a 84 testovaných línií, pre porovnanie relatívnej objem (v percentách) z žalúdočnej sliznice oddielov (epitelu, strómy a ďalších priestorov, s výnimkou epitel a stróma) pre hematoxylín-eozín a relatívna početnosť retikulárne a distribúcie elastické vlákna (v percentách) pre Gömöri retikulín a resorcin- fuchsínu farbenie Weigert je, resp. Hodnoty sú uvedené ako priemer ± SEM z relatívneho objemu (v percentách) z žalúdočnej sliznice priehradiek a priemer ± SEM z relatívnej početnosťou retikulárne a elastické distribúciu vlákien (v percentách).
Mastocytov
Analýza mastocytov v žalúdočnej Antrum bolo vykonané v sekciách farbených toluidínová modrá 0,5% pre kvantifikáciu intaktné a degranulované bunkách a s Alcian-modro-safraninovým (AB-SAF) pre kvantifikáciu slizničné a spojivového tkaniva mastocytov [30, 31]. Za týmto účelom boli analyzované šesťdesiat náhodne oblasti žalúdočnej sliznice, na zviera, sa svetelným mikroskopom Olympus (Olympus, Hamburg, Nemecko) za použitia x 12,5 /16 milimetrov a očné x 40 napájanie objektív s (Zeiss, Nemecko) , Hodnoty sú uvedené ako priemer ± SEM počtu buniek na mm
2. Štatistická analýza
Dáta boli analyzované s použitím softvéru Statistica 6.0 (StarSoft, Inc., Tulsa, OK). Údaje sú uvedené ako priemer ± SEM a boli predložené t
testu Studentov a jednocestné analýzy variance (ANOVA) a potom na viacnásobné porovnávania teste Tukom-Kramer alebo Bonferroniho. Rozdiely medzi hodnotami P Hotel < 0,05 boli považované za štatisticky významné.
Výsledky
Histopatologické a histochemické analýzy krysích žalúdkov
Spočiatku vrátnika fragmenty non-denervovaných a denervovaných žalúdkov podľa benzalkoniumchlorid (BAC) (skupiny I a II, v danom poradí) boli študované , Analýza fragmentov skupiny II zistilo, že myenteric denerváciu nemení nič na množstvo a rozloženie mriežkoviny kolagénových vlákien, ktoré obklopujú pylorické žľazy v porovnaní so skupinou I (obr. 1A a 1B). Tento výsledok bol potvrdený Picrosirius-Hematoxylin farbivom (Obr. 1E a 1F) a kvantitatívnu analýzu relatívneho objemu epitelu a strómy žalúdočnej sliznice z oboch skupín (obr. 1i a 1j). Obrázok 1 Histologická analýza krysích žalúdkov. A, B, E a F)
pyloru žalúdočné žľazy (g) obklopené strómy s kolagénových vlákien (y) pozorovaných v sliznici vrstve skupín I a II. Epitel (ep). Žalúdočné jamy (f). Muscularis sliznice (m). C, D, G a H)
pyloric žalúdočné žľazy (g) tvorené nádorových bunkách obsadila najväčšiu oblasť žalúdočnej sliznice skupín III a IV. Nahromadenie PMN (šípky) bola pozorovaná v rámci žliaz. Hematoxylínom-Eozín (A-D); Picrosirius-Hematoxylin (E-H). Bary: 20 um. I-L
) Tkanivové priehradiek (epitel, stróma, ostatné) objemy žalúdočnej sliznice pyloru. Hodnoty sú vyjadrené ako priemer ± SEM z percento z relatívneho objemu. Skupiny bez lézií (I a II) predstavil vysokú relatívny objem epitel (p menšie ako 0,05) v porovnaní s skupín s léziami (III a IV). Prítomnosť adenokarcinómu v skupinách III a IV malo za následok významné (p menšie ako 0,05). Strómy v porovnaní so skupinami I a II
Non-denervated a denervated žalúdky ošetrené MNNG (skupiny III a IV, v uvedenom poradí) prezentované zmeny architektúry tkaniva a usporiadanie vlákien extracelulárnej matrix a zvýšenie priemeru pyloru žliaz, ako aj v relatívnom objeme stróma (obr. 1C, D, G a 1H). Liečba MNNG vyvolanú vývoj benígnych aj zhubných nádorov, najmä adenomatóznych polypov a adenokarcinómov (obr. 1C a 1G) v non-denervovaných žalúdky (skupina III). Zvieratá s denervovaných žalúdkov a liečených MNNG (skupina IV) vyvinul prekanceróznych lézií a zhubných nádorov charakterizovaných dysplázia, atrofickú gastritídu a adenokarcinóm (obr. 1D a 1H). V oboch skupinách, stróma z adenokarcinómu bola obohatená prítomnosťou zápalových buniek, ako žírne bunky, neutrofily, plazmatické bunky a lymfocyty, ktoré ukazujú imunitnej odpovede na neoplázie (obr. 2). Avšak, neoplastické lézie v skupine IV boli menšie a menej agresívne profily v porovnaní so skupinou III a zápalový infiltrát lokalizované v nádorovom stróma bola intenzívnejšia, a to najmä u zvierat, ktorá sa vyvinula adenokarcinómov (obr. 2D). Obrázok 2 Histologická analýza adenokarcinóme vyvolané pôsobením MNNG. A a B)
morfologická pohľad adenokarcinóm (AD) v non-denervated (skupina III) a denervated žalúdka (skupina IV). Svalová vrstva (M). Intenzívne zápalový infiltrát (V). C a D)
Detail zápalového infiltrátu nádorové stróma tvorené mastocytov (čierne šípky), neutrofily (šípok), lymfocytov (zelené šípky) a plazmatických buniek (červené šípky). Toluidín modrá. Bary :. 100 um (obr. A a B), 10 um (obr. C a D)
histochemické analýzy pylorické sekcií bola vykonaná Gömöri retikulín a rezorcinol-fuchsínu farbenie Weigert k preštudovať distribúciu ( frekvenciu) retikulárne a elastických vlákien v podpornej väzivového tkaniva, v tomto poradí. Sekcia predloženej oboch metód odhalili podobnú distribúciu sieťoviny vlákien, ktoré obklopujú pylorické žľazy žalúdkov zo skupín I a II (obr. 3A, B, E a 3f). Non-denervated alebo denervated žalúdky ošetrené MNNG (skupiny III a IV, v tomto poradí), zrejme prezentované zvýšené množstvo retikulárne vlákna (Obr. 3C a 3D) a hrubé a krátkych elastických vlákien veľmi neprehľadné (obr. 3G a 3H) v adenokarcinómu v porovnaní s ich príslušných kontrolných skupín (skupiny i a II, v danom poradí). Obrázok 3 Histochemická analýza retikulárne (A-D) a elastických vlákien (E-H) v žalúdku krysy. A a B)
skupiny I a II prezentované retikulárne vlákna priamočiare a vyrovnané (šípky), obklopujúce epitelu (EP) a stróma (y). C a D)
retikulárne vlákna (šípka) vinutia a zrejme najhustejšia na základni (šípky) žliaz (g). bola pozorovaná akumulácia kolagénové vlákna medzi žliaz (*). E a F) sú
Žľazy sprevádzané delikátna pásu elastických vlákien (šípka) a intenzívnejšie označených v E. G a H)
zvýšenie hrúbky týchto vlákien, narušenie a fragmentácii fibrilárnych premenných zoskupené masy elastínu (šípky) je možné pozorovať po žliaz (g), v porovnaní s ich kontrolných skupín (i a II). Gömöri strieborný (A-D); Weigert je rezorcinol-fuchsínu (E-H). Bary :. 10 um
kvantitatívnu analýzu retikulárne vlákna potvrdila nárast tohto extracelulárnej zložky v adenokarcinómy pozorovaných v skupinách III a IV a tiež vykázala neočakávaný výrazný nárast na sliznicu žalúdka denervated (skupina II ) v porovnaní so skupinou I (tabuľka 1). Aj napriek zjavný nárast elastických vlákien vo strómy non-denervovaných a denervovaných zvierat liečených MNNG (skupiny III a IV, v tomto poradí), štatisticky významný rozdiel bol pozorovaný v ich distribúciu v porovnaní s kontrolnou skupinou (I a II) (tabuľka 1) , Na druhej strane, myenteric denerváciu indukovanej výrazné zvýšenie elastických vlákien žalúdočnej strómy zo skupín II a IV, v porovnaní s non-denervovaných žalúdky zo skupín I a III (tabuľka 1). Žiadny významný rozdiel bol zaznamenaný v kolagénu a elastických vlákien rozdelenie medzi non-zhubných a zhubných lézií stromas zo skupín III a IV.Table 1 stereologických vyhodnotenie vplyvov myentericus denerváciu v žalúdočnej dutine.

Relatívna rozloženie početnosti vlákien (%) 1
Skupiny
Kolagén systém
pružinovým systémom
I
16,87 ± 0,5
13,27 ± 0,5
II
24,06 ± 1,5 *
19,4 ± 0,6 *
III - NT
21,8 ± 0,9
11,2 ± 0,6
III - MT
25,71 ± 0,5 *
11,1 ± 0,4
IV - NT
21,2 ± 1,6
20,2 ± 1,7 &
IV - MT
26,87 ± 1,5 *
19 ± 0,7 &
Histologické príprava bola vykonaná, ako je popísané v časti materiály a metódy
. Hodnoty sú vyjadrené ako priemer ± SEM z percento relatívnej početnosťou vlákien. Non-malígny tumor (NT); malígny tumor (MT). 1 Štatistická analýza založená na ANOVA nasledované korekciou Tukom-Kramer. * P < 0,05 verzus skupina I; &Amp; P < 0,05 verzus skupiny III.
Kvantifikácia mastocytov v fragmenty pyloru oblasti žalúdka
mastocytov boli analyzované a kvantifikované v slizničnej, submukóznu a svalových vrstiev vo všetkých experimentálnych skupinách. Analýza celkového počtu buniek na žalúdočné fragmentu nepreukázala žiadny významný rozdiel medzi non-denervated (I) a (II) denervated skupiny (viď obr. 4A). Avšak, v non-denervovaných alebo denervovaných skupín liečených MNNG (III a IV, v uvedenom poradí), vývoj benígnych alebo malígnych lézií bol spojený s významným zvýšením počtu žírnych buniek v žalúdočnej dutine v porovnaní s non-denervated skupine (I). Vo slizničných a submukóznymi vrstiev, významné zvýšenie mastocytov v non-denervovaných alebo denervovaných skupín liečených MNNG, (III a IV) bol spojený so zvýšením o intaktných a degranulované buniek (obr. 4B). Vo svalovej vrstve, toto zvýšenie bolo spojené predovšetkým s veľkým počtom neporušených žírnych buniek (obr. 4C). Obrázok 4 Kvantitatívna analýza mastocytov v žalúdku. Dáta predstavujú priemer ± SEM z šesťdesiatich oblastiach analyzovaných na jedno zviera, ako je popísané v sekcii Materiál a metódy. Non-denervovaný (I) a denervovaný žalúdok (II) bez poškodenia. Non-denervated (III) a denervovaný žalúdka (IV) s léziami. Non-malígny tumor (NT). Zhubný nádor (MT). A)
Celkový počet žírnych buniek v žalúdku fragmentu. * P < 0,05 vs. skupiny I. # P < 0.01 vs. ďalších pokusných skupín. B a C),
neporušený a degranulované mastocytov v slizničnej, submukóznu a svalovej vrstvy. * P < 0,05 verzus skupina I; #P ≪ 0,05 verzus ďalšie experimentálnej skupiny; δ P < 0,05 vs. skupina III - NT (neporušené žírne bunky); &Amp; P < 0,05 vs. skupiny III - NT (degranulované žírne bunky). C)
neporušený a degranulované mastocytov vo svalovej vrstvy. * P < 0,05 verzus skupina I; # P < 0,05 verzus skupiny II.
Fenotypová analýza mastocytov
Pre fenotypovej charakterizáciu mastocytov bola použitá metóda Alcian Blue-safraninovým (AB-SAF). U zvierat v prípade neexistencie denervated (I) a denervovaných (II) skupiny, došlo k prevaha mastocytov AB pozitívne (AB +) v slizníc a submukóznymi vrstiev žalúdočné dutine, ktoré charakterizujú tieto bunky sú slizničnej mastocytov (MMC) (obr. 5A a 5B). V experimentálnych skupín liečených MNNG (III a IV), vysoký podiel AB + a AB-SAF + žírne bunky podtypy boli pozorované, druhý hlavne v denervated skupine (IV) (obr. 5C a 5D). Fragmenty žalúdočné dutine obsahujúci okružie boli použité na potvrdenie prítomnosti SAF + buniek, charakterizujúce spojivového tkaniva mastocytov (CTMC) podľa tohto spôsobu farbenia (obr. 5E a 5F). Obrázok 5 fenotypové analýzy mastocytov žalúdočnej fragmentu. A a B)
LIEKU Submukózna vrstvou non-denervated (skupina I) a denervovaný (skupina II) žalúdok ukazujúci žírne bunky s cytoplazmatických granúl pozitívnymi na alcian modrej (šípky), ktoré charakterizujú slizničné mastocytov fenotypu - v detaile panelového A . C a D)
Dva mastocytov populácie sú uvedené v žalúdočných lézií non-denervated (skupina III) a denervovaných (skupina IV) žalúdky: alcian modrých pozitívnych mastocytov (čierne šípky) a alcian-modrá /safraninovým pozitívna žírne bunky (červené šípky). E a F)
mastocytov s safraninovým pozitívnymi granúl (šípky) sú pozorované v okružie, charakterizujúce spojivového tkaniva žírne bunky. Alcian modrá /metóda Safraninový. Bary: 10 um (obr A-F.); 5 um (detail obr. A)
.
Celkové kvantifikáciu troch podtypov žírnych buniek (AB +, AB-SAF + a SAF +) potvrdil morfologických pozorovanie, ukazuje prevahu AB + buniek v pyloru fragmentu vo všetkých experimentálnych skupín (tabuľka 2). V non-denervovaných a denervovaných skupín liečených MNNG (III a IV, v tomto poradí), táto bunka podtyp výrazne zvýšili v porovnaní so skupinou bez denervated (I). V denervovaných žalúdkoch liečených MNNG (skupina IV), sub-bunkové AB-SAF + bola tiež významne zvýšila v malígnych lézií v porovnaní s lézií v non-denervated skupine liečenej MNNG (III) .Table 2 Hustota mastocytov s rôznymi fenotypmi v žalúdočnej dutine.

pyloric Fragment
Skupiny
AB +

SAF +
AB + SAF +
Aj
8 ± 2
1 ± 1
4 ± 1
II
14 ± 4 Sims 3 ± 1
13 ± 10
III - NT
49 ± 16 *
5 ± 2
11 ± 4
III - MT
23 ± 4 ***
4 ± 2
13 ± 5
IV - NT
28 ± 5 ***
2 ± 1
23 ± 8
IV - MT
36 ± 8 ** #
13 ± 10
47 ± 12 &Co.
Histologické príprava bola vykonaná, ako je popísané v časti materiály a metódy
. Hodnoty (počet buniek na mm2), sú vyjadrené ako priemer ± SEM z 60 polí analyzovaných na jedno zviera s vysokým výkonom s cieľom (40 x). Alcian-blue
(AB +), safranín (SAF +) a Alcina modrá
/Safraninový pozitívnych buniek (AB + SAF +). * P < 0,05 verzus skupina I; # P < 0,01 vs. III - NT a - MT; &Amp; P < 0,05 verzus II.
Analýzu rôznych podtypov žírnych buniek v slizničných a submukóznymi vrstiev pyloru fragmentov ukázala významné zvýšenie mastocytov AB + iba u zvierat s benígna nádor (tabuľka 3). V denervovaných žalúdkoch liečených MNNG (skupina IV), populácia mastocytov AB-SAF + vzrástol v porovnaní s inými experimentálnymi skupinami, je významné pre zhubný novotvar. Sval vrstve ukazuje iný profil fragmentu ako celku, a denervovaných žalúdky bez a s neoplázie (skupín II a IV) vykazovali prevahu mastocytov AB-SAF +. V žiadnom skupine študoval, počet buniek SAF +, ktoré charakterizujú CTMC, prevzal ďalšie bunky subtypes.Table 3 rozdelenie mastocytov s rôznymi fenotypmi v vrstiev žalúdočnej dutine.

histologických vrstiev

sliznice a submukóze
svalová

Groups
AB +
SAF +
AB + SAF +
AB +
SAF +
AB + SAF +

I (Control)
7 ± 2
0 ± 0 Sims 3 ± 0
1 ± 0
1 ± 1
2 ± 1
II
12 ± 4
0 ± 0
2 ± 1
2 ± 1
2 ± 1
11 ± 9
III - NT
40 ± 14 *
1 ± 1
4 ± 1
8 ± 3 * Sims 3 ± 2
7 ± 3
III - MT
12 ± 2
0 ± 0 Sims 3 ± 1
11 ± 3 *
4 ± 1
10 ± 4
IV - NT
19 ± 3 **
1 ± 0,6
12 ± 8
9 ± 3 *
1 ± 0
18 ± 7
IV - MT
27 ± 10
9 ± 8
25 ± 8 # &
9 ± 2 ** π Sims 3 ± 2
22 ± 9
Histologické príprava bola vykonaná ako je popísané v materiáloch a metódach
. Hodnoty (počet buniek na mm2), sú vyjadrené ako priemer ± SEM z 60 polí analyzovaných na jedno zviera s vysokým výkonom s cieľom (40 x). Alcian-blue
(AB +), safranín (SAF +) a Alcina modrá
/Safraninový pozitívnych buniek (AB + SAF +). * P < 0,05 verzus skupina I; # ≪ 0,05 vs. I a III-MT; &Amp; P < 0,01 vs. II; π P < 0,05 vs. II.
Diskusia
V tejto štúdii sa skúmal histopatologické zmeny a rozloženie extracelulárnej matrix (ECM) fibrilárnych zložiek a žírne bunky v pylorické regióne krysích žalúdkov non-denervovaných alebo denervated podľa benzalkóniumchloridu (BAC) a neošetrených alebo liečení karcinogénov-N-metyl-N 'nitro-N-nitrosoguanidinu (MNNG).
Spočiatku histopatologické a stereologických analýza ukázala, v relatívnom objeme epiteliálne žiadne zmeny a stromálny schránky v pylorické fragmentov z non-denervated (skupina i) a denervated žalúdky (skupina II). Štúdia však z fibrilárnych zložiek ECM v týchto vzoriek bolo zistené, že BAC denerváciu spôsobuje zvýšenie frekvencie retikulárne a pružný systém vlákien v denervated žalúdočnej sliznice (skupina II), v porovnaní s non-denervated (skupina I), ako bolo preukázané histochemické a stereologických analýza pomocou Gömöri retikulínu a farbenie rezorcinol-fuchsínu Weigert je, resp. Pravdepodobne, absencia kontraktilné stimulácia spôsobené myentericus denerváciu v týchto fragmentov (skupina II), prispievajú k zvýšeniu syntézy retikulárne a elastických vlákien od buniek hladkého svalstva a /alebo nové združenie vlákien vo stróma ako mechanizmus k dostatočnej peristaltické vlny koordinácie, a aby sa zabránilo stázy v denervovaných orgánoch [32-34].
Liečba non-denervated (skupina III) a denervated (skupina IV) zvieratá s MNNG indukuje vývoj zhubných nádorov (adenokarcinómy), benígne nádory (adenomatóznej polypy) a prekanceróznych lézií (dysplázia a atrofickej gastritídy). Vývoj adenokarcinómov v oboch non-denervovaných a denervovaných žalúdkov bol schopný podporovať významné zvýšenie relatívneho objemu stromálne priestoru. V priebehu vývoja nádoru prostaty alebo žalúdočnej sliznice, interakcie stróma /epitelu je narušený a ukladá novú stavu súvisiaceho s morfologické zmeny zložky medzibunkovej hmoty a rastu nádorov [35]. Proliferácia epitelových buniek v oboch zhubných a nezhubných lézií spôsobuje zmeny umiestnené v žľaze, nasledované fokálna remodelácie z fibrilárnych zložiek v extracelulárnej matrix, [27].
V tomto aspekte je histochemická analýza ukázala významné zvýšenie oproti retikulárne vlákna adenokarcinóm (skupina III) v porovnaní s non-denervovaných žalúdky bez lézií (skupina I). Zvýšenie stromálny kolagénových vlákien predstavuje mechanizmus, ktorým nádorové bunky by mohli uniknúť "útok" T lymfocytov (CD8 +) a indukovať apoptózu, ktorý by fungoval ako bariéra k infiltrácii CD8 + [ ,,,0],36]. Aj napriek nie významným zmenám na pružnom systému, narušenie týchto vlákien bola pozorovaná u adenokarcinómov of non-denervated žalúdka (skupina III), s prítomnosťou orgánov pružných elementov frakcionované, čo svedčí o degradácii alebo prerábanie stróma v reakcii poranenia vplyvom nádorových buniek. Tieto zmeny v elastických vlákien, systém sa súčasne s prestavbou kolagénových vlákien, tiež pozorovaný v prostatických lézií [37] a v prostatickej žľazy stromálnych v tomto regresie po kastrácii [38, 39]. Podľa týchto výsledkov je agresívny nádor by mohli byť hodnotené vláknitými zložkami matrice.

• Ako by stopovacie byť podaný na detekciu pre sentinelových uzlín u karcinómu žalúdka - submucosally zvnútra alebo zvonku subserosally žalúdka?
• Patologickým vlastnosti a výsledky liečby z hepatoid adenokarcinóm žalúdka, vzácne, ale unikátnym podtypom žalúdočné cancer