Terapeutický potenciál PRL-3 zacielenie a klinický význam PRL-3 genomické zosilnenie v žalúdku cancer

terapeutický potenciál PRL-3 zacielenie a klinický význam PRL-3
genomické zosilnenie u rakoviny žalúdka
abstraktné
pozadia
fosfatáza regenerácia pečene-3 (PRL-3) má zaslúženú pozornosť, čo je kľúčovou molekulou v niekoľkých krokoch metastáz. V tejto štúdii sme sa zaoberali mechanizmy upravujúce PRL-3 expresiu, a hodnotila klinický potenciál PRL-3-cielené terapie rakoviny žalúdka.
Metódy
PRL-3 genomická amplifikácia bola analyzovaná pomocou kvantitatívnej polymerázovej řetězové- reakcie a /alebo fluorescenčnej in situ hybridizácia v 77 primárnych nádorov žalúdka. Protirakovinové aktivita PRL-3 inhibítora (1-4-bróm-2-benzyliden rhodanin) liečby bola hodnotená proti rakovinovým bunkám s odlišnou genetickou a expresné stave.
Výsledky
PRL-3 genomické zosilnenie bol úzko zhoduje sa s vysokým úroveň jeho expresie proteínu v bunkových líniách, a bola nájdená v ľudských primárnych nádorov u s jeho expresie, ktoré boli všetky etapu 20% (8/40) III /IV ochorenie (40%, 8/20), ale v žiadnom (0 /37) medzi tými, bez výrazu. Navyše PRL-3 genomická amplifikácia bola spojená s metastatické stavu lymfatických uzlín, čo vedie k pokročilej fáze a tým zlými výsledkami u pacientov s postihnutím lymfatických uzlín (p
= 0,021). PRL-3 malé interferujúce RNA robustne potlačená metastatické vlastnosti, vrátane bunkovej proliferácie, invázie a tvorby kolónií na ukotvenie nezávislý. Aj keď ani PRL-3 genomická amplifikácie ani hladina expresie bola zodpovedná za citlivosť na PRL-3 liečbe inhibítorom inhibítor ukázala na dávke závislú protirakovinovú účinnosť a pozoruhodne indukovanú apoptózu u všetkých testovaných bunkových línií s PRL-3 expresie.
závery
Máme prvýkrát, ukázali, že PRL-3 genomická amplifikácie je jedným z prevládajúcich mechanizmov indukcii jeho expresiu, a to najmä v pokročilejšom štádiu, a že liečba PRL-3-cielené môže mať veľký potenciál proti rakovine žalúdka s jeho expresie.
Kľúčové
PRL-3 karcinómu žalúdka genomická amplifikácie cielená liečba lymfatických uzlín na pozadí
karcinómu žalúdka (GC) je štvrtou najčastejšou rakovinou a druhou najčastejšou príčinou úmrtí na celom svete súvisiace s rakovinou [1 ]. Nedávne zlepšenie diagnostických nástrojov a metód uľahčili detekciu skoré GC a tým vynikajúce dlhodobé prežitie. U pacientov s pokročilým ochorením v čase diagnózy zostanú zlých výsledkov. Metastáza je viacstupňový proces zahŕňajúci miestnej invázie, šírenie a znova zariadenie bolo uvedené do vzdialených orgánov, a je hlavným určujúcim faktorom úmrtnosti [2]. Preto lepšie pochopenie metastázy môže otvoriť cestu k celej rade inovatívnych liečebných postupov v GC.
Proteín tyrozín fosfatázy (PTP) tvoria veľkú rodinu enzýmov, ktoré slúžia ako kľúčový regulačný komponenty signálnych dráh [3] , V fosfatázy na regeneráciu pečene (PRL-1, -2 a -3), patriaci k malej triede PTP nadčeľade, majú jedinečnú COOH-terminálny prenylace motív, ktorý kriticky ovplyvňuje ich bunkovú lokalizáciu a funkciu [4]. PRL-3 bol prvýkrát identifikovaný, že je špecificky nadmerne exprimované v pečeňových metastáz odvodených od kolorektálneho karcinómu [5], a následne jeho nadmerná expresia bola dokumentovaná v rôznych typov nádorov, vrátane GC [6]. PRL-3 môže podporovať rakovinu invázie, migrácie, rastu a angiogenézu, a to buď prostredníctvom defosforylácie, ktorá je katalyzovaná katalytickou doménu alebo lokalizácia do plazmatické membrány v réžii COOH-terminálny prenylace motívom [7-9]. Tak, PRL-3 sa si zaslúži pozornosť ako rozhodujúci molekuly v niekoľkých krokoch metastáz, a preto ako nový terapeutický cieľ. Na druhej strane, mechanizmy vyvolávajúce PRL-3 expresie nie sú úplne objasnené. Amplifikácie genomickej oblastí obsahujúcich onkogénov je hlavným mechanizmom jeho následné nadmerné expresie a vývoj rakoviny, a preto má význam pre cielenej liečby [10]. PRL-3
amplifikácia génu čiastočne zodpovedá za zvýšenú expresiu u kolorektálneho karcinómu a karcinómu pažeráka [5, 11]. Avšak, vzťah medzi genomické zosilnenie a GC stále uniká v oboch mechanických a liečebných hľadísk. V tejto štúdii sme skúmali vlastnosti PRL-3
genomické zosilnenie v GC, a ďalej hodnotiť klinický potenciál PRL-3-cielené terapie.
Metódy
Bunkové línie a tkanivové vzorky
GC bunkové línie MKN7 láskavo poskytol z bunky Resource Center pre biomedicínsky výskum inštitútu rozvoja, starnutie a rakovine, Tohoku University (Sendai, Japonsko). Sedem ďalších GC bunkové línie (GCIY, AZ521, KatoIII, SH10, H111, MKN74 a NUGC4) boli zakúpené od Riken BioResource Center (Ibaraki, Japonsko). Tieto bunkové línie pokrývajú dva hlavné typy GC [12], črevné typ (MKN7, MKN74, AZ521 a H111 buniek) a difúzna typ (GCIY, KatoIII, SH10, a NUGC bunky) [13-15]. MKN7, NUGC4 a AZ521 bunky boli stanovené z lymfatických uzlín (LNM), a MKN74 bunky boli z pečeňových metastáz. KATOIII a GCIY bunky boli stanovené od metastatický pleurálny výpotok a ascites, resp. H111 a SH10 bunky boli stanovené od xenotransplantácia. Normálny kostrového svalstva C2C12 bunky boli získané od DS Pharma biomedicínskeho Co., Ltd (Osaka, Japonsko). AZ521 a C2C12 bunky boli pestované v DMEM médiu (GIBCO, Carlsbad, CA), doplnenom 10% fetálneho hovädzieho séra (FBS). Ostatné bunky boli pestované v RPMI1640 médiu (Gibco) doplnenom 10% FBS. 1-4-bróm-2-benzyliden rhodanin bol zakúpený od firmy Calbiochem Corp. (San Diego, CA), ktorý bol identifikovaný ako PRL-3 inhibítora cez vysokou priepustnosťou skríningu pomocou chemickej knižnice Kórea Chemical Bank, a inhibuje PRL-3 aktivitu fosfatázy [16]. V skutočnosti, fosforylácie KRT8, PRL-3-interagujúce proteín, vyvolané katalyticky neaktívneho zmutovaného PRL-3, ale nie divokého typu, bol potvrdený PRL-3 liečbe inhibítorom v spôsobom závislým od dávky [17]. Okrem toho, protinádorová účinnosť PRL-3 liečbe inhibítorom tiež ukázal, že je podobný tomu, ktorý liečby siRNA v rakoviny pažeráka alebo hrubého čreva a [11, 17].
Z 173 formalínom fixované, zaliatych v parafínu, vzorky tkaniva radu, ak sme predtým hodnotená PRL-3 stav expresie pomocou imunohistochemického farbenia (IHC) v GC [6], 77 uzavreté pary primárnych nádorových tkanivách a zodpovedajúce normálne sliznice tkaniva boli náhodne vybrané z pacientov s diferenciálnej fázou v závislosti na 13 th edition japonskej klasifikácie karcinómu žalúdka (JCGC) [18]; 40 párov s pozitívnou PRL-3 výrazu (10 pacientov vo fáze I, 10 v druhej, 10 v III a 10 v oblasti IV) a 37 párov s negatívnym výrazom (10 pacientov v štádiu I, 10 v druhej, 9 v III a 8 v oblasti IV). Všetci pacienti podstúpili gastrektómii podľa pokynov žalúdočných liečby rakoviny v Japonsku [19], a histopatologické vyšetrenie bola vykonaná v súlade s JCGC. Použitý 6 ročník Medzinárodnej únie proti rakovine (UICC) /bol tiež použitý TNM klasifikácie [20]. Tabuľka 1 zobrazuje detailné informácie o 77 pacientov. Všetky vzorky tkaniva boli odobraté v Kitasato University Hospital, a informovaný súhlas bol získaný od všetkých pacientov. Táto štúdia bola schválená etickou komisiou v Kitasato University.Table 1 Korelácia medzi zosilnenie PRL-3 génu a klinicko-premenných u 77 pacientov s rakovinou žalúdka


amplifikácia génu PRL-3

Premenné
Celkový počet
negativita
Positivity
p
hodnota

EU Počet
(%)
EU Počet
(%)

PRL-3 výraz
0,006
negativita
37
37
(100 ) NETHRY.cz 0
(0)
Positivity
40
32
(80)
8
(20)
vek (roky)
0,726 Hotel < 60
34
30
(88)
4
(12)
≥60
43
39
(91)
4
(9)
Pohlavie
0,710
Male
51 45
(88)
6
(12)
Žena
26
24
(92)
2
(8)
Lymfatická prenikanie
0,343
Absencia
15
15
(100) NETHRY.cz 0
(0)
prítomnosť
62
54
(87)
8
(13)
cievnu priepustnosť
0,263
absencia
25
24
(96)
1
(4)
prítomnosť
52 45
(87)
7
(13)
Diferenciácia
0,134
dobre a stredne
31.
30
(97)
1
(3)
Poor
46
39
(85)
7
(15)
Hĺbka invázie
0,006 *
T1 (ma sm)
15
15
(100)
0
(0)
T2 (mp a ss)
35
33
(94)
2
(6)
T3 (SE)
19
16
(84) Sims 3
(16)
T4 (sI)
8
5
(63)
3
(38)
lymfatických uzlín
0,022
Absencia

• MicroRNA-645, up-regulované v ľudskom adencarcinoma žalúdočnej pažeráka križovatky, inhibuje apoptózu zameraním nádorového supresor IFIT2
• Prognostický význam detekcie životaschopné cirkulujúcich nádorových buniek u pacientov s rakovinou žalúdka pomocou telomerázy špecifické vírusovej agent: prospektívnej štúdie