Plos ONE: Exosomal miRNAs od potrebušnice izpirku kot potencialne Prognostic biomarkerjev peritonealne metastaze želodčnega raka

Povzetek

peritonealni metastaze je najpogostejša vrsta ponovitve pri bolnikih z rakom želodca (GC) in je povezana s slabo prognozo. Peritonealno izpiranje citologija, ki se uporablja za oceno tveganja za peritonealno metastaz, ima nizko občutljivost. Tukaj smo ocenili diagnostične možnosti exosomal miRNA profilov v peritonealni tekočini za napovedovanje peritonealno razširjanja v GC. Total RNA je bila vzeta iz eksozomov, prostazomov izoliranih iz šestih želodca malignega ascitesa (MA) vzorcev, 24 peritonealno izpiranje tekočine (PLF) vzorcev in supernatante kulture (cm) dveh človeških želodčnega raka celične linije, ki se razlikujejo v njihovem potencialu za peritonealno metastaz. Izražanje exosomal miRNAs je bila ocenjena z Agilent Human miRNA mikromrež in kvantitativno povratne reakcije transkripcijski polimerazo (QRT-PCR). Z analizo mikromrež pokazala nizko variabilnost v številu in signala intenzivnosti miRNAs odkritih med vzorci. V šestih OU tekočin, miR-21 je pokazala največjo moč signala. Identificirali smo pet miRNAs (miR-1225-5p, miR-320C, miR-1202, miR-1207-5p in miR-4270), z visoko izražanja v OU ​​vzorcih je PLF korena invazivne GC in cm od visoko metastatskega GC celične linije; pojavijo te kandidatke Mirna vrste, ki so povezani s peritonealno razširjanje. Razlika izraz miR-21, MIR-320c in pokoj-1225-5p je bila potrjena v PLF korena-invazivno in neinvazivno GC s QRT-PCR in pokoj-21 in pokoj-1225-5p so potrdili, da se pridružijo s serozne invazijo v PK. PLF mogoče uporabiti za profiliranje izražanje exosomal miRNAs. Naše ugotovitve kažejo, da lahko miR-21 in miR-1225-5p služijo kot biomarkerjev peritonealno ponovitev po kurativno GC resekcijo, kar omogoča nov pristop k zgodnji diagnozi peritonealno razširjanje GC

Navedba. Tokuhisa M, Ichikawa Y, Kosaka N Ochiya T Yashiro M, Hirakawo K, et al. (2015) Exosomal miRNAs od potrebušnice izpirku kot potencialne Prognostic biomarkerjev peritonealne metastaze želodčnega raka. PLoS ONE 10 (7): e0130472. doi: 10,1371 /journal.pone.0130472

Urednik: Soheil S. Dadras, University of Connecticut Health Center, UNITED STATES

Prejeto: 1. februar 2015; Sprejeto: 20. maj 2015; Objavljeno: 24. julij 2015

Copyright: © 2015 Tokuhisa et al. To je prost dostop članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Razpoložljivost podatkov: Vsi pomembni podatki so v prispevku

financiranje:.. avtorji nimajo podpore ali sredstva za sporočanje

nasprotujočimi si interesi. avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

MicroRNAs (miRNAs) so majhne (19-23 nukleotidov) nekodiran RNA, ki delujejo kot post-transkripcijskih regulatorji izražanja genov in igrajo pomembno vlogo pri obvladovanju številnih bioloških procesov, vključno s celično diferenciacijo, proliferacijo in apoptoza [1]. MiRNAs so pokazale, da imajo onkogenega ali tumor-zatiranje dejavnost, in deregulacije izražanje mnogih vrst miRNA je bila odkrita na več vrst raka, kar kaže na morebitno uporabo miRNAs kot biomarkerjev napredovanja raka in metastaz [2-5].

MiRNAs so zaviti v izločevalnih microvesicles (npr eksozomov, prostazomov, apoptotične organe, ter ukinitev microvesicles), ki je ščit miRNAs pred razgradnjo s RNase in služijo kot sredstvo za izločanje miRNA v zunajcelični prostor in telesnih tekočin. Eksozomov, prostazomov so majhne membranasta mehurčki, ki so bili vpleteni v celični imunski odziv; Vendar pa v zadnjem času je postalo očitno, da eksozomov, prostazomov vsebujejo velike količine RNK in lahko sodeluje pri imunsko neodvisna regulatornih mehanizmov. To je bilo zdaj ugotovljeno, da lahko eksozomov, prostazomov opravljajo medcelični prenos miRNAs, tako sodelujejo v mehanizmih, ki temeljijo na miRNA signalizaciji [6]. Višji nivoji eksozomov, prostazomov vsebujejo miRNA so zaznali tudi v plazmi bolnikov z rakom kot pri zdravih posameznikih [7], kar kaže, da temelji na Eksosom miRNK izločanje sodeluje pri razvoju raka. Analiza odklonskega miRNA izražanja v serumu, slina, iztrebki in urin je bil zaposlen za zgodnje odkrivanje B limfomom in ustna, črevesne in mehurja raka [8-11].

rak želodca (GC) je drugi najpogostejši vzrok smrti zaradi raka na svetu [12]. Trebušne votline je najpogostejše mesto metastaz in ponovitve GC in malignega ascitesa (MA), s peritonealno širjenje rakavih celic je povzročil, so bili povezani s slabo prognozo. Trenutno ni zanesljivih napovednika za razvoj malignih peritonealno ascitesa pri bolnikih GC. eksozomov, prostazomov vsebujejo Mirna predstavljajo mehanizem novo v medcelično signaliziranje in lahko dobimo vpogled v okolje, ki omogoča širjenje raka v potrebušnice [13].

V tej študiji so eksozomov, prostazomov izolirali iz MA in odčitavanje peritonealni izpirku (PLF) vzorce, dobljene iz pacientov GC in gojišče (CM) visoko invazivnih peritonealno celičnih linij in miRNAs smo nato ekstrahirali iz teh vzorcev. smo preverili kakovost izločenega exosomal miRNAs in usklajenost miRNA vzorcev izražanja. MIRNA izraz profili v MA, PLF in vzorcev CM smo primerjali in so bile ugotovljene miRNAs kandidatke, povezane s peritonealno razširjanje GC.

Materiali in metode

Bolniki

Vsi bolniki ali njihovi skrbniki, če soglasja pisno obveščeno. Študija je odobril Odbor za etiko City University Hospital Yokohama (odobritev št A110127001).

MA in intraoperativne PLF Vzorci so bili zbrani pri bolnikih GC z clinicopathological značilnosti, predstavljene v tabeli 1. Vsi bolniki so že bili diagnosticiran z GC s histopatološko analizo biopsijo vzorcev, odvzetih iz primarnih lezij, in šest bolnikov MA je bila diagnosticirana za prisotnost ascites ga trebuhu Računalniška tomografija (CT). Ascites smo analizirali tudi s citologijo in vsi so bili potrjeni kot pozitiven za maligne bolezni, ki ga patologi; preostale vzorce MA smo uporabili miRNA izolacijo. PLF je intraoperatively zbirali od 24 bolnikov GC (tabela 1). Po laparotomijo smo 100 ml fiziološke raztopine zlijemo v vrečke po Douglas in peritonealno izpiranje z vodo zberemo pred kirurško resekcijo tumorja. PLF smo analizirali s citologijo in se uporablja za miRNA izolacijo. Med 24 PLF vzorcev, šest smo testirali s pomočjo Mirna mikromrež in 18 smo analizirali s qPCR.

celične kulture

celično linijo OCUM-2M je bila ustanovljena iz primarnega tumorja scirrhous karcinoma želodca in celično linijo OCUM-2MD3 izvira iz OCUM-2M celice z velikim potencialom za peritonealno razširjanja v golih miših [14]. Celice smo gojili v mediju, modificiranem Dulbeccovem Eagle je (DMEM; Life Technologies, Grand Island, NY), dopolnjenem z 10% toplotno deaktiviranega fetalni goveji serum (FBS) in antibiotik-antimikotično pri 37 ° C v 5% CO _{2 inkubator. Da dobimo celično CM so OCUM-2M in OCUM-2MD3 celice izperemo trikrat z DMEM brez seruma, dopolnjenem z antibiotikom Antimikotičen in inkubiranih v istem mediju 48 ur.}

osamitev eksozomov, prostazomov

Vzorci za Eksosom izolacijo smo pripravili kot smo že prej [15] opisano. Za odstranjevanje velikih delcev celic in celična naplavin, mag PLF in CM smo centrifugirali pri 2000 kratni povečavi g
15 minut pri 4 ° C in filtriramo skozi filter 0,22-im (Millipore, Billerica, MA). Supernatant smo shranili pri -80 ° C, dokler jih ne rabimo za miRNA ekstrakcijo.

obori eksozomov, prostazomov, smo vzorce centrifugirali pri 110.000-kratni povečavi g
za 70 min pri 4 ° C. Eksosom pelet smo sprali s 11 ml-fosfatnim pufrom (PBS), in ponovno centrifugirali, kot je opisano zgoraj. Pelet se uporablja za ekstrakcijo RNA.

Total ekstrakcijo RNA in analiza

Total RNA je bila vzeta iz eksozomov, prostazomov uporabo kit miRNeasy mini (Qiagen, Hilden, Nemčija), v skladu z navodili proizvajalca in je bila nato shrani pri -80 ° C, dokler zahteva nadaljnjo analizo.

kakovost, koncentracijo in velikost celotnega exosomal RNA so bile ocenjene z nizom Agilent Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies, Foster City, CA). Pred analizo, je bilo skupno RNA pripravili z uporabo Agilent RNA 6000 Pico komplet (Agilent Technologies) po protokolu proizvajalca.

Mirna mikromrež

MiRNAs pridobljeni iz šestih MA, šest PLF, in dva CM vzorce smo analizirali z uporabo Agilent Human Mirna mikromrež (Agilent Technologies), ki vsebuje 1.226 ljudi miRNAs in 146 ljudi virusne miRNAs. Za odkrivanje miRNA, je bila 100 ng RNK označene in hibridni pomočjo Human miRNA mikromrež komplet (rel 16,0; Agilent Technologies) po protokolu proizvajalca (miRNA popoln označevanje in Hyb komplet za miRNA mikromrež sistema). Hibridizacije signali so bile ugotovljene z DNA Mikromrežni Scanner G2505C (Agilent Technologies) in skeniranih podob so bili analizirani s pomočjo Agilent za kopiranje programske opreme (v. 10.7.3.1). Analiza podatkov je bila opravljena s pomočjo Agilent GeneSpring GX programske opreme v. 11.0.2. (Log _{2 preoblikovanje). Izhodišče transformacija ni bila izvedena.}

Kakovost miRNA ekstrakcijo smo analizirali glede na spremenljivost števila-mikromrež zazna miRNA vrste signala intenzivnost in korelacija miRNA izražanja med vzorci glede na povprečje ± SD, koeficient variacije (CV) in korelacijski koeficient (CC).

Izbor peritonealno metastaz specifične miRNAs

smo analizirali profili izraz za exosomal miRNAs izbrati miRNAs, ki so specifični za GC trebušni votlini razširjanje po naslednji postopni pristop. 1. korak: Mirna profili v CM visoko metastatski peritonealno OCUM-2MD3 celic smo primerjali s tistimi od starševskih non-metastatskega OCUM-2M celic in različno izražena miRNAs (pomeni kratna sprememba, > 2) je bilo izbranih <. br>

korak 2: šest PLF vzorci so bili razdeljeni v dve skupini: T4 (n = 4) in T1-T3 (n = 2) glede na stopnjo raka po velikosti tumorja in podaljšek (UICC-AJCC, 7 ^{th izdaja). Faza T4 GC je označen z najvišjo frekvenco peritonealno metastaz v primerjavi z drugimi fazah [16]. profili miRNA izraz za T4 skupine so v primerjavi s tistimi iz skupine T1-T3 in različno izraženih miRNAs (pomeni kratna sprememba, > 2) je bilo izbranih}

Korak 3:. izbrane miRNAs, ki so skupna oba koraka in ki so bili izraženi v MA so dodatno filtrira glede na jakost signala. Tisti z vrednostmi intenziteto več kot dnevnika _{2 10 v OU ​​in PLF so bili izbrani kot miRNAs kandidatke, povezanih z peritonealni metastaz; miR-21 je pokazala najvišje povprečne intenzitete signala med MA vzorcev. Razlika v izraz miRNA vrst izbrali v koraku 3 je bila potrjena v preostalih 18 PLF vzorcih QRT-PCR.}

Kvantitativna analiza peritonealne metastaz specifične miRNA izražanja QRT-PCR

TaqMan microRNA testi (Life Technologies) so bili uporabljeni za količinsko relativne ravni izražanja mir-21 (testa ID. 000397), miR-320C (test ID. 241053_mat), miR-1225-5p (test ID. 002.764), in miR-16 (test ID. 000391). Reverzna transkripcija smo izvedli s pomočjo TaqMan miRNK RT Kit (Life Technologies) pod naslednjimi pogoji: 30 min pri 16 ° C, 30 min pri 42 ° C in 5 min pri 85 ° C. PCR je bila izvedena v 96 vdolbinami z uporabo 7500 Real Time PCR System (Life Technologies); Vse reakcije smo izvedli v treh izvodih. Stopnje izraženosti ciljnih miRNAs smo normalizirali tistemu miR-16, ki je bila uporabljena kot stabilno izražen kontrolo [17]. Pri analizi naše mikromrež podatkov exosomal miRNA pri malignih vzorcih ascites, miR-16 je predstavil najmanjši koeficient variacije (CV = 4%) med kandidatkami notranjih standardov, vključno z miR-638 (CV = 8%), pusti-7a (CV = 8%), in 142-3p (CV = 23%).

Statistična analiza

zveznih spremenljivk smo primerjali s pomočjo študentov je t
-test. Ko je potrebno, t
-test je bil spremenjen za primerjavo neenake variance. Razlika med kategorične spremenljivke je bila ocenjena s pomočjo Fisherjev test. Korelacija med dvema spremenljivkama je bil ovrednoten z Pearsonov koeficient korelacije. Razlike so bile upoštevane statistično značilne pri P < 0,05. Statistične analize so bile izvedene s pomočjo SPSS 21,0 programsko opremo za Windows (IBM, Armonka, NY).

Rezultati

Kvantitativna analiza izpisanih exosomal RNA

Total RNA je bila vzeta iz eksozomov, prostazomov izoliranih iz MA, intraoperativnim PLF in celic CM. Mediana koncentracija izpisanih exosomal RNA je bila 4,4 ng /xl (od 1,2 do 6,1 ng /ul) za OU in 6,4 ng /p.L (od 1,7 do 16,4 ng /ul) za PLF. Elektroferogrami pokazala velik delež malih vrste RNA prisotne v vseh CM in kliničnih vzorcev, medtem ko je bilo zelo malo kontaminacija s 18S in 28S ribosomske RNA (brez ločenih vrhov na ustrezno molekulsko maso) brez ali z opazili (slika 1).

Uspešnost miRNA mikromrež

Če želite preizkusiti izražanje exosomal miRNA mikromrež v vsaki skupini vzorcev, smo pregledali število odkritih miRNAs, percentil jakosti signala, število običajno zajetih miRNAs in korelacijo miRNA izraz med skupinami. Številke miRNA vrst odkritih v vsaki skupini z mikromrežnem je prikazano na sliki 2. V šestih OU in šest PLF vzorcev, to pomeni število bila 490,1 (SD = 42,3; CV = 8,6%) in 367,5 (SD = 13,4; CV = 3,6%) oz. V vsaki skupini je bilo variabilnost v številu odkritih miRNAs med vzorci nizko

signalov porazdelitev intenzivnosti za vsako je predstavljeno na sliki 3 skupini.; To prikazuje obdelane signale normalizirale do 25, 50, 75 in 90 ^{th percentil v vsaki skupini. V 50 th percentila dnevnik _{2 relativne intenzitete signala za MA (sliki 3-1) in PLF (sl 3 in 2) vzorcev in med tremi skupinami (MA, PLF in CM, slikah 3 in 4) je bila 5,53 ± 0,19 (CV = 3,49%), 6,14 ± 0,24 (CV = 3,87%) in 4,97 ± SD (CV = 5,24%), oz. Variabilnost jakosti signala med vzorcev v vsaki skupini kot tudi med skupinami je bila nizka.}}

Številke miRNAs pogosti med vzorci v skupinah mag PLF in CM bile 327, 263 in 354 , oziroma, ker to je bilo 194 za tri skupine (slika 4).

Tabela 2 prikazuje korelacijo miRNA izražanja med vsaka dva vzorca. Najvišje in najnižje CC vrednosti so 0,94 in 0,68, v tem zaporedju; Povprečna CC vseh vzorcih je bila 0,79 (CV = 8,86%). V MA, PLF, in CM skupine, so bile povprečne vrednosti CC 0,85, 0,88 in 0,90, v tem zaporedju, in spremenljivost v izražanju profilov za vsako skupino je bila nizka.

Izbor miRNAs kandidatk v zvezi s peritonealno razširjanje

do sedaj ni bilo nobenih podatkov je na voljo na izraz profilov exosomal miRNAs povezanih s peritonealno razširjanja, zaradi nedostopnosti normalnih ascitic tekočin zoper katero bi lahko primerjali profile MA izražanja. Izbrali smo miRNAs povezane s peritonealno širjenje z uporabo postopni pristop. Število miRNAs pogosto ujeli v šestih OU vzorcev je 327. v korakih 1 in 2, 140 in 118 metastaze specifične miRNAs so bili izbrani v CM in PLF skupin oz. Od teh 327, 140 in 118 miRNAs je bilo pet miRNAs izbrali kandidate, povezanih s peritonealno razširjanje (slika 5). Dva od njih (miR-1225-5p in miR-320C) in miR-21 z največjo intenzivnostjo signala med miRNAs OU specifične so potrdili, da je bila različno izražena v 18 PLF vzorcih, z uporabo qPCR (tabela 3).

Potrditev kandidata miRNA izražanja qPCR

Osemnajst PLF vzorci so bili razdeljeni v dve skupini glede na metastatskega fazi, T4 (perforiran korena, n = 9) in T1-T3 (subserosa ali manj, n = 9), in izražanje miR-21, miR-320c in miR-1225-5p smo analizirali s QRT-PCR. Slika 5 kaže, da so bile stopnje miR-21 in pokoj-1225-5p pri bolnikih GC T4 fazi bistveno povečala v primerjavi s tistimi pri bolnikih T1-T3 (MIR-21, P = 0,027 in miR-1225-5p, P = 0,008; slika 5). Razlika v miR-320C izražanja med dvema skupinama bolnikov je bilo brez značilna (P = 0,928, slika 6).

Naslednja je bila preučena povezava med ravnmi miRNA in kliničnega ozadja bolnikov GC (tabela 4). MIR-21 in miR-1225-5p izraz je bila bistveno višja pri bolnikih s T4 stadiju raka, kot je pri bolnikih T1-T3-stopenjskimi (P = 0,015). Ni pomembna korelacija je bilo med miRNA izražanja in drugih kliničnih parametrov.

Pogovor

V tej študiji smo raziskovali, prvič, vsebina miRNA za eksozomov, prostazomov izoliranih iz MA in PLF GC bolnikov. Naša raziskava je pokazala, da se exosomal miRNAs lahko dosledno pridobljeni iz upravljanja in PLF in da miRNA izraznih profilov lahko kaže stanje potrebušnice pri bolnikih z GC.

Prognoza GC s serozne invaziji še vedno slaba, tudi po R0 resekcijo, ker visoke stopnje ponovitve, zlasti peritonealno metastaz (PM) [18]. PM v GC je najbolj zapletena vrsta ponovitve, ker je težko napovedati, kakor tudi za diagnosticiranje. Čeprav ascites je najpogostejša PM simptom, mnogi pacienti GC s PM ne razvijejo ascitesa. Med diagnostičnimi metodami, ki temeljijo na slikanje, ki je visoke hitrosti spiralna CT pogosto uporablja za oceno predoperativnega uprizoritev GC in post-terapevtskega spremljanja; Vendar pa v primeru PM je njena diagnostična natančnost pomanjkljivo, predvsem zaradi nizke občutljivosti [19]. Uporaba PET-CT za PM diagnozo v PK je prav tako sporno, kot je bilo opisano, da ima FDG-PET slabo občutljivost za odkrivanje PM v GC [20]. PLF je postala naslednja tarča za ugotavljanje in napovedovanje PM v PK. Citološki pregled intraoperatively zbranih PLF se uporablja za napovedovanje peritonealno ponovitve [21] in se uporablja za GC uprizoritve na Japonskem [22]. Vendar pa so nekateri raziskovalci so poročali, da PLF citologijo ne kažejo občutljivosti potreben za napovedovanje in odkrivanje PM [21], in so predlagali uporabo molekularnih diagnostičnih metod, kot je RT-PCR za detekcijo mikro metastaz pri PLF. V multicentrični prospektivni študiji, mRNA izražanje genov, ki kodirajo karcinoembrionski antigen (CEA) in Cytokeratin 20 (CK-20), ki ga je RT-PCR ovrednotene, se je izkazala za koristno za napovedovanje celokupnega preživetja in PM v PK [23] . Vendar pa pomanjkljivost diagnostičnih metod, ki temeljijo na mRNA je visoka razgradljivost mRNA v okviru kirurških posegov.

V nasprotju s tem, miRNAs zaprti v eksozomov, prostazomov ostane stabilna in lahko krožijo v telesnih tekočinah, kot seruma, plazme , slina, urin, materino mleko, in solze, za dalj časa [24, 25]; eksozomov, prostazomov so tudi izolirali iz MA pri raku jajčnikov [26].

Kolikor nam je znano, ni bilo poročila o exosomal miRNAs izoliranih iz PLF bolnikov GC. Levänen sod. zbrani eksozomov, prostazomov iz bronhoalveolarni izpirku in analizirali exosomal Mirna izraz za odkrivanje, povezane z alergijo Mirna vrst [27]. Liu et al. poročali, da eksozomov, prostazomov izolirane iz cervicovaginal izpirku vsebuje visoke vrednosti miR-21, ki bi jih lahko uporabili kot biomarker raka materničnega vratu [28]. Tukaj smo analizirali izražanja profile exosomal miRNAs v PLF bolnikov GC s miRNA mikromrež tehnologije, da bi ugotovili kandidatke diagnostične Mirna biomarkerjev za napovedovanje metastaz v PK.

V naši raziskavi, prvi izziv laična v kvantitativnem izolacijo exosomal miRNA iz PLF. Weber et al. ocenili Mirna izraz v 12 telesnih tekočinah in poročali, da je bila celotna koncentracija RNA v peritonealni tekočini 775 g /L [25], kar je manj, kot da smo pridobili iz MA in PLF-4.400 in 6.400 ug /L, oziroma razlog za razlika je lahko metodologija za izolacijo celotne RNA, saj Weber et al. neposredno pridobljeni RNA iz peritonealne tekočine, medtem ko smo najprej izolirali eksozomov, prostazomov in nato uporabi teh za ekstrakcijo RNA. Analiza kakovosti RNA izolirane iz PLF pokazali obilo majhnih (< 200 nt) RNA vrste v CM in MA. Ni bilo različne 18S in 28S ribosomskih RNK ​​vrhovi v pripravi, kar kaže na odsotnost okužbe z znotrajcelične RNA.

Druga težava pri tej raziskavi je sodelovalo doslednosti pri kakovosti exosomal miRNAs izolirana. V naši raziskavi smo ugotovili nizko variabilnost v številu odkritih miRNA vrst in miRNA jakosti signala in visoko korelacijo miRNA izražanja med vzorcev v vsaki skupini. Srednje število zaznavnih miRNAs v OU ​​in PLF bilo 490 in 367, ki je bil v soglasju s številom miRNAs (397) prej odkritih v peritonealni tekočini [25].

PLF in MA vzorci so pokazali nizko variabilnost v jakost signala (CV = 3,87% za 50 ^{th percentil). Poleg tega so Mirne izražanje vzorce močno povezana med vzorci v vsaki skupini (CC > 0.850), kot tudi med skupinami (0,8 > CC > 0,7). Ti rezultati so pokazali, da bi lahko PLF vir visoko donos kakovostnih miRNAs, ki kažejo, skladne izrazne vzorce v mikromrež testu.}

smo analizirali Z izrazom profili Mirna izbrati miRNAs specifične za peritonealno metastaz. MIR-21 je pokazala višjo ekspresijo pri bolnikih s T4 stadiju raka kot pri tistih skupini T1-T3. Fabbri sod. poročali, da miR-21 in miR-29a pri raku sprosti eksozomov, prostazomov vplivala rast tumorjev in širjenje z vezavo in aktiviranje TLR v okolici imunskih celic in induciranje prometastatic vnetni odziv [29]; To podpira zamisel, da s tumorjem izhaja eksozomov, prostazomov prispeva k premetastatic mikrookolja [30, 31]. To lahko pomeni, da je T4-karcinoma izhaja eksozomov, prostazomov ustvarite premetastatic nišo v potrebušnice, ki pa podpira peritonealno invazijo po kurativno resekcijo GC.

Z postopni pristop, smo izbrali pet exosomal miRNAs (miR-320C , miR-1202, miR-1225-5p, miR-1207-5p in miR-7270) in potrjen miR-320 in miR1225-5p izraz v PLF 18 bolnikov CG s QRT-PCR. Mir-1225-5p pokazala višjo izraz v T4 kot T1-T3 bolnikov fazi CG, kar potrjuje rezultate, ki jih mikromrež, ker ni bilo nobene razlike v miR-320 ravni med skupinami bolnikov. Mir-1225 cilji gen policističnih ledvic, PKD1
, ki se pogosto mutirani v avtosomnem dominantnem bolezni policističnih ledvic; Tako lahko miR1225 vpliva na napredovanje te bolezni [31]. Vendar pa je razmerje med pokoj-1225 in rak ostaja nejasna. MIR-21 in miR-1225-5p lahko pripravi premetastatic nišo v potrebušnice za razširjanje in poravnavo raka metastatsko celic in tako lahko navede predispozicije za peritonealno ponovitve po kurativno GC resekcijo.

PLF daje informacije o statusu peritonej, kot spremembe v populaciji imunskih celic in izločanje rastnih faktorjev in citokini [32, 33]. Citologijo in molekularne diagnostične teste, ki temelji na odkrivanju rakavih celic, medtem ko se profiliranje miRNAs v PLF lahko uporabi za napovedovanje peritonealno premetastatic fenotipa v PK, ki zagotavlja bolj učinkovite preventivne in kurativne ukrepe.

• Plos ONE: Zic1 Promotor Hypermethylation v plazmi DNK je potencialni Biomarker za Rak želodca in intraepitelijski Neoplasia
• Plos ONE: MicroRNA-206: Učinkovito zavira Rak želodca napredovanje skozi c-Met Pathway