Plos ONE: Plasma microRNAs, miR-223, miR-21 in miR-218, kot je Nova Potencialni Biomarkerji za Rak želodca Detection

Povzetek

Ozadje

MicroRNAs (miRNAs), endogeni majhna nekodiran RNA, so stalni v človeški plazmi. Zgodnja diagnoza rak želodca (GC) je zelo pomembno, da se izboljša učinek terapije in podaljša preživetje bolnikov. Naš namen je ugotoviti, ali lahko štiri miRNAs (miR-223, MIR-21, miR-218 in MIR-25), ki so tesno povezane z tumorigeneze ali metastaz GC služijo kot novih potencialnih biomarkerjev za detekcijo GC.

Metodologija

najprej smo izmerili plazemske koncentracije štirih miRNAs 10 GC bolnikov in 10 zdravih kontrolnih osebah s kvantitativno reverzno transkripcijo verižne reakcije s polimerazo (QRT-PCR), nato pa v primerjavi plazmi rezultate Mirne z izrazi v tumorskih tkivih od osmih bolnikih GC. Nazadnje je bila prisotnost miR-223, MIR-21 in miR-218 v plazmi potrjen v 60 GC bolnikov in 60 zdravih kontrolnih osebah, in so bili analizirani območja pod sprejemnik deluje značilne (ROC) krivulje teh miRNAs.

Rezultati

Ugotovili smo, da so plazemske koncentracije miR-223 ( P
< 0,001) in miR-21 ( P
< 0,001) pri bolnikih GC bistveno višja kot pri zdravih kontrolah, medtem ko miR-218 ( P
< 0,001) je bila bistveno nižja. ROC analize prineslo AUC vrednosti 0.9089 za miR-223, 0.7944 za pokoj-21 in 0.7432 za pokoj-218, in kombinirana analiza ROC pokazala najvišjo vrednost AUC 0.9531 v diskriminacijo bolnikov GC iz zdravih kontrol. Poleg tega so plazemske koncentracije miR-223 ( P
< 0,001) so bili in miR-21 ( P
= 0,003) bistveno višja pri bolnikih GC s stopnjo I kot pri zdravih kontrolah. Poleg tega so bile plazemske koncentracije miR-223 bistveno višja pri bolnikih GC s Helicobacter pylori
(HP) okužbe, kot tiste, ki nimajo ( P
= 0,014), in znatno višje pri zdravih kontrolnih osebah z okužbo s HP, kot tiste, ki nimajo ( P
= 0,016).

sklepi

Plasma miR-223, miR-21 in miR-218 so nove potencialne biomarkerjev za detekcijo GC .

Navedba: Li Bs Zhao il, Guo G Li W Zhu Ed, luo X, et al. (2012) Plasma microRNAs, miR-223, miR-21 in miR-218, kot nove potencialne biomarkerjev za želodca odkrivanje raka. PLoS ONE 7 (7): e41629. doi: 10,1371 /journal.pone.0041629

Urednik: Ajay Goel, Baylor University Medical Center, Združene države Amerike

Prejeto: 21. december 2011; Sprejeto: 27. junij 2012; Objavljeno: 30. julij 2012

Copyright: © Li et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je bil podprt z donacijo Natural Science Foundation Kitajske (NSFC, št 81071412). Med financerji imeli vlogo pri zbiranju in analizi, ne pa vloge pri oblikovanju študije, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi:.. Avtorji so poročali, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca je četrti najpogostejši malignom na svetu, in drugi najpogostejši vzrok smrti zaradi raka pri obeh spolih po vsem svetu. Najvišje stopnje umrljivosti so ocenjeni v vzhodni Aziji [1]. Stopnja preživetja 5 let za raka želodca, je manj kot 20% -25% v ZDA, Evropi in na Kitajskem [2]. Trenutno popolna kirurška resekcija je najbolj učinkovito zdravljenje, ki ponuja odlično (90%), možnost ozdravitve pri bolnikih z zgodnjim rakom želodca [3]. Za napredovalega raka želodca, kljub kurativno operacijo, okoli 80% pacientov umre v kratkem času od Lokoregionalno ponovitve (87%) in /ali oddaljeno metastaz (30%) [4]. Zato bi izboljšanje zgodnjega diagnosticiranja poveča možnost ozdravitve pri bolnikih z zgodnjim GC ali podaljša preživetje bolnikov z zgodnji fazi GC. Vendar pa je večina v zgodnji fazi GK je težko odkriti [5]. Konvencionalne serumski markerji za GC, kot antigen ogljikovih hidratov 19-9 (CA19-9) in karcinoembrionski antigen (CEA), pomanjkanja zadostne občutljivosti in specifičnosti za olajšanje zgodnjega odkrivanja.

MicroRNAs (miRNAs) so majhne, ​​ne -coding RNA da posttranscriptionally uravnavajo izražanje genov. Abnormalnih izraz miRNAs je povezana s številnimi boleznimi, vključno raka [6]. Prejšnje študije so pokazale, da se tkivo Mirna izraz profili lahko štejejo za diagnostične biomarkerjev pri raku [7] - [9]. Vendar pa je ta diagnostična metoda omejena v svoji učinkovitosti, kot so vzorci tkiva niso primerna za dostop in so invazivni pridobiti. Vedno večje število dokumentov poročajo, da so v obtoku miRNAs trajno odkriti v različnih telesnih tekočinah, vključno seruma in plazme [10], [11]. Obtoku miRNAs kot novih stabilnih biomarkerjev bi bil eden izmed najbolj obetavnih sredstev za diagnozo, saj so v plazmi in serumu enostaven dostop in neinvaziven pridobiti. V zadnjem času so bile ugotovljene številne obetavne serum ali plazma Mirna biomarkerjev za detekcijo GC [12], [13].

Če želite raziskati to novo plazmo Mirna podpis lahko razlikuje bolnikov z GC (zlasti v zgodnji fazi GC) z zdravo kontrole, smo izbrali štiri miRNAs (MIR-223, miR-218, MIR-25 in MIR-21), ki so bile prijavljene pogosto dysregulated v GC tkiva in tesno povezana z tumorigeneze ali metastaz GC [14] - [21] . Zato smo predpostavili, da so bile plazemske koncentracije treh miRNAs (miR-223, miR-218 in MIR-25) zmotna pri bolnikih, GC, kot tudi tiste, miR-21, ki je predlagal, da se lahko ta podpis služi kot biomarker za odkrivanje GC [12]. Vendar pa niso bile ugotovljene plazemske koncentracije miR-21 v GC bolnikov na različnih stopnjah TNM. V tej študiji smo primerjali plazemske štirih miRNAs v GC bolnikov z zdravimi kontrolami, in ocenila izvedljivost štirih miRNAs kot novimi neinvazivnimi biomarkerjev za detekcijo GC.

Materiali in metode

Bolniki in vzorci

Vsi vzorci so bili zbrani iz privolijo posameznikov v skladu s protokoli, ki jih revizijski odbor za etiko, odobrenih na tretje vojaške Medical University. Skupno je bilo vključenih 70 bolnikov z GC pred obdelav in 70 zdravih kontrolnih osebah iz bolnišnice Southwest (Chongqing, Kitajska), v naši raziskavi med letoma 2010 in 2011. Pri bolnikih, GC 70, smo analizirali histologijo GC tkiv, vključno 56 adenokarcinom, 13 mucinozni adenokarcinom in 1 karcinom Signet-obroč celic, in določiti lokacije tumorja, vključno z 34 v želodca telesu, 24 želodčnega antruma, 8 želodčnega Kardije in 4, v drugih (v zgornjem delu trebuha, želodca kota, želodca panj). Bolniki GC so bili razvrščeni glede na klinične faze TNM, vključno z 12 stopnjo I (mediana starost 53 let [območje, 36-70 let]; 8 moških, 4 ženske), 11 stopnja II (srednja starost, 61 let [območje, 36-77 let], 7 moških, 4 ženske), 36 stadij III (mediana starost 55 let [območje, 30-71 let]; 26 moških, 10 žensk) in 11 stage IV (mediana starost, 53 let [razpon , 46-66 let], je bilo 9 moških, 2 ženski) .The status okužbe HP preskušajo z Kits Anti-HP Protitelesa ELISA Diagnostic (S20010005), (Peking BEIER BIOENGINEERING CO, LTD), ki prikazuje 43 GC bolnikov z okužbo s HP. in 27 brez. Pri 70 zdravih kontrolnih osebah so bili vključeni 44 moških in 26 žensk, in povprečna starost je bila 51 let [razpon, 26-75 let]. Rezultati testa HP okužbe je pokazala 31 zdravih kontrolnih osebah z okužbo s HP in 39 brez. (Tabela 1).

celic brez plazme smo izolirali iz vseh krvnih vzorcih v 2 urah zbiranja uporablja dvostopenjski protokol (1500 rpm za 10 minut, 12.000 rpm 2 min), da se prepreči onesnaženje z mobilnega nukleinske kisline. Plazmo smo prenesli v svežo epruveto, pri čemer fiksno višino 0,5 cm plazme supernatanta nad pelete izogniti premešali peleto [11]. Je bila shranjena pri -80 ° C v 450 p.l alikvote. Osem parov vzorcev tkiv so bili zbrani iz osmih bolnikih GC z višjimi stopnjami plazme miR-223 in MIR-21, in nižjih ravneh plazme miR-218, kot pri zdravih kontrolah po kirurški odstranitvi, in približno zmanjšati za 1 mm kvadratov in takoj zamrznili v tekoči dušik.

RNA Pridobivanje

Skupaj RNA so bili pridobljeni iz 400 ul plazme z uporabo mirVana PARIS Kit (Ambion) po protokolu proizvajalca in speremo s 105 ul iz segreje ( 95 ° C) Elucijo raztopina. Da se omogoči normalizacijo variacije vzorca s vzorca v stopnji RNA izolacijo, 10 ml za 0,05 LM sintetičnega C. elegans
miR-39 (sintetična RNA oligo-nukleotidov s GenePharma sintetiziranih) dodamo vsakemu denaturiranega vzorca po kombiniranje vzorca plazme z denaturacijski Rešitev [11]. Za zamrznjenih tkiva, se je celotni RNA, pridobljeni z uporabo TRIzola reagenta (Invitrogen) po protokolu proizvajalca, in na koncu resuspendirali v 60 ul za predhodno segrejemo (95 ° C) nukleazo brez vode.

Kvantitativna obrnjene davčne transkriptaze verižno reakcijo s polimerazo (QRT-PCR)

prepis reakcijo reverzne je bila izvedena s pomočjo TaqMan MicroRNA povratne transcription Kit (Applied Biosystems). cDNA smo sintetizirali v 5 ml volumnih, ki vsebujejo 1,67 xl izvlečka RNK, 0.5μl 10 × reverzne transkripcije buffer, 0.05 xl 100 mM dNTP, 0.063 xl RNase inhibitorja (20 U ul ^{-1), 0,33 xl Mutiscribe reverzne transkriptaze (50 U ul -1), 0.5 ul genov specifičnih temeljni premaz in 1.887 xl nukleazo brez vode. Reakcije smo inkubirali pri 16 ° C za 30 minut, čemur sledi 42 ° C za 30 minut, nato pa 85 ° C za 5 minut, nato pa je potekala pri 4 ° C. Sintetizirani cDNA smo razredčili 2 krat z jedrsko brez vode. Kvantitativni PCR reakcije so bile izvedene z 2 xl raztopine cDNA, 5 xl TaqMan 2 × Popolna Master Mix (Takara), 0,25 xl genov specifičnih začetnih oligonukleotidov /sondo (TaqMan® MicroRNA testih Applied Biosystems. Tabela S1) in 2,75 ul z nukleazo brez vode v končnem volumnu 10 ul in tek na Bio-Rad IQ5 (Bio-Rad Laboratories, Inc) termostat. Reakcijske zmesi inkubiramo pri 95 ° C za 2 min, čemur sledi 40 ciklov 95 ° C za 15 sekund in 60 ° C za 30 sekund. Prag cikel ( C
_{t) vrednosti so bile izračunane s programsko opremo za Bio-Rad iQ5 2.1 Standard Edition Optični sistem 2.1.94.0617.}}

Koncentracije v plazmi Mirni so bili izračunani z uporabo standarda krivulja zgrajena z uporabo sintetičnih miRNAs [22]. Standardne referenčne miRNAs smo pomnožili za vsako reakcijo. Vendar pa je bila izraz miRNAs iz vzorcev tkiv normaliziral z uporabo 2 ^{-ΔΔ C
_{Metoda t iz C
t vrednosti miRNAs interesa glede na RNU6B.}}

Normalizacija eksperimentalno QRT-PCR Podatki iz plazme z uporabo sintetičnih C. elegans miR-39

C. elegans
miR-39, ki nima sekvenčno homologijo s človeškimi miRNAs, je bil izbran za normalizacijo eksperimentalnih podatkov QRT-PCR. Znane količine sintetičnih C. elegans
miR-39 so se razredči za proizvodnjo C
_{t vrednosti v C
t vrednost giblje standardnih krivulj miRNA. Mi empirično dodali 10 ml od 0,05 LM sintetičnega C. elegans
MIR-39 do 400 xl plazme po združenem vzorcu plazme z denaturacijo rešitev. C. elegans
miR-39 smo pomnožili kot tudi druge miRNAs. Naslednja enačba je bila uporabljena za nastavljanje C
t vrednot miRNAs (MIR-223, MIR-21, miR-218 in MIR-25) v vseh vzorcih plazme: Normalized_ C
t vrednost za miRNA v vzorcu = Raw_ C
t vrednost - [(SpikeIn_ Average_ C
t vrednost danega vzorca) - (Median_ SpikeIn_ C
t)] [11]. Normalized_ C
t vrednost je bila nato uporabljena za izračun koncentracije vsake miRNA.}

Statistična analiza

test Mann-Whitney je bila uporabljena za primerjavo razlik koncentracije v plazmi, mirna in razmerij miRNA med skupino raka in zdravo skupino. Obojestranskega χ ^{2 testu smo uporabili za primerjavo razlike v spolu, starosti ali status HP okužbe med GC bolnikov in zdravih kontrol. ANOVA testu je bila uporabljena za analizo odnosa med stopnjami miR-223, MIR-21, miR-218 in TNM stopenj. Sprejemnik, ki deluje značilne (ROC) krivulj in površino pod ROC krivuljo (AUC) so bili uporabljeni za oceno izvedljivosti uporabe plazemskih koncentracij miRNAs kot diagnostičnega orodja za odkrivanje GC. Indeks Youdenovega je bila uporabljena za izbiro optimalne vrednosti časovnem prelomu. A P
vrednost manj kot 0,05 smo upoštevali kot statistično značilne. Vse statistične analize smo izvedli s pomočjo SPSS 13.0 programsko opremo in grafi so bili ustvarjeni s pomočjo GraphPad Prism 5.0 (Graphpad Software Inc, Caligornia).}

Rezultati

označuje preiskovancev

Sto štirideset predmeti, vključno z 70 GC bolnikov in 70 zdravih kontrolnih osebah, so bili zaposleni v tej študiji. Ni velike razlike v spolu in starosti so bile ugotovljene med GC bolnikov in zdravih kontrolah ( P
= 0,371, P
= 0.398, χ ^{2 testnih oz). Stanje KM okužba je bila bistveno drugačna med GC bolnikov in zdravih kontrolah ( P
= 0,042) (tabela 1).}

Ocenjevanje kvantitativne RT-PCR za Merjenje miRNAs v plazmi

Če želite določiti dinamični razpon in občutljivost miRNA kvantifikacije s PCR v realnem času, so sintetične single-sklop miRNAs serijsko razredčene 10-krat od koncentracije 0,1 do 0,000001 fmol za miR-223, mIR-218, miR- 25, in miR-21 na priporočilo GenePharma miRNA referenčni plošči. Linearnost kvantitativne RT-PCR med logaritemskih vrednosti vhodnih miRNAs in C
_{t vrednosti je bila potrjena za vsako sintetično miRNA, MIR-223, MIR-218, MIR-25 in miR -21 (R ^{2 = 0,997, R 2 = 0,998, R 2 = 0,993 in R 2 = 0,999 oz) (slika 1).}}

Predhodna proučitev od Plasma miRNAs ki lahko Monitor GC

štiri miRNAs, miR-223, miR-218, miR-25 in miR-21, so odklonsko izražena v GC tkivih. Da razišče, ali so ravni v štirih miRNAs tej disregulacijo v plazmi bolnikov z GC, smo na začetku izmeri plazemske štirih miRNAs 10 GC bolnikov in 10 zdravih kontrol. Kot je bilo pričakovati, so bile koncentracije v plazmi miR-223 in pokoj-21 bistveno višja pri bolnikih GC kot pri zdravih kontrolah ( P
< 0,001), medtem ko so miR-218 bistveno nižji ( P
< 0,001). Vendar pa so plazemske koncentracije miR-25 niso bistveno razlikovali med GC bolnikov in zdravih kontrolah ( P
= 0,970) (Slika 2 (A-D)). Ugotovljeno je bilo, da bi raven pokoj-21 v GC plazmi upoštevati v primarnem GC tkiva [12]. Da bi raziskali, ali se lahko ravni treh miRNAs (miR-223, miR-218 in MIR-21) v GC plazmi upoštevati v primarnem GC tkivu, smo testirali na ravni treh miRNAs v osem parov GC tkiva in sosednjih zdravih tkivih vzorci iz bolnikov, 8 GC katerih plazma raven miR-223, so bili miR-21 znatno višja, in miR-218 je bila bistveno nižja. Kot je prikazano na sliki 2E, so bile stopnje izraženosti Mir-223, v primarnih GC tkivih višja kot v kontrolni skupini v sedmih od osmih bolnikov analizirali (87,5%) in miR-21 pri osmih bolnikih (100%), medtem ko je miR-218 nižja pri sedmih bolnikih (87,5%), kar kaže, da je vsebnost teh treh miRNAs v GC plazmi odraža tiste v osnovnem GC tkivu.

plazme ravni miR-223, mIR-21, miR-218 in miR -25 so bile potrjene v velikem obsegu

za oceno plazemske koncentracije teh štirih miRNAs kot diagnostični markerji za detekcijo GC, so dodali še 60 GC bolnikov in 60 zdravih kontrolnih osebah v tem validacije testu. Kot je prikazano na sliki 3, so bile ravni miR-223 in pokoj-21 v GC plazmi bistveno višja kot v kontrolni ( P
< 0,001), medtem ko je bil miR-218 bistveno nižji ( P
< 0,001). Vendar pa so plazemske koncentracije miR-25 niso bistveno razlikovali med GC bolnikov in zdravih kontrolah ( P
= 0,082) (Slika S1). Vrednosti koncentracije štirih miRNAs izmerjene v plazmi predmetov bili prikazani v tabeli S2. ROC analize krivulje so bile opravljene za oceno diagnostične vrednosti za tri plazmi miRNAs in je pokazala, da so bili trije plazmi miRNAs dragocene biomarkerjev za razlikovanje GC od običajnih kontrol z AUC (območja pod krivuljo ROC) od 0,9089 (95% CI: 0,8598 do 0.9580 ) za miR-223, 0.7944 (95% IZ: 0,7211 do 0,8677) za miR-21 in 0.7432 (95% IZ: 0,6628 do 0,8236) za miR-218. Na optimalno mejno vrednostjo za 0.7286 z vrednostjo občutljivosti + specifičnosti-1 šteje, da je največja za pokoj-223, je bila občutljivost in specifičnost 84,29% in 88,57%; na mejno vrednost 0.5000 za pokoj-21, občutljivost in specifičnost je bila 74.29% in 75.71%, in na cutoff za 0.3858 za pokoj-218, je bila občutljivost in specifičnost 94,29% in 44,29%. Povišati vrednost diagnozo, analize kombinacija ROC krivulja smo izvedli (miR-223, pomnoženo s pokoj-21), deljeno s pokoj-218. Razmerje (miR-223 × miR-21) /miR-218 prinesla najvišjo vrednost AUC 0,9531 (95% CI: 0.9222 do 0.9839) in optimalno cutoff vrednost 0.7715, občutljivost in specifičnost bili 84,29% in 92,86% , ki je pokazal, da ima kombinacija podpis močno potencialno Diagnostične vrednosti za odkrivanje GC.

plazemskimi miR-223, mIR-218 in pokoj-21 v GC Bolniki z različnimi kliničnega stanja

analizirani so bili plazemske koncentracije teh treh miRNAs pri bolnikih GC na različnih stopnjah TNM (12 z I, 11 s II, 36 s III ali 11 s IV), da se ugotovi, ali se lahko trije plazmi miRNAs odkrijejo v zgodnji fazi GC. Kot je prikazano na sliki 4A, plazemske koncentracije treh miRNAs niso bistveno razlikovali v štirih fazah (MIR-223, P
= 0,244; miR-218, P
= 0,664; miR -21, P
= 0,596), vendar pa je vsak od štirih fazah, vključno z bolniki fazi I je pomembno zvišana plazma miR-223 in miR-21 v primerjavi z zdravimi kontrolami (P < 0,01), in miR -218 je bistveno zmanjšalo v fazi II, III in IV ( P
< 0,01), medtem ko miR-218 niso bistveno razlikovali med fazo pacienti I in zdravi ( P
= 0,071). Poleg tega smo primerjali vrednosti treh miRNAs v plazmi iz pacientov GC s metastaze tistim brez. Kot je prikazano na sliki 4B, imeli plazemska treh miRNAs nobenih pomembnih razlik med bolniki GC z metastazami in tistimi brez (miR-223, P
= 0,320; miR-218, P
= 0,979;. miR-21, P
= 0,310)

Razmerje med plazemskimi miR-223, mIR-21, miR-218 in HP okužbe Status preiskovancev

Poleg tega smo testirali status okužbe s Hp pri 140 osebah, kot je opisano zgoraj, in analizirali plazemske treh miRNAs pri bolnikih z GC 70 (43 z okužbo s HP in 27 brez) in 70 zdravih kontrolnih oseb (31 z okužbo s HP in 39 ne), da ovrednoti razmerje med plazemskimi treh miRNAs in status HP okužbe preiskovancev. Kot je prikazano na sliki 5, plazemske koncentracije miR-21 ( P
= 0,875, P
= 0,527) in miR-218 ( P
= 0,097, P
= 0,539), niso bistveno razlikovali med bolniki GC z okužbo s HP in tistimi brez, in med zdravimi kontrolami z okužbo s HP in tiste, ki nimajo oz. Vendar pa je bil miR-223 pri bolnikih GC z okužbo s HP, kot tiste, ki nimajo ( P
= 0,014) bistveno višja, in bistveno višja pri zdravih kontrolnih z okužbo s HP, kot tiste, ki nimajo ( P
= 0,016). Plazemske koncentracije miR-223 ( P
< 0,001) in miR-21 ( P
< 0,001) so znatno zvišane pri bolnikih GC z okužbo s HP ali katerih brez primerjavi z zdravimi kontrolami, okuženih s HP in katerih ne, medtem ko je miR-218 bistveno nižji ( P
< 0,05). Ti podatki zagotavljajo močne dokaze, da lahko trije Mirna podpisi razlikovati bolnike GC z ali brez okužbe HP iz zdravih kontrol.

Pogovor

V tej študiji, ravni štirih miRNAs (MIR-223, smo analizirali miR-218, miR-21 in miR-25) v plazmi od 70 GC bolnikov in 70 zdravih kontrol. V skladu s prejšnjimi študijami Tsujiura et al [12], naš test je tudi pokazala, da so bistveno višje plazemske koncentracije miR-21 pri bolnikih GC. Ugotovili smo, da so bile ravni miR-223 v GC plazmi bistveno višja kot v nadzor, medtem ko je miR-218 bistveno nižji. Kombinirana ROC analiz so pokazali najvišjo AUC 0.9531 z 84,29% občutljivostjo in 92,86% specifičnostjo za razmerje (miR-223 × miR-21) /miR-218 v diskriminacijo GC iz nadzora. Analizirali smo tudi plazemske koncentracije miR-223, MIR-21, MIR-218 pri bolnikih GC na različnih kliničnega stanja (fazi TNM ali metastaz) in razmerje med plazemskimi treh miRNAs in status HP okužbe preiskovancev.

Čeprav je miR-223, naj bi se skoraj izražena samo v kostnem mozgu [23], njegova čezmernim je bilo opaziti v mnogih vrstah raka, kot na požiralniku raka [16], karcinomom jetrnih celic [24], in GC [14], [15]. V zadnjem času, Xiaohua Li poročali, da je bil miR-223 prekomerno samo v metastatskih želodčnih rakavih celic in stimulira brez metastaz želodčne rakavih celic migracije in invazijo [25]. Zakaj se plazemske koncentracije miR-223 je bila bistveno višja pri bolnikih z zgodnjo GC? V GC mikrookolja, mnogi povezane s tumorjem celice, kot so makrofagi, mieloidnih celic, dendritičnih celic in celic T, so sposobni sproščanja eksozomov, prostazomov, ki Shuttle tako mRNA in microRNA druge celice ali obtoku [26]. Za zgodnje GC, miR-223 lahko up-urejena v nekaterih tumorjev, povezanih celic in dostavljena v periferni krvi preko exosmes. Nedavni podatki so pokazali, da je bila miR-223 makrofagi sprostijo shuttled v celice raka dojke in urejena invazivnosti celic raka dojke [27]. Dokazano je, da je obnova miR-218 zatira Robo1 izražanja in zavira želodčni rak celic invazijo in metastaze in vitro
in in vivo
[17]. Čezmernim miR-218 je povzročilo bistveno zmanjšana aktivnost rast celic in celične vdor AGS celic v primerjavi z nadzorom [20]. Gao C et al [21], so poročali, da so ekspresijski nivoji miR-218 v GC tkivih znatno zmanjša, v H. pylori okuženi želodčne sluznice in H. pylori okuženih AGS celice. V naši raziskavi, plazemske koncentracije miR-218 niso bistveno razlikovali med bolniki GC z okužbo s HP in tistimi brez, ali pri zdravih kontrolnih osebah z okužbo s HP in tistimi brez. Ravni miRNAs se lahko razlikuje med GC plazmo in želodčne sluznice. MIR-21 je prekomerno v različnih vrst raka, vključno z rakom dojke [28], pljučnega raka [29], raka debelega črevesa [30] in GC [18], [19]. Čeprav Tsujiura et al [12] poroča, da so bile plazemske koncentracije miR-21 znatno zvišane pri bolnikih, GC, niso bile ugotovljene njegove koncentracije v plazmi od GC bolnikov na različnih TNM jelenov.

Povečanje števila dokumentov poročali da lahko v obtoku miRNAs služijo kot neinvazivnih biomarkerjev za detekcijo GC. V zadnjem času, Hanshao Liu je poročala, da serum miR-378 je zelo povišan pri bolnikih GC z odpovedjo TNM I, kar pomeni, da lahko ta podpis miRNA služijo kot nove neinvazivne biomarker za zgodnje odkrivanje GC [31]. Toda status HP okužbe v GC bolnikih in zdravih kontrolah ni bilo omenjeno. Znano je, da je infekcija HP ​​eden izmed glavnih vzrokov GC, vključno z adenokarcinomom želodca, želodčnega MALT limfom. Če so bile plazemske /serumske posebnih krožijo miRNAs dysregulated le pri bolnikih GC z okužbo s HP, ne pa pri tistih brez, bi se miRNAs služijo kot biomarkerjev za odkrivanje bolnikov, okuženih z virusom HP namesto odkrivanju bolnikov z GC.

v tej študiji, čeprav smo analizirali plazemske koncentracije miR-223, mIR-21 in miR-218 v GC bolnikov v različnih fazah TNM, je bilo število vzorcev na začetku poklicne poti GC skromna. Število plazemskih miRNAs testiranih v učni množici je bil omejen. V prihodnje preiskave, lahko dostopate do več število vzorcev na začetku poklicne poti GC oceniti vlogo plazme miR-223, miR-21, MIR-218 ali druge plazemske miRNAs povezano z GC v zgodnje odkrivanje GC.

za iskanju učinkovitih biomarkerjev temelji na krvi za ugotavljanje GC da podaljša preživetje bolnikov z zgodnjim GC, so številni raziskovalci osredotočili na krožeči miRNAs, ki so bili pred kratkim poročali, da služi kot učinkovit in neinvazivno biomarker za odkrivanje različne vrste raka ali drugih bolezni, [32] - [35]. Čeprav so občutljivost in specifičnost kroži Mirna biomarkerjev za detekcijo GC precej višja kot v serumu biomarkerjev (CA19-9 in CEA), ki se trenutno uporabljajo, je dolga pot, preden obtoku miRNAs kot klinično diagnozo se uporabljajo za odkrivanje GC , ker bi ravni krožečega miRNA bistveno višja ali nižja v različnih boleznih. Nadaljnje študije v obtoku Mirne biomarkerjev lahko osredotočijo na povezavo profile izražanja obtoku miRNAs od vseh skupnih bolezni, za pridobitev posebne biomarkerjev za edinstveno odkrivanje bolezni. Čeprav Jianning Song [36] priporoča MIR-16 in MIR-93 kot primerne referenčne genov v serumu analizo miRNA za GC bolnikih in zdravih kontrol, v vzorec pa je skromna. Metode normalizacije, ki se uporabljajo za določanje ravni obtoku miRNAs treba poenotiti.

Na koncu smo ugotovili, da lahko tri plazmi miRNAs (MIR-223, MIR-21 in MIR-218), lahko služijo kot nove noninvasive biomarkerjev za odkrivanje GC. Ali miR-223 in miR-21 imajo sposobnost, da odkrijejo v zgodnji fazi GC bodo opredeljene v prihodnjih študijah.

Podpora Informacije
Slika S1.
Validacija plazemskimi pokoj-25 v GC bolnikov in zdravih kontrol. Box parcele plazemskih koncentracij pokoj-25 pri bolnikih GC (GC, n = 70) in zdravi (NC, n = 70). Črte v notranjosti škatle označuje mediano. V laske v polje parcele: MIN do MAX. Ni bistvene razlike je opaziti med GC bolnikov in zdravih kontrolnih osebah
doi:. 10,1371 /journal.pone.0041629.s001
(IOD)
Tabela S1.
zrelih microRNAs in njihovo ujema primer /sonda AB Preskusno ID.
doi: 10,1371 /journal.pone.0041629.s002
(DOCX)
tabeli S2.
vrednosti koncentracije štirih miRNAs izmerjene v plazmi predmetov.
doi:. 10,1371 /journal.pone.0041629.s003
(XLSX)

Priznanja

Zahvaljujemo Yun Zhao za tehnično podporo

• Plos ONE: Meta-analiza interlevkin-10 -592 Promotor polimorfizem, ki sodelujejo v Rak želodca tveganja
• Plos ONE: β, β-Dimethylacrylshikonin inducira Mitohondrij Odvisna apoptoza skozi ERK Pathway v človekovem želodca Rak SGC-7901 celice